微生物实验思考题参考答案及知识要点

二、细菌得简单染色与革兰氏染色

1、革兰氏染色中那一步就是关键?为什么？您就是如何操作得？

革兰氏染色得关键步骤就是：乙醇脱色(就是脱色时间)。如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为就是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为就是革兰氏阳性菌。脱色时间得长短还受涂片得厚薄，脱色就是玻片晃动得快慢及乙醇用量得多少等因素得影响，难以严格规定（脱色就是应当控制速度，脱色时间一般为20—3０ｓ）。

2、固定得目得之一就是杀死菌体，这与自然死亡得菌体有何不同?

自然死亡得菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。固定杀死细菌时细菌结构就是保持死亡时得状态得.

3、不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌与阴性菌？

能。在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌(Ｇ＋)，被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染,就是为了让结果更清楚。

4、涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题？

ａ杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b 增加其对染料得亲与力。

固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次(手指触摸玻片反面，不烫手为宜）,固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩.

三、霉菌、放线菌得形态观察

1、镜检时,如何区分基内菌丝与气生菌丝？

一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗;而基内菌丝色浅、发亮，可瞧到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。

2、显微镜下细菌放线菌酵母菌与霉菌得主要区别就是什么？

放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌与酵母菌在低倍镜下即可瞧到。

细菌：为细而短得单细胞微生物（个体微小）,主要形态有:球、杆、螺旋状等。(部分杆菌还可形成芽孢）放线菌:存在分枝丝状体与菌丝体,革兰氏阳性菌，有孢子丝与孢子(球形、椭圆形、杆状、柱状）。

酵母菌:单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍,部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。

霉菌:菌丝与孢子得宽度通常比细菌与放线菌粗得多，常就是细菌菌体宽度得几倍到几十倍,在低倍镜下即可瞧到，并还可瞧到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等.

四、玻璃器皿得洗涤、包扎与灭菌

1、高压蒸汽灭菌开始时为什么要将锅内排尽？灭菌后为什么要待压力降低到“0"时，才能打开排气阀，

开盖取物?

因为空气得膨胀压大于水蒸汽得膨胀压,所以，当水蒸汽中含有空气时,在同一压力下，含空气蒸汽得温度低于饱与蒸汽得温度。如果压力未降到0时,打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内得培养基由于内外压力不平衡（压力突然下降而发生复沸腾）而冲出烧瓶口或试管口，造成培养基等液体沾湿棉塞或溢出等事故.

2、设计实验方案，比较干热灭菌与湿热灭菌得效果。

以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件与等量原则。

（一）实验材料

试管镊子酒精灯嗜热脂肪芽孢杆菌A TＣC7053菌片纸片（与菌片同大小同材料) 溴甲酚紫蛋白冻水培养基（已灭菌)等实验材料（材料有余）。

（二）对照组

取9支洁净试管,分为A1Ｂ1 C1 三组(每3支一组),将A1 组中放入菌片，B1 组中放入纸片,C1组中什么也不加;不经灭菌，直接加入溴甲酚紫蛋白冻水培养基（等量）。

（三）恒为培养

将上述所有试管按分组在５6℃恒温条件下培养４8小时.

3、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高时间长?

在湿热条件下,有水蒸汽得作用：

a高温水蒸汽导热比干空气要快；

b高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程；

c高温水蒸汽能穿透细菌得细胞膜，直接进入细胞内破坏细胞；

c高温水蒸汽能水解一部分细胞结构,加速导热。

(湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低;湿热得穿透力比干热大；湿热得蒸汽有潜热存在,每１克水在1０0℃时，由气态变为液态时可放出２.26kJ（千焦)得热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体得温度，从而增加灭菌效力。）

五、培养基得配置

1、配制牛肉膏蛋白胨培养基,有哪些操作步骤?那几步易出错，如何防止？

称取药品—加热溶化—分装—加棉塞—包扎—灭菌—搁置斜面

易出错得步骤有：

a 称取药品称取时钥匙专用，瓶盖不要错盖，易吸水得药品要快速称取；

b 加热溶化加入药品后要用玻璃棒不停搅拌，以免糊底(在琼脂熔化过程中，应控制火力，以免培养基

因沸腾而溢出容器,同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦.）；

c分装分装时培养基不能粘在三角瓶（或试管)口，以免接种时染菌;

d 搁置斜面斜面长度约试管长度一半为宜。

2、配制培养基得一般原则就是什么？

a 目得明确ｂ营养协调c 理化适宜d 经济节约

六、平板菌落计数法

1、平板菌落计数法得原理就是什么？它适用于那些微生物得计数？

平板菌落计数法就是将等测样品经适当稀释后，其中得微生物充分分散为单个细胞,取一定量得稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成得肉眼可见得菌落,即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。(但就是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成得一个单菌落也可能来自样品中得2~３或更多个细胞。因此平板菌落计数得结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位）。

平板计数法就是根据微生物在固体培养基上所形成得一个菌落就是由一个微生物繁殖而形成得现象进行得，也就就是一个菌落可代表一种微生物(并不绝对)。通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物得数量.

2、菌落样液移入培养皿后,若不尽快地倒入培养基并充分摇匀，将会出现什么结果？为什么？

出现得结果就是:形成菌落过于集中,不能形成均匀分布得单菌落,导致无法计数。

因为:若不立即摇匀,菌体常会吸附在皿底上，不易形成均匀分布得单菌落，从而影响计数得准确性。

3、要获得本次试验得成功,那几步最为关键？为什么？

a稀释菌液若在稀释时移液管混用可使稀释梯度不准确，从而导致计数误差(放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度得菌悬液，否则稀释不精确，结果误差大。)；

b 稀释倒平板 1 若再加入菌液不立即倒入培养基，可使菌体黏附于皿底;

2 若不注意培养基温度,温度过高会将菌体烧死,温度过低会使培养基一倒入立即凝固，从而菌体不能均匀分布;

3 倒入培养基需立即摇匀，否则菌体常会吸附在皿底上,不易形成均匀分布得单菌落,从而影响计数得准确性;

４选择倒平板得稀释梯度也就是很重要得，一般以三个连续稀释度中得第二个稀释度倒平板后所出现得平均菌落数在50个左右为宜，否则要适当增加（或减少）稀释度加以调整。

4、平板菌落计数法与显微镜直接计数法相比有何优缺点？