马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法

马铃薯病毒种类及主姜病毒检测方法•农学论文

马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法

罗燕娜,刘江娜,王航

（兵团第六师农业科学研究所,新疆五家渠831300 ）

收稿日期：2 015—01—20

摘要：本文对：Ibli地区马铃薯主要病莓的特性和致病症状逬行了描述”并简要介绍了马铃薯主要病毒的检测技术。

关键词：马铃薯；病莓；检测方法

马铃薯在我国广泛种植,已成为仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。

由于光照强、昼夜遍差大、气候冷凉等优势，新疆北疆沿天山一带的昌吉州、乌鲁木齐、昭苏、新源等地都非常适宜种植马铃薯，现种植面积已达2310hm2［l］.

然而在当前的马铃薯生产中，病壽病发生普遍而严重，成为制约马铃薯产业发展的主要障碍，是生产上亟待解决的突出问题［2］。目前，已报道的马铃薯病毒种类超过25种、类病壽1种，其中，侵染乌鲁木齐地区马铃書的主要病原病莓有

PVX、PVY、PVA、PLRV,类病莓为PSTVd。主要检测的马铃薯病毒有马铃薯X

病毒（PVX X马铃薯Y病量PVY 1马铃S S病頡PVS \马铃薯M病毒（PVM \

马铃薯卷叶病毒（PLRV ）及马铃薯纺锤块茎类病莓（PSTVd ）⑴。

1马铃薯主要病莓种类及致病症状

1.1马铃薯X病毒（PVX）

X病莓又称普通花叶病莓,病莓粒子为长杆状,大小为515nmxl3nm ,基因组全长6.4kb［3］。该病莓可通过叶片汁液摩擦传播，也可通过蜗虫以非持久性方式传播,还可通过种暮传播［1］。感病植株症状多种多样,因栽培品种的敏感性

不同和病莓株系的不同而存在差异，多数表现为轻花叶或潜隐症状，症状严重的

则表现为严更的花叶或皱缩,产量损失可达50%。

1.2马铃薯Y病毒（PVY）

Y病莓又称为重花叶病莓，病莓粒子形状为弯曲的线形,大小为

750nmxllnm ,多数通过桃妈和大戟长管妈传播。PVY包括3个株系组：马铃薯Y病毒普通株系组（PVYO X马铃薯点条斑株系（PVYC ）和马铃薯Y病毒褐脉株系（PVYN L前2个株系组引起的主要初期症状是叶片坏死、斑驳，后期

则表现为矮化、皱缩、斑驳和卷曲；第3个株系组初期表现为不同程度的花叶, 后期为花叶和斑驳,当溫度低于10°C或高于25°C时，花叶症状消失。产量损失最高可达80%。通常该病莓不会引起块茎发病，但近年来欧洲出现的一个新株系PVYNTN ,则可在块茎上导致坏死环斑［4］。

1.3马铃薯A病莓（PVA ）

A病莓又称为轻花叶病莓,病莓粒体为弯曲的线形，大小为730nmxl5nm ,

基因组全长9.7kb。该病莓可通过汁液摩擦传播或由33虫以非持久性方式传播, 也可通过种團专播。感病植株的症状表现为脉间花叶、叶片有光泽、叶脉深陷和说缘粗缩，产量损失可达40%。

1.4马铃薯S病莓（PVS ）

S病毒又称为潜隐性花叶病毒，病莓粒子形状为线形,大小为650nmxl2nm,

病毒基因组全长7.4kb。可通过汁液摩擦传播，也可通过!@虫传播。感病植株初期症状不明显，严重危害时，叶片呈青铜色，叶脉轻微下陷，植株的开张度较大。

一些品种上会出现坏死斑和条纹。在田间常与其他病莓混合侵染，当与PVX或

PVM病莓混合侵染时,可减产20%〜30%［5］。

L5马铃薯M病莓(PVM )

M病莓也厲于香石竹潜隐病毒厲(Carlavirus X病§粒子为线形,大小为

650nmxl2nm ,该厲病毒基因组全长&5kb。可通过机械传播,或者通过4?虫以非捋久性方式传播，也可通过种薯的调运远距离传播。感病植株叶上表面的叶脉深陷,有的出现粗缩.叶片轻微下垂,顶部叶片呈开散状。

1.6马铃薯卷叶病莓(PLRV )

PLRV厲于马铃薯卷叶病莓厲(Polerovirus),病毒粒子为六边形等轴对称，

直径24nm-26nm ,基因组全长5・9kb。主要由4?虫传播，也可通过种薯传播。感病植株发病较轻时表现为幼叶褪绿.卷曲，叶基常有紫红色边缘。发病较重时.

植株矮化.叶片上卷并革质化,产量损失可达70%[1].

2马铃薯病莓检测方法

因马铃薯茎尖脱莓培养过程中各环节都会有误差，所以在茎尖苗扩繁之前必须对马铃薯苗进行严格的病莓学检测『确定不带病莓后才能逬一步扩繁。除此之外, 还必须抽样检查以下几种情况：瓶苗下地之前、组培苗杆插结束.试管薯出苗后

30~40d、现蕾期至盛花期、收获前30d左右、收获后和种薯出库前。因此■在

马铃書脱莓种書培育过程中，准确可靠的病莓检测方法与高效的脱莓方法同等重要⑹。

目前bl養地区常用的马铃薯病番检测方法是酶联免疫吸附法(双抗体夹心法

(DAS-ELISA)X该检测方法的主要操作过程有以下几步。

21准备工作

实验前.在设计图表上注明各反应孔的位置，以避免出错。在密封塑料盒底部铺1张吸水纸■倒入适量蒸憎水使之刚好润湿,即为恒湿箱,孵育用。微孑版为

可拆卸,根据用量取出所需数量的微孔，未使用完的微孑庖封好.4。(：下保

存。

2.2样品的提取及稀释

尽可能选择出现症状的植物组织作为样品.通常将叶片作为ELISA实验的检

测样品,其它植物组织也可用于ELISA实验。使用通用样品提取缓;中液来碾磨

稀释样品。若用研钵提取样品,在每份样品提取后彻底清洗研钵,以免造成样品

间的相互污染。

将样品与通用样品提取缓冲液以1:10(样品重量(g ):提取缓冲液体积(mL)

的比例研磨样品。

每个反应孔需要lOOpL的样品提取稀释液。多制备一些样品提取稀释液以利于吸取。

23点样

根据实验设计，取lOOpL样品提取稀释液到各样品孔中,取lOOpL阴性质控物溶液到阴性对照孔中,取lOOpL阳性质控物溶液到阳性对照孔中。

24准备酶合物

检测抗体和酶标抗体均为浓缩液体,应根据标签上的稀释倍数用ECM缓冲液稀释。根据酶标记物标签上的稀释倍数将酶标记物和检测抗体(瓶A和瓶B )加

到1倍的ECM缓冲液中,混合均匀。IpL的检测抗体稀释液可供8个反应孔使用,WpL的酶标记物稀释液可供96个反应孔使用。

2.5洗板

孵育结束后.将反应孔中的试剂倒出，加入250pL的1倍PBST缓冲液,之后快速倒出，重复7次，将微孔板倒扣在吸水纸上以控干孔中残留液体。

2.6加酶标结合物

在各反应孔中加入lOOpL配置好的酶标结合物溶液。

2.7孵育

室溫下(25°C )在恒湿箱中孵育2h。

2.8PNP底物的制备

孵育结束前ISmin制备PNP底物溶液。在室溫下用SmLPNP缓冲液溶解1 片PNP底物片。每片PNP底物片可溶解成5mL的底物溶液,溶解比例为

Img/mL ,可供40个反应孔使用。在室温下用SmLPNP缓冲液(1倍浓度)

溶解1片PNP底物片。

2.9洗板、力DPNP底物溶液