枯草芽孢杆菌菌株发酵生产工艺优化

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枯草芽孢杆菌的发酵培养基优化研究

收稿日期:2018-08-14基金项目:湖北省技术创新专项重大项目(2016ABA103);湖北省农科院重大研发成果培育专项(2017CGPY01);国家重点研发计划项目(2017YFD0200900)作者简介:饶犇(1983-),男,湖北孝感人,助理研究员,博士,主要从事发酵工程研究,(电话)156********(电子信箱)623253512@。

饶犇,周荣华,闵勇,等.枯草芽孢杆菌的发酵培养基优化研究[J].湖北农业科学,2018,57(21):127-129.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )是一种常用的微生物源生物农药。

枯草芽孢杆菌在防治水稻、小麦、花生、番茄、辣椒、大豆、玉米等作物的病害上有较好的效果,特别是针对小麦白粉病、赤霉病、纹枯病等病害的防治效果更佳,田间增产率达到了10%~50%[1-4]。

枯草芽孢杆菌具有很强的营养物质竞争能力以及氧气竞争优势;定殖、繁殖速度很快,迅速抑制其他病原微生物生存,起到保护植物、确保植物健康生长的作用。

此外,枯草芽孢杆菌对人畜无毒无害、不污染环境、对作物安全;能产生多种抗菌素和酶,具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力;还能分泌促进作物生长的活性物质,使植株叶片浓绿肥厚,提高作物免疫力,增产提质效果显著,发酵过程中产生多种氨基酸,对作物有生长调节的作用[5-9]。

枯草芽孢杆菌主要是以3种方式起作用,一是竞争作用:拌种或灌根后,枯草芽孢杆菌能够在作物周围、根表面、根内部以及通过植物导管传导到地上部分而在作物根表、根内、茎部、叶部等位点定殖和繁殖,保护作物根部不受病菌侵染和抑制作物体内枯草芽孢杆菌的发酵培养基优化研究饶犇,周荣华,闵勇,廖先清,刘芳,陈伟,张光阳(湖北省生物农药工程研究中心,武汉430064)摘要:为了得到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )发酵的最佳培养基,应用Plackett-Burman 设计法对影响枯草芽孢杆菌芽孢形成的关键因子进行筛选,并进一步采用响应面分析法对影响芽孢产量的关键因素进行研究。

饲用枯草芽孢杆菌发酵条件的优化

饲用枯草芽孢杆菌发酵条件的优化导言枯草芽孢杆菌是一种常见的益生菌，能够在肠道内生长并产生一系列有益活性物质，因此在动物饲用中被广泛采用。

但是，枯草芽孢杆菌的发酵条件也会影响其对动物的益处。

因此，为了优化枯草芽孢杆菌的发酵条件，提高其饲用效果，有必要对其发酵条件进行深入研究和分析。

枯草芽孢杆菌的饲用效果枯草芽孢杆菌具有很多在动物生长和健康方面的优点，包括：•帮助消化吸收养分•增强免疫力•抑制有害菌群的生长•改善肠道微生态平衡因此，枯草芽孢杆菌被广泛使用于动物饲料生产中。

枯草芽孢杆菌的发酵条件枯草芽孢杆菌的发酵条件包括发酵罐的温度、湿度、压力、通气量、pH值、微生物菌群等多方面因素。

其中，以下因素是枯草芽孢杆菌发酵过程中最为重要的：发酵温度发酵温度是枯草芽孢杆菌生长和发酵的重要因素之一。

在一定的范围内，发酵温度对菌体的活性和合成物的产生具有显著影响。

过低的发酵温度会减缓菌体的生长速度；过高的发酵温度则可能导致细胞壁的破坏，从而影响产品的质量。

目前，大多数研究表明枯草芽孢杆菌的最适发酵温度为40至45℃。

发酵pH值pH值是枯草芽孢杆菌生长和发酵的另一个关键因素。

菌体内部的pH值非常关键，因为它可以影响蛋白质、碳水化合物的合成和菌体的活性。

在发酵过程中，pH值的变化也会影响枯草芽孢杆菌的生长和合成物的产生。

目前，大多数研究表明，枯草芽孢杆菌的最适发酵pH值为6至7。

饲用枯草芽孢杆菌发酵条件的优化为了优化枯草芽孢杆菌的发酵条件，提高其饲用效果，以下是一些建议：选择适当的发酵温度在生产过程中，应确定合适的发酵温度，以充分发挥枯草芽孢杆菌的生长和活性。

过低的温度会导致生长速度缓慢，而过高的温度会导致细胞壁的破坏。

控制发酵pH值在饲用枯草芽孢杆菌的生产过程中，pH值的变化应得到严格的控制。

如前所述，枯草芽孢杆菌的最适发酵pH值为6至7。

在生产过程中应该控制在这个范围之内。

合理控制发酵时间在饲用枯草芽孢杆菌的发酵过程中，时间也是一个重要的因素。

饲用枯草芽孢杆菌发酵工艺的优化及菌剂制备

饲用枯草芽孢杆菌发酵工艺的优化及菌剂制备吴东;刘惠琴;徐力;田永强【摘要】[目的]为饲用枯草芽孢杆菌的大规模生产奠定基础.[方法]通过单因素试验和正交试验,对发酵培养基配方及其发酵条件进行优化.[结果]饲用枯草芽孢杆菌的最佳培养基为:葡萄糖3％、酵母浸膏1.5％、磷酸氢二钠0.2％、磷酸二氢钠0.1％、硫酸镁0.1％、酵母浸粉0.5％.饲用枯草芽孢杆菌的的最适发酵条件为:温度38℃,初始pH7.0 ～7.2,摇床转速180 r/min,接种量7％.选择木屑质量与发酵液体积(m/V)的混合比为3∶5,继续高温发酵16 h,芽饱产量可达到5.18×1010CFU/g.[结论]该研究可为饲用枯草芽孢杆菌的工业化生产提供了数据支持.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)019【总页数】4页(P134-137)【关键词】枯草芽孢杆菌;发酵工艺;优化;菌剂;制备【作者】吴东;刘惠琴;徐力;田永强【作者单位】兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070;兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070;兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070;兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070【正文语种】中文【中图分类】S816.6饲用抗生素的使用在我国过去的很多年内对养殖业的发展作出了突出的贡献。

但是，随着社会和科技的发展，人们对食品安全越来越重视，抗生素产生一系列负面问题(如耐药性)，引起饲料用药及治疗用药量越来越高，并且过量使用抗生素容易导致动物生产能力降低［1］。

枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，由于其在自然界广泛分布，枯草芽孢杆菌产生孢子时能分泌许多种酶类物质和生长因子，稳定性极好，具有耐氧化、抗挤压、耐高温、耐酸等特征［2］。

此外，枯草芽孢杆菌抗逆性很强，能够储藏的时间较长，它在颗粒或粉料中都有较强的稳定性，也能够很通顺地进入动物的大小肠道生存并且能够大范围繁殖，是在微生物饲料添加剂中应用最为广泛的益生菌。

饲用枯草芽孢杆菌发酵条件的优化

饲用枯草芽孢杆菌发酵条件的优化周映华; 吴胜莲; 贺月林; 缪东【期刊名称】《《湖南农业科学》》【年(卷),期】2010(000)011【总页数】3页(P21-23)【关键词】枯草芽孢杆菌; 培养基; 发酵条件; 优化【作者】周映华; 吴胜莲; 贺月林; 缪东【作者单位】湖南省微生物研究所湖南长沙 410009【正文语种】中文【中图分类】S816.3枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）基我国农业部允许作为饲料添加剂的两种芽孢杆菌之一，已被越来越多的研制成微生物制剂。

其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色”添加剂，具有广阔的发展前景，现已在畜牧业、饲料行业中广泛应用，显示出了巨大的社会效益和生态效益。

枯草芽孢杆菌具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等活性，能产生抗菌素，在动物肠道内具有较强生物夺氧能力，这些特性对促进动物营养的消化吸收、提高动物的饲料转化率和防病，促进生长起到重要作用。

目前在工业化生产中，仍然存在发酵周期长、芽孢形成率低、成本高等问题。

笔者对枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件进行了研究，以期提高枯草芽孢杆菌的产量并降低生产成本。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种供试菌种为枯草芽孢杆菌，由湖南省微生物研究所菌种保藏室提供。

1.1.2 培养基检测培养基：牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，葡萄糖1%，氯化钠0.5%，琼脂2%；种子培养基：牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，pH 7.0～7.2；基础发酵培养基：淀粉0.15%、葡萄糖0.5%、尿素0.1%、磷酸氢二钾0.3%、磷酸二氢钾0.15%、硫酸镁0.05%、酵母膏0.02%、氯化铁0.01%、碳酸钙0.01%、大豆粕1%、淀粉0.3%、3.08%浓度的硫酸锰溶液0.1%。

pH均调为7.0～7.2。

1.1.3 仪器设备供试仪器：SHP-250生化培养箱、1600倍微生物显微镜、PHS—25型数显酸度计、福玛QYC—211摇床、电热鼓风干燥箱等。

枯草芽孢杆菌的发酵过程优化及产物提取技术探究

枯草芽孢杆菌的发酵过程优化及产物提取技术探究枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然界中的细菌，具有良好的生物学特性和产物应用潜力。

本文将探讨枯草芽孢杆菌的发酵过程优化以及产物提取技术的相关研究。

首先，枯草芽孢杆菌的发酵过程优化是实现高产产物的关键。

发酵过程中的温度、pH值、培养基组分以及氧气供应等因素对产物生成具有重要影响。

在温度方面，研究表明最适合枯草芽孢杆菌生长和产物生成的温度是37°C。

此外，维持适宜的pH值（通常在6-8之间）有助于促进产物的生成。

培养基组分方面，通常采用含有碳源、氮源、矿物盐和生长因子等成分的培养基。

合理设计培养基组分的配比及优化培养条件，可以提高产物的产量和质量。

此外，提供充足的氧气供应也是枯草芽孢杆菌发酵过程的关键环节，通过调节搅拌速度和增加氧气传递效率，可以最大限度地提高产物产量。

其次，产物提取技术是从发酵液中纯化并得到目标产物的重要步骤。

产物提取的目标是高效、高纯度地获得目标产物，并保证较低的成本和良好的产物质量。

常用的产物提取技术包括有机溶剂提取、沉淀法、离子交换法、超滤法等。

有机溶剂提取是最常用的方法之一，通过将发酵产物与合适的溶剂相混合，在适当的温度和压力下进行搅拌和分离，从而得到相对纯度较高的目标产物。

沉淀法是利用添加特定的盐类或聚合物使产物发生沉淀，利用离心或过滤等方式将沉淀物分离出来。

离子交换法则通过将产物溶液通过具有相应固定相的离子交换树脂柱，利用产物与树脂之间的吸附和解吸作用来完成分离和纯化。

超滤法则是利用不同分子量的孔膜实现对产物的分离和提纯。

根据产物的特性和需求，选择合适的提取方法来实现产物的高效提纯是非常重要的。

此外，为了进一步提高产物的产量和质量，还可以通过辅助策略来优化枯草芽孢杆菌的发酵过程以及产物的提取技术。

常用的辅助策略包括基因工程技术、发酵反应动力学研究、传质芯片技术等。

基因工程技术可以通过改造枯草芽孢杆菌的菌株，使其具有更高的产物生产能力。

枯草芽胞杆菌B44菌株培养与发酵的优化条件研究

枯草芽孢杆菌在自然界中广泛存在，人畜无害，污对不
染环境，有显著的抗菌活性和极强的抗逆能力『１具６，，并且许７
多枯草芽孢杆菌的菌株可以产生对主要植物病原真菌具有抑制活性的代谢产物，具有极高生物工程利用价值和开是发前景的医用抗生素和环保型生物源农药１枯草芽孢杆菌８１。
供试菌株：草芽孢杆菌菌株Ｂ４、麦全蚀病菌、枯４小苹果腐烂病菌，由青岛农业大学农业仿生应用工程技术研均究中心提供。
１．培养基２
温度、应的时间、０／ｉ相２ｒｎ下振荡培养之后，抗细菌培０ｍ拮
维普资讯
代农业科技）０８年第５期２０
植物保护
枯草芽胞杆菌Ｂ４菌株培养与发酵的优化条件研究４
梁桂淼罗兰刘诚诚牛新威鲁世伟袁忠林
（青岛农业大学植物保护学院，山东青岛２６０）６１９
摘要
采用单因素试验和正交试验设计法Ｌ（对拮抗细茵— — 枯草芽孢杆茵Ｂ４的液体发酵培养基和发酵条件进行优化试验。４）４确
防治植物病害非常广泛【５ｌ。
１．拮抗细菌培养基的选择。用５种培养基。．２３选各培养基的ｐ值均为７０装液量为３ｍＬ（５ｍＬ三角瓶）接入Ｈ．，０２０。ｌｍＬ相应的种子发酵液，２ ℃ 、０ｒｍｉ下振荡培养在８２０／ｎ４ｈ。草芽孢杆菌细菌培养液在４Ｃ、０００／ｉ心８枯￣１０ｒｒｎ离ａ１ｒｉ菌体，复１次，到上清液即为枯草芽孢杆菌拮０ｎ去ａ重得抗物质粗提液。用环柱测定法『测量小麦全蚀病菌与苹果腐１ｑ烂病菌在５种培养粗提液下的生长半径的大小，对照试其验用无菌水处理，个试验重复４次，据各培养粗提液抑每根

好氧堆肥用枯草芽孢杆菌GX2产芽孢工艺优化

好氧堆肥用枯草芽抱杆菌GX2产芽抱工艺优化李月月心，李秀芬&心，齐希光'，李健心，任月萍心，王新华心，夏琼琼5(1.江南大学环境科学与工程学院，江苏无锡214122；2.江苏省厌氧生物技术重点实验室，江苏无锡214122；3.江苏省水处理技术与材料协同创新中心,江苏苏州215009；4.江南大学食品学院,江苏无锡214122；5.中国市政工程华北设计研究总院有限公司，天津300074)摘要：芽，杆菌是好氧堆肥微生物菌剂的重要组成部分，为降低菌剂生产成本、改善其品质及应用效果，对芽，杆菌产芽,工艺进行研究$首先，在摇瓶上进行枯草芽，杆菌GX2的培养基及培养条件优化，在此基础上，在3L发酵罐中进行分批补料优化研究，进一步提高细胞浓度，最后，通过单因素及正交试验研究，在3L发酵罐中对产芽，工艺进行了优化。

结果表明，当pH为6.8、温度为50七和搅拌转速为150r/min时，发酵液中的活菌数达1.57x1010CFU/mL，芽,数达1.32x l010CFU/mL,芽，率为84.1%。

堆肥用枯草芽，杆菌GX2的发酵及产芽，工艺优化可有效提高发酵液中的活菌数及芽，率，降低菌剂的发酵及生产成本，为后续工业化生产及应用奠定基础&关键词：微生物菌剂；枯草芽，杆菌；芽，率；工艺优化中图分类号:Q815文章编号:1673-1689(2021)01-0091-09DOI：10.3969/j.issn.1673-1689.2021.01.012Optimization of Sporulation Parameters for Aerobic CompostingBacillus subtilis GX2Strains*1,2,3,QI Xiguang4,LI Jian1,2,3,LI Yueyue1,2,3,LI XiufenREN Yueping1,2,3,WANG Xinhua1,2,3,XIA Qiongqion,(1.School of Environmental and Civil Engineering,Jiangnan University,Wuxi214122,China;2.Jiangsu KeyLaboratory of Anaerobic Biotechnology,Wuxi214122,China; 3.Jiangsu Cooperative Innovation Center ofTechnology and Material of Water Treatment,Suzhou215009,China; 4.School of Food Science andTechnology,Jiangnan University,Wuxi214122,China; 5.North China Municipal Engineering Design&Research Institute Co.Ltd.,Tianjin300074,China)Abstract:Bacillus subtilis is an important microbial agent during the aerobic composting.Toreduce the production cost and improve the quality and applicability of bacteria,the sporeproduction process of Bacillus subtilis was studied.Firstly,the culture medium and environmentalconditions of Bacillus subtilis GX2were optimized using shaking flasks.Cell concentration wasfurther increased by a batch feed optimization method in a3L fermenter.Finally,single-factor andorthogonal experiments were applied to optimize the spore-forming process.The results showed thatthe number of viable cells and spores in the fermentation broth reached1.57 x1010CFU/mL and 收稿日期：2019-06-11基金项目：国家&十三五’重点研发计划项目(2016YFC0400707)。

枯草芽孢杆菌固态发酵工艺流程

枯草芽孢杆菌固态发酵工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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枯草芽孢杆菌培养基优化

培养特性：枯草芽孢杆菌可在营养丰富的培养基上生长，如LB培养基、酪素培养基等；在固体培养基上可形成典型的菌落，菌落为乳白色、圆
形、凸起、湿润。
枯草芽孢杆菌在培养过程中可产生多种代谢产物，如抗菌物质、酶等，这些代谢产物具有潜在的商业价值。
03
培养基成分对枯草芽孢杆菌生长的影响
碳源对枯草芽孢杆菌生长的影响
氮源是培养基中重要的营养成分之一，对枯草芽孢杆菌的生长和代谢具有重要
影响。
常用的氮源包括有机氮源和无机氮源，其中有机氮源如蛋白胨、酵母粉等可以提供丰富的营养物质，促进枯草芽孢杆菌的生长，而无机氮源如硝酸盐、氨盐
等则对其生长作用有限。
在优化培养基时，需要选择适当的氮源及其浓度，以获得最佳的生长效果。
实验操作
根据因素和水平数量，选择合适的均匀表，确保每个实验组合都包含所有因素和水平，且每个水平的出现次数相同。
数据处理
根据均匀表进行实验操作，记录每个组合下的枯草芽孢杆菌生长情况。
分析实验数据，找出最优的培养基组合。
05
培养基优化实验结果分析
正交试验设计结果分析
• 氮源种类：在正交试验中，不同氮源种类对枯草芽孢杆菌的生长和芽孢产量有显著影响。其中，牛肉膏、蛋白胨和尿素为较优的氮源，牛肉膏与蛋白胨的组合或牛肉膏与尿素的组合为最佳氮源。
生长因子对枯草芽孢杆菌生长的影响
生长因子是促进微生物生长和代谢的一类微量营养成分。
不同的生长因子对枯草芽孢杆菌的生长和代谢具有不同的作用，如维生素B1可以促进其生长和产酶，而其他一些生长因子则对其生长和代谢没有明显影响。
在优化培养基时，需要添加适量的生长因子，以促进枯草芽孢杆菌的生长和代谢。
培养基pH值对枯草芽孢杆菌生长的影响

枯草芽孢杆菌高产中性蛋白酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌高产中性蛋白酶发酵条件的优化刘颖;张彬彬;孙冰玉;刘琳琳;邹丽宏;石彦国【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2014(035)013【摘要】通过单因素试验和正交试验对枯草芽孢杆菌10075菌株发酵产中性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化,达到提高菌株中性蛋白酶产量的目的.结果表明,发酵培养基的最佳组分:添加麦芽糖8.0％、蛋白胨4.0％、MgSO4 0.08％;最适发酵条件为发酵温度37℃、初始pH 7.0、发酵时间42 h,酶活力由最初的98.36 U/mL提高到353.45 U/mL.【总页数】5页(P166-170)【作者】刘颖;张彬彬;孙冰玉;刘琳琳;邹丽宏;石彦国【作者单位】哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江省普通高等学校食品科学与工程重点实验室,黑龙江哈尔滨 150076【正文语种】中文【中图分类】Q939.97;TS201.3【相关文献】1.枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化 [J], 李洪康;李由然;李赢;顾正华;丁重阳;石贵阳;张梁2.枯草芽孢杆菌ZC 1发酵产中性蛋白酶的条件优化 [J], 黄达明;宋庆春;管国强;张志才;李倩3.枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化 [J], LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai4.枯草芽孢杆菌L07产中性蛋白酶发酵条件优化 [J], 卢超;陈景鲜;王国霞;陈刚;李春阁;王会鱼5.蜡样芽孢杆菌高产新型中性蛋白酶发酵条件的优化 [J], 于平;吴赟婷;杨柳贞;贺敏;胡淳玉;刘航;易明花因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

枯草芽孢杆菌发酵芽孢形成过程初探及干燥温度优化

枯草芽孢杆菌发酵芽孢形成过程初探及干燥温度优化枯草芽孢杆菌微生态制剂因其能够产生芽孢而具有较好的适应性和抗逆性,被广泛应用于动物养殖,植物防病和水体净化等多个领域。

目前对枯草芽孢杆菌制剂的研究主要集中于如何提高有效生物量产量,但是在制备过程中培养基理化性质变化以及芽孢形成的分子机制的研究相对较少。

本文主要研究了固态发酵过程中,培养基理化性质的动态变化,芽孢形成调控基因的表达,并探讨了其与活菌数,芽孢数以及芽孢率的关系。

此外,通过优化干燥温度以进一步提高枯草芽孢杆菌有效生物量。

主要研究结果如下:（1）固态发酵体系中,发酵前48h枯草芽孢杆菌生长繁殖迅速,活菌数量达8.34×109 cfu/g。

发酵24-48h过程中,菌体利用了培养基中的大量葡萄糖,葡萄糖含量由13.6 mg/g下降到6.38mg/g。

低场核磁结果表明,T21峰在发酵过程中向左移动,表明菌体代谢改变了培养基结构,使得T21水与培养基结合更加紧密。

发酵48-72h过程中,芽孢数增加,芽孢率达到72%,菌体对培养基中营养物质利用率降低,培养基理化性质变化较小。

（2）枯草芽孢杆菌发酵48h后芽孢数持续增加,营养体数目减少,说明菌体繁殖方式发生明显变化。

调控芽孢形成的sigF基因在发酵中期表达量提高,spo0A基因和sigE基因在发酵后期表达量提高。

以24h的基因表达量为对照,sigF基因在发酵48h时的表达量是其1.58倍。

发酵72h后spo0A基因表达量较24h提高了1.92倍,sigE基因表达量提高了89%。

（3）在60℃、70℃、80℃和90℃四种温度下对枯草芽孢杆菌制剂进行热风干燥,结果表明80℃干燥条件下,2h后有效生物量为4.85×109cfu/g,明显高于其他温度。

一株饲用枯草芽孢杆菌CCAM 080032固态发酵工艺的研究

ｏＣ、２００
ｒ／ｍｉｎ控温摇床下培
养１７
ｈ。
１．４固态培养
根据试验配方称取固体发酵培养基原料，装料量
为４０ｇ，加入适当蒸馏水，１２１。Ｃ高压灭菌３０ｒａｉｎ，冷却至室温后，以接种量为５％接人种子液，在３７℃培
万方数据
－ｌ＿＿豳
养４８ｈ，然后６０℃烘干、粉碎、计芽孢数。１．５芽孢计数方法
笪：！：堑釜！二盗塑旦丝芏茎塾堑董ｇ垦垒丛Ｑ！塑！兰堕查垒壁三堇丝堑窒将枯草芽孢杆菌ＣＣＡＭ０８００３２在３７℃下进行固态培养，每１２ｈ取样测定芽孢产量，以确定最适的发酵时间。１．７．２发酵温度的选择分别在３０、３４、３７、加、４５℃的温度下，发酵４８后测定芽孢产量，确定最适的发酵温度。１．７．３料水比的确定通过控制添加的蒸馏水的量，使培养基料水比分别为ｌ：１、１：１．２５、１：１．５、１：１．７５，其他条件保持一致，３７℃发酵４８ｈ后测定芽孢产量，以确定最佳的初始料水比。２结果与分析２．１培养基优化２．１．１培养基固体基质的选择
７
ｏ
铵、硫酸铵、尿素、胰蛋白胨、酵母抽提物到含５０以ｇ
葡萄糖的基础培养基中。其他条件保持一致，３７℃发酵４８ｈ后测定芽孢产量，确定最适外加氮源的种类。
表ｌ外加氮源对芽孢产量的影响堡旦
ＮａＮ０３
０
６０５Ｏ４Ｏ３ＯＯ
鋈垫量亟丝由
３０．３６１４．２９１９．“ ２３．５７１０．７２３９．３７５０１５０．１５
ｇ，３７℃培养４８ｈ，芽孢产量达到７．９０ｘ１０ｍ
ＣＦＵ／ｇ。
关键词：枯草芽孢杆茵；固态发酵；芽孢产量中图分类号：Ｑ８１５文献标识码：Ａ文章编号：１００１—９９１Ｘ（２０１０）２２－００４３—０４

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai【摘要】选用玉米粉、豆饼粉、KH2 PO4及Na2 HPO4为基础配方,通过单因素实验对枯草芽孢杆菌发酵产中性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化.确定了优化的发酵培养基为:20 g·L-1甘油,30 g·L-1豆饼粉,2 mmol·L-1氯化钙,0.3 g·L-1 KH2 PO4,4 g·L-1 Na2 HPO4;优化的发酵条件为:温度30℃,接种量5％.调控发酵培养基pH值7.0控制发酵,发酵周期40 h,最终的酶活达到7344 U·mL-1.进行甘油补料流加实验,培养温度30℃,发酵过程控制pH值7.0,调整转速和风量控制溶氧30％～35％,接入5％种子,经过40 h发酵,最终酶活达到10654 U·mL-1,较未补料提高了45％.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】6页(P47-52)【关键词】枯草芽孢杆菌;中性蛋白酶;液体发酵;酶活性【作者】LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai【作者单位】;;;【正文语种】中文蛋白酶是一类在生理及商业上都有非常重要地位的水解酶类，能催化肽键水解成氨基酸或短肽，其销售量约占酶制剂市场的一半以上[1]。

按蛋白酶作用的最适pH值可分为酸性、中性和碱性蛋白酶。

中性蛋白酶是最早被应用的蛋白酶之一，能在中性pH值范围内将大分子蛋白质水解成相对分子量在5 000以下的多肽[2]，普遍存在于细菌和真菌中，在pH值7～8时活性最大[3]。

目前，中性蛋白酶高产菌株主要通过自然界筛选、人工诱变和分子生物学改造获得[4-8]。

近年来，国外研究侧重于基因结构特性研究、定点突变改变蛋白酶的特性、稳定性的提高、与医学相关的蛋白酶的分离鉴定、蛋白酶的应用等[9-12]。

黄芪提取液发酵枯草芽孢杆菌工艺优化研究

黄芪提取液发酵枯草芽孢杆菌工艺优化研究乔宏兴;史洪涛;张帅帅;边传周【摘要】为研究黄芪提取液发酵枯草芽孢杆菌的工艺流程,将活化后的枯草芽孢杆菌菌液以1％的比例分别接入含黄芪提取液浓度为100％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％的液体培养基中,置于37℃温箱中进行培养,分别取24 h、48 h、72 h的培养物检测菌液数量、芽孢形成率和OD值.对初筛的培养基配方选取接种量、pH、温度和摇床转速4个条件进行正交试验观察影响发酵的主要因素并进行发酵罐大量培养.结果表明:含60％黄芪提取液芽孢数量最高可达1.70×109,芽孢形成率99％,OD值为2.961.正交试验结果优化条件为接种量10％,pH9.0,温度37℃,转速250 r/min,发酵罐培养结果48 h即可发酵结束,芽孢数量比摇瓶培养高5倍左右.【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2014(035)007【总页数】5页(P58-62)【关键词】黄芪;枯草芽孢杆菌;发酵【作者】乔宏兴;史洪涛;张帅帅;边传周【作者单位】河南牧业经济学院生物工程系,河南郑州450046;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南牧业经济学院生物工程系,河南郑州450046;河南牧业经济学院生物工程系,河南郑州450046【正文语种】中文【中图分类】S811.6枯草芽孢杆菌是饲料中常用的一种添加剂，具有维持肠道菌群平衡、调节机体免疫功能、提高生产性能等作用[1]。

黄芪是常用的一种中草药，味甘、性温，有补气升阳、固表止汗、脱毒排脓和生肌等功效[2-3]，其有效成分黄芪多糖已被证实具有提高动物生产性能，增强机体免疫力等作用[3]。

传统的合生元是简单的将益生菌与植物多糖组合在一起，虽然在临床中也起到了一定的作用，但是并没有充分发挥出微生物发酵的巨大潜力。

黄芪多糖具有发酵益生菌的作用，同时能提高中药活性成分含量、提高药效和降低毒副作用等优点[4-5]。

枯草芽孢杆菌的发酵

枯草芽孢杆菌的发酵学院：化工学院专业：生物工程班级：生物10-2姓名：***摘要枯草芽孢杆菌是我国农业部允许作为饲料添加剂的15种菌种之一,其已被越来越多地制成饲用微生态制剂。

因其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色”添加剂，故具有广阔的发展前景，并已在畜牧业、饲料业广泛应用，显示巨大的社会效益和生态效益。

通过摇床培养筛选出较适宜于枯草芽孢杆菌发酵的培养基配方，发酵培养基配方确定后，在摇床条件下，通过对温度、初始ｐＨ值、初始接种量、装液量、摇床转速等发酵条件的摸索，确定最佳发酵条件。

在摇瓶条件下优化发酵培养基和发酵工艺后，采用发酵罐进行发酵培养，对枯草芽孢杆菌在液体发酵过程中的菌体数量、ｐＨ值、总糖含量和总氮含量四个因素随时间的变化进行了观察。

枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。

单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。

无荚膜，周生鞭毛，能运动。

革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。

菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。

枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。

枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道pH值，间接抑制其它致病菌生长。

枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性，在饲料中应用广泛。

它还可以用来改善水质，应用在污水处理和环境保护中。

和其它微生物混合使用，还可以用于生物肥料和土地改良等关键词：枯草芽孢杆菌生长发酵活菌数第一章材料与方法1.1材料1.1.1 菌种枯草芽孢杆菌1.1.2 培养基（1）LB培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl10g，蒸馏水1000ml，pH为7，（可溶性淀粉20g）琼脂20g。

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化焉兆萍，宋士良，陆克文(上海邦成生物工程有限公司，上海 201506)中图分类号：TQ920.6 文献标志码：A文章编号：1001-0769(2019)01-0051-05枯草芽孢杆菌是嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，且不污染环境；能产生多种抗菌物质和酶，具有广谱抗菌活性。

该菌已被我国农业农村部列入饲料添加剂目录名单，越来越多地被研制成微生物制剂，其制剂作为“绿色”饲料添加剂，在畜牧养殖业、饲料加工业中得到广泛应用，成为现代养殖业的一种常规添加剂，具有广阔的发展前景[1]。

枯草芽孢杆菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这对动物的营养物质利用、生长、防病起到重要作用[2]；其还可以通过产生抗体和提高嗜菌作用等，刺激免疫，激发体液免疫与细胞免疫，从而提高动物的生产性能和饲料利用率[3]。

由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、易于存活、无致病性，具有良好的发酵基础，国内外已有众多学者对此菌进行了大量研究[4]。

本文通过单因素试验与正交试验，对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了研究，确定其最佳发酵培养基和最适发酵条件，以最大限度地提高枯草芽孢杆菌的发酵菌数，降低生产成本，满足工业化发酵生产的要求。

1 材料与方法1.1 供试菌种枯草芽孢杆菌，由上海邦成生物工程有限公司菌种保藏室提供。

1.2 培养基LB固体培养基：蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、葡萄糖5 g、氯化钠10 g、琼脂粉20 g、水1 000 mL，pH 7.2。

LB液体种子培养基：蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、葡萄糖5 g、氯化钠10 g、水 1 000 mL，pH 7.2。

1.3 种子液的制备将菌种接种于LB固体培养基中，37 ℃恒温培养箱活化18 h后，挑取单菌落接入装有100 mL LB液体种子培养基的250 mL三角瓶中，37 ℃条件下180 r/min振荡培养24 h。

枯草芽孢杆菌固态高密度发酵工艺条件的优化

meal, rice husk and straw were made into the solid-state fermentation medium. The best fermentation technology of
Bacillus subtilis was optimized by single factor test and orthogonal test of four factors and three levels. Results
721
单因素试验结果
3.2.1 发酵时间对活菌数的影响
发酵时间对枯草芽孢杆菌固态发酵产物中活菌
数的影响结果见图1，发酵时间达到25 h时，活菌数
数也在升高，当发酵时间达到 30 h 时，增长幅度减
下培养 12~14 h。取活化后的液体培养基 2 mL 接入
200 mL 液体培养基进行扩大培养，置于 37 ℃ 、
195 r·min-1 培养 3~6 h 后，作为种子液备用[14]。
2.2
固态发酵
将豆粕、稻壳、玉米秸秆粉碎后过筛，按表 1
的比例置于 500 mL 的烧杯中。将烧杯置于高压灭
质量比 631 为最佳配比，不但降低了原料成本，
同时也提高了粮食作物的性价比。
根据原料的市场保有量和价格设计不同的原料
配比，以固态发酵产物中的活菌数为指标，将豆
粕、玉米秸秆和稻壳按比例配制后进行固态发酵试
验，确定最佳原料配比，结果见表 3。
活菌数/（cfu·g-1）
451
5.2×107
631
玉米秸秆，购自吉林华展生物工程有限责任公司。
培养基
斜面培养基：蛋白胨 10.00 g·L- 1，酵母浸粉

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化作者：焉兆萍宋士良陆克文来源：《国外畜牧学·猪与禽》2019年第01期摘; 要：本文对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了筛选优化。

采用单因素试验和正交试验方法，确定该枯草芽孢杆菌的优化培养基为：豆粕40 g/L、玉米粉20 g/L、葡萄糖15 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、磷酸二氢钾1.5 g/L、硫酸镁0.5 g/L、硫酸铵0.35 g/L、酵母浸粉0.2 g/L、硫酸锰0.2 g/L、硫酸亚; ;铁0.1 g/L、碳酸钙0.1 g/L。

最适发酵条件为：初始pH 7.2，接种量5%，发酵温度35 ℃，摇床转速250 r/min。

关键词：枯草芽孢杆菌;发酵培养基;发酵条件中图分类号：TQ920.6 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2019）01-0051-05枯草芽孢杆菌是嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，且不污染环境;能产生多种抗菌物质和酶，具有广谱抗菌活性。

枯草芽; 孢桿菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这对动物的营养物质利用、生长、防病起到重要作用[2];其还可以通过产生抗体和提高嗜菌作用等，刺激免疫，激发体液免疫与细胞免疫，从而提高动物的生产性能和饲料利用率[3]。

由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、易于存活、无致病性，具有良好的发酵基础，国内外已有众多学者对此菌进行了大量研究[4]。

枯草芽孢杆菌D-29菌株发酵条件的优化

ｏｂｔａｉｎｅｄｂｅｓｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗａｓｄｅｓｃｒｉｂｅｄａｓ：ａｍｏｕｎｔｏｆｌｏａｄ１００ｍＬ（ｉｎａ２５０ｍＬｌｆａｓｋ）。ａｍｏｕｎｔｏｆｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ１％，ｂｅｇｉｎｉｎｇ
ｐＨ７，ｔｈｅｆｅｍｅｒｎｔａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ２８℃ 。ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅ４８ｈ，ａｎｄｒｏｔａｔｉｏｎｓｐｅｅｄ１７０ — １９０ｒ／ｍｉｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ；ｆｅｒｍｅｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ；ｂｉｏｌｏｇｉｃｌａｃｏｎｔｒｏｌ
中图分类号：￥４７６．１文献标识码：Ａ文章编号：１００２ — ２４８１（２０１３）１２ — １３３３ — ０３
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＦｅｒｍｅｔａｔｉｏｎＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＳｔｒａｉｎＤ－２９
最佳初始培养基配方为：玉米粉１０ｇ，麦芽糖３０ｇ，碳酸钙１．５ｇ，豆粉３０ｇ，水１０００ｍＬ；最佳培养条件为：２５０ｍＬ