最新【抗生素精品课件】D-氨基酸氧化酶基因工程菌诱导发酵实验讲学课件

三、His-Tag亲和柱纯化D-氨基酸氧化酶
收集菌体40g加入pH7.0,30ml 磷酸 buffer, 用 French pressure cell press，1000psi的压力下压榨 细胞两次, 离心取上清加入5g Co-Agarose， 10oC,160rpm振摇24h, 装柱然后用50-100倍柱床 体积的Wash buffer流洗柱1ml/min，直到洗出液 OD595小于0.06, 然后用Elution buffer 洗脱流速 为0.5 ml/min, 得到的酶液直接用于固定化。酶 活的回收率为36.2％。纯度为99.1%。
展位营销手段
关系营销 合作营销 直复营销 网络营销
招展策划
建立目标参展商数据库
案例阅读与分析
请阅读书中第128页的案例，分析2004 中国（古镇）国际灯饰博览会招展成功 的三大因素。
例提示：
2004年中国（古镇）国际灯饰博览会在广东中 山古镇举行。根据筹备工作方案，展览面积4 万平方米，共设展位2400个。为了确保招展任 务的如期高质完成，在总结往届灯博会经验的 基础上，筹委会梳理招展信息，充分挖掘展会 资源，建立了参展商数据库，成立了精干的招 展机构，广泛宣传，多轮驱动，取得了良好的 效果。
愿望---通过展会获得收益
各方想从展会中获取什么？
主办方？ 参展商？ 观众？
招展是否很重要？
怎样理解招展对于展会的重要性？
展会出售的产品是什么？
展位 展会策划、组织和服务
无形产品的有形化
服务的有形展示 ➢ 信息明确，有吸引力：包括招展书、参
展商手册，观众组织描述清晰细致 ➢ 人员服务到位 ➢ 过程协作顺畅
案例分析---参考答案：
市场定位准确---针对家用车 策划时间和地点得当 展会策划活动丰富，活跃展会气氛，聚
集人气，吸引目标观众 为参展商提供良好的展示环境
展会利益主体价值分析
主办方、参展商和观众是展会的基本利 益主体，它们之间的相互作用直接决定 了展会组织的运作和核心价值的最终实 现。
案例提示：
1999年和2002年两届灯博会的成功举办，为这届博览会积累了大量的客 商及灯饰企业资料，筹委会在完善招展企业数据库的基础上，又采取了 一系列的措施：
一是在镇内通过电视台、灯饰报、政府网站、灯饰在线网站等发布招展 信息；
二是借古镇领导赴美考察之机，参加美国拉斯韦加斯灯展，在展会上介 绍古镇灯博会的有关情况，邀请商家前来参展参观；
第六讲、招展策划和展位营销
招展策划主要学习内容
展览利益主体价值与招展营销要素分析 招展策划的几项工作 建立目标参展商数据库 展区和展位划分 招展价格的制定 招展代理确定 招展方案的编制 招展函的编制
招展策划
展览利益主体价值分析与招展营销要素分析
案例分析
请分析福州迎春家用车赏车会成功的原 因。
七是在招商方面，组委会高度重视，5月份已经通过邮寄、电子邮件、传 真等方式向海内外10万业内人士寄发了邀请函。通过中国照明协会与西 班牙协会联系，邀请协会成员前来参观；并与一些知名B to B网站合作 利用他们的客户资源；此外还在欧美的专业杂志上投放广告。
The activity of DAAO（u/L)
1600 1400 1200 1000
800 600 400 200
0
0
5
10
15
20
25
Time（h）
Fig.2. The effect of fermentation time on DAAO activity
重庆定做广告伞
Fig.4 SDS PAGE of pure Dao 1-3ml; 2-6ml; 3-9ml; 4-12ml; 5-15ml; 6-18ml
1. 发酵过程中菌生长曲线
OD600
25 20 15 10
5 0
0
5
10
15
20
25
Time（h）
Fig.1. The curve of growth
2. 发酵过程中产酶曲线
【抗生素精品课件】D－氨 基酸氧化酶基因工程菌诱导
发酵实验
一、选题的意义 两步酶法合成7-ACA的研究
两步酶法合成7-ACA，是指头孢菌素C （CPC）首先在DAO的催化下氧化脱 羧反应生成戊二酰-7ACA(GL-7ACA)， GL-7ACA再由GA催化，脱酰基生成7ACA。整个过程的流程参见Fig.1。因 此，两步酶法转化CPC合成7-ACA的研 究，离不开对DAO和GA的研究。
三、 His-Tag亲和柱纯化D-氨基酸氧化酶
收集菌体40g加入pH7.0,30ml 磷酸 buffer, 用French pressure cell press， 1000psi的压力 下压榨细胞两次, 离心取上清加入 5g CoAgarose， 10oC,160rpm振摇24h, 装柱然后用 50 -100 倍柱床体积的 Wash buffer 流洗柱 1ml/min，直到洗出液OD595小于0.06, 然后用 Elution buffer 洗脱流速为0.5 ml/min, 得到的 酶液直接用于固定化。酶的回收率为36.2％ 。纯度为99.1%。
Fig3.Expression of dao gene in E.coli induced with IPTG Lane1,2 The precipitation of 6-His-N ; Lane3, The precipitation of 2-His-N ;
Lane4, The precipitation of 6-His-C ; Lane 5 The supernatantof 6-His-N ; Lane 6The supernatantof 2-His-N ; Lane 7 The supernatantof 6-His-C ;
三是通过电子邮件、邮寄、电话、传真等方式向国内外5000多家灯饰及 相关企业发送了邀请函；
四是温州灯饰商会协商进行代理招展，邀请温州的客商前来参展
五是古镇组织了12家企业组团参加“2004年中国轻工业产品博览会”, 宣传古镇形象，并同时发布灯博会宣传广告，以达到借展招展的效果。
六是5月份在北京组委会召开了第一次新闻发布会，来自央视、北京电视 台、中央人民广播电台、新华社、中国照明电器、新浪网、搜狐网等来 自国内外近60家媒体对灯博会进行了相关报道。