孔圣枕中丹对自发性高血压大鼠前额叶皮质及纹状体TH、DAT、DRD1、DRD

孔圣枕中丹对自发性高血压大鼠前额叶皮质及纹状体TH、DAT、DRD1、DRD2蛋白和基因表达的影响

作者：陈晓刚谭丽丽赖东兰等

来源：《中国医药导报》2013年第22期

[摘要] 目的探讨孔圣枕中丹对注意缺陷多动障碍（ADHD）动物模型——自发性高血压大鼠（SHR）前额叶皮质及纹状体（含伏核）中酪氨酸羟化酶（TH）、多巴胺转运体（DAT）、多巴胺D1受体（DRD1）、多巴胺D2受体（DRD2）蛋白和基因表达的影响。方法将36只SHR雄性大鼠随机分为三组，分别用孔圣枕中丹煎剂、盐酸哌甲酯和生理盐水灌胃28 d，采用免疫组化法和原位杂交法检测其前额叶皮质、纹状体（含伏核）中TH、DAT、DAR1、DRD2蛋白和基因的表达。结果①在SHR大鼠的前额叶皮质：TH的蛋白表达，孔圣枕中丹组（10.10±3.25）高于盐酸哌甲酯组（7.78±2.73），后者又高于生理盐水对照组

（4.79±2.53）；TH的基因表达，孔圣枕中丹组（23.00±2.10）高于盐酸哌甲酯组

（19.26±1.26），后者又高于生理盐水对照组（16.63±3.09）；DAT的蛋白表达，孔圣枕中丹组（9.06±1.81）低于盐酸哌甲酯组（14.20±1.19），后者又低于生理盐水对照组

（17.57±3.74）；DAT的基因表达，孔圣枕中丹组（9.32±1.40）低于盐酸哌甲酯组

（16.45±3.23），后者又低于生理盐水对照组（26.28±4.48）。DRD1的蛋白表达，孔圣枕中丹组（14.67±1.49）和盐酸哌甲酯组（11.45±1.42）均低于生理盐水对照组（18.06±2.20）；DRD1的基因表达，孔圣枕中丹组（22.54±2.69）和盐酸哌甲酯组（16.47±1.25）均低于生理盐水对照组（38.65±1.10）。DRD2的蛋白表达，孔圣枕中丹组（14.83±1.84）和盐酸哌甲酯组（11.01±1.03）均低于生理盐水对照组（17.83±3.36）；DRD2的基因表达，孔圣枕中丹组（14.68±1.03）和盐酸哌甲酯组（11.18±1.01）均低于生理盐水对照组（17.44±2.84）。②在SHR大鼠的纹状体：TH的蛋白表达，孔圣枕中丹组（14.30±3.85）高于盐酸哌甲酯组

（9.36±2.59），后者又高于生理盐水对照组（6.30±3.21）；TH的基因表达，孔圣枕中丹组（22.92±1.87）高于盐酸哌甲酯组（19.24±0.77），后者又高于生理盐水对照组

（16.47±1.19）。DAT的蛋白表达，孔圣枕中丹组（9.78±1.24）低于盐酸哌甲酯组

（14.30±2.43），后者又低于生理盐水对照组（17.79±2.39）；DAT的基因表达，孔圣枕中丹组（11.75±1.99）低于盐酸哌甲酯组（17.72±2.77），盐酸哌甲酯组又低于生理盐水对照组（30.54±9.08）。DRD1的蛋白表达，孔圣枕中丹组（14.24±2.19）和盐酸哌甲酯

（11.22±2.78）组均低于生理盐水对照组（22.10±2.90）；DRD1的基因表达，孔圣枕中丹组（17.29±1.27）和盐酸哌甲酯组（14.02±1.55）均低于生理盐水对照组（23.12±2.70）。DRD2的蛋白表达，孔圣枕中丹组（11.05±1.39）和盐酸哌甲酯组（13.83±1.20）均低于生理盐水对照组（16.64±0.72）；DRD2的基因表达，孔圣枕中丹组（9.68±1.65）和盐酸哌甲酯组

（12.70±0.70）均低于生理盐水对照组（17.15±1.05）。以上差异均有统计学意义（均P <

0.05）。结论孔圣枕中丹可能通过影响调控脑内前额叶皮质-纹状体环路的DA神经信号传导而治疗ADHD。

[关键词] 孔圣枕中丹；SHR大鼠；前额叶皮质；纹状体；TH；DAT；DRD1；DRD2；蛋白；基因

[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（a）-0113-05

注意缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder，ADHD），是以注意力不集中、多动、冲动等为主要表现的常见儿童行为障碍，严重危害儿童的身心健康。以哌甲酯为代表的中枢兴奋剂虽是目前治疗ADHD的首选，但也存在不良反应较多、管理困难等诸多问题[1]。大量临床实践发现，中医药治疗ADHD具备独特优势[2-3]。本研究检测了孔圣枕中丹煎剂对ADHD动物模型——自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat，SHR）前额叶皮质及纹状体（含伏核）中的酪氨酸羟化酶（TH）、多巴胺转运体（DAT）、多巴胺D1受体（DRD1）、多巴胺D2受体（DRD2）的基因和蛋白表达的影响，并与盐酸哌甲酯对照，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雄性8周龄的SHR大鼠36只，体重240～300 g，由四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所生产供应部提供[许可证号：SCXK（111）2008-16]。

1.2 主要仪器与试剂

DAB显色试剂盒，SA1022兔IgG试剂盒，鼠IgG试剂盒，大鼠IgG试剂盒，原位杂交试剂盒（博士德生物技术有限公司）；TH 抗体：兔抗（Miliproe抗体公司）；DAT抗体：大鼠抗体（abcam抗体公司）；DRD1抗体：兔抗（abcam抗体公司）；DRD2抗体：小鼠抗体（Santa抗体公司）。显微镜（日本OLYMPUS公司CHK2-F-GS型），离心机（上海安亭TGL-16G型），电热恒温水箱（广州东方YH140-1型）。

1.3 孔圣枕中丹煎剂的制备

孔圣枕中丹方由龙骨、龟板、远志、石菖蒲4味中药组成（比例4∶2∶1∶2），广州中医药大学第一附属医院门诊部药房提供生药，制成水煎剂，并配成含生药约1.154 g/mL的溶液，充分搅匀，贮于4℃冰箱备用。盐酸哌甲酯（苏州医药集团有限公司）终浓度为0.24

g/L。

1.4 实验动物分组及处理