常用10种培养基的配置和质控标准
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小结:常用10种培养基的配置和质控标准
(1)基础肉汤
成分和配制方法:
蛋白胨10g
NaCl5g
牛肉膏5g
酵母膏3g
DW1L
pH~
15磅30min高压灭菌,倾注无菌试管备用。
每次新配制时做质控
阳性质控:ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种基础肉汤中,35℃温箱24h肉汤混浊。
无菌试验:<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的基础肉汤35℃温箱24h培养,无细菌生长。
平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做
用途:供培养对营养要求不高的细菌增菌用;作其他选择培养基的基础液。
储存
干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。
培养基:2-8℃保存一个月
(2)普通营养琼脂
成分和配制方法:
基础肉汤100ml
琼脂2g
15磅30min高压灭菌,倾注平板备用。
注:可购买国内生产的瓶装营养琼脂粉,按上面的说明配制。
质量控制:
质控频度每次新配制时做质控
质控方法
阳性质控:ATCC 25923金黄色葡萄球菌或ATCC25922大肠埃希菌接种营养琼脂上,35℃温箱24h细菌生长良好。
无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10管未接种的营养琼脂35℃温箱24h培养,无细菌生长。
平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做
用途:
供培养对营养要求不高的细菌。
作无糖基础培养基。
加血成血平板。
加血加热75℃以上,再加上生长添加剂就成巧克力平板。
储存
干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。
培养基:2-8℃保存半个月
(3)葡萄糖肉汤
成分和配制方法:
蛋白胨10g
朊胨10g
NaCl5g
牛肉膏5g
酵母粉3g
葡萄糖4g
枸橼酸钠3g
硫酸镁3g
DW1L
pH~
%酚红5ml
15磅30min高压灭菌,备用
质量控制:
质控频度每次新配制时做质控
质控方法
阳性质控:ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种葡萄糖肉汤中,35℃温箱24h肉汤混浊。
无菌试验:<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的葡萄糖肉汤35℃温箱24h培养,无细菌生长。
平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做
用途:供培养对营养要求不高的细菌增菌用。
6 储存
干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。
培养基:2-8℃保存一个月
(4)血液琼脂平板
成分和配制方法:(法国生物梅里埃成品培养基)
4g琼脂基础+100mL蒸馏水
高压灭菌(15磅、121℃)20min
冷却至50℃加入5%-10%无菌羊(兔)血
倾注于无菌平皿内(φ9mm)每一个平皿分装13~15ml。
质量控制:
质控频度每次新配制时做质控
质控方法
阳性质控:ATCC 6303肺炎链球菌(或质控菌株)和ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂,35℃温箱24h细菌生长良好。ATCC 6303肺炎链球菌为α溶血。ATCC 25923金黄色葡萄球菌为β溶血。
无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的血液琼脂35℃温箱24h培养,无细菌生长。
平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做
用途:供分离培养营养要求较高的细菌。
储存
干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。
培养基:2-8℃保存半个月
注意事项:
制备血平板时,温度必须适宜,琼脂应冷至50℃左右,如温度过高,可使血液变色不易观察溶血,温度过低,琼脂凝固与血液不易混合。
使用的血液以羊血,兔血为好,不宜使用人血,因人血中有抗体、补体不利细菌生长。羊血对链球菌、葡萄球菌的溶血比较满意,但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。
(5)血液琼脂平板(国产)
普通营养琼脂粉 3.8克+100ml蒸馏水
10%葡萄糖
血液6~10ml
冷却至50℃加入5%-10%无菌羊(兔)血
倾注于无菌平皿内(φ9mm)每一个平皿分装13~15ml。
质控方法
阳性质控:ATCC 6303肺炎链球菌(或质控菌株)和ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂,35℃温箱24h细菌生长良好。ATCC 6303肺炎链球菌为α溶血。ATCC 25923金黄色葡萄球菌为β溶血。
无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的血液琼脂35℃温箱24h培养,无细菌生长。
平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做
用途:供分离培养营养要求较高的细菌。
储存
干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。
培养基:2-8℃保存半个月
注意事项:
制备血平板时,温度必须适宜,琼脂应冷至50℃左右,如温度过高,可使血液变色不易观察溶血,温度过低,琼脂凝固与血液不易混合。
使用的血液以羊血,兔血为好,不宜使用人血,因人血中有抗体、补体不利细菌生长。羊血对链球菌、葡萄球菌的溶血比较满意,但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。
(6)巧克力平板
成分和配制方法:
基础肉汤100ml
琼脂粉 1.5g
无菌脱纤维兔血10ml