2血型盐水法操作规程

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检验科ABO及RH血型标准操作规程

检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。

2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。

1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。

1.3受检者血清。

1.4受检者5%红细胞盐水悬液。

2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。

2.25%D阳性红细胞生理悬液。

2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。

4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。

常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。

②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。

结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。

RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。

虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。

Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。

5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。

2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。

3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。

4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。

血型鉴定标准操作规程

血型鉴定标准操作规程1.目的为规范各血型系统血型鉴定的技术操作，保证鉴定结果准确及临床输血安全有效，特制定本规程。

2.适用范围适用于输血科（血库）进行各血型系统血型鉴定。

3.职责输血科（血库）技术人员负责各血型系统血型鉴定。

4.所需设备和试剂设备普通离心机，血型血清学专用离心机，普通显微镜。

试剂各血型系统单克隆血型试剂，3%-5%的A、B、O型试剂红细胞。

5.检测环境条件室温应控制在18-27℃，湿度应保持30%-70%。

6.项目及方法ABO血型鉴定ABO血型鉴定原理红细胞上具有A抗原，而血清中含有抗B抗体者为A型；红细胞上有B抗原，而血清中含有抗A抗体者为B型；红细胞上没有A和B抗原，而血清中含有抗A、B抗体者为O 型；红细胞上有A和B抗原，而血清中没有相应抗体者为AB型，见表1。

表1.试剂血清、红细胞鉴定血型（一）玻板法实验操作（1）洁静的玻板，用记号笔在正定型一侧注明抗A、抗B、抗A（B）,反定型一侧孔中注明A细胞、B细胞、O细胞。

（2）在正定型一侧孔中先加入相应试剂血清1滴,再加入待检者20%红细胞悬液1滴；在反定型一侧先加入待检者血清2滴,再加入相应20%试剂红细胞(为3-5人份的混合红细胞)1滴。

（3）摇动玻板数次,5min后观察凝集现象，判断并报告检测结果。

如有怀疑者,须做试管法对照。

（4）报告方式:通过计算机信息系统发布正式血型结果。

注意事项（1）操作者必须认真细致,严格查对,准确报告血型结果。

（2）鉴定血型时,室内温度宜在18-27℃,以免产生假阳性。

遇有可疑冷凝集时 (1)先将玻板放在日光灯处加热3-5分钟后观察 (2)将待检者红细胞用37℃生理盐水洗涤2-3次后，再做血型鉴定。

（3）抗A、抗B、抗A(B)试剂血清，效价不低于256，亲和力在15s以内出现凝集，3min 时凝块不小于1mm2，冷凝集等效价在1:4以下。

（4）应另备有一套合格的试剂的血清作对照。

（5）所有待检者的血型均应做正、反定型，防止误定血型。

输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程

输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2．供血者血清抗体筛检；3．输血前受血者血清抗体检查；4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5．孕妇血清的抗体检查；6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。

筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。

这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。

在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。

对患者或供血者的血样不需要用这种方法。

在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。

【试剂】1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。

筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。

因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。

筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。

这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。

每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。

如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。

合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。

2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。

因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。

盐水介质法血型鉴定标准操作程序

操作人员：经批准人授权的本院专业技术人员部门主管：质量控制员：唐目的保证血型鉴定的操作规范化，为临床提供准确可靠的结果。

该SOP变动程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。

适用范围：适用于盐水介质法血型鉴定的操作。

方法学原理：1、正定型：用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应（室温），若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。

2、反定型：用已知标准A、B、O型红细胞与被检血清反应，若被检血清与已知型别的标准红细胞出现凝集，则证明被检血清中存在着与该红细胞抗原相对应的抗体。

反之，若被检血清与已知型别的标准红细胞不出现凝集，证明被检血清中不存在与红细胞抗原相对应的血型抗体。

以此反证被检者红细胞抗原的型别。

标本采集：由临床科室采用真空负压EDTA－K2抗凝管采集3ml－5ml，作好标记，立即送检。

标本编号登记：检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。

确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号。

并按日期索引进行登记。

标本处理：将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。

保证血浆与血球有效分离。

溶血、乳靡血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。

试剂：标准抗A、抗B血清，5%A、B型标准红细胞生理盐水悬液，生理盐水。

仪器双目显微镜。

试剂准备：将A，B红细胞悬液，单克隆抗A，抗B试剂，单克隆IgM/IgG 抗D抗体，从冰箱中拿出，室温放置15-20分钟。

正定型：每样本取4支小试管，每管编号A，B，D，分别加入抗A，抗B，抗D抗体各两滴，另一支加生理盐水，配制检测样本5%红细胞悬液，将红细胞悬液各加两滴入编好号的抗A，抗B，抗D试管中，室温放置（25℃）5分钟，1000r/min离心1分钟后先肉眼观察显微镜观察。

ABO血型鉴定（生理盐水法）

ABO血型‎鉴定（生理‎盐水法）‎2009-‎01-22‎14:0‎7【大中‎小】【我‎要纠错】‎ 1. ‎原理‎根据红细‎胞上有或无‎A抗原或/‎和B抗原，‎将血型分为‎A型、B型‎、AB型及‎O 型四种。

‎A型红细胞‎膜上含有A‎抗原，B型‎红细胞膜上‎含有B抗原‎，AB型红‎细胞膜上含‎有A、B抗‎原，抗A、‎抗B试剂是‎分别针对A‎抗原和B抗‎原的特异性‎抗体。

可利‎用红细胞凝‎集试验，通‎过正、反定‎型准确鉴定‎A BO血型‎。

所谓正定‎型，是用已‎知的抗A、‎抗B试剂与‎受检者的红‎细胞混合时‎，与抗A试‎剂发生凝集‎者即为A型‎，与抗B分‎型试剂发生‎凝集者即为‎B型，与抗‎A、抗B试‎剂均发生凝‎集者即为A‎B型，与抗‎A、抗B试‎剂均不凝集‎者即为O型‎。

所谓反定‎型，是用已‎知A细胞和‎B细胞来测‎定血清中有‎无相应的抗‎－A或/和‎抗－B.‎2.‎标本采集‎2‎.1 标本‎种类：新抽‎取的抗凝血‎或手指末梢‎血和血清。

‎2‎.2 标本‎要求：‎ 2.2‎.1 抗凝‎剂：如用抗‎凝血，多主‎张用EDT‎A K2（‎㎎/dL）‎抗凝。

‎ 2.2‎.2 用手‎指末梢血作‎血型检测时‎，最少样品‎量为100‎u l，如手‎指有‎冻疮，则‎主张采耳垂‎血。

‎ 3. 标‎本储存：2‎小时内完成‎实验，室温‎放置下不超‎过8小时，‎4℃-8℃‎保‎存不超过4‎8小时。

‎4.‎标本运输‎：室温运输‎5‎.标本拒‎收标准：细‎菌污染、溶‎血标本不能‎作测定‎ 6. ‎试剂‎ 6.1 ‎试剂名称：‎A BO血型‎检测试剂‎6.‎2试剂生‎产厂家：南‎京华欣药业‎生物工程有‎限公司‎ 6.3‎试剂组成‎试‎剂1：抗A‎分型试剂（‎蓝色），效‎价1：12‎8，2℃-‎8℃避光保‎存，室温放‎置不宜过久‎。

‎试剂2：抗‎B分型试剂‎（黄色），‎效价1：1‎28，2℃‎-8℃避光‎保存，室温‎放置不宜过‎久。

医院输血科交叉配血(盐水法)标准操作程序

输血科交叉配血（盐水法）标准操作程序
（原理）交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，故受血者血清加供血者红细胞相配的一管称为“主侧”，供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为“次侧”，两者合称交叉配血。

交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整的操作规程应包括：①查阅受血者以前的血型检查记录，如与这次检查结果有所不同，应及时分析原因；②对收到的受血者血样应作ABO正反定型，RH(1)定型及血型抗体检测和鉴定；③选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。

交叉配血方法：
（一）盐水介质配血法
本法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性，当受血者和供血者细胞经混合并离心后，如有ABO不配合问题，就会很快显示出来，所以常称为“立即离心”配血试验。

[操作]
1、抽取受血者静脉血3-4ml，待凝固后分离血清，并配制2%-5%台红细胞盐水悬液。

2、将供血者血样以同样方法分离血清，并配制2%-5%红细胞悬液。

3、取洁净水试管2支，1支标明受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）作“主侧”，另1支标明供血者血清（DS）+受血者细胞（PC）作“次侧”。

4、按标记“主侧”管如受血者血清2滴和供血者红细胞悬液1滴。

“次侧”管如供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴混匀，以1000r/min离心1min，轻轻侧动试管，观察结果，冬季气温较低，应将试管保温，以防
冷凝集素引起的凝集反应影响结果判断。

ABO同型配血，“主侧”和“次侧”均无溶血及凝集表示无输血禁忌可以输血。

ABO血型鉴定2

• (2)平板法 ①取洁净平板1块，用记号笔划出反应小格，在左侧注明抗D，中间段注明阴性对照，右侧注明阳性对照；②将室温盐水反应的抗D血清各1滴加入上述小格内；③抗D 小格内加入待检者5％红细胞悬液1滴，阳性对照小格内加入阳性对照红细胞悬液1滴，阴性对照小格加入阴性对照红细胞悬液1滴； ④用干净玻璃棒搅拌红细胞悬液与试剂血清充分混合；⑤连续轻轻倾斜转动平板，一般在2min内观察结果，或按试剂说明书规定的时间观察结果。
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2019/4/1
• RH血型的分类
•
RH血型系统，其中含有6种抗原，即C、c、D、d、 E、e。凡人体血液红细胞含D抗原（又称RH抗原）为 RH阳性，否则为阴性。这样就使已发现的红细胞 A、 B、O及AB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为RH阳性和阴性两种。随着对RH血型的不断研究，认为RH血型系统可能是红细胞血型中最为复杂的一个血型系。RH血型无天然抗体，其抗体多由输血（RH阴性者被输人RH阳性血液）或妊娠（RH阴性母亲孕育着RH阳性胎儿）免疫生成，具有重要临床意义。一旦形成抗体，如再输入RH阳性血液，可发生严重输血反应。再孕育RH阳性胎儿可发生新生儿溶血症。
ABO血型和RH血型鉴定
永昌县计划生育服务站孙晓玲
ABO血型鉴定
• 一、 [器材]
1、采血针：市售一次性使用的采血针，刺血深度可加控制。 2、消毒干棉球。 3、75%乙醇棉球。 4、一次性使用的20uL刻度采血管。
• 二、鉴定方法
• 生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。

ABO血型鉴定标准操作程序

SOP_10-1 ABO血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：血型鉴定。

三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。

许多组织细胞上有规律地存在着A、B、H抗原，以及分泌型的分泌液中存在着A、B、H物质。

红细胞上的A/B /D抗原与抗B/A /D标准血清发生凝集反应。

ABO血型的分类及其与抗血清的反应：红细胞与抗血清反应表型红细胞上抗原血清中抗体抗A 抗BO 无抗A、抗B ――A A 抗B + ―B B 抗A ―+AB A、B 无+ +2 试剂：A、B、O标准血清；A、B、O定型红细胞；生理盐水。

3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。

3.2 ABO血型盐水介质鉴定（试管法）：3.2.1制备患者3~5%的红细胞盐水悬液。

3.2.2 正定型：抗-A 抗-B 抗-A、B 标准血清(μl) 100 100 100受检者RBC悬液(μl) 50 50 503.2.3 反定型：Ac Bc Oc 定型红细胞(μl) 50 50 50受检者血清(μl) 100 100 1003.2.4混匀。

3.2.5 以1000r/min离心1min。

3.2.6 取出试管，轻摇，使沉管底的红细胞浮起，认真观察有无溶血和/或凝集。

3.3 ABO血型正反定型结果判断：分型血清+受检者红细胞受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A、B 受检者血型Ac Bc Oc + –+ A –+ ––+ + B + –––––O + + –+ + + AB –––3.4 正反定型不一致的原因：（1）技术和管理工作的错误①血样试管及玻片混淆②书写错误③红细胞过浓或过淡④未注意样品溶血现象⑤漏加试剂⑥未按试剂说明操作⑦试剂血清效价低、亲和力不强或污染/过期/失效⑧离心速度/温度改变（2）血清异常等其它原因①抗体：新生儿、老年人、白血病、肿瘤、免疫缺陷、骨髓移植、嵌合体双生子、异型输血交换、胎盘出血等引起的抗体改变。

血库技术操作规程

ABO血型正定型操作规程1、原理根据红细胞表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正定型鉴定ABO血型。

正定型用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原。

2、试剂2.1 抗A、抗B血型定型试剂，有批文准号。

2.2 受检者3~5%红细胞盐水悬液。

3、操作3.1 试管法3.1.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，用滴管分别滴加抗A、抗B分型试剂各一滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者3~5%红细胞盐水悬液1滴混匀。

3.1.2 立即以1000r/min离心1分钟。

3.1.3 将试管从离心机取出，轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象。

如肉眼未见凝集，应将反应物倒于玻片上，以低倍镜观察。

3.1.4 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

3.1.5 凝集强度判断标准4+：红细胞凝集成一大块，血浆清晰透明。

3+：红细胞凝集成数小块，血浆尚清晰。

2+：红细胞凝块分散成数小块，周围可见到游离红细胞。

1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF：即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。

—：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

3.2 玻片法3.2.1 取清洁玻片一张（或凹玻板），用记号笔划成方格，标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B血清一滴于相应的方格内，再加受检者5%红细胞悬液一滴混匀。

3.2.2 将玻片（或凹玻板）不断轻轻转动，使血浆与细胞充分混匀，连续1~5分钟，肉眼观察有无凝集或溶血反应，再在低倍镜下观察结果。

ABO血型反定型操作规程1、原理用已知的A1、B细胞测定被箭血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。

2、试剂为成熟市售标准红细胞，主要组成组分为：A1、B型红细胞，葡萄糖、枸橼酸、核苷酸、抗生素等。

交叉配血试验标准化操作规程(盐水法)作业指导书

交叉配血试验标准化操作规程（盐水法）一、目的为保证临床输血的相容性，确保临床输血安全，对红细胞悬液、洗涤红细胞、浓缩红细胞、少白细胞红细胞等进行交叉配血试验。

二、方法采用盐水介质试管法；三、原理交叉配血试验也称配合性试验,只是检查不配合性,使受、供者血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分。

盐水介质交叉配血试验常称立即离心配血试验，将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在盐水介质中进行，只有在任何步骤中不产生溶液血或凝集时方可将供血者的血液或血液成分给受血者输注。

试验通常包括：（一、）主侧交叉配血试验：受血者血清对供血者红细胞，是检测受血者血清中是否存在与供血者红细胞发生反应的抗体；（二、）次侧交叉配血试验：受血者红细胞对供血者血清，是检测供血者血清中是否存在与受血者红细胞发生反应的抗体；四、适用范围适用于输血前需进行交叉配血试验的血液及血液成分。

五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、0.9%氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司）批准文号：国药准字H51021158；有效期：自生产日期之日起三年；七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA－K2真空紫头采血管1支+ 普通红头真空采血管1支)。

2、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。

3、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。

八、操作步骤1、将受血者与献血者的红细胞血清分离；2、分别配制受血者与献血者红细胞配成3 % RBC悬液3% RBC悬液配制：1滴压积RBC + 1.6 ml（40滴）生理盐水3、取一次性试管2支，1支标明主侧：受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）；另1支标明次侧：供血者血清（DS）+受血者细胞（PC）。

4、主侧管加受血者血清5滴和供血者红细胞悬液5滴。

次侧管加供血者血清5滴和受血者红细胞悬液5滴。

混匀，以1000r/min离心2min，轻轻侧动试管，观察结果。

冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起凝集反应影响结果判断。

盐水法配血操作规程

盐水法配血操作规程盐水法配血是一种常用的配血方法，通过在供者血样与受者红细胞悬液中加入不同浓度的盐水溶液来观察凝集反应，判断供者与受者血型是否相容。

下面是盐水法配血的操作规程。

一、实验前准备1. 准备好所需试剂和仪器设备，如盐水溶液、试管、试管架、洗瓶、一次性手套、试管盒等。

2. 校对血型试剂，确保其有效期内，并按照说明书稀释好。

二、操作步骤1. 标记试管用玻璃笔或细标签标记试管，并分别写上供者和受者的信息。

2. 制备供者血样取一滴供者的血液于洗净的试管内，加入一滴净化水，用试管尾轻轻混匀。

3. 制备受者红细胞悬液取一滴受者的血液于洗净的试管内，加入适量的盐水溶液，用试管尾轻轻混匀。

4. 加盐水溶液以1:2、1:4、1:8的比例分别将0.9%的盐水溶液加入供者和受者的试管中，使总体积约为1ml。

轻轻摇动试管，使溶液充分混合。

5. 静置观察把试管放入试管架上，静置5分钟，观察凝集情况。

6. 结果判定观察供者与受者试管中是否出现凝集现象，根据凝集的程度判断血型的相容性。

- 无凝集：相容，可进行输血。

- 片状凝集：相容，可进行输血，但需留意可能存在特殊抗体。

- 线状凝集：不相容，不可进行输血。

7. 清理试管将用过的试管放入洗瓶中，用水冲洗干净，清理试管架。

8. 记录结果根据观察结果，将配血结果记录在相关数据表格中，包括供者和受者的血型信息、凝集情况以及对应的相容性。

三、注意事项1. 操作时要严格按照标准操作规程进行，避免操作失误。

2. 手套和试管架等工具要彻底清洁干净，确保实验的准确性和结果可靠性。

3. 配血试验要进行双重确认，避免操作失误和结果错误。

4. 注意个人防护，避免接触到供者的血液，以避免传染病的传播。

5. 根据实际需要，可进行不同浓度溶液的稀释和配制，以满足不同试验的要求。

通过盐水法配血操作规程，可以判断供者与受者的血型相容性，为临床输血提供可靠的依据，确保输血安全性和有效性。

血型鉴定的操作流程

ABO血型鉴定正定型原理：用已知特异性抗体（标准血清）检查红细胞上的未知抗原。

试管法的操作过程1、取2支洁净小试管，编号分别为抗A和抗B2、分别加入抗A和抗B标准血清各1滴3、取1支洁净试管，用标签纸注明病人姓名，科室、床号.配成5%的红细胞悬液。

4、将配好的红细胞悬液分别加入抗A和抗B的两个试管中各1滴。

5、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒。

6、将试管从离心机中取出，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象。

7、登记结果、签名。

ABO血型鉴定正定型原理：用已知血型的标准红细胞，检查血清中的未知抗体。

试管法的操作过程：1、取3支洁净的小试管，分别标明A细胞，B细胞、O细胞；2、分别加入受检者的血清各2滴；3、分别在3个试管中加入反定细胞A、B、O（既5%的A、B、O型标准红细胞盐水悬液）各1滴；4、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒；5、将试管从离心机中取出，在光照下观查是否有溶血、脂血等，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象并记录。

ABO血型正反定型结果判断Rh（D）血型鉴定试管法（盐水法）操作过程：1、取洁净小试管3支，分别标明阴、阳对照管和试验管；2、在3支试管中各加入RhD定型血清1滴；3、在实验管中加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，在阴、阳对照管中各加入Rh阴性和阳性5%红细胞盐水悬液1滴；4、混匀，以3400转/分秒离心15秒；5、观查结果:实验管凝集，即表示受检红细胞上有相应抗原；实验管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。

不规则抗体筛检试验凝聚胺法操作过程：1、取3支洁净的小试管，分别标上“Ⅰ”“Ⅱ”“Ⅲ”；2、分别在3支试管中加入两滴受检者血清2滴；3、分别在3支试管中加入3~5%的筛选Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号细胞试剂各1滴，混匀以3400转/分钟，离心15S，看是否凝集；4、分别在3支试管中心0.65ml的Baso低离子溶液，放置室温1分钟；5、再分别在3支试管中心加入凝聚胺溶液两滴摇匀，以3400转/分钟，离心15秒，倒去上清液，不要沥干，让管底留0.1ml液体；6、轻轻摇动试管，且测红细胞有无凝集，（必须凝集，不凝集要重新做实验）；7、分别在3支试管中加入2滴“悬浮液”轻轻转动试管混合并同时观察结果，30S肉眼看是否凝聚。

ABO血型鉴定标准操作规程

ABO血型鉴定标准操作规程1.检验原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型及0型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知抗一A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A 抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一A或/和抗一B2.试剂和材料：1、抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（0型血）分型血清，2、5%A、B及。

型试剂红细胞盐水悬液。

3、受检者血清；4、受检者5%红细胞盐水悬液。

3.方法3.1.试管法（1）取洁净小试管（内径IommX60mm）3支，分别标明抗一A、抗一B和抗-分型血清各1滴于试管底部，再A十B,用滴管分别加抗一A、抗一B和抗一A十B以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。

（2）另取洁净小试管（内径IOmlnX60mm）3支，分别标明A、B和0细胞。

用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和0型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。

（3）立即以100Or/min离心Inlino（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。

如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或CiSAB的发现。

（6）凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞MF混合凝集外观（mixedfield）是指镜下可见少数红细胞凝集,而绝大多数红细胞仍呈分散分布。

一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

3.2.玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔画成方格，标明抗X、抗-B 和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗f和抗-A十B分型血清1滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。

ABO血型鉴定(生理盐水法).

ABO血型鉴定（生理盐水法）1. 原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及0型四种。

A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB 型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。

所谓正定型，是用已知的抗A、抗 B 试剂与受检者的红细胞混合时，与抗 A 试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为0型。

所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一A或/和抗－B。

2. 标本采集2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。

2.2 标本要求：2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2 （嗎/dL ）抗凝。

2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul ，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。

3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4C -8C 保存不超过48 小时。

4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定6. 试剂6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂6.2 试剂生产厂家：长春博德生物技术有限责任公司上海血液生物医药有限责任公司6.3 试剂组成试剂1 :抗A分型试剂（蓝色），效价1 : 128 , 2C - 8C避光保存，室温放置不宜过久。

试剂2 :抗B分型试剂（黄色），效价1 : 128 , 2C - 8C避光保存，室温放置不宜过久。

试剂3 : 5% A、B及0型红细胞盐水悬液，自制。

配制方法：分别采取已知A、B、0三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。

红细胞悬液的配制悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴）212ml ( 40 )510.8ml ( 16)1010.4ml ( 8)为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。

盐水介质交叉配血SOP

杭州余杭邦尔医院检验科血库标准操作规程盐水介质配血法标准操作规程1（1）首先对患者血样充分离心后，吸出血清于另一试管中并标记。

（2）取试管12支,分别标记患者细胞、患者抗A、抗B、抗D、AC、BC、OC、主侧、次侧、献血者抗A、抗B、献血者细胞管。

对患者血样进行ABO血型（正反定性）和Rh血型检定，主侧管加受血者血清2滴，献血者2%~5%红细胞悬液1滴；次侧管加献血者血清2滴，受血者2%~5%红细胞悬液1滴，对献血者血辫进行ABO血型复查，以1000g离心15秒，观察结果2.结果判断ABO同型配血，主侧和次侧均无凝集及溶血现象。

为盐水介质配血结果阴性，可将原标本接着做聚凝胺法(具体方法见聚凝胺法)或抗人球蛋白法配血。

3.附注3.1冬季室温较低，应将试管保温以防止冷凝集引起的凝集反应。

3.2献血者血型因初复检已确定，可只做正定型，但务必要做。

3.3患者血清中纤维蛋白没完全析出时，要放置到37℃水浴箱中15分钟，然后再离心。

以防未完全析出的纤维蛋白影响判断结果。

3.4 交叉配血试验中发现不配合时，首先应考虑受血者和献血者的ABO定型是否错误，必要时进行抗体筛选，注意有无特异性同种抗体。

或者病人的血清在室温，37℃或抗人球蛋白血清中凝集所有的其它红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步作有关试验进行鉴定。

3.5 在每次输血之后，受血者和献血者样本应在2℃~6℃保存10天。

如果病人在输血中发生不良反应或在输血后数天内发生迟发性溶血性反应时，保存的病人和献血员的血样就有可能要重新或追加试验，必要时从发生溶血性输血反应的病人重新采取血样与输血前病人血样同时检查以资比较。

7.6 各医院前来配血时，要有输血申请单方可配血。

4.相关文件《中国输血技术操作规程》编制人王渊审核人钟剑版本号第二版颁布日期2018年1月1日文件编号YHBE/SOP-XK-02 页码第 1 页。

ABO血型系统交叉配血实验操作规程

ABO血型系统交叉配血实验操作规程
（盐水试管法）
1 严格认真核对用血申请单与血样上患者姓名，科别，床号，病历号，血型是否相符，并对照检查供血者血型，血液成分及血袋编号，观察血液外观质量，如血袋是否破损，是否溶血使混浊，起泡，血浆是否有乳糜、絮状物、红细胞层呈紫红色是否超过保存期限等。

2 将受血者血样放置在试管架上（靠左侧）将离心后的供血者血样放置在右侧。

3 取一次性试管两支各加生理盐水1ml,然后一支中加入受血者红细胞1滴，另一支加入供血者红细胞1滴，各自制成3-5%的红细胞悬液备用（分别置于各自血样后面）。

4 取透明的一次性硬塑试管两支，分别标上主次侧及配血序号主侧试管排列在受血者血样后面，次侧试管排列在供血者血样后面。

5 用一次性滴管，将受血者血清1滴加入主侧试管内再将受血者红细胞悬液1滴加入次侧试管内，再取一支滴管将供血者血清1滴加入次侧试管内将供血者红细胞悬液1滴加入主侧试管内。

6 将主，次侧两支试管轻轻混匀置离心机以1000miml分钟，取出试管在白色背景下观察上清液有无溶血，若无溶血时，再轻摇试管观察红细胞有无凝集，若有可疑情况应进一步加做聚凝胺配血。

7 正确规范的书写配血报告单，再仔细与用血申请单受血者血样标签，血袋上供血者姓名，血型，编号等核查无误后做好登记。

血型抗体效价测定标准操作规程(sop)

血型抗体效价测定标准操作规程一、目的为规范红细胞血型抗体效价测定的技术操作，保证结果的准确性从而为临床疾病的诊断和治疗做出正确的评估。

二、适用范围输血科负责红细胞血型抗体效价测定的技术人员。

三、原理：将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体效价须先用巯基试剂裂解其中的IgM型抗体）经连续倍比稀释后与表达目标抗体对应的抗原红细胞试剂反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，同时根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

四、步骤和方法（1）盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价1、排试管12支，编号，以第1支试管为原倍进行生理盐水倍比稀释受检血清，第12支试管为2048倍，稀释后容积定为100微升。

2、分别往12支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀。

3、用专用离心机120g离心1min，观察有无溶血和凝集情况。

4、结果判断：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价，再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

（2）IgG类红细胞血型抗体效价测定1、取200微升受检血清加入0.2mol/L二巯基乙醇（2—Me）应用液200微升混匀，将试管口密封，37℃孵育30min。

2、排11支试管，编号，进行生理盐水倍比稀释2—Me处理过的血清。

由于第1支已经进行了稀释，所以第11支试管为2048倍，稀释后容积定为100微升。

3、凝聚胺法检测时，往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀，按照凝聚胺法操作步骤进行试验。

4、抗球蛋白法测定时，往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀后置37℃孵育30min后，按照抗球蛋白法操作步骤进行试验。

5、结果判断：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价，再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

（1）评分标准根据稀释血清各管凝集强度进行评分，凝集强度与评分标准为：4+为12分，3+为10分，2+为8分，1+为5分，+/-或W+为2分，阴性为0分，稀释各管评分之和为积分。