黄酮的提取方案
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黄酮提取实验方案
1
1.1材料
1.2试剂
芦丁，无水乙醇，氢氧化钠，石油醚，硝酸铝，三氯化铁，三氯化铝，浓氨水，浓盐酸，镁粉， 亚硝酸钠(以上均为国产分析纯)，实验所用水均为蒸馏水。
1.3实验仪器
电热恒温水浴锅
电子天平(感量0.0001g)
722型光栅分光光度计
索氏提取器
量筒(100ml,10ml)25ml比色管 移液管 小试管 白瓷板圆底烧瓶100m容量瓶
液配制成100.00mL的溶液，备用。
3.3
精确移取芦丁标准溶液0.50mL,置于25.00mL勺比色管中，用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀， 放置10min,再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min,加入85%勺乙醇溶液至刻度，摇 匀，10min后在460〜560nm处测定吸光度，⑷（以试剂样品做空白）选择最大吸收波长。
于波长500nmBiblioteka Baidu测定其吸光度，同时做三组平行实验。
2.6.2较佳提取时间的确定
准确称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用2h、2.5h、3h、3.5h提取时
间用60mL85%的乙醇对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取，乙醇提取液的处理方法
如前，测定其吸光度，同时做三组平行实验。
3.8
精密量取石油醚处理过的提取液0.50mL,置于25.00mL的比色管中。力口85%的乙醇稀释到
10.00mL，加入5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀， 放置10min,再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min，加入85%的乙醇溶液至刻度， 摇匀，10min后于波长500nm处测定吸光度。
然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图，绘制标准曲线。
3.5黄酮类化合物勺特征性实验[5]-[6]在一定条件下对提取勺黄酮类化合物进行特征性实验，具体内容如下：
（1）盐酸一镁粉反应：取1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀，再加入浓盐酸数滴（1次
加入），观察其泡沫颜色。 （2） 三氯化铝反应：取提取液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，
4
4.1
将定量的黄酮提取液显色以后在460〜560nm处测定吸光度，（以试剂样品做空白）选择最大吸
收波长，测定结果如下:
表1波长与吸光度的关系
波长（nm）吸光度（A）波长（nm）吸光度（A）
从表1中可以知道当波长在什么时候有最大吸收波峰。
4.2
精确吸取0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL的芦丁标准溶液稀释、显色以后在波长500nm
的85%的乙醇溶液在水浴温度为85C下对3g金星厥科叶样品回流提取2.5 h,乙醇提取液的处理方
法如前，测定其吸光度，同时做三组平行实验。
3.7
称取15g金星厥科叶样品放于锥形瓶中用90mL的石油醚浸泡8个小时对其脱色，过滤、干燥。 然后准确称取处理过的3g金星厥科叶样品用质量分数为85%的60mL乙醇溶液在水浴温度为85C下 对其回流提取2.5h，乙醇提取液的处理方法如前，测定其吸光度，同时做三组平行实验。
3.4
精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中， 用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加 入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀，放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min，加入85%勺乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后于波长500nm处测定吸光度，（以第一瓶为空白溶液）
75%的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取3h.提取完毕，用与提取剂的
质量分数相同勺乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包，将其定容于100:00mL容量瓶中，然后精确吸取
0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中，用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到10.00mL处，加人
5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀，放置10min,再 加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min,加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后
锥形瓶
2
2.1提取原理
溶剂提取原理 游离黄酮黄酮昔
乙辱溶解范围广++
(甲醇)著■甘元均可溶(90-95%)(6M)甲醇毒性大
沸水多糖昔易于水+成本低、安全,
水溶性杂质多
臓性水或稀氢氧化钠溶出能力强
碱性乙醇酚强基的酸性 ++石灰水除杂质效果好
3
3.1
金星科厥类叶T除杂T水洗T晾干T粉碎
3.2
将芦丁在干燥箱里用120C条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品O.OIg用85%勺乙醇溶
同时做样品空白管.根据标准曲线计算提取物中黄酮类化合物的含量.（把样品所测得吸光度的
平均值代入标准曲线方程，再算出0.50mL提取液中黄酮类化合物的浓度，然后再根据浓度算出样品 中黄酮类化合物的百分含量.）计算方法（公式）如下：
设样品中黄酮类化合物的含量为，稀释以后的浓度为C；原提取液的浓度为C0；
处测定吸光度（以第一瓶为空白溶液），以浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线， 结果如下：
2.6.3较佳提取温度的确定
称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别在75C、80C、85C、90C的水
浴温度下用60mL85%的乙醇对3g金星厥科叶样品回流提取2.5 h，乙醇提取液的处理方法如前，测 定其吸光度，同时做三组平行实验。
2.6.4较佳物料比的确定
称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用30mL 45mL、60mL、75mL、90mL
吹干，观察颜色变化。（3） 三氯化铁反应：取几滴提取液于白瓷板上，滴加1%三氯化铁乙醇溶液，
观察其颜色。（4） 浓氨水反应：取乙醇提取液点在滤纸上，将滤纸在浓氨水上方熏0.5min，观察
其颜色变化。
3.6
2.6.1较佳提取剂质量分数勺确定
准确称取3g处理好勺金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用无水乙醇、95%、85% 80%、
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1.1材料
1.2试剂
芦丁，无水乙醇，氢氧化钠，石油醚，硝酸铝，三氯化铁，三氯化铝，浓氨水，浓盐酸，镁粉， 亚硝酸钠(以上均为国产分析纯)，实验所用水均为蒸馏水。
1.3实验仪器
电热恒温水浴锅
电子天平(感量0.0001g)
722型光栅分光光度计
索氏提取器
量筒(100ml,10ml)25ml比色管 移液管 小试管 白瓷板圆底烧瓶100m容量瓶
液配制成100.00mL的溶液，备用。
3.3
精确移取芦丁标准溶液0.50mL,置于25.00mL勺比色管中，用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀， 放置10min,再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min,加入85%勺乙醇溶液至刻度，摇 匀，10min后在460〜560nm处测定吸光度，⑷（以试剂样品做空白）选择最大吸收波长。
于波长500nmBiblioteka Baidu测定其吸光度，同时做三组平行实验。
2.6.2较佳提取时间的确定
准确称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用2h、2.5h、3h、3.5h提取时
间用60mL85%的乙醇对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取，乙醇提取液的处理方法
如前，测定其吸光度，同时做三组平行实验。
3.8
精密量取石油醚处理过的提取液0.50mL,置于25.00mL的比色管中。力口85%的乙醇稀释到
10.00mL，加入5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀， 放置10min,再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min，加入85%的乙醇溶液至刻度， 摇匀，10min后于波长500nm处测定吸光度。
然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图，绘制标准曲线。
3.5黄酮类化合物勺特征性实验[5]-[6]在一定条件下对提取勺黄酮类化合物进行特征性实验，具体内容如下：
（1）盐酸一镁粉反应：取1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀，再加入浓盐酸数滴（1次
加入），观察其泡沫颜色。 （2） 三氯化铝反应：取提取液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，
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4.1
将定量的黄酮提取液显色以后在460〜560nm处测定吸光度，（以试剂样品做空白）选择最大吸
收波长，测定结果如下:
表1波长与吸光度的关系
波长（nm）吸光度（A）波长（nm）吸光度（A）
从表1中可以知道当波长在什么时候有最大吸收波峰。
4.2
精确吸取0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL的芦丁标准溶液稀释、显色以后在波长500nm
的85%的乙醇溶液在水浴温度为85C下对3g金星厥科叶样品回流提取2.5 h,乙醇提取液的处理方
法如前，测定其吸光度，同时做三组平行实验。
3.7
称取15g金星厥科叶样品放于锥形瓶中用90mL的石油醚浸泡8个小时对其脱色，过滤、干燥。 然后准确称取处理过的3g金星厥科叶样品用质量分数为85%的60mL乙醇溶液在水浴温度为85C下 对其回流提取2.5h，乙醇提取液的处理方法如前，测定其吸光度，同时做三组平行实验。
3.4
精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中， 用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加 入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀，放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min，加入85%勺乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后于波长500nm处测定吸光度，（以第一瓶为空白溶液）
75%的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取3h.提取完毕，用与提取剂的
质量分数相同勺乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包，将其定容于100:00mL容量瓶中，然后精确吸取
0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中，用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到10.00mL处，加人
5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL,混匀，放置10min,再 加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL,混匀，放置10min,加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后
锥形瓶
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2.1提取原理
溶剂提取原理 游离黄酮黄酮昔
乙辱溶解范围广++
(甲醇)著■甘元均可溶(90-95%)(6M)甲醇毒性大
沸水多糖昔易于水+成本低、安全,
水溶性杂质多
臓性水或稀氢氧化钠溶出能力强
碱性乙醇酚强基的酸性 ++石灰水除杂质效果好
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3.1
金星科厥类叶T除杂T水洗T晾干T粉碎
3.2
将芦丁在干燥箱里用120C条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品O.OIg用85%勺乙醇溶
同时做样品空白管.根据标准曲线计算提取物中黄酮类化合物的含量.（把样品所测得吸光度的
平均值代入标准曲线方程，再算出0.50mL提取液中黄酮类化合物的浓度，然后再根据浓度算出样品 中黄酮类化合物的百分含量.）计算方法（公式）如下：
设样品中黄酮类化合物的含量为，稀释以后的浓度为C；原提取液的浓度为C0；
处测定吸光度（以第一瓶为空白溶液），以浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线， 结果如下：
2.6.3较佳提取温度的确定
称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别在75C、80C、85C、90C的水
浴温度下用60mL85%的乙醇对3g金星厥科叶样品回流提取2.5 h，乙醇提取液的处理方法如前，测 定其吸光度，同时做三组平行实验。
2.6.4较佳物料比的确定
称取3g处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用30mL 45mL、60mL、75mL、90mL
吹干，观察颜色变化。（3） 三氯化铁反应：取几滴提取液于白瓷板上，滴加1%三氯化铁乙醇溶液，
观察其颜色。（4） 浓氨水反应：取乙醇提取液点在滤纸上，将滤纸在浓氨水上方熏0.5min，观察
其颜色变化。
3.6
2.6.1较佳提取剂质量分数勺确定
准确称取3g处理好勺金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用无水乙醇、95%、85% 80%、