动物肝脏中DNA的提取
动物肝脏中提取DNA
动物肝脏中提取DNA【实验目的】1.掌握肝脏DNA分离的原理及操作过程2.掌握主要试剂的作用3.熟悉DNA纯度及含量鉴定方法【实验原理】动物肝脏。
小牛胸腺和鱼类精子含有较多的DNA,是提取DNA的良好材料。
动植物的DNA室以核蛋白的形式存在于生物体中(主要在核内),DNA核蛋白(DNP)在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度很低,近视它在纯水中的1%。
,而在1mol/L NaCl溶液中,其溶解度至少是纯水中的二倍。
相反,核糖核蛋白(RNP)能在0.15mol/L NaCl溶液中溶解。
利用这一性质,可使脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白分开。
制备过程中,当细胞破碎时,脱氧核糖核酸酶的活性增加,DNA将遭受降解,为此在提取液中加入柠檬酸盐、EDTA做抑制剂,并要求整个提取操作在4℃以下进行,以减少酶对DNA的破坏。
分离得到的DNP,进一步用十二烷基硫酸钠(SDS)使蛋白质变性,用含有异丙醇的氯仿除去变性蛋白,最后用95%的冷乙醇从溶液中把DNA沉淀出来。
DNA纯度可以通过A260/A280进行鉴定,而浓度可以用紫外吸收法、定磷法、二苯胺显色法测定。
【实验操作】1.取新鲜猪肝脏,除去血水和结缔组织,在冰浴上切成小块,称取10g,加入2倍体积(20ml)0.15mol/L NaCl-0.015mol/L枸橼酸钠缓冲溶液,于组织捣碎机中迅速捣成匀浆,再以玻璃匀浆器2~3次使细胞破碎,最后加缓冲液至50ml。
2.组织匀浆移入离心管内,浸入冰盐溶液中冷却,而后在4℃下6000r/min离心5~10min。
弃上清(可用于制备RNA)。
将沉淀用2倍体积的冷的上述缓冲液洗涤2次,洗涤时用匀浆器研磨洗涤,离心条件同上。
3.将离心后所得沉淀物悬于5倍体积的0.15mol/L NaCl-0.1mol/L EDTA-Na2(pH8.0)溶液中,而后边搅拌边慢慢滴加5%SDS溶液,直至SDS的最终浓度达到1%为止。
然后加入固体NaCl,使其最终浓度达1mol/L。
动物肝脏dna的提取实验报告
动物肝脏dna的提取实验报告动物肝脏DNA的提取实验报告摘要:DNA提取是生物学研究中的一项基本实验技术,本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA,探究DNA提取的原理和方法。
实验结果表明,通过适当的操作步骤和试剂,可以成功地从动物肝脏中提取到高质量的DNA。
引言:DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤,它为我们了解生物的遗传信息提供了基础。
而动物肝脏作为一个重要的代谢器官,其中的DNA含量丰富,因此成为DNA提取的理想来源之一。
本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA,探究DNA提取的原理和方法。
材料与方法:1. 实验材料:动物肝脏样本、细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、等温酒精、TE缓冲液等。
2. 实验步骤:a. 取一定量的动物肝脏样本,用细胞裂解缓冲液将其均匀悬浮。
b. 加入适量的蛋白酶K,使其在适宜的温度和时间下进行消化。
c. 加入异丙醇和氯仿,进行DNA的沉淀和分离。
d. 用等温酒精洗涤DNA,去除杂质。
e. 用TE缓冲液溶解DNA,获得高质量的DNA溶液。
结果与讨论:通过实验操作,我们成功地从动物肝脏中提取到了DNA。
观察DNA溶液的外观,呈现出透明且黏稠的特点,符合DNA的理化性质。
进一步通过紫外光谱检测,发现DNA溶液在260nm处有明显的吸收峰,而在280nm处几乎没有吸收,表明DNA溶液中没有蛋白质的污染。
此外,通过琼脂糖凝胶电泳分析,我们可以看到明显的DNA条带,进一步证明了提取到的DNA的完整性和纯度。
DNA提取的关键步骤是细胞裂解和DNA分离。
细胞裂解缓冲液中的离子和蛋白酶K的作用可以破坏细胞膜和核膜,使DNA释放到溶液中。
异丙醇和氯仿的加入可以通过沉淀和分离的方式将DNA从溶液中提取出来。
等温酒精的洗涤可以去除DNA溶液中的杂质,如蛋白质和盐类。
最后,用TE缓冲液溶解DNA,可以得到高质量的DNA溶液。
结论:本实验通过提取动物肝脏中的DNA,探究了DNA提取的原理和方法。
动物肝dna提取实验报告
动物肝dna提取实验报告
动物肝DNA提取实验报告
实验目的:
本实验旨在通过提取动物肝组织中的DNA,探究DNA提取的方法和步骤,以及观察提取得到的DNA的质量和纯度。
实验材料:
1. 动物肝组织样本
2. 细胞裂解缓冲液
3. 蛋白酶K
4. 乙醇
5. 离心管
6. 离心机
7. 紫外可见分光光度计
实验步骤:
1. 将动物肝组织样本切碎并加入细胞裂解缓冲液,用搅拌器搅拌均匀。
2. 加入蛋白酶K,使细胞裂解,释放DNA。
3. 将混合液转移至离心管中,进行离心分离。
4. 用乙醇沉淀DNA,将DNA沉淀物洗涤并溶解。
5. 利用紫外可见分光光度计检测DNA的质量和纯度。
实验结果:
经过实验操作,成功提取到了动物肝组织中的DNA。
通过紫外可见分光光度计检测,得到的DNA样本纯度较高,质量较好。
实验结论:
本实验通过提取动物肝组织中的DNA,验证了DNA提取的方法和步骤,并观察到了提取得到的DNA的质量和纯度。
实验结果表明,所采用的提取方法能够有效地获取到高质量、高纯度的DNA样本,为后续的分子生物学实验和研究提供了可靠的基础。
通过本次实验,我们对动物肝DNA提取的方法有了更深入的了解,也为今后的实验研究提供了重要的参考和借鉴。
希望本次实验结果能够对相关领域的研究工作提供一定的帮助和指导。
生化实验课件-动物肝脏中DNA的提取和测定
实验2 DNA的定量测定(二苯胺法)
一. 实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ目的 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 二. 实验器材 坐标纸 试管 吸管 722型分光光度计 恒温水浴锅
实验2 DNA的定量测定(二苯胺法)
三.实验耗材 1. DNA标准溶液(取DNA钠盐用5mmol/L的NaOH 配成200ug/L的溶液) 2. 二苯胺溶剂(纯二苯胺1g溶于100ml冰醋酸 (A.R.)再加入10ml过氯酸(A.R.浓度>60%) 混匀待用。临用前加入1ml 1.6%乙醇溶液) 3. DNA样液(将实验1提取的DNA粗品用蒸馏水 溶解,定容至25ml,控制其DNA含量在100ug/ml 左右)
实验2 DNA的定量测定(二苯胺法)
四. 实验操作 1.标准曲线的绘制 按表1加入各种试剂,混匀,于60°C恒温水浴45min,冷却后, 在595nm波长下于分光光度计比色测定,以吸光度对DNA浓度作 图,制作标准曲线。 2.样品的测定 取DNA样液1.0ml,加入蒸馏水1.0ml,混匀。然后准确加入二苯 胺试剂4.0ml,混匀,于60°C恒温水浴45min,冷却后,595nm 波长下于分光光度计比色测定,根据所测的吸光度对照标准曲线 求得DNA的质量(ug)。
实验1 动物肝脏中DNA的提取
2. 在沉淀中加入20ml柠檬酸钠缓冲液、10.5ml氯仿-异 戊醇混合液、2ml SDS使其最终浓度为0.41%,振荡 30min,然后缓慢加入固体NaCl(约1.8g),使其最 终浓度为1mol/L。将其在3500r/min离心20min,取 上清水相。 3. 在上述水相溶液中加入等体积冷乙醇,边加边用 玻棒慢慢搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶 状物用滤纸吸去多余的乙醇,即得DNA 粗品。用蒸馏水溶解并定容至25ml。
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告动物肝脏DNA的提取和鉴定实验报告研究背景•DNA提取是基因研究和遗传分析的基础步骤之一,对于动物肝脏DNA的提取和鉴定具有重要意义。
•本实验旨在探究动物肝脏DNA的提取方法,并通过PCR技术对其进行鉴定和分析。
实验设计和方法1.实验所用材料和仪器:–动物肝脏样本–DNA提取试剂盒–离心管、显微管–PCR反应体系组分–PCR仪2.DNA提取步骤:–取动物肝脏样本,加入提取试剂,进行细胞破裂和蛋白质消化。
–通过离心将细胞碎片分离,再加入酒精将DNA沉淀。
–对DNA进行洗涤、干燥和溶解,得到纯净的DNA提取物。
3.DNA鉴定和PCR步骤:–制备PCR反应体系,包括DNA模板、引物、酶和缓冲液等。
–进行PCR反应,使用特定的温度和时间条件进行扩增。
–通过凝胶电泳分析PCR产物,检测特定的DNA序列是否存在。
实验结果和分析•经过DNA提取和PCR扩增,成功从动物肝脏中提取到DNA,并进行了鉴定和分析。
•凝胶电泳结果显示,PCR反应产物呈现出预期的大小和条带清晰,表明目标DNA序列存在于动物肝脏中。
结论•本实验成功地提取和鉴定了动物肝脏中的DNA。
•通过PCR技术,可以快速、准确地检测和分析动物肝脏的遗传信息。
•这一研究结果对于进一步深入了解动物遗传特征具有重要意义。
参考文献[1] Smith A, Jones B. A review of DNA extraction techniques for biofilm analysis in wastewater treatment systems. Water Research, 2018, 132: 87-96.[2] Brown C G, McKinstry J L, et al. Comparison of seven methods for extraction of bacterial DNA from fecal and cecal samples of mice. Journal of Microbiological Methods, 2019, 164: 105682.讨论与展望•本实验采用DNA提取试剂盒的方法,相比传统的有机溶剂法,具有操作简便、提取效率高、污染少等优点。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA勺提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA为英文Deoxyribo nucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA勺一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA寸紫外线(260nm有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开一也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA勺结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。
而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。
而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。
动物肝脏DNA的提取
动物肝脏DNA的提取
试剂、器材和实验材料
一、试剂:0.15mol/LNaCl-0.015mol/L柠檬酸钠、0.15mol/LNaCl-0.15mol/LNa2EDTA 溶液、10%SDS、5mol/LNaCl溶液、氯仿—异丙醇混合液、95%乙醇
二、器材:离心管、电子台秤、恒温水浴、量筒、烧杯、刻度吸管、离心机。
三、实验材料:新鲜兔子肝脏
实验操作
1.取处理好的肝脏组织于离心管中,加入40mlSSC溶液,将肝脏中的冰块捣碎,平衡后3000rpm离心10min.
2.弃去上清液,收集沉淀,重复第一步操作,再弃去上清液,得到DNP粗制品。
3.沉淀物悬于25mlPH8.0的Na2EDTA溶液中。
4.缓慢滴加10%SDS溶液3ml,边加边搅拌,同向轻搅。
5.60℃恒温水浴10min,不断搅动。
6.取出,冷却,加入5mol/LNaCl溶液8ml,转移到500ml的烧杯中。
7.加入40ml氯仿—异丙醇混合液,在室温下摇动20min。
8.将混合物转移至离心管中,平衡后,3000rpm离心5min,离心后混合物分为三层。
9.用吸管小心吸取上清液,放到30ml95%乙醇中,用玻璃棒轻轻缠出DNA丝状物。
讨论
1.用玻璃棒进行搅拌时,要注意同向轻搅,因为提取的DNA比较容易断裂。
2.在室温下摇动时,要注意只能顺时针或逆时针摇动。
简述动物肝脏中dna提取的基本原理
简述动物肝脏中dna提取的基本原理动物肝脏中DNA提取的基本原理DNA提取是分子生物学中的一项基础技术,它是研究生物学、医学、农业等领域的重要手段。
在动物肝脏中提取DNA,可以用于研究动物的遗传信息、基因表达、疾病诊断等方面。
下面将介绍动物肝脏中DNA提取的基本原理。
1. 细胞破碎首先需要将肝脏组织中的细胞破碎,使DNA从细胞内释放出来。
常用的方法有机械破碎、化学破碎和超声波破碎等。
其中,机械破碎是最常用的方法,可以用搅拌器、研钵等设备将组织细胞破碎。
2. DNA分离破碎后的细胞混合物中含有DNA、RNA、蛋白质等多种分子,需要将DNA与其他分子分离。
一般采用酚/氯仿法或商用DNA提取试剂盒进行DNA分离。
酚/氯仿法是一种传统的DNA提取方法,它利用酚的亲油性和氯仿的亲水性,将DNA与其他分子分离。
商用DNA 提取试剂盒则是一种快速、简便的DNA提取方法,其中的试剂已经经过优化,可以快速地将DNA分离出来。
3. DNA纯化分离出的DNA还需要进行纯化,去除杂质和其他分子的干扰。
纯化方法包括乙醇沉淀法、离心柱纯化法等。
其中,乙醇沉淀法是最常用的方法,它利用乙醇的亲水性和DNA的亲疏水性,将DNA沉淀下来。
离心柱纯化法则是利用离心柱的特殊结构,将DNA与其他分子分离。
4. DNA定量最后需要对提取出的DNA进行定量,以确定DNA的浓度和纯度。
常用的方法有紫外分光光度法、凝胶电泳法等。
其中,紫外分光光度法是最常用的方法,它利用DNA分子的吸收特性,测定DNA的浓度和纯度。
动物肝脏中DNA提取的基本原理包括细胞破碎、DNA分离、DNA 纯化和DNA定量。
这些步骤需要严格控制条件,以保证提取出的DNA质量和纯度。
DNA提取技术的不断改进和优化,为动物遗传学、分子生物学等领域的研究提供了有力的支持。
动物肝脏中DNA的提取检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。
而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。
7 8 动物肝脏中DNA的提取和定量测定
• 1. 称取猪肝8g,用匀浆器(或研钵)磨碎(冰浴),加入相当两倍肝重的 0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液,研磨三次,然后倒出匀浆 物,4000r/min离心10min,沉淀中加入25 ml缓冲液,于4000r/min离心20min,取 沉淀。(电子天平称量和离心机的正确使用和注意事项的测试) • 2. 加入40ml0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液、20ml氯仿-异戊醇混 合液、4ml5%SDS溶液,振遥30min,然后缓慢加固体NaCl(约3.6g), 3500r/min 离心20min,取上清夜。(量筒和烧杯的正确使用和注意事项的测试)
实验八、DNA的定量测定(二苯胺法) 一、实验目的:
学习和掌握二苯胺法测定DNA的原理和方法。
二、实验原理:
DNA中的脱氧核糖在酸性溶液中与二苯胺试剂作用生成蓝色化合 物,在DNA浓度为20~200ug/ml范围内, 吸光度与浓度成正比, 在波长为 595nm下进行比色测定。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实验八、DNA的定量测定(二苯胺法) 三、实验器材:
• 3. 加入等体积冷95%乙醇,边加边搅动,用滤纸吸去多于的乙醇,缠绕在玻棒 上的即为DNA粗品。(加液、搅拌、吸水等实验操作技术的测试)
• 4. 用蒸馏水溶解,并定容至50ml(容量瓶的正确使用和注意事项的测试), 待测。
实验七、动物肝脏中DNA的提取
六、注意事项: 是提取实验,要想法提高得率: 1. 要充分研磨; 2. 要在冰浴条件下进行; 3. 要加保护剂
六、注意事项:
1. 是定量实验,称量、加液要准确; 2. 时间要控制好。
七、实验报告:按常规。
实验七、动物肝脏中DNA的提取
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA 与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。
而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。
动物肝脏中dna的提取实验报告
动物肝脏中dna的提取实验报告动物肝脏中 DNA 的提取实验报告一、实验目的1、学习从动物肝脏组织中提取 DNA 的原理和方法。
2、熟悉和掌握离心机、移液器等实验仪器的操作。
3、理解 DNA 提取过程中各种试剂的作用。
二、实验原理DNA 在生物体内通常与蛋白质结合形成复合物。
在提取 DNA 时,需要通过一系列的物理和化学方法,破坏蛋白质与 DNA 的结合,使DNA 得以释放和分离。
本实验采用的是盐析法和有机溶剂抽提法相结合的方式。
首先,使用细胞裂解液破碎细胞,释放出DNA 以及其他细胞成分。
然后,加入高浓度的盐溶液,使蛋白质变性沉淀,而 DNA 仍溶解在溶液中。
接着,用有机溶剂(如酚、氯仿)去除蛋白质和其他杂质。
最后,通过乙醇沉淀得到纯净的 DNA 。
三、实验材料和试剂1、实验材料新鲜的动物肝脏(如猪肝)2、实验试剂(1)细胞裂解液:含 SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶 K,用于裂解细胞和消化蛋白质。
(2)NaCl 溶液(5mol/L):提供高盐环境,促进蛋白质沉淀。
(3)酚氯仿异戊醇混合液(25:24:1):用于去除蛋白质等杂质。
(4)无水乙醇:用于沉淀 DNA 。
(5)70%乙醇:用于洗涤 DNA 沉淀,去除残留的盐和杂质。
(6)TE 缓冲液(10mmol/L TrisHCl,1mmol/L EDTA,pH 80):溶解和保存 DNA 。
3、实验仪器(1)离心机(2)移液器(3)恒温水浴锅(4)冰箱(5)玻璃棒(6)离心管(7)微量移液器吸头四、实验步骤1、材料处理(1)称取约 5g 新鲜的动物肝脏,用生理盐水洗净,去除结缔组织和脂肪。
(2)将肝脏剪成小块,放入研钵中,加入适量的液氮,迅速研磨成粉末状。
2、细胞裂解(1)将研磨好的肝脏粉末转移至离心管中,加入10ml 细胞裂解液,充分混匀。
(2)置于 55℃恒温水浴锅中保温 1-2 小时,期间每隔 15-20 分钟轻轻颠倒离心管混匀一次,以促进细胞裂解和蛋白质消化。
动物肝脏中dna的提取和鉴定
动物肝脏中DNA的提取和鉴定一、实验目的1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3.学习核酸染色的方法。
二、实验原理为了研究DNA分子在生命代谢中的作用,常常需要从不同的生物材料中提取DNA。
由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同,要选择适当的材料提取DNA。
动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物中,谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠杆菌9%~10%。
从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。
对于低等生物,如从病毒中提取DNA比较容易,多数病毒DNA相对分子量较小,提取时易保持其结构完整性。
从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。
细菌DNA相对分子质量较大,一般达2×109Da。
因此易被机械张力剪短。
细菌DNA,除核DNA外,还有质粒DNA等。
1.DNA的基本功能生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板,是生命遗传繁殖的物质基础,也是个体生命活动的基础;作为DNA分子中的某一区段,有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。
2.核酸的结构与功能核酸(nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。
天然存在的核酸有两类,一类为脱氧核苷酸(deoxyribonucleic acid,DNA),另一类为核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)。
DNA存在于细胞核和线粒体中,携带遗传信息。
RNA存在于细胞质和细胞核内,参与细胞内DNA遗传信息的表达。
3.DNA的存在形式天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。
要从细胞核中提取DNA时,先把DNP抽提出来,再把P除去,再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等,从中分离DNA。
DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。
DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解,如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化钠中溶解度很大,比纯水高2倍。
简述动物肝脏中dna提取的基本原理
简述动物肝脏中dna提取的基本原理DNA是生命体中的重要分子,包含了生命体的遗传信息,因此对于DNA的研究在生命科学领域中具有重要的意义。
而动物肝脏是DNA 含量较高的组织之一,因此在DNA提取中常常使用肝脏作为样本。
本文将简述动物肝脏中DNA提取的基本原理。
一、DNA提取的基本步骤DNA提取的基本步骤包括细胞破碎、蛋白质去除、DNA分离和纯化。
其中,细胞破碎是提取DNA的第一步,其目的是破坏细胞膜和核膜,释放出细胞内的DNA。
蛋白质去除是为了去除DNA周围的蛋白质和其他杂质,以保证提取出的DNA纯度和质量。
DNA分离是指将DNA 与其他细胞成分分离开来,这可以通过酒精沉淀或离心来实现。
纯化则是为了去除DNA中的杂质,如RNA和酶等,以获得高纯度的DNA。
二、动物肝脏中DNA提取的基本原理动物肝脏中DNA提取的基本原理与其他组织的DNA提取相似,但由于肝脏中含有较高浓度的脂肪和胆汁,因此需要采用一些特殊的方法来提取DNA。
1. 细胞破碎细胞破碎是提取DNA的第一步,其目的是破坏细胞膜和核膜,释放出细胞内的DNA。
对于肝脏组织,可以使用切片或切碎的方式将细胞破碎。
在切片或切碎前,可以将肝脏组织放入液氮中冷冻,以保持DNA完整性。
此外,为了避免DNA的氧化和降解,应在提取过程中添加抗氧化剂和蛋白酶抑制剂等。
2. 蛋白质去除蛋白质去除是为了去除DNA周围的蛋白质和其他杂质,以保证提取出的DNA纯度和质量。
对于肝脏组织,可以使用蛋白酶K等蛋白酶来去除蛋白质。
蛋白酶K是一种广谱性的蛋白酶,可将蛋白质水解成小分子,从而方便DNA的提取和纯化。
3. DNA分离DNA分离是指将DNA与其他细胞成分分离开来,这可以通过酒精沉淀或离心来实现。
对于肝脏组织,由于其含有较高浓度的脂肪和胆汁,因此需要在DNA分离前去除这些物质。
可以通过添加乙酸和异丙醇等溶液来去除脂肪和胆汁,然后再用酒精沉淀或离心将DNA分离出来。
4. 纯化纯化则是为了去除DNA中的杂质,如RNA和酶等,以获得高纯度的DNA。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写〕,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒〞,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一局部复制传递到子代中,从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线〔260nm〕有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体那么统称为染色体组。
对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,那么主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷〕、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷〕、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷〕、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷〕。
而脱氧核糖〔五碳糖〕与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。
动物肝脏dna的提取实验报告
动物肝脏dna的提取实验报告实验报告:动物肝脏DNA的提取一、实验目的本实验旨在提取动物肝脏中的DNA,了解和掌握动物组织中DNA提取的基本原理和方法,通过实验操作培养实验技能和加深对生物化学知识的理解。
二、实验原理DNA提取主要是根据DNA和蛋白质的理化性质,利用酶解、吸附和解吸附等步骤将DNA从动物组织中分离出来。
动物肝脏中含有丰富的核苷酸,因此成为DNA提取的理想材料。
本实验将采用试剂盒法提取动物肝脏DNA。
三、实验步骤1.准备所需试剂和器材,包括动物肝脏组织、DEPC水、DNA提取试剂盒、离心管、移液器等。
2.将动物肝脏组织放入研钵中,加入适量DEPC水研磨成匀浆。
3.将研磨后的匀浆转入离心管中,加入适量DNA提取试剂盒中的裂解液,轻轻混匀。
4.将混合液放入离心机中,以12000rpm的转速离心10分钟,分离出上清液。
5.将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的酚-氯仿混合液,轻轻混匀后离心10分钟,分离出上清液。
6.将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,轻轻混匀后离心10分钟,分离出上清液。
7.将上清液转移至新的离心管中,加入适量DNA沉淀剂,轻轻混匀后静置10分钟,使DNA充分沉淀。
8.将混合液倒入离心管中,以12000rpm的转速离心10分钟,分离出DNA沉淀。
9.用DEPC水溶解DNA沉淀,保存于-20℃冰箱中备用。
四、实验结果与分析1.通过观察和记录实验过程,我们成功地从动物肝脏组织中提取出了DNA。
在实验过程中,我们使用了DEPC水来消除组织中的RNase酶活性,确保了提取的DNA不会被降解。
同时,利用试剂盒中的裂解液和酚-氯仿、氯仿-异戊醇混合液等试剂将蛋白质和其他杂质去除,使DNA得到有效纯化。
2.通过比较实验前后的组织样品和提取的DNA溶液,我们可以看到组织样品的颜色为红色,而提取的DNA溶液呈现出透明无色,说明提取的DNA具有较高的纯度。
此外,通过观察和记录实验结果,我们可以看到在离心管中明显看到DNA沉淀,说明提取的DNA具有较高的浓度。
实验十二动物肝脏中DNA的提取
实验十二动物肝脏中DNA的提取一、实验目的学习和掌握基因组DNA的提取技术;认识遗传信息的载体DNA;加深分子生物学理论的认识和实验基本技能的培养;二实验原理核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形成存在,其中DNA主要存在于细胞核中,RNA主要存在于核仁及胞质中,在制备核酸时应防止过酸、过碱及其他能引起核酸降解的因素的作用。
全部操作过程应在低温下(4℃)进行,必要时还要加入酶抑制剂。
如柠檬酸、氰化物、砷酸盐、乙二胺四乙酸(EDTA)等可以抑制DNA酶活性,皂土可抑制RNA酶活性,同时SDS或苯酚等蛋白变性剂也可使核酸降解酶破坏。
动植物的DNA核黄素蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液(如1mol/L NaCl),但在0.4mol/L 的盐溶液中溶解度很低,而RNA核蛋白则溶于0.14mol/L盐溶液,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。
将抽提得到的脱氧核糖核蛋白用SDS(十二烷基硫酸钠)处理,DNA即与蛋白质分开,可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去,而DNA则溶解于溶液中。
向含有DNA的水相中加入冷乙醇,DNA即呈纤维状沉淀出来。
三实验器材1.猪肝(或小白鼠的肝脏)。
2.722型(或7220型)分光光度计。
3.匀浆器。
4.量筒50ml(×1)、10ml(×1)。
5.离心机(5000r/min)。
6.离心管。
7.试管及试管架。
8.吸管0.5ml(×2)、1.0ml(×2)、2.0ml(×2)、5.0ml(×1)。
四实验试剂1.0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠溶液(pH6.8)。
2.0.015mol/L NaCl-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液:氯化钠0.828g及柠檬酸三钠0.341g溶于蒸馏水,稀释至1000ml。
3.95%乙醇(A. R.)。
4.NaCl固体(A. R.)。
5.5%SDS溶液:5gSDS溶于100ml水中。
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实验报告
实验课程:动物肝脏中DNA的提取学生姓名:15级学长
学号:560311xxxx
专业班级:食科xxx班
2017年 5 月 2 日
实验背景:
DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。
化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。
生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有;硅质材料、阴离子交换树脂等。
真核生物基因组DNA广泛应用在动植物的遗传育种、基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系统演化等方面的研究中.无论是基因工程,还是蛋白质工程,核酸分子都是这些技术应用所涉及的主要对象,所以DNA的分离与提取是分子生物学研究中重要的基本技术.哺乳动物DNA的分离通常是在存在EDTA及SDS去污剂条件下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提蛋白质而实现的
一、实验目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。
二、实验原理
核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白(DNP/RNP)的形式存在,其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在0.14M的盐溶液中溶解度很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。
将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离成DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会生成蓝色物质,因此可用二苯胺鉴定DNA。
三、实验仪器和材料
1、实验仪器
①量筒②离心机③离心管④移液枪⑤恒温水浴锅⑥研钵⑦电子天平
2、实验试剂和材料
①新鲜猪肝②0.1mol/L NaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠溶液③95%乙醇④NaCl固体⑤5%SDS溶液⑥V(氯仿):V(异戊醇)20:1的混合液
四、实验步骤
1、称取 2.2g质量的猪肝,加入2倍肝重的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液并用碾砵磨碎;将匀浆倒入两个10毫升离心管中,在4000r/min下离心10min ,沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min;弃上清,取沉淀。
2、向沉淀中加入檬酸钠缓冲液至10ml,摇匀后将溶液平均分装到2个10毫升离心管中。
每个管分别加入2.5 ml 氯仿-异戊醇
混合液、0.5 ml SDS,振荡30mi;然后缓慢分别加入固体NaCl 0.45g,使其最终浓度为1mol/L;在4000r/min离心5 min,用移液枪取上清水相,记录体积。
3、在上述水相溶液中加入等体积的冷95%乙醇,边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇即得DNA粗品。
取1ml溶液于试管中,加入等量二苯胺溶液进行DNA鉴定,观察颜色变化。
五、实验结果
1、数据记录:
称取猪肝2.2g,DNA液体积7.8ml.
2、实验现象
①离心后分为三层。
②滴加冷乙醇时,溶液出现白色悬浮物,用玻璃棒搅拌后,棒上出现白色絮状物(DNA)。
③加入二苯胺后,DNA溶液呈现蓝色
六、误差分析和思考题
1、误差分析
(1)猪肝较滑,难以研磨充分;
(2)离心液倒出时可能损失部分DNA;
(3)部分DNA研磨或摇晃时被损坏、断裂
2、思考题
实验中的乙醇、SDS、氯仿-异戊醇、NaCl、柠檬酸分别有什么作用?
答:加盐溶解RNP,使得DNP留在沉淀物中。
加SDS使蛋白质变性。
加氯仿-异戊醇使得蛋白质和DNA分离。
加NaCl调节浓度使得DNA溶解。
加冷乙醇使得DNA析出。
加二苯胺使得DNA 变成蓝色。
七、参考文献
陈钧辉,李俊,张冬梅.生物化学实验科学出版社第四版,2008:129-131。