动物肝脏中DNA的提取检测实验报告

合集下载

动物肝脏dna的提取实验报告

动物肝脏dna的提取实验报告

动物肝脏dna的提取实验报告动物肝脏DNA的提取实验报告摘要:DNA提取是生物学研究中的一项基本实验技术,本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA,探究DNA提取的原理和方法。

实验结果表明,通过适当的操作步骤和试剂,可以成功地从动物肝脏中提取到高质量的DNA。

引言:DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤,它为我们了解生物的遗传信息提供了基础。

而动物肝脏作为一个重要的代谢器官,其中的DNA含量丰富,因此成为DNA提取的理想来源之一。

本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA,探究DNA提取的原理和方法。

材料与方法:1. 实验材料:动物肝脏样本、细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、等温酒精、TE缓冲液等。

2. 实验步骤:a. 取一定量的动物肝脏样本,用细胞裂解缓冲液将其均匀悬浮。

b. 加入适量的蛋白酶K,使其在适宜的温度和时间下进行消化。

c. 加入异丙醇和氯仿,进行DNA的沉淀和分离。

d. 用等温酒精洗涤DNA,去除杂质。

e. 用TE缓冲液溶解DNA,获得高质量的DNA溶液。

结果与讨论:通过实验操作,我们成功地从动物肝脏中提取到了DNA。

观察DNA溶液的外观,呈现出透明且黏稠的特点,符合DNA的理化性质。

进一步通过紫外光谱检测,发现DNA溶液在260nm处有明显的吸收峰,而在280nm处几乎没有吸收,表明DNA溶液中没有蛋白质的污染。

此外,通过琼脂糖凝胶电泳分析,我们可以看到明显的DNA条带,进一步证明了提取到的DNA的完整性和纯度。

DNA提取的关键步骤是细胞裂解和DNA分离。

细胞裂解缓冲液中的离子和蛋白酶K的作用可以破坏细胞膜和核膜,使DNA释放到溶液中。

异丙醇和氯仿的加入可以通过沉淀和分离的方式将DNA从溶液中提取出来。

等温酒精的洗涤可以去除DNA溶液中的杂质,如蛋白质和盐类。

最后,用TE缓冲液溶解DNA,可以得到高质量的DNA溶液。

结论:本实验通过提取动物肝脏中的DNA,探究了DNA提取的原理和方法。

动物肝脏中DNA的提取和检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取和检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为"遗传微粒",原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线〔260nm有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷。

而脱氧核糖〔五碳糖与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝dna提取实验报告

动物肝dna提取实验报告

动物肝dna提取实验报告动物肝DNA提取实验报告引言:DNA(脱氧核糖核酸)是生物体内的遗传物质,对于研究生物进化、基因表达和遗传变异等方面具有重要意义。

DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一,它可以用于进一步的PCR扩增、测序以及其他分子生物学实验。

本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA,了解DNA提取的基本原理和方法。

材料与方法:1. 实验材料:- 动物肝脏样本(例如小鼠、大鼠、猪等)- 细胞裂解缓冲液(含有蛋白酶K)- 乙酸酚/氯仿提取液- 乙醇- TE缓冲液(含有Tris-HCl和EDTA)2. 实验仪器:- 离心机- 恒温水浴- 紫外可见分光光度计- 电泳仪实验步骤:1. 取动物肝脏样本,将其置于细胞裂解缓冲液中,用块状器械将其均匀研磨。

2. 将研磨后的样本转移到离心管中,离心10分钟,以去除细胞碎片和蛋白质。

3. 将上清液转移到新的离心管中,加入等体积的乙酸酚/氯仿提取液,轻轻摇匀,离心10分钟。

4. 分离上清液和有机相,将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的冷乙醇,缓慢倾倒,使DNA沉淀。

5. 用离心机离心10分钟,将上清液倒掉,加入70%乙醇洗涤沉淀3次,每次离心5分钟。

6. 倒掉乙醇,将离心管倒置在吸水纸上,待DNA沉淀干燥。

7. 加入适量的TE缓冲液溶解DNA,使其充分溶解。

8. 使用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。

9. 可以将提取得到的DNA用于后续的PCR扩增、测序等实验。

结果与讨论:通过上述实验步骤,我们成功地从动物肝脏样本中提取到了DNA。

通过紫外可见分光光度计检测,我们可以得到DNA的浓度和纯度信息,以确保提取到的DNA质量良好。

此外,我们还可以使用电泳仪对提取得到的DNA进行质量检测,观察DNA的大小和完整性。

DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤,它为后续实验提供了可靠的DNA样本。

在实际应用中,我们可以利用提取得到的DNA进行PCR扩增,以研究特定基因的表达情况;也可以进行测序,以了解DNA序列的变异情况。

动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告

动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告

动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告动物肝脏DNA的提取和鉴定实验报告研究背景•DNA提取是基因研究和遗传分析的基础步骤之一,对于动物肝脏DNA的提取和鉴定具有重要意义。

•本实验旨在探究动物肝脏DNA的提取方法,并通过PCR技术对其进行鉴定和分析。

实验设计和方法1.实验所用材料和仪器:–动物肝脏样本–DNA提取试剂盒–离心管、显微管–PCR反应体系组分–PCR仪2.DNA提取步骤:–取动物肝脏样本,加入提取试剂,进行细胞破裂和蛋白质消化。

–通过离心将细胞碎片分离,再加入酒精将DNA沉淀。

–对DNA进行洗涤、干燥和溶解,得到纯净的DNA提取物。

3.DNA鉴定和PCR步骤:–制备PCR反应体系,包括DNA模板、引物、酶和缓冲液等。

–进行PCR反应,使用特定的温度和时间条件进行扩增。

–通过凝胶电泳分析PCR产物,检测特定的DNA序列是否存在。

实验结果和分析•经过DNA提取和PCR扩增,成功从动物肝脏中提取到DNA,并进行了鉴定和分析。

•凝胶电泳结果显示,PCR反应产物呈现出预期的大小和条带清晰,表明目标DNA序列存在于动物肝脏中。

结论•本实验成功地提取和鉴定了动物肝脏中的DNA。

•通过PCR技术,可以快速、准确地检测和分析动物肝脏的遗传信息。

•这一研究结果对于进一步深入了解动物遗传特征具有重要意义。

参考文献[1] Smith A, Jones B. A review of DNA extraction techniques for biofilm analysis in wastewater treatment systems. Water Research, 2018, 132: 87-96.[2] Brown C G, McKinstry J L, et al. Comparison of seven methods for extraction of bacterial DNA from fecal and cecal samples of mice. Journal of Microbiological Methods, 2019, 164: 105682.讨论与展望•本实验采用DNA提取试剂盒的方法,相比传统的有机溶剂法,具有操作简便、提取效率高、污染少等优点。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告修订版

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告修订版

动物肝脏中D N A的提取及检测实验报告集团标准化小组:[VVOPPT-JOPP28-JPPTL98-LOPPNN]动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic?acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏中DNA的提取与检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取与检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写〕,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒〞,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一局部复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线〔260nm〕有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进展含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋构造解开—也称为DNA的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体那么统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,那么主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进展组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进展交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的构造DNA的构造:DNA的构造一般可划分为一级构造、二级构造、三级构造和四级构造四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷〕、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷〕、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷〕、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷〕。

而脱氧核糖〔五碳糖〕与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏中DNA的提取与检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取与检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构: DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏中dna的提取实验报告

动物肝脏中dna的提取实验报告

动物肝脏中dna的提取实验报告动物肝脏中 DNA 的提取实验报告一、实验目的1、学习从动物肝脏组织中提取 DNA 的原理和方法。

2、熟悉和掌握离心机、移液器等实验仪器的操作。

3、理解 DNA 提取过程中各种试剂的作用。

二、实验原理DNA 在生物体内通常与蛋白质结合形成复合物。

在提取 DNA 时,需要通过一系列的物理和化学方法,破坏蛋白质与 DNA 的结合,使DNA 得以释放和分离。

本实验采用的是盐析法和有机溶剂抽提法相结合的方式。

首先,使用细胞裂解液破碎细胞,释放出DNA 以及其他细胞成分。

然后,加入高浓度的盐溶液,使蛋白质变性沉淀,而 DNA 仍溶解在溶液中。

接着,用有机溶剂(如酚、氯仿)去除蛋白质和其他杂质。

最后,通过乙醇沉淀得到纯净的 DNA 。

三、实验材料和试剂1、实验材料新鲜的动物肝脏(如猪肝)2、实验试剂(1)细胞裂解液:含 SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶 K,用于裂解细胞和消化蛋白质。

(2)NaCl 溶液(5mol/L):提供高盐环境,促进蛋白质沉淀。

(3)酚氯仿异戊醇混合液(25:24:1):用于去除蛋白质等杂质。

(4)无水乙醇:用于沉淀 DNA 。

(5)70%乙醇:用于洗涤 DNA 沉淀,去除残留的盐和杂质。

(6)TE 缓冲液(10mmol/L TrisHCl,1mmol/L EDTA,pH 80):溶解和保存 DNA 。

3、实验仪器(1)离心机(2)移液器(3)恒温水浴锅(4)冰箱(5)玻璃棒(6)离心管(7)微量移液器吸头四、实验步骤1、材料处理(1)称取约 5g 新鲜的动物肝脏,用生理盐水洗净,去除结缔组织和脂肪。

(2)将肝脏剪成小块,放入研钵中,加入适量的液氮,迅速研磨成粉末状。

2、细胞裂解(1)将研磨好的肝脏粉末转移至离心管中,加入10ml 细胞裂解液,充分混匀。

(2)置于 55℃恒温水浴锅中保温 1-2 小时,期间每隔 15-20 分钟轻轻颠倒离心管混匀一次,以促进细胞裂解和蛋白质消化。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA勺提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA ,为英文Deoxyribo nucleic acid 的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm )有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开一也称为DNA的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物组织提取实验报告(3篇)

动物组织提取实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。

2. 熟悉实验操作流程,包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。

3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA,并掌握相关试剂和仪器的使用。

二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。

提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,同时保持DNA分子的完整性。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA,其原理如下:1. 使用SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K处理组织,破坏细胞膜,使蛋白质变性并溶解。

2. 加入酚和氯仿/异戊醇,通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性,使蛋白质和DNA分离。

3. 通过离心,将蛋白质和杂质与DNA分离。

4. 用乙醇沉淀DNA,得到纯净的DNA。

三、实验材料1. 实验动物:小鼠或鸡2. 试剂:SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织(如肝脏、肌肉等),用液氮迅速冷冻。

- 将冷冻的组织移入研钵中,加入适量的裂解缓冲液(含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等),用研钵研磨至匀浆状。

- 将匀浆移入离心管中,加入等体积的酚和氯仿/异戊醇,充分混匀。

- 4℃下静置30分钟,待蛋白质变性沉淀。

2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟,弃去上清液。

- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液,充分混匀。

- 再次以12,000 rpm离心10分钟,弃去上清液。

3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇,混匀后静置2-3分钟。

- 将沉淀移入新的离心管中,以12,000 rpm离心5分钟。

- 弃去上清液,用75%乙醇洗涤沉淀1次。

- 将沉淀干燥,加入适量的TE缓冲液溶解。

4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤,去除杂质。

- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

动物肝脏dna的提取实验报告

动物肝脏dna的提取实验报告

动物肝脏dna的提取实验报告实验报告:动物肝脏DNA的提取一、实验目的本实验旨在提取动物肝脏中的DNA,了解和掌握动物组织中DNA提取的基本原理和方法,通过实验操作培养实验技能和加深对生物化学知识的理解。

二、实验原理DNA提取主要是根据DNA和蛋白质的理化性质,利用酶解、吸附和解吸附等步骤将DNA从动物组织中分离出来。

动物肝脏中含有丰富的核苷酸,因此成为DNA提取的理想材料。

本实验将采用试剂盒法提取动物肝脏DNA。

三、实验步骤1.准备所需试剂和器材,包括动物肝脏组织、DEPC水、DNA提取试剂盒、离心管、移液器等。

2.将动物肝脏组织放入研钵中,加入适量DEPC水研磨成匀浆。

3.将研磨后的匀浆转入离心管中,加入适量DNA提取试剂盒中的裂解液,轻轻混匀。

4.将混合液放入离心机中,以12000rpm的转速离心10分钟,分离出上清液。

5.将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的酚-氯仿混合液,轻轻混匀后离心10分钟,分离出上清液。

6.将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,轻轻混匀后离心10分钟,分离出上清液。

7.将上清液转移至新的离心管中,加入适量DNA沉淀剂,轻轻混匀后静置10分钟,使DNA充分沉淀。

8.将混合液倒入离心管中,以12000rpm的转速离心10分钟,分离出DNA沉淀。

9.用DEPC水溶解DNA沉淀,保存于-20℃冰箱中备用。

四、实验结果与分析1.通过观察和记录实验过程,我们成功地从动物肝脏组织中提取出了DNA。

在实验过程中,我们使用了DEPC水来消除组织中的RNase酶活性,确保了提取的DNA不会被降解。

同时,利用试剂盒中的裂解液和酚-氯仿、氯仿-异戊醇混合液等试剂将蛋白质和其他杂质去除,使DNA得到有效纯化。

2.通过比较实验前后的组织样品和提取的DNA溶液,我们可以看到组织样品的颜色为红色,而提取的DNA溶液呈现出透明无色,说明提取的DNA具有较高的纯度。

此外,通过观察和记录实验结果,我们可以看到在离心管中明显看到DNA沉淀,说明提取的DNA具有较高的浓度。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写),又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。

有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。

DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。

DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。

在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。

染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。

脱氧核糖核酸的结构DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。

而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。

读取密码的过程称为转录,是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA(信使RNA)的核酸分子。

DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’,5’-磷酸二酯键相连构成的长链。

大多数DNA含有两条这样的长链,也有的DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。

DNA 有环形DNA和链状DNA之分。

在某些类型的DNA中,5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶,其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。

在某些噬菌体中,5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。

40年代后期,查加夫(E.Chargaff)发现不同物种DNA的碱基组成不同,但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数(A=T),鸟嘌呤数等于胞嘧啶数(G=C),因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和,一般用几个层次描绘DNA的结构。

浓盐法从动物组织中提取DNA核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白(DNP/RNP)的形式存在,其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在0.14 M的盐溶液中溶解度很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl 溶液将其从样品中分别抽提出来。

将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。

肝脏细胞肝脏是由肝细胞组成,肝细胞极小,肉眼看不到,必须通过显微镜才能看到。

人肝约有25亿个肝细胞,5000个肝细胞组成一个肝小叶,因此人肝的肝小叶总数约有50万个。

肝细胞为多角形,直径约为20-30/加(微米),有6-8个面,不同的生理条件下大小有差异,如饥饿时肝细胞体积变大。

每个肝细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞面和面三种。

肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构:如肝细胞核、肝细胞质、、内质网、、高尔基氏体、微粒体及饮液泡等组成。

二、实验目的1.掌握浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术三、实验原理核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白(DNP/RNP)的形式存在,其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在0.14 M的盐溶液中溶解度很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl 溶液将其从样品中分别抽提出来。

将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。

四、实验器材和材料试剂实验器材:①匀浆器②量筒③离心机④离心管⑤试管⑥吸管⑦恒温水浴锅实验材料:①猪肝实验试剂:①0.1mol/L NaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠溶液(pH6.8)②95%乙醇(A.R.)③NaCl固体(A.R.)④5%SDS溶液(5g SDS 定容至100ml)⑤V(氯仿):V(异戊醇)20:1的混合液五、实验操作1.称量①称取一定质量的猪肝,加入2倍肝重的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液并用匀浆器磨碎(已完成)。

2.提取DNA①量取肝糜4 ml 于10毫升离心管,在4000r/min下离心10min ,沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min;②弃上清,取沉淀;③将沉淀用10 ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧杯、加入5 ml 氯仿-异戊醇混合液、1 ml SDS,振荡30min(保鲜膜封口);④缓慢加入固体NaCl(约0.9g),使其最终浓度为1mol/L;⑤将溶液分装到2个10毫升离心管中,在4000r/min离心5 min,取上清水相;⑥在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇,边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇,即得DNA粗品;⑦用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中。

3.标准曲线的绘制按下表加入各种试剂,混匀,于60℃恒温水浴锅45min,冷却后,在595nm波长下于分光光度计比色测定,以吸光度对DNA 浓度作图,制作标准曲线。

0 1 2 3 4 50.0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 标准DNA溶液/ml蒸馏水/ml 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 04.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 二苯胺试剂/mlA595nm4.样品的测定将DNA粗品定容至25ml容量瓶,再取DNA样液1.0ml,加入蒸馏水1.0ml,混匀。

然后准确加入二苯胺试剂4.0ml,混匀,于60℃恒温水浴锅45min,冷却后,595nm波长下于分光光度计比色测定,根据所测的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量(ug)。

5.计算100g猪肝中DNA含量w=m1/m2×100%w:DNA的质量分数(%)m1:样液中测得的DNA的质量(ug)m2:样液中所含样品的质量(ug)六、实验数据处理1.标准曲线2.实验结果处理猪肝质量为2.04gDNA提取液体积为12.53ml序号 1 2 3A595nm 0.102 0.102 0.101平均A595nm 0.102样液中DNA含量/ug 171.4样液中样品质量/g 0.1628根据公式w=m1/m2×100%得:w=0.1053%则100g猪肝中DNA含量为:w×100=0.1053g七、思考题1.实验中的乙醇、SDS、氯仿-异戊醇、NaCl、柠檬酸钠分别有什么作用?答:①柠檬酸的钠盐在实验中既充当DNA酶的抑制剂,也是pH缓冲溶液;②SDS是表面活性剂,可以让蛋白质与DNA分开;③氯仿是有机溶剂,可以使蛋白质聚集沉淀,便于分离出去;④异戊醇是消泡剂,可以减少泡沫的发生;⑤氯仿-异戊醇的作用是使、膜溶解;⑥NaCl固体溶解使得试液成为高浓度的盐溶液,在这样的环境中DNA核蛋白能溶解,RNA核蛋白则溶解度很低,可以利用这一性质分离两种核酸。

八、实验注意事项1.DNA主要集中在细胞核中,因此,通常选用细胞核含量比例大的生活组织作为提取制备DNA的材料,小牛胸腺组织中细胞核比例较大,因而DNA含量丰富,同时其脱氧核苷酸酶活性较低,制备过程中DNA被降解的可能性相对较低,所以是制备DNA的良好材料,但其来源较困难,脾脏或肝脏易获得,也是实验室制备DNA常用的材料,本实验用新鲜肝脏作为实验材料。

2.为了防止大分子核酸在提取过程中被降解,须采取以下措施:整个过程必须在低温下进行,可加入某些物质抑制核酸酶的活性,如柠檬酸钠、EDTA、SDS等,EDTA是抑制核酸酶的活性最好的抑制剂。

3.从核蛋白中脱去蛋白质的方法很多,经常采用的有:氯仿-异丙醇法、苯酚法、去垢剂法等,他们均能使蛋白质变性和核蛋白解聚,并释放出核酸。

4.使用离心机时,对称放置的离心管必须用天平调平衡。

5.避免剧烈振荡,如研磨过程、搅拌过程等。

九、实验结果误差分析及讨论经过对本次实验结果进行分析,得出100g猪肝中DNA含量大约为0.1053g的结论,在上网查阅相关资料后发现:猪肝中DNA含量与本次试验实际操作测量得出的结果大致相互吻合。

由此可知,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的。

但是本次实验结果只是粗略测量,并未达到精确测量猪肝中DNA的含量,且实验数据较理论值偏低,这是由于某些误差导致,在实验过程中些许因素可能会导致实验结果数据有偏差,经分析得出以下几点:①在称取猪肝后加入柠檬酸钠缓冲液进行研磨的过程中,由于猪肝组织表面较滑不易磨碎,且研磨至最后依旧有小部分猪肝组织块残留,因此可能导致猪肝中DNA提取不充分,致使实验数据较理论值偏低;②研磨过程中,可能由于操作不当,导致部分液体溅出,因此可能使得提取液中部分DNA损失,导致实验数据偏低;③在粗提取DNA操作中,频繁地将DNA提取液转移至各个仪器内,可能有极小部分DNA提取液未倒净,残留在仪器壁上损耗掉,导致实验误差;④在使用移液枪的过程中,可能因为操作不当或移液枪经常错误使用,出现仪器误差,导致吸取的DNA样液不精确,出现实验误差;⑤在水相中加入乙醇析出DNA时,不是所有DNA均析出,有小部分依旧融在溶液,导致提取出的DNA含量偏低;⑥标准曲线制作过程中出现些许误差;总的来讲,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的。

在今后的实验中会着重注意实验操作的严谨性,严格按照实验前拟定完全的实验步骤进行,保证将实验操作过程中可能出现的误差概率降到最低,尽可能达到预期的实验效果,完成自我的学习及锻炼过程。

相关文档
最新文档