菊花的组织培养(第二课时)

班级：__________ 姓名：__________ 使用时间：第_ _周

【学习目标】

1、熟悉植物组织培养的基本过程

2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化

3、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力

【学习重点】

植物组织培养过程中使用的无菌技术

【学习难点】

植物组织培养过程中使用的无菌技术

二、实验操作

（一）MS固体培养基制备

1．配置各种母液

①无机物中大量元素浓缩______倍，微量元素浓缩______倍，常温保存。

②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。

③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。

2．配制培养基

①配制培养液；②调PH；③培养基的分装。

分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml。由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。

3．灭菌

分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。

（二）外植体消毒

1．选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝。

2．消毒

①流水冲洗：菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。

②酒精处理：用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动______次，持续______s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。

③消毒液处理：取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％

的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗______次，漂净消毒液。

（三）接种

1．接种室消毒

污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟。

2．无菌操作要求

操作要在____________完成，每次使用器械后，都需要__________________，接种后立即____________。

3．材料的切取和接种

4．接种注意事项

①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。

②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜____________块，菊的茎或叶____________块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件。

③插入时应注意______，不要______。茎段、茎尖基部插入培养基利于______。

思考：应该做几组重复、设置几组对照实验？

（四）培养

1．愈伤组织的培养

从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行____________。

2．愈伤组织的继代培养

继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为______cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养。

在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色。

3．试管苗的培养

当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的见光培养。

（五）移栽

1．打开封口膜

移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。

2．清洗转移

用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。

3．移栽：幼苗长壮后，移栽到土壤中。

（六）栽培

幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。

【学习小结】

菊花的组织培养小卷子（二）

班级：__________ 姓名：__________

一、选择题

1．无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键，以下说法正确的是( )

①由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对无菌操作的要求非常严格②对培养基及器械用高压蒸汽灭菌③对培养材料进行表面消毒时，一方面要考虑药剂的消毒效果，另一方面还要考虑植物材料的耐受能力④不同药剂、不同植物材料甚至不同器官要区别对待⑤对培养材料可用高压蒸汽灭菌⑥如果不小心导致污染，将可能造成培养工作的前功尽弃

A．①②③④⑤B．①②③④

C．①②③④⑥D．①②③④⑤⑥

2．甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的( )

A．减数分裂B．分化

C．有丝分裂D．全能性

3．MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别是( )

A．MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素

B．MS培养基不需要氨基酸，微生物培养基含各种氨基酸

C．MS培养基不需碳源，微生物培养基含碳源

D．MS培养基含维生素B1和维生素B2，微生物培养基不含有

4.甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的

A．有丝分裂 B．分化

C．减数分裂 D．全能性

5. 试管苗在移栽前进行一系列操作，使幼苗生长健壮，耐环境变化能力增强，这一过程叫炼苗。下列关于移栽的叙述，正确的是

A．培养后的试管苗，打开封口膜后，直接移栽至大田

B．试管苗在移栽时不需在培养间进一步培养

C．试管苗在培养间培养一段时间后，用无菌水清洗根部培养基后，移栽入大田

D．幼苗在培养间培养一段时间后，最好用无菌水清洗根部培养基，再移入消过毒的蛭石、珍珠岩等环境炼苗

6. 关于接种时应注意的事项，正确的是

①接种室要消毒②无菌操作③接种时可以谈话④外植体如茎段、茎尖可随机放入培养基⑤接种时要防止交叉污染⑥接种完立刻盖好瓶口

A．①②③④ B．①②③④⑤⑥

C．③④⑤⑥ D．①②⑤⑥

7. 无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键，以下说法正确的是

①由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差对无菌操作的要求非常严格②对培养基及器械用高压蒸汽灭菌③对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的