脑微血管内皮细胞培养及鉴定共20页

大鼠脊髓微血管内皮细胞的分离培养与鉴定

大鼠脊髓微血管内皮细胞的分离培养与鉴定
苑晓晨;李炳蔚;秦伟伟;武清斌;荆瀛黎;李宏伟;刘淑英;修瑞娟
【期刊名称】《基础医学与临床》
【年(卷),期】2013(033)010
【总页数】2页(P1326-1327)
【作者】苑晓晨;李炳蔚;秦伟伟;武清斌;荆瀛黎;李宏伟;刘淑英;修瑞娟
【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所,北京100005;中国医
学科学院北京协和医学院微循环研究所,北京100005;中国医学科学院北京协和医
学院微循环研究所,北京100005;中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所,北京100005;中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所,北京100005;中国医学
科学院北京协和医学院微循环研究所,北京100005;中国医学科学院北京协和医学
院微循环研究所,北京100005;中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所,北京100005
【正文语种】中文
【中图分类】R543;R-332
【相关文献】
1.Wistar大鼠脑和脊髓微血管周细胞的分离、培养、鉴定及其功能差异的比较 [J], 武清斌;荆瀛黎;苑晓晨;李宏伟;修瑞娟
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3.大鼠脊髓神经元的分离、培养与鉴定 [J], 王斌;郭伟韬;黄云
4.大鼠脑皮质微血管内皮细胞的分离培养及鉴定 [J], 张磊;胡格;张涛;林红;索占伟;
段慧琴;穆祥
5.新生大鼠心脏微血管内皮细胞的分离培养及鉴定 [J], 周燕琼;郭福晓;贾强用;张艳美;郑燕珊;李乐娜;石刚刚
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内皮细胞的培养

内皮细胞的培养内皮细胞，用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管，可见到内皮细胞，内皮细胞较间皮细胞小，排列紧密。

内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成，呈多边形，细胞的边缘呈锯齿状，相互嵌合。

血管内皮细胞（EC）位于血液与血管组织之间，它不仅能完成血液和组织液的代谢交换，并且能合成和分泌多种生物活性物质，以保证血管正常的收缩和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，进而保持血液的正常流动和血管的长期通畅。

抗凝血材料表面内皮细胞化，可以减少血栓的形成和血小板激活。

下面以脐带静脉为例介绍内皮细胞的培养：一、试剂准备：（1）脐带保存液：生理盐水、葡萄糖100 mmoL/L、100 U/ml青霉素一100 U/m1链霉素。

（2）组织消化液：0．1％I型胶原酶和0．05％胰酶-0．02％乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)溶液。

（3）内皮细胞培养液：含20％胎牛血清、ECGS、肝素，100 U／m1青霉素-100 U／m1链霉素的M199培养基。

（4）器皿：0．2％明胶包被：用PBS配制。

二、原代提取（1）脐带处理：在无菌条件下取新生胎儿脐带，长度>20 cm。

剪去脐带两端和脐带上有夹痕及血肿部分，尽量挤干净脐带内血液。

用生理盐水冲洗脐带表面至无血色。

（2）脐静脉处理：用输血器内接有穿刺器的软管，找到脐静脉，将软管针头一端插入脐静脉，用止水夹固定，另一端接20 m1注射器，吸取PBS反复冲洗脐静脉直至无血色液体流出为止。

（3）组织消化：将脐带另一端用止血钳夹闭，向脐静脉中灌入0．1％I型胶原酶溶液，使之充盈，夹闭软管，37℃水浴中孵育20 min，其间轻轻挤压并旋转脐带，以使酶溶液充分接触血管内壁，然后将细胞一酶溶液收集于预先装有温培养液小三角瓶中。

（4）收集细胞：用2倍于消化液的温PBS冲洗脐静脉，一并收集于小三角瓶中，将细胞悬液装入10 ml离心管，（5）离心培养：1 000 r／min离心10 min，弃上清，吹打悬浮，再次离心10 min，重悬细胞并接种于铺有明胶的25 cm2培养瓶中，置于37℃5％C02饱和湿度培养箱中培养，24 h 后更换培养液，以后每隔2 d换液1次。

血管内皮细胞培养方法

血管内皮细胞培养方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）是血管内膜上的一种细胞，它们起着维持血管结构和功能的重要作用。

近年来，血管内皮细胞的培养方法逐渐成为生物医学领域的研究热点之一。

良好的血管内皮细胞培养方法不仅有助于研究心血管疾病的发生机制，还可以为新药的研发提供重要参考依据。

本文将详细介绍血管内皮细胞培养的方法和技巧，希望对相关研究人员和医学工作者有所帮助。

一、血管内皮细胞来源血管内皮细胞可以从多种来源获得，包括人类或动物的血管组织。

通常情况下，从人体的脐带血、外周血或组织中分离得到的血管内皮细胞具有较高的纯度和活性，适合于体外培养。

一些商业生物技术公司也提供血管内皮细胞的原代细胞培养服务，可以方便地购买到高质量的细胞用于研究。

二、血管内皮细胞培养基的选择血管内皮细胞培养基是培养血管内皮细胞的基本营养液，不同类型的细胞需要不同种类的培养基。

一般来说，常用的血管内皮细胞培养基包括Eagle's minimum essential medium（EMEM）、Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）和Medium 199等。

这些培养基通常含有必需氨基酸、维生素、矿物质、生长因子、胎牛血清等营养成分，可以提供适宜的环境促进细胞生长。

1、原代细胞的分离和培养将采集到的组织样本进行酶消化处理，分离出血管内皮细胞，并通过贴壁法或悬浮培养法将其传代培养。

在传代培养的过程中，需要定期更换培养基、观察细胞的形态和数量变化，以确保细胞的健康生长。

2、细胞的传代和冻存随着细胞的传代次数增加，细胞的增殖能力和活性逐渐下降，需要进行细胞的传代和冻存。

传代前需要对细胞进行细胞数计数和活力检测，传代后要及时观察细胞的形态和生长情况，确保细胞的健康状态。

3、细胞的实验处理在进行实验前，需要对培养的细胞进行处理，如细胞分裂抑制（如丙酮酸、羟基脲等）、细胞增殖刺激（如VEGF、EGF等）等。

脑微血管内皮细胞的培养及鉴定

试验步骤
10.混匀后放入37℃摇床中消化，30分钟左右取出一滴至镜下观察，如见到大量细短串状的微血管（3、 4个细胞一串），则表示消化适度，3000－ 4000rpm 5分钟离心；如为大团状或已成单个细胞，则消化不足或消化过度。
beforeafter Nhomakorabea试验步骤
11.离心后弃上清，以PBS 3000－4000rpm 5分钟离心，得到的沉淀以2－3ml细胞培养液冲散、混匀，放入37℃、5％CO2孵箱培养，5个小时左右后再加入1－2ml培养液。此为原代细胞P1（[=parental generation]亲代）之后每日观察细胞状况，贴壁前2－3日半换液，全部细胞贴壁后视培养液情况每1－2日全换液一次。细胞铺满瓶底80％左右即可考虑传代及冻存。
6.培养基（以下各浓度均为终浓度）：RMPI 1640，10％FBS， 10％NuSerum，ECGS 30μg/ml，1％双抗，肝素5 U/ml，L谷氨酰胺2mmol/L，1mmol/L丙酮酸钠，MEM non-essential amino acids，MEM vitamins各1％。各组分过滤后混合。 4°c保存。
试验步骤
7.吸出上层液体及白色脂质，以1－2ml PBS小心冲散红色目标沉淀物（即含有微血管的组织），尽量将目标物冲洗尽，然后将PBS－组织悬液吸入干净的离心管。
试验步骤
8.取40-45mlPBS加入离心管中， 3000rpm,4°c离心 5min。重复2次。其目的是将葡聚糖洗脱。
4. 组织洗涤液：2％FBS，10％双抗（如为无菌手术标本则为2％），DMEM。4℃保存。 FBS需先56℃灭活过滤、分装。－20℃保存。
试剂配制
5.100ml 10×PBS(其中不能含有钙以及镁离子)： 80ml蒸馏水中溶解8g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4，0.24g KH2PO4，用NaOH调节pH至 7.4加水定容到100mL，取20ml 10×PBS，加入 180ml去离子水，配成200ml PBS，高压灭菌，室温或4°c保存。

Qualityard bEnd.3 小鼠脑微血管内皮细胞说明书及注意事项 - 使用说明书

bEnd.3小鼠脑微血管内皮细胞说明书及注意事项1.简介：bEnd.3小鼠脑微血管内皮细胞是用NTKmT逆转录病毒载体感染后的转化细胞，表达多瘤病毒中T抗原。

通过观察von Willebrand因子的表达和荧光标记的低密度脂蛋白（LDL）的摄取来证实这些细胞的内皮特性。

通过细胞因子和脂多糖（LPS）诱导bEnd.3细胞，可产生刺激淋巴细胞的Peyer's Patch 高内皮细胞受体，粘膜血管寻常因子（MAdCAM-1）和E-选择蛋白。

肿瘤坏死因子α（TNFα），白细胞介素1（IL-1）或LPS的诱导是浓度和时间依赖性的。

MAdCAM-1在未受刺激的bEnd.3早期代数细胞的表面表达，超过30代不表达。

胞内粘附分子1（ICAM-1）在细胞上组成型表达，通过用LPS，IL-1和TNFα处理增加表达。

血管细胞粘附分子1（VCAM-1）在早期传代中在细胞上组成型表达，但超过30代不表达。

在早期和晚期传代中，可以通过肿瘤坏死因子α（TNFα）诱导表达bEnd.3细胞的P-选择蛋白，但在30代后传代中表达更多。

在本库通过支原体检测。

所有肿瘤细胞和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，操作者需注意自身防护。

基本培养条件:培养基：90％DMEM+10％胎牛血清温度：37℃气相：95％空气，5%二氧化碳2.细胞运输：本细胞为贴壁细胞，常规运输方式是将细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满新鲜的完全培养液并封好瓶口进行运输。

根据气温的高低及运输距离的远近，我们可能采取以下两种方式运输。

活细胞胰酶消化离心后血清发货；冻存管发货。

3.客户收到细胞后请严格按照以下要求进行操作。

3.1培养前的注意事项：A. 细胞出库前都是生长良好,我们会对出库细胞进行拍照留档(建议用户在收到细胞时拍照片,细胞拍照时请用100X 、200X倍数各拍上2~3张照片留存,可用作细胞状态的对比,拍摄的照片应当清晰)。

内皮实验报告

实验目的：本研究旨在通过体外实验，探讨内皮细胞在不同条件下的生物学特性，包括细胞增殖、凋亡、迁移和血管生成能力，以期为内皮细胞在疾病发生发展中的作用提供实验依据。

实验材料：1. 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）2. DMEM培养基（高糖）3. 胎牛血清（FBS）4. 0.25%胰蛋白酶5. 细胞培养箱6. 倒置显微镜7. 流式细胞仪8. 实验试剂（如Annexin V-FITC/PI双染试剂盒、血管内皮生长因子（VEGF）检测试剂盒等）实验方法：一、细胞培养与鉴定1. 将HUVECs接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

2. 每2-3天更换一次培养基。

3. 利用免疫荧光染色法鉴定内皮细胞，观察细胞形态和内皮细胞标记物（如VE-cadherin）的表达。

二、细胞增殖实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的VEGF处理，对照组给予等量DMEM培养基。

3. 在不同时间点收集细胞，利用CCK-8法检测细胞增殖情况。

三、细胞凋亡实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的肿瘤坏死因子α（TNF-α）处理，对照组给予等量DMEM 培养基。

3. 利用Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡情况。

四、细胞迁移实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的细胞外基质（ECM）蛋白处理，对照组给予等量DMEM培养基。

3. 利用Transwell小室检测细胞迁移能力。

五、血管生成实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的VEGF处理，对照组给予等量DMEM培养基。

3. 利用血管生成实验试剂盒检测细胞血管生成能力。

实验结果：一、细胞培养与鉴定成功培养出HUVECs，细胞形态为长梭形，细胞表面表达VE-cadherin。

二、细胞增殖实验VEGF处理组细胞增殖能力明显增强，与对照组相比，增殖率显著提高。

三、细胞凋亡实验TNF-α处理组细胞凋亡率显著升高，与对照组相比，凋亡率显著增加。

脑微血管内皮细胞通过分泌血管内皮生长因子促进神经干细胞增殖的研究

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙ
Ｍｕ — ｚｈｅｎ，ＤＥＮＧＷａｎ — ｑｉｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＲｅｄＣｒｏｓｓＨｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅＦｏｕｒｔｈＡｉｌｆｉａｔｅｄ
医学杂志２０１３年第２９巷弟ｌＯ
３２９５
脑微血管内皮细胞通过分泌血管内皮生长因子促进
神经干细胞增殖的研究
黄惠鸿张素平凌要目的：观察脑微血管内皮细胞通过分泌血管内皮生长因子ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，
ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＨＵＡＮＧＨｕｉ — ｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＳｕ－ｐｉｎｇ，ＬＩＮＧＬｉ，ＬＩＵＢｏ — ｈｕｉ，ＨＥＲｕｉ，ＷＡＮＧ
ＶＥＧＦ）对神经干细胞增殖的影响并探讨可能的机制。方法：取新生ｓＤ大鼠，进行脑微血管内皮细胞与神经干细胞的原代培养、分离及传代。然后通过形态学和免疫荧光法鉴定。使用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室建立脑微血管内皮

第四节血管内皮细胞与临床ppt课件

2、内皮源性舒张因子 ACh 可通过刺激 VEC 产生使血管平滑肌细胞舒张的物质而引起血管舒张，这种物质后命名为内皮源性舒张因子(EDRF)。其他舒血管物质，其舒张作用也取决于内皮细胞是否完整。这些物质舒张作用也是通过内皮细胞释放EDRF来介导的。大量工作提示，EDRF与NO可能是同一物质。但进一步证实，两者的生物学、生化和药理学特性有一定的差异。 NO可能不是 EDRF 的惟一成员， EDRF 通过NO发挥作用，即许多内皮依赖性的舒血管物质作用的共同通路是生成释放NO而发挥作用。 NO 产生多种生物效应： NO 扩散到内皮细胞下的平滑肌，使其舒张，血管扩张；扩散到血管腔，抑制血小板和内皮细胞间的粘附，并抑制凝血酶引起的血小板 [Ca2+]i 的升高及伴随的血小板聚集，阻止血栓的形成；NO可稳定溶酶体膜和抗自由基损伤，保护细胞免受超氧阴离子损伤，抑制脂质过氧化和自由基产生，是细胞的保护因子。
血管内皮细胞（VEC）由沿血流方向纵向排列的单层扁平鳞状上皮细胞组成，成人约有1012个VEC覆盖在 400~500m2的血管内腔表面。是机体重要的代谢和内分泌器官之一，其功能众多。
一、血管内皮细胞的功能
(一)合成和释放舒血管物质 1、前列环素
VEC 是合成前列环素 (PGI2) 的主要场所。花生四烯酸经环氧合酶代谢途径先生成内过氧化物 PGG2和PGH2，然后在各种合成酶的作用下生成不同的PGs，如PGD2、PGE2和PGF2α。在血栓烷 A2(thromboxane A2 ， TXA2) 合成酶的作用下，生成 TXA2；在PGI2合成酶的作用下生成PGI2。
ET-1是迄今知道的作用最强的血管收缩物，对不同部位的动脉、静脉及微血管均显示强烈而持久的收缩作用，且对静脉的作用比动脉强。其收缩血管的效应是血管紧张素 Ⅱ(angiotensin，AgⅡ)的10倍，去甲肾上腺素的100倍，PGF2a 的1000倍。

大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养及鉴定

ｉｅｔｅｙｉｄｎｉｄｂｍｍｕｏｕｒｓｅｃ．Ｗｅａｓｅｅｍｉｅｈｒｗｔｕ＂ｆＢｉｆｎｆｏｅｃｎｅｌｌｏｄｔｒｎｄｔｅｇｏｈｃＩｅｏＭＥｙＭＴｓａ．Ｔｅｃｌｏｋｄ１ｅｓａｓｎ ” ｖＣｓｂｒａｓｙｈｅｌｌｏｅｉ ”ｌｂｔｅ．ｓｋｏ
（．ｏｅｅｏｎｍａＳｉｎｅａｄＶｔｉａｙＭｅｉｎ，ｉｎＵｉｅｓｙＣａｇｈｎ１０６，ｈｎ；．ｅａｍｅｔｏｎｍａＳｉｎｅａｄ１ＣｌｇｆＡｉｌｃｃｎｅｅｎｒｄｃｅＪｉｎｖｒｔ，ｈｎｃｕ３０２Ｃｉａ２ＤｐｒｎｆＡｉｌｃｅｃｎｌｅｒｉｌｉｔ
Ｔｃｎｌｇ，ｅｉｇＡｒｕｔｒｏｌｇ，ｅｉｇ１２０，Ｃｉａ．ＣｌｇｆＡｉｌＳｉｃｎｔｒａｙＭｅｉｉｅｈｎａｇｈ６ｕｔｒｅｈｏｙＢｉｎｇｉｌａＣｌｅＢｉｎ０２６ｈｎ；３ｏｌｅｏｎｍａｃｅｅａｄＶｅｉｒｄｃｎ，ＳｅｙｎｇｃｌａｏｊｃｕｌｅｊｅｎｅｎｕｌＵｉｅｉ，ｈｎａｇ１０６，Ｃｉａ４ＣｌｇｆＢｓｄｃｌＳｉｃｓＣｐｉｄｃｌＵｉｅｉ，ｅｉｇ１０６，ＣｉａｎｖｒｔＳｅｙｎ８６ｈｎ．ｏｌｅｏａｉＭｅｉａｃｅｅ，ａｔａＭｅｉａｎｖｒｔＢｉｎ００８ｈｎ）ｓｙ１；ｅｃｎｃｌｓｙｊＡｂｔａｔＴｅｍｅｈｄｆｃｌｒｎａｒｉｃｏａｃｌｒｅｄｔｅｉｌｃｉＢＭＥＣ）ｗｒｔｄｅｏｂｉｐｔｅｂｓｏｈｓｒｃ：ｈｔｏｓｏｕｔｉｇｒｔｂａｎｍｉｒｖｓｕａｎｏｈｌｅｌｆｕａｓｓｅｅｓｕｉｄｔｕｌｕｈａｉｆｒｔｅｄｓ

大鼠脑微血管内皮细胞的培养与鉴定

摘要：目的探讨大鼠脑微血管内皮细胞体外培养方法，血管内皮细胞的研究打下基础。为方法用胶原酶消化大鼠脑皮质制成细胞悬液再进行培养，用光镜及免疫组织化学检测进行鉴定。结果分离的大鼠脑微血管内皮细胞体外培养５～７ｄ左右可长成单层，光镜下为多角彤或扁平梭形，铺路石样” 呈“ 排列，第Ⅷ 因子相关抗原免疫组织化学测定阳性。结论该分离细胞培养法可培养出大鼠的脑微血管内皮细胞。关键词：脑微血管；内皮细胞；体外培养
ＴｂｅｈｄｆＣｕｌｉｇａｄＩｅｔｆｉｒｂａＬｍｉｒｖｓｕａｅＭｔｏｓｏｔｎｎｄｎｉｎｇＣｅｅｒｕｒｙｃｏａｃｌｒＥｎｄｔｌＣｅｌｉＩｏｈｅｌｎＲａｓＳＵＮ
［］中华医学会呼吸病学会．５慢性肺源性心脏病临床诊断与疗效判断标准［］中华结核和呼吸杂志，８，（）２－．Ｊ．１０３２：２９３５平芬实用呼吸病学［．Ｍ］石家庄：河北科学技术出版［］赵景春，．６
社，０４：１￣２．２０６９５
ｐｌｏａｙｅｔｓｎＪ．ｍＪｈｓｌｕｇＣｌＭｌｈｓｌｕｎｒｈｐｒｎｉ［］ＡＰｙｉｎｅｏＰｙｉ，ｍｙｅｏｏＬｌｏ
２０，８（）Ｌ３１１６．０１２１６：１６ —３８
顾顺华，秦建，慢性肺心病急性发作期患者红细胞膜等．［］张燕，８黏弹特性研究［］生物医学工程学杂志，０７２１Ｊ．２０，４（）：

柴贝止痫汤影响大鼠脑微血管内皮细胞乳腺癌耐药蛋白、核因子p65表达的研究

柴贝止痫汤影响大鼠脑微血管内皮细胞乳腺癌耐药蛋白、核因子p65表达的研究鄢泽然;张青;王潇慧;王越;聂莉媛;刘金民【摘要】目的：探索中药柴贝止痫汤对离体大鼠脑微血管内皮细胞乳腺癌耐药蛋白( breast cancer resistance protein, BCRP)和核因子κB( nuclear factor-kappa B, NF-κB) p65表达的影响。

方法培养原代大鼠脑微血管内皮细胞,传至3代时分为正常组、模型组和中药组,正常组常规培养,模型组用100 nmol/L的地塞米松作用细胞24小时,诱导细胞膜上BCRP表达增加；中药组在造模基础上分别用柴贝止痫汤四个浓度(10μg/ml、100μg/ml、500μg/ml、1 mg/ml)干预模型细胞24小时。

Western blot检测各组细胞BCRP、NF-κB p65的表达,差异比较采用方差分析；Real-time PCR检测Bcrp mRNA的扩增,相对定量法比较各组间扩增差异。

结果柴贝止痫汤10μg/ml、100μg/ml组BCRP表达及Bcrp mRNA的扩增均较模型组降低( P<0．05)；柴贝止痫汤1 mg/ml组NF-κB p65的表达较模型组降低(P<0．05)。

结论柴贝止痫汤可以下调地塞米松诱导的大鼠脑微血管内皮细胞BCRP及Bcrp mRNA的表达；可能对NF-κB p65的表达有下调作用。

%Objective To observe the effects of Chaibei Zhixian Decoction on regulating the ex-pression of breast cancer resistance protein ( BCRP) and nuclear factor-kappaB ( NF-κB) p65 in rat brain microvascular endothelial cells. Methods Primary culture of brain microvascular endothelial cells were prepared from rats. The 3rd passage cells were exposed to dexamethasone (100 nmol/L) for 24h to up-reg-ulate the expression of BCRP. After dexamethasone administration, the cells were treated with increasing concentrations (10 μg/ml, 100 μg/ml, 500 μg/ml and 1 mg/ml) of ChaibeiZhixian Decoction for 24h. BCRP and NF-κB p65 protein expression were assessed by Western blot analysis and data were measured with analysis of variance. Real-time PCR was performed for Bcrp mRNA amplification and differences a-mong groups were assessed by relative quantitative assay. Results Exposure to Chaibei Zhixian Decoction (10 μg/ml, 100 μg/ml) resulted in significant decrease in protein and mRNA levels of BCRP ( P <0.05);While BCRP was down-regulated, NF-κB p65 expression was decreased by Chaibei Zhixian Decoction (1 mg/ml) (P<0. 05). Conclusion Chaibei Zhixian Decoction down-regulate both protein and mRNA expression of BCRP and probably decrease the levels of NF-κB p65 in rat brain microvascular endothelial cells.【期刊名称】《环球中医药》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】6页(P241-246)【关键词】柴贝止痫汤;乳腺癌耐药蛋白;大鼠脑微血管内皮细胞;难治性癫痫【作者】鄢泽然;张青;王潇慧;王越;聂莉媛;刘金民【作者单位】100078北京中医药大学东方医院脑病科;100078北京中医药大学东方医院脑病科;100078北京中医药大学东方医院脑病科;天津中医药大学第二附属医院急诊科;100078北京中医药大学东方医院脑病科;100078北京中医药大学东方医院脑病科【正文语种】中文【中图分类】R277.7难治性癫痫对多种抗癫痫药物交叉耐药，其可能的机制是血脑屏障上表达增加的多药转运体逆浓度梯度将抗癫痫药物分子泵出血脑屏障，降低病灶处的药物浓度，使药物疗效降低甚至失效，引起癫痫反复发作。

大鼠脑皮质微血管内皮细胞的培养

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文耄编号：０５－６６２０）２０５・２２３３２（０２０ — １１０
大鼠脑皮质微血管内皮细胞的培养
吴文斌。胡常林。，汤为学
，
（重庆医科大学第二Ｉ１临床学院神经内科
重庆４０１；２重庆医科大学基础医学院病理生理教研室０００．
ＵＷｅｂｎｅａｎｉ，ｔｔ
ｅａｔｎｏＮｕｏｏｙｔｅｅｏｄＣｌｇ ’ｌｉｌｄｃｎｈｎｑｎｐｒｍｅｔｆｅｒｌｇ，ｈＳｃｎｏｌｅｙＣｉｃＭｅｉｉｅＣｏｇｉｅｏｎａｇＭｅｉａＵｉｒｉｄｃｌｎｖｓｅ【Ａｓａ０６ｅｔｅ：ｏｃｌｒｃｏａｃｌｎｏｈｌｌｃｌｏＷｉａａｃｒｂａｃｒｘＭｅｈｄ＂ｂｔｅ１ｆｉＴｕｔｅｍｉｖｓｕａｅｄｔｅｉｅｌｆｍｓｒｒｔｅｅｒｌｏｔ．ｔｏｓｒｔｃｖｕｒｒａｓｒｔｅ

血管内皮细胞检测流程

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在进行血管内皮细胞检测之前，需要做好充分的准备。

脑微血管内皮细胞与体外培养神经干细胞共培养后Th1Th2相关细胞因子的表达

脑微血管内皮细胞与体外培养神经干细胞共培养后Th1/Th2相关细胞因子的表达罗文芳1唐涛黎杏群林源罗杰坤钟鹏程刘清娥（中南大学湘雅医院中西医结合研究所，湖南长沙410008）〔摘要〕目的体外观察脑微血管内皮细胞（MVECs ）对来自大鼠海马神经干细胞（NSCs ）免疫相关细胞因子表达的影响。

方法采用Tran-swell 建立神经干细胞与脑微血管内皮细胞共培养模型（NSCs +MVECs ），用荧光免疫化学和RT-PCR 测定NSCs 中与Th1相关的IFN-γ、IL-2及与Th2相关的IL-4、IL-10的表达。

结果两种细胞共培养后，神经干细胞呈INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10阳性；同时INF-γ、IL-2mRNA 的表达上调，而IL-4、IL-10mRNA 的表达下调，与空白对照组比较明显差异（P ＜0.01）。

结论脑微血管内皮细胞（MVECs ）有可能使神经干细胞的INF-γ、IL-2表达上调，IL-4、IL-10的表达下调。

〔关键词〕脑微血管内皮细胞；神经干细胞；Th1细胞因子；Th2细胞因子〔中图分类号〕R743.34〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）03-0512-05；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.03.034The expressions of Th1/Th2related cytokines after co-cultured microvascular endothelial cells with neural stem cells in vitro LUO Wen-Fang ，TANG Tao ，LI Xing-Qun ，et al .TCM Research Insitute of Xiangya Hospital Central-South University ，Changsha 410008，Hunan ，China【Abstract 】Objective To investigate microvascular endothelial cells （MVECs ）on the expressions of IFN-γ，IL-2，IL-4，IL-10of NSCs in vitro.Methods Rat neural stem cells （NSCs ）aged 3 5day were adopted for amplification in vitro ，and co-cultured microvascular endothelial cells with neural stem cells.After 48h ，the expressions of IFN-γ，IL-2，IL-4，IL-10were assayed by immunohistochemistry and RT-PCR.Results After 48h of co-cultured ，the NSCs was positive of expressions in cytokines INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10；and the expres-sions of INF-γ，IL-2were increased ，the expressions of IL-4，IL-10were deceased （P ＜0.01）.Conclusions MVECs maybe up-regulate the expressions of IFN-γ，IL-2and down-regulate the expressions of IL-4，IL-10of NSCs.【Key words 】Microvascular endothelial cells （MVECs ）；Neural stem cells ；Th1cytokines ；Th2cytokines基金项目：国家自然科学基金资助项目（30472264）1南华大学附属第一医院中医科通讯作者：黎杏群（1933-），女，教授，主要从事中西医结合脑血管病及肿瘤病研究。

脑内皮细胞

HBMEC (Human Brain Microvascular Endothelial Cells人脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑。

大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。

如：1）脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；2）脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；3）脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化”的表现型。

与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。

由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。

大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）的重要成分，与外周血管内皮细胞不同，它具有高跨内皮阻抗（transendothelial electrical resistance，TER）、细胞间紧密连接、极少的胞饮小泡、缺乏窗孔结构以及含有选择性双向跨细胞膜转运系统等独有的特征，从而使血脑屏障形成一个限制大多数极性分子和蛋白质运动的选择性低渗透性的屏障[1]。

由于体外培养的脑微血管内皮细胞保持了较多的其体内固有的特点[1]，因此目前脑微血管内皮细胞体外培养模型已被广泛应用于血脑屏障的研究、脑血管疾病的病理生理及分子生物学研究、新药筛选、脑微血管内皮细胞生理生化及药理学研究等领域。

而大多数体内实验采用大鼠为动物模型，而且大鼠具有较多的细胞生物学研究所需的抗体可用，因此进行大鼠脑微血管内皮细胞的培养具有重要的意义。

自从Panula等[2]首次成功培养大鼠脑微血管内皮细胞以来，国内外有关大鼠脑微血管内皮细胞的分离和培养方法已有较多的报道，我们发现国内的方法多以组织匀浆、两次尼龙网过滤分离脑微血管段为主[3,4]，也有采用酶消化、梯度离心及尼龙网过滤的[5]，但细胞得率均较低，而近些年来国外大多数方法采用以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养[6~9,11,12]。

原代脑微血管内皮细胞提取_解释说明

原代脑微血管内皮细胞提取解释说明1. 引言1.1 概述在神经科学领域，研究脑血管和微血管内皮细胞的功能对于理解大脑正常生理过程以及疾病发展过程至关重要。

原代脑微血管内皮细胞提取是一种已被广泛应用的技术，可以从动物模型或人体中获取这些细胞。

通过提取原代脑微血管内皮细胞，我们可以进一步了解内皮细胞的结构、功能和相互作用，为相关疾病的机制研究和药物开发提供重要参考。

1.2 文章结构本文将首先介绍什么是原代脑微血管内皮细胞，并详细说明其提取方法和步骤。

接着，我们将探讨该技术在不同应用领域中的重要性。

然后，我们将深入讨论提取原代脑微血管内皮细胞时需要注意的要点，包括细胞培养基的配方和条件以及细胞分离方法与工具。

最后，文章将总结分析结果并展望未来该技术的潜力。

1.3 目的本文的目的是全面阐述原代脑微血管内皮细胞提取技术，使读者对该技术有一个清晰的了解。

我们希望通过本文呈现的详细步骤和关键要点，能够为科研工作者提供准确可靠的操作指导，并为相关领域学者进一步深入研究提供参考。

此外，我们还将探讨这一技术在医学研究、药物开发和疾病治疗等方面可能产生的影响及其意义。

2. 原代脑微血管内皮细胞提取2.1 什么是原代脑微血管内皮细胞原代脑微血管内皮细胞是一种从大脑组织中提取、培养并繁殖的细胞类型。

它们主要存在于大脑的微血管壁上，形成了大脑的血脑屏障。

这些内皮细胞具有调节物质交换和保护大脑免受外界有害物质侵入的重要功能。

2.2 提取方法和步骤提取原代脑微血管内皮细胞需要经过以下几个基本步骤：步骤一：准备工作在开始前，应先准备好所需的实验器材和试剂。

同时也需要确保所有操作环境具备无菌条件，以避免污染。

步骤二：切割组织首先要从新鲜动物的大脑中取出相应区域的组织样品。

然后迅速将组织切割成小块，以方便后续处理。

步骤三：消化和分离将切割好的组织块放入含有消化酶的培养基溶液中，在适当的温度和时间条件下进行消化，以分离出细胞。

消化酶的种类和浓度可以根据实验需要来确定。

微血管内皮细胞的体外分离培养方法概述

微血管内皮细胞的体外分离培养方法概述微血管内皮细胞的体外分离培养方法概述＊段慧琴1，张永东2，穆祥1*(1.北京农学院动科系，北京102206；2.北京农业职业学院，北京102442)摘要：微血管内皮细胞在许多病理生理过程中起着关键性的作用。

应用体外培养的微血管内皮细胞，不仅广泛应用于微循环系统对不同生理或病理刺激的反应，也可阐明伴随微血管功能障碍和组织损伤的某些疾病的病理机制，所以分离培养动物及人各个器官组织微血管内皮细胞的报道日渐增多。

微血管内皮细胞分离方法主要有3种，包括酶消化法、机械分离法和磁珠分离法，每种方法各有利弊。

微血管内皮细胞一般通过其表面的血管紧张素酶、摄取乙酰基低密度脂蛋白和表达Ⅷ因子相关抗原进行鉴定。

目前从不同组织器官分离培养微血管内皮细胞的方法已经比较成熟。

关键词：微血管内皮细胞；体外；分离培养从1973年Jaffe E A等成功培养人的脐静脉内皮细胞至今，血管内皮细胞的研究已经取得了重要的进展，极大地丰富了人们对血管内皮细胞的认识。

研究资料已经证实，动脉起源的内皮细胞不同于静脉起源的内皮细胞，微血管内皮细胞不同于大血管的内皮细胞[1]，并且不同器官组织起源的血管内皮细胞也表现出不同的功能特性。

微血管内皮细胞所表现的组织器官特异性，使人们认识到微血管内皮细胞研究的重要性。

因此，研究发生于某一器官或组织的微血管病变，应该采用这一器官或组织的微血管内皮细胞作为细胞模型。

因此，微血管内皮细胞的培养技术越来越受到人们的重视，已经成为医学研究中不可缺少的重要手段。

但是，由于微血管内皮细胞的培养难度较大，研究成本较高，因而它的普及和应用都受到一定的限制。

近年来，内皮细胞生长因子的应用和免疫磁珠技术的发展，使微血管内皮细胞的培养和纯化变得相对简化，加之许多微血管内皮细胞系的建立，使得微血管内皮细胞的研究及应用得到迅速发展。

1微血管内皮细胞体外培养状况到目前为止，人体主要器官和组织的微血管内皮细胞已经培养成功。

内皮细胞培养图片汇总

作者：mousehui【原创】ECV-304(脐静脉内皮细胞株)1.细胞种类：ECV-304(脐静脉内皮细胞株)；2.培养的天数：3d；3.放大倍速：倒置显微镜X100；4.培养基种类：1640+10%胎牛血清；5.细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，贴壁生长作者：同上ECV-304细胞做的微核，不知园子里有没有做的。

是钴60伽玛射线处理，2Gy，2Gy/mim作者：wokankan【原创】内皮祖细胞2.培养的天数：6天3.放大倍速：倒置显微镜X100；4.培养基种类：EGM－2；5.细胞状态与特征简述:细胞呈梭形贴壁生长，排列成直线低密度接种是集落出现极少的，我的内皮祖细胞鉴定是DiI-LDL摄入试验（红）和UEA-1（绿）流式检测CD34 CD133 KDR 钙黏素，跟成熟内皮细胞一样出现融合细胞有养出来过，在二十几天的时候，不过我一般没养那么久，一两周之后就重新分离。

这个是融合细胞的图：作者：wokankan作者：wzliqiang人脐静脉内皮细胞株1.细胞种类：人脐静脉内皮细胞株2.培养的天数：2d；3.放大倍速：倒置显微镜X10；4.培养基种类：1640+10%胎牛血清；5.细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，贴壁生长zhangma【原创】脐血来源的内皮祖细胞2.培养的天数：3W3.放大倍速：倒置显微镜X100；4.培养基种类：EGM－2；5.细胞状态与特征简述:细胞呈梭形贴壁生长，已融合作者：comerkeke【原创】人脐静脉血管内皮细胞：1.细胞种类：原代内皮细胞；2.培养的天数：2d;细胞倍增时间--24h左右；2－3代3.放大倍速：倒置显微镜，20倍；4.培养基种类：M200；5.细胞状态与特征简述:细胞贴壁生长；6.图片目的：鉴定抗VIII-factor阳性。

作者：ratman小鼠肺组织分类培养（内皮，上皮，成纤维），培养基为DMEM/F12，10%FBS，双抗，添加100ng/ml EGF, 0.1ug/ml Hydrocortisone, 10ug/ml insulin。

人脑血管周细胞培养

1200Human Brain V ascular Pericytes人脑血管周细胞周细胞是具伸缩性的平滑肌细胞样的细胞，它们覆盖在微脉管的基底面。

周细胞是小静脉的主要成分，并普遍存在于毛细血管中。

在不同的组织和器官中，周细胞的数量和功能均呈现很大的差异。

周细胞的三种主要功能是参与中枢神经系统微血管收缩性，内皮细胞活性及巨噬细胞活性的调节。

也有证据表明周细胞与血脑屏障的物质转运及血管渗透性的调节有关。

病理学研究显示，周细胞与高血压，糖尿病视网膜病变，阿尔海默氏病，多发性硬化和中枢神经系统肿瘤的形成有关。

细胞培养说明注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。

将小瓶置于37°C水浴，然后尽快移入培养物中，尽量减少操作。

经过以下步骤后开始培养细胞1.准备纤维多聚赖氨酸包被的培养瓶(2μg/cm2，推荐用T-75的培养瓶)。

向T-75瓶内加入10ml无菌水，然后加入15μl多聚赖氨酸原液(10mg/ml,ScienCell cat. no. 0413).将培养瓶放入培养箱中过夜(至少在37°C中过一小时)2.准备完全培养基：用70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。

在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。

用培养基冲洗每一个小管以保证添加物全部加入基本培养基中。

3.用无菌水冲洗多聚赖氨酸包被的培养瓶两次并向瓶内加入20 ml完全培养基。

将培养瓶放入超净台中，然后融化细胞。

4. .将小瓶放入37°C水浴中，轻轻地握住并旋转小瓶直到完全融化。

将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。

小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面。

用1ml eppendorf吸管轻轻重悬管内容物。

5.将管中内含物放入均匀的，多聚赖氨酸包被的培养瓶中。

推荐接种密度为5,000 cells/cm2。

注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中DMSO残留物对细胞的伤害大。