芦荟中5个化合物提取分离及其抗氧化研究_袁晓
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Key words： Aloe； separation and purification； antioxidantion； DPPH
芦荟是百合科（ Liliaeeae） 芦荟属（ Aloe） 多年生 常 绿肉质草本植物，我国广东、云南、福建及北方一些地 区也有栽培。主要的药用芦荟有库拉索芦荟 （ A． vera） 、好望角芦荟 （ A． ferox Mill． ） 、中华芦荟［A． vera L． var． chinensis （ Haw） Berg］、木 立 芦 荟 （ A． arborescens） 、 非洲芦荟（ A． africana） 和皂质芦荟（ A． saponaria） 等。。 具有健胃催泻、杀菌解毒、增强内脏功能、调节内分泌 系统、软化血管、降低胆固醇、利尿、抗肿瘤、抗病毒、抗 过敏、抗溃疡、收敛皮肤、保湿、抑制黑色素生成及治疗 烫伤、烧伤、虫咬等多种药理作用［1 － 2］。程旺兴［3］研究 发现，芦荟中含有的蒽醌及其苷类物质主要有芦荟大 黄素苷及其苷元、芦荟大黄素、芦荟苷、芦荟苦素、异芦 荟苦素等多种蒽醌类化合物。本文根据芦荟中的几个 重要的蒽醌类化合物的抗氧化性进行研究，为开发利 用芦荟提供科学依据。 1 材料与方法 1. 1 材料、试剂及仪器 1. 1. 1 材料 芦荟药材经鉴定为百合科（ Liliaceae） ， 芦荟属（ Aloe） 干燥品，采自四川。 1. 1. 2 仪器 紫外 / 可见分光光度计（ UV － 1601，北
收稿日期：2012 － 01 － 04 基金项目：国家科技部科技基础性工作专项课题（ 2008FY230400） 作者简介：袁晓（ 1962 － ） ，男，一级副研究员，博士，研究方向： 长期从事
中药及天然产物研究。
京瑞利分析仪器有限公司） ，中低压制备色谱（ 上海利 穗科学仪器有限公司） ，分析天平电子分析天平（ 万分 之一，奥豪斯仪器 （ 上海） 有限公司） 超 声 波 清 洗 器： JK5200DB 型数控 （ 合肥金尼克超声仪器有限公司 － 频率： 59KHz） 1. 1. 3 试剂 DPPH（ 二苯代苦味酰基自由基） ； TBHQ（ 特丁基对苯二酚，） ； 维生素 C ﹑维生素 E，以上 试剂均为分析纯。 1. 2 实验方法 1. 2. 1 芦荟药材中 5 个化合物的提取分离 取芦荟 药材 2kg，用 5 倍量 95% 乙醇超声提取 3 次，过滤，浓 缩得 到 约 180g 流 浸 膏，用 乙 酸 乙 酯 － 水 （ 52% ～ 48% ） 萃取，乙酸乙酯层浓缩，备用，水层过滤后备用。 取乙酸乙酯层 15g，分别经硅胶柱和 C18 柱层析得到 5 个化合物。 1. 2. 2 5 个化合物经高压液相测试其纯度 液相色 谱测试 条 件： 色 谱 柱 为 YMC － ODS － AQC18 色 谱 柱 （ 250mm × 4. 6mm，5μm） ； 流动相： 乙腈（ A） － 0. 2% 磷 酸水溶液（ B） 。流速 1. 0mL / min，检测波长 270nm，柱 温 25℃ ，进样量 10μL。 1. 3 样品溶液及 DPPH 和 TBHQ 的配制
化 合 物 2： 黄 色 针 晶， 1H － NMR （ CDCl3， 400MHz） ： δ12. 11 （ 1H，s，H － 1 ） ，11. 86 （ 1H，s，H － 8） ，11. 02 （ 1H，s，H － 3 ） ，7. 38 （ 1H，d，H － 4 ） ，7. 11 （ 1H，d，H － 5） ，7. 06 （ 1H，d，H － 2 ） ，6. 55 （ 1H，d，H － 7） ，2. 38（ 3H，s，H － 6） 。13C N － MR（ MeOH） δ： 162. 1 （ C － 1） ，120. 1（ C － 2） ，153. 4（ C － 3） ，114. 3（ C － 4） ， 119. 6（ C － 5） ，169. 6 （ C － 6） ，124. 8 （ C － 7） ，163. 5 （ C － 8） ，188. 0（ C － 9） ，183. 3（ C － 10） ，65. 6（ C － 11） ，经 鉴定与文献报 道［2］ 羟 基 芦 荟 大 黄 素 波 谱 数 据 基 本 一 致。
YUAN Xiao，GAO Jun-fei，GONG Er-lan，LU Feng-ping （ Wuhan Botanic Garden，Chinese Academy of Sciences，Wuhan 430074，Hubei，China）
Abstract： Objective： To investigate antioxidant activity of compenents from Aloe． Methods： Five compenents were separated and purified by silica and C18 column chromatoghy，which were identified by MS，NMR，IR，and UV spectra． Their antioxidant activity was tested by DPPH assay，and the antioxidant activity of TBHQ，Vc and Ve was compared． Results： 6 － hydroxyl-aloe-emodin，protocatechuric acid and aloeresin G have antioxidant activity． Conclusion： The antioxidant DPPH assay is reliable and stable， and provides the foundation for the screening radical group of the natural antioxidants．
DOI：10.13192/j.ljtcm.2012.08.156.yuanx.067
辽宁中医杂志 2012 年第 39 卷第 8 期
·1589·
芦荟中 5 个化合物提取分离及其抗氧化研究
袁晓，高俊飞，龚二兰，陆峰平
（ 中国科学wenku.baidu.com武汉植物园，湖北 武汉 430074）
摘 要：利用 C18 柱对乙醇提取的芦荟浸膏进行分离纯化，得到蒽醌单体，核兹共振分析确证单体的化学结构，高压 液相色谱分析单体的纯度； 结果表明从芦荟的乙醇提取物中分离得到 5 个单体，分别为芦荟大黄素、羟基芦荟大黄素、 原儿茶酸、芦荟色苷 G、8 － C － glu － 7 － O － methyl － （ S） － Aloesol，其纯度分别为 98． 55% 、99． 22% 、98． 51% 、98． 76% 、 98． 12% 。另外，采用 DPPH 方法对 5 个成分进行抗氧化测试，同时与 TBHQ、维生素 C 和维生素 E 进行了对比实验。结 果表明其中大黄素、原儿茶酸和芦荟色苷 G 等 3 个化合物具有抗氧化性，而芦荟大黄素和 8 － C － glu － 7 － O － methyl － （ S） － Aloesol 没显示抗氧化性，该实验结果为芦荟的进一步开发利用提供佐证。
化合物 1： 黄色针晶，1 H － NMR（ CDCl3，400MHz） δ： 11. 96 （ 1H，s，H － 1 ） ，11. 89 （ 1H，s，H － 8 ） ，7. 79 （ 1H，t，H － 6 ） ，7. 69 （ 1H，d，H － 4 ） ，7. 67 （ 1H，s，H － 7） ，7. 36（ 1H，d，H － 2） ，7. 27（ 1H，s，H － 5） 。13 CN － MR （ MeOH） δ： 162. 0 （ C － 1 ） ，122. 1 （ C － 2 ） ，152. 4 （ C － 3） ，112. 3（ C － 4） ，119. 6（ C － 5） ，139. 6（ C － 6） ，122. 8 （ C － 7 ） ，162. 5 （ C － 8 ） ，188. 0 （ C － 9 ） ，182. 3 （ C － 10） ，65. 6（ C － 11 ） ，经鉴定与文献报道［1］ 芦荟大黄素 波谱数据基本一致。
化合物 4： 白色粉末，1 H － NMR（ CDCl3，400MHz） δ： 6. 53（ 1H，d ） ，7. 44（ 1H ，d ） 6. 83（ 2H，d ，） 。13 C － NMR（ MeOH） δ： 162. 6 （ C － 2 ） ，109. 8 （ C － 3 ） ，182. 7 （ C － 4 ） ，116. 2 （ C － 4a） ，144. 5 （ C － 5 ） ，112. 5 （ C － 6） ，162. 1（ C － 7） ，112. 0（ C － 8） ，159. 6（ 1a） ，138. 8（ C － 9） ，124. 0 （ C － 10 ） ，18. 4 （ C － 11 ） ，23. 5 （ C － 12 ） ， 57. 0（ 7 － OCH3） ，72. 3（ C － 1'） ，74. 3（ C － 2'） ，77. 3（ C － 3'） ，73. 3 （ C － 4'） ，82. 3 （ C － 5'） ，82. 3 （ C － 6'） ， 167. 9（ C － 1 ”） ，114. 9 （ C － 2 ”） ，146. 9 （ C － 3 ”） ， 127. 9（ C － 4 ’） ，130. 9 （ C － 5 ”，C － 9 ”） ，117. 5 （ C － 6”，C － 8 ”） ，160. 3 （ C － 7 ”） ，经鉴定与文献报道［4］ 芦 荟色苷 G 波谱数据一致。
精确称量 500mg 试药溶解于乙醇，定容至 5mL， 然后按一定梯度稀释配制成等体积不同浓度的溶液。 DPPH 和 TBHQ 溶液的配制准确称取 2. 55mgDPPH 用
·1590·
辽宁中医杂志 2012 年第 39 卷第 8 期
无水乙醇溶解并定容于 100mL 容量瓶，则 DPPH 浓度 为 0. 0255mg / mL。准确称取 7. 5mg TBHQ 用无水乙醇 溶解并定容于 50mL 容量瓶，则 TBHQ 浓度为 0. 15mg / mL，用时再用无水乙醇稀释成不同浓度。 1. 4 对 DPPH 自由基的抑制试验
化合物 3： 无色针晶，1 H － NMR（ CDCl3，400MHz） δ： 7. 54 （ 1H，d，H － 2 ） ，7. 39 （ 1H，dd，H － 6 ） ，6. 98 （ 1H，d，H － 5 ） ； 13 CN － MR （ MeOH ） δ： C － NMR （ MeOH） 124. 2（ C － 1） ，117. 2 （ C － 2） ，145. 2 （ C － 3） ， 154. 2（ C － 4） ，117. 0 （ C － 5） ，124. 2 （ C － 6） ，168. 3 （ C － 7） 。经鉴定与文献报道［3］原儿茶酸波谱数据一致。
关键词：芦荟； 分离纯化； 抗氧化 中图分类号：R284． 2 文献标识码：B 文章编号：1000 － 1719（2012）08 － 1589 － 03
Research on Separation and Antioxidant Activity of Five Compenents from Aloe
取 2mL 浓度为 0. 0255mg / mL 的 DPPH 溶液，与 等体积不同浓度的样品溶液充分混匀，黑暗下室温避 光反应 30min，后在 517nm 处测量其吸光度（ AU） ，控 制样本用乙醇代替提取物，以 95% 乙醇为空白样本， 计算对 DPPH 自由基的清除率 （ S） 。S = （ Ao － As） / Ao × 100% ； 式中： Ao 为控制样本的吸光度，As 为测试 样本的吸光度。 2结果 2. 1 化合物的鉴定结果
芦荟是百合科（ Liliaeeae） 芦荟属（ Aloe） 多年生 常 绿肉质草本植物，我国广东、云南、福建及北方一些地 区也有栽培。主要的药用芦荟有库拉索芦荟 （ A． vera） 、好望角芦荟 （ A． ferox Mill． ） 、中华芦荟［A． vera L． var． chinensis （ Haw） Berg］、木 立 芦 荟 （ A． arborescens） 、 非洲芦荟（ A． africana） 和皂质芦荟（ A． saponaria） 等。。 具有健胃催泻、杀菌解毒、增强内脏功能、调节内分泌 系统、软化血管、降低胆固醇、利尿、抗肿瘤、抗病毒、抗 过敏、抗溃疡、收敛皮肤、保湿、抑制黑色素生成及治疗 烫伤、烧伤、虫咬等多种药理作用［1 － 2］。程旺兴［3］研究 发现，芦荟中含有的蒽醌及其苷类物质主要有芦荟大 黄素苷及其苷元、芦荟大黄素、芦荟苷、芦荟苦素、异芦 荟苦素等多种蒽醌类化合物。本文根据芦荟中的几个 重要的蒽醌类化合物的抗氧化性进行研究，为开发利 用芦荟提供科学依据。 1 材料与方法 1. 1 材料、试剂及仪器 1. 1. 1 材料 芦荟药材经鉴定为百合科（ Liliaceae） ， 芦荟属（ Aloe） 干燥品，采自四川。 1. 1. 2 仪器 紫外 / 可见分光光度计（ UV － 1601，北
收稿日期：2012 － 01 － 04 基金项目：国家科技部科技基础性工作专项课题（ 2008FY230400） 作者简介：袁晓（ 1962 － ） ，男，一级副研究员，博士，研究方向： 长期从事
中药及天然产物研究。
京瑞利分析仪器有限公司） ，中低压制备色谱（ 上海利 穗科学仪器有限公司） ，分析天平电子分析天平（ 万分 之一，奥豪斯仪器 （ 上海） 有限公司） 超 声 波 清 洗 器： JK5200DB 型数控 （ 合肥金尼克超声仪器有限公司 － 频率： 59KHz） 1. 1. 3 试剂 DPPH（ 二苯代苦味酰基自由基） ； TBHQ（ 特丁基对苯二酚，） ； 维生素 C ﹑维生素 E，以上 试剂均为分析纯。 1. 2 实验方法 1. 2. 1 芦荟药材中 5 个化合物的提取分离 取芦荟 药材 2kg，用 5 倍量 95% 乙醇超声提取 3 次，过滤，浓 缩得 到 约 180g 流 浸 膏，用 乙 酸 乙 酯 － 水 （ 52% ～ 48% ） 萃取，乙酸乙酯层浓缩，备用，水层过滤后备用。 取乙酸乙酯层 15g，分别经硅胶柱和 C18 柱层析得到 5 个化合物。 1. 2. 2 5 个化合物经高压液相测试其纯度 液相色 谱测试 条 件： 色 谱 柱 为 YMC － ODS － AQC18 色 谱 柱 （ 250mm × 4. 6mm，5μm） ； 流动相： 乙腈（ A） － 0. 2% 磷 酸水溶液（ B） 。流速 1. 0mL / min，检测波长 270nm，柱 温 25℃ ，进样量 10μL。 1. 3 样品溶液及 DPPH 和 TBHQ 的配制
化 合 物 2： 黄 色 针 晶， 1H － NMR （ CDCl3， 400MHz） ： δ12. 11 （ 1H，s，H － 1 ） ，11. 86 （ 1H，s，H － 8） ，11. 02 （ 1H，s，H － 3 ） ，7. 38 （ 1H，d，H － 4 ） ，7. 11 （ 1H，d，H － 5） ，7. 06 （ 1H，d，H － 2 ） ，6. 55 （ 1H，d，H － 7） ，2. 38（ 3H，s，H － 6） 。13C N － MR（ MeOH） δ： 162. 1 （ C － 1） ，120. 1（ C － 2） ，153. 4（ C － 3） ，114. 3（ C － 4） ， 119. 6（ C － 5） ，169. 6 （ C － 6） ，124. 8 （ C － 7） ，163. 5 （ C － 8） ，188. 0（ C － 9） ，183. 3（ C － 10） ，65. 6（ C － 11） ，经 鉴定与文献报 道［2］ 羟 基 芦 荟 大 黄 素 波 谱 数 据 基 本 一 致。
YUAN Xiao，GAO Jun-fei，GONG Er-lan，LU Feng-ping （ Wuhan Botanic Garden，Chinese Academy of Sciences，Wuhan 430074，Hubei，China）
Abstract： Objective： To investigate antioxidant activity of compenents from Aloe． Methods： Five compenents were separated and purified by silica and C18 column chromatoghy，which were identified by MS，NMR，IR，and UV spectra． Their antioxidant activity was tested by DPPH assay，and the antioxidant activity of TBHQ，Vc and Ve was compared． Results： 6 － hydroxyl-aloe-emodin，protocatechuric acid and aloeresin G have antioxidant activity． Conclusion： The antioxidant DPPH assay is reliable and stable， and provides the foundation for the screening radical group of the natural antioxidants．
DOI：10.13192/j.ljtcm.2012.08.156.yuanx.067
辽宁中医杂志 2012 年第 39 卷第 8 期
·1589·
芦荟中 5 个化合物提取分离及其抗氧化研究
袁晓，高俊飞，龚二兰，陆峰平
（ 中国科学wenku.baidu.com武汉植物园，湖北 武汉 430074）
摘 要：利用 C18 柱对乙醇提取的芦荟浸膏进行分离纯化，得到蒽醌单体，核兹共振分析确证单体的化学结构，高压 液相色谱分析单体的纯度； 结果表明从芦荟的乙醇提取物中分离得到 5 个单体，分别为芦荟大黄素、羟基芦荟大黄素、 原儿茶酸、芦荟色苷 G、8 － C － glu － 7 － O － methyl － （ S） － Aloesol，其纯度分别为 98． 55% 、99． 22% 、98． 51% 、98． 76% 、 98． 12% 。另外，采用 DPPH 方法对 5 个成分进行抗氧化测试，同时与 TBHQ、维生素 C 和维生素 E 进行了对比实验。结 果表明其中大黄素、原儿茶酸和芦荟色苷 G 等 3 个化合物具有抗氧化性，而芦荟大黄素和 8 － C － glu － 7 － O － methyl － （ S） － Aloesol 没显示抗氧化性，该实验结果为芦荟的进一步开发利用提供佐证。
化合物 1： 黄色针晶，1 H － NMR（ CDCl3，400MHz） δ： 11. 96 （ 1H，s，H － 1 ） ，11. 89 （ 1H，s，H － 8 ） ，7. 79 （ 1H，t，H － 6 ） ，7. 69 （ 1H，d，H － 4 ） ，7. 67 （ 1H，s，H － 7） ，7. 36（ 1H，d，H － 2） ，7. 27（ 1H，s，H － 5） 。13 CN － MR （ MeOH） δ： 162. 0 （ C － 1 ） ，122. 1 （ C － 2 ） ，152. 4 （ C － 3） ，112. 3（ C － 4） ，119. 6（ C － 5） ，139. 6（ C － 6） ，122. 8 （ C － 7 ） ，162. 5 （ C － 8 ） ，188. 0 （ C － 9 ） ，182. 3 （ C － 10） ，65. 6（ C － 11 ） ，经鉴定与文献报道［1］ 芦荟大黄素 波谱数据基本一致。
化合物 4： 白色粉末，1 H － NMR（ CDCl3，400MHz） δ： 6. 53（ 1H，d ） ，7. 44（ 1H ，d ） 6. 83（ 2H，d ，） 。13 C － NMR（ MeOH） δ： 162. 6 （ C － 2 ） ，109. 8 （ C － 3 ） ，182. 7 （ C － 4 ） ，116. 2 （ C － 4a） ，144. 5 （ C － 5 ） ，112. 5 （ C － 6） ，162. 1（ C － 7） ，112. 0（ C － 8） ，159. 6（ 1a） ，138. 8（ C － 9） ，124. 0 （ C － 10 ） ，18. 4 （ C － 11 ） ，23. 5 （ C － 12 ） ， 57. 0（ 7 － OCH3） ，72. 3（ C － 1'） ，74. 3（ C － 2'） ，77. 3（ C － 3'） ，73. 3 （ C － 4'） ，82. 3 （ C － 5'） ，82. 3 （ C － 6'） ， 167. 9（ C － 1 ”） ，114. 9 （ C － 2 ”） ，146. 9 （ C － 3 ”） ， 127. 9（ C － 4 ’） ，130. 9 （ C － 5 ”，C － 9 ”） ，117. 5 （ C － 6”，C － 8 ”） ，160. 3 （ C － 7 ”） ，经鉴定与文献报道［4］ 芦 荟色苷 G 波谱数据一致。
精确称量 500mg 试药溶解于乙醇，定容至 5mL， 然后按一定梯度稀释配制成等体积不同浓度的溶液。 DPPH 和 TBHQ 溶液的配制准确称取 2. 55mgDPPH 用
·1590·
辽宁中医杂志 2012 年第 39 卷第 8 期
无水乙醇溶解并定容于 100mL 容量瓶，则 DPPH 浓度 为 0. 0255mg / mL。准确称取 7. 5mg TBHQ 用无水乙醇 溶解并定容于 50mL 容量瓶，则 TBHQ 浓度为 0. 15mg / mL，用时再用无水乙醇稀释成不同浓度。 1. 4 对 DPPH 自由基的抑制试验
化合物 3： 无色针晶，1 H － NMR（ CDCl3，400MHz） δ： 7. 54 （ 1H，d，H － 2 ） ，7. 39 （ 1H，dd，H － 6 ） ，6. 98 （ 1H，d，H － 5 ） ； 13 CN － MR （ MeOH ） δ： C － NMR （ MeOH） 124. 2（ C － 1） ，117. 2 （ C － 2） ，145. 2 （ C － 3） ， 154. 2（ C － 4） ，117. 0 （ C － 5） ，124. 2 （ C － 6） ，168. 3 （ C － 7） 。经鉴定与文献报道［3］原儿茶酸波谱数据一致。
关键词：芦荟； 分离纯化； 抗氧化 中图分类号：R284． 2 文献标识码：B 文章编号：1000 － 1719（2012）08 － 1589 － 03
Research on Separation and Antioxidant Activity of Five Compenents from Aloe
取 2mL 浓度为 0. 0255mg / mL 的 DPPH 溶液，与 等体积不同浓度的样品溶液充分混匀，黑暗下室温避 光反应 30min，后在 517nm 处测量其吸光度（ AU） ，控 制样本用乙醇代替提取物，以 95% 乙醇为空白样本， 计算对 DPPH 自由基的清除率 （ S） 。S = （ Ao － As） / Ao × 100% ； 式中： Ao 为控制样本的吸光度，As 为测试 样本的吸光度。 2结果 2. 1 化合物的鉴定结果