脑组织冰冻切片

1、冰冻切片的保存

我做的脑组织，直接断头取脑，用OCT胶包裹脑组织，放入异戊烷中在-80度冰箱中速冻1分钟，取出后用锡箔纸包好，冻存于-80度冰箱保存。切片前-20度回温半小时，即可切片。冰冻切片也放-80度冰箱保存。做组化时用4%多聚甲醛放4度固定15分钟。

如果标本量较多，需要保存一段时间后再冰冻切片，我目前是把标本经OCT包埋后，液氮速冻，待OCT完全冻硬变白后，转入-80度保存。这样处理的标

本，切出来的片子很好看！也没有冰晶。

2、作了冰冻切片但不能马上染色，切片应如何保存呢？

①如果想第二天做，可以直接放在4度，如果想多放几天，冰冻切片干后以冷丙

酮固定10分钟，放入－20度冰箱保存至染色可行。我曾保存了一个多月都没

问题。染色前，从冰箱取出后4度复温20min，再室温复温15min即可。用

PBS洗后，即可接后续步骤。

②两点个人经验，仅供参考：

1、如果切片为40微米或者更厚，放在PBS中，液体要足够多，至少没过组

织切片，建议用24或48孔细胞培养板，放好后将培养板四周用胶布或封口膜密封，以确保水份不蒸发，存放两个月不会出问题。

不过在移动细胞培养板时千万要注意保持水平，以免组织切片移到相邻的孔

内，那样的话，就搞不清次序了！

2、如果切片为20微米或者更薄，先自然干燥，然后放切片盒中室温保存即

可。一般3个月是不会有问题的。

③正常包埋，然后将整个包埋块用封口膜封好，置于－20度或－80度（前者一

般2个月没问题，后者时间更长），重点是防止包埋块的风干，当攒齐了不同时间点或者暴露于不同处理因素的标本后，一起切片，一起染色，效果很好。