动物肝脏中DNA的提取

实验报告

实验课程：动物肝脏中DNA的提取学生姓名：15级学长

学号：560311xxxx

专业班级：食科xxx班

2017年 5 月 2 日

实验背景：

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。

真核生物基因组DNA广泛应用在动植物的遗传育种、基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系统演化等方面的研究中.无论是基因工程,还是蛋白质工程,核酸分子都是这些技术应用所涉及的主要对象,所以DNA的分离与提取是分子生物学研究中重要的基本技术.哺乳动物DNA的分离通常是在存在EDTA及SDS去污剂条件下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提蛋白质而实现的

一、实验目的

学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。二、实验原理

核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在0.14M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离成DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。

DNA遇二苯胺（沸水浴）会生成蓝色物质，因此可用二苯胺鉴定DNA。

三、实验仪器和材料

1、实验仪器

①量筒②离心机③离心管④移液枪⑤恒温水浴锅⑥研钵⑦电子天平

2、实验试剂和材料

①新鲜猪肝②0.1mol/L NaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠溶液③95%乙醇④NaCl固体⑤5%SDS溶液⑥V(氯仿)：V（异戊醇）20：1的混合液

四、实验步骤

1、称取 2.2g质量的猪肝，加入2倍肝重的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液并用碾砵磨碎；将匀浆倒入两个10毫升离心管中，在4000r/min下离心10min ，沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min；弃上清，取沉淀。

2、向沉淀中加入檬酸钠缓冲液至10ml，摇匀后将溶液平均分装到2个10毫升离心管中。每个管分别加入2.5 ml 氯仿-异戊醇

混合液、0.5 ml SDS，振荡30mi；然后缓慢分别加入固体NaCl 0.45g，使其最终浓度为1mol/L；在4000r/min离心5 min，用移液枪取上清水相，记录体积。

3、在上述水相溶液中加入等体积的冷95%乙醇，边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇即得DNA粗品。取1ml溶液于试管中，加入等量二苯胺溶液进行DNA鉴定，观察颜色变化。

五、实验结果

1、数据记录：

称取猪肝2.2g，DNA液体积7.8ml.

2、实验现象

①离心后分为三层。

②滴加冷乙醇时，溶液出现白色悬浮物，用玻璃棒搅拌后，棒上出现白色絮状物（DNA）。

③加入二苯胺后，DNA溶液呈现蓝色

六、误差分析和思考题

１、误差分析

（1）猪肝较滑，难以研磨充分；

（2）离心液倒出时可能损失部分DNA；

（3）部分DNA研磨或摇晃时被损坏、断裂

２、思考题

实验中的乙醇、SDS、氯仿-异戊醇、NaCl、柠檬酸分别有什么作用？

答：加盐溶解RNP，使得DNP留在沉淀物中。加SDS使蛋白质变性。加氯仿-异戊醇使得蛋白质和DNA分离。加NaCl调节浓度使得DNA溶解。加冷乙醇使得DNA析出。加二苯胺使得DNA 变成蓝色。

七、参考文献

陈钧辉，李俊，张冬梅.生物化学实验科学出版社第四版,2008:129-131