放射自显影技术
放射自显影技术
本底过高
妨害自显影中低水平放射性测量，降低 分辨率 造成人工假象，导致解释错误
本底升高的原因
暗室红灯过亮或乳胶在红灯下暴露过长 （不同乳胶对红光耐受性不同） 显影：时间过长，温度过高，显影液配 方不当 周围的放射性污染 感光材料在保存和操作过程中温度过高 （不宜超过40℃），使卤化银发生潜影
光镜ARG
观察范围小，要求分辨率高，以银粒判 断示踪的部位和数量。 适用：组织切片，细胞涂片，培养细胞 意义：研究放射性物质在各种组织或细 胞中的分布情况
光镜放射自显影
体内引入示踪剂 制成切片 涂敷原子核乳胶曝光 显影、定影、水洗、染色 显微镜下观察银粒分布
电镜ARG
3氢－是低能量射线发射体，对生物研究
最有用 14碳 32磷
潜影形成
溴化银
放射物发出 带电粒子
电子
溴原子
被周围银离 子俘获
银原
子（潜影形成）
潜影形成因素
放射源强度 曝光时间 乳胶灵敏度
潜影消退（衰退）
核乳胶中卤化银晶体为带电粒子激发所 形成的潜影的消失 一般认为：由组成潜影的银颗粒的氧化 造成
液态乳胶放射自显影
组织标本制备 固定（Bouim/Carnoy液） 脱水包埋 切片：石蜡4－5u 载玻片：预处理，干净！ 先染或后染：在核乳胶应用前染色称先染； 放射自显影全过程结束后染色称后染。
液态乳胶放射自显影
核乳胶的选择和应用 选择：对β粒子敏感的核乳胶 光镜－核4；电镜－HW4 应用：核乳胶溶解：dH20 1：1稀释 核乳胶涂盖：浸涂法，滴涂法，平涂法 核乳胶干燥：涂后玻片垂直，25℃，70％
放射自显影术
新应用领域的探索
医学影像诊断
探索放射自显影术在医学 影像诊断中的新应用，如 肿瘤检测、血管成像等。
生物科学研究
应用于生物科学研究，如 蛋白质组学、基因表达分 析等领域。
环境监测
开发放射自显影术在环境 监测领域的应用，如污染 物检测、土壤质量评估等 。
与其他技术的结合
与光学技术的结合
结合光学显微镜技术，实现更微观尺度的成像分析。
蛋白质相互作用研究
通过放射自显影术可以检测蛋白质之间的相互作 用，进一步揭示蛋白质的功能和调控机制。
3
蛋白质修饰研究
通过放射自显影术可以研究蛋白质的修饰情况， 了解蛋白质的磷酸化、乙酰化等修饰对蛋白质活 性和功能的影响。
放射自显影术涉及使用放射性物质，存在一定的 辐射危害，需要采取防护措施。
成本较高
放射自显影术需要昂贵的设备和试剂，成本较高 ，限制了其在某些领域的应用。
ABCD
操作复杂
放射自显影术需要专业的操作人员和技术条件， 操作过程较为复杂。
半衰期限制
放射自显影术使用的放射性物质具有较短的半衰 期，需要在使用前进行充分的准备和储存。
色体上确定基因的位置。
基因表达分析
通过放射自显影术可以检测基因的 表达情况，了解特定基因在不同组 织或发育阶段中的表达水平。
基因突变研究
放射自显影术可以用于检测基因突 变，通过比较正常和异常基因的标 记分布，研究突变对基因结构和功 能的影响。
在转录组学中的应用
转录本分析
放射自显影术可以用于分析转录 本的表达情况，了解特定基因在 不同条件下的转录水平。
景辐射。
显影与定影
通过显影和定影过程，将放射 性信号转化为可见的图像。
放射性自显影技术讲述
分钟。
（五）水洗及干燥
定影后要经充分水洗，以清除残余的定影剂 和未被显影的银盐。
一般要求在流水中冲洗20~30分钟，然后在空气
中晾干。
第二节 放射性自显影的制作方法
一、宏观放射性自显影的制作方法
（一）整体植株的放射性自显影
（二）放射性纸层析和薄层层析板自显影
（6） 曝光和显影时间
三、自显影效率
自显影效率 指一个入射粒子所生成显影
×曝光时间 = （0.5 ~ 1）×107 粒子/cm2
c）实验曝光法
（三）显 影
显影
指感光后形成潜影的乳胶，在显影剂 的作用下，使潜影转化为金属银的过程。
（1）显影液的组成：
显影剂：常用米吐尔，主要起还原作用。 促进剂：常用碳酸钠，维持碱性条件。 保护剂：常用亚硫酸钠，中和氧化产物。 抑制剂：常用溴化钾，抑制未感光的银盐。
明胶是溴化银的支持剂，又是溴原子的吸收剂；
它决定着乳胶的通透性、吸水膨胀、浓度稀释 和坚膜作用等特性。 而乳胶的敏感度决定于溴化银的浓度、颗粒大 小及其配制方法。
几种自显影感光材料的性能
乳胶名称
幻灯片 电影胶片 X射线乳 胶片 卤化银 卤化 晶体直 银 径（μm） (%) 晶体 灵 分 敏 辨 产品特点 粒子数 /1000 μm3 度 力
（二）染色
1. 前染
是指涂核乳胶前对切片进行染色。
优点：乳胶层不被染色，与后染相比颜色
清晰鲜明。缺点：染色处理可能引起标本中
放射性的损失；对易溶性放射性化合物不宜
采用前染。
2. 后染
是指在切片涂布核乳胶、曝光、显
影、定影后进行的染色。
优点：没有前染的放射性损失问题；
放射自显影放射自显影autoradiography放射自显影的原理是利用
放射自显影放射自显影(autoradiography)放射自显影的原理是利用放射性同位素所发射出来的带电离子(α或β粒子)作用于感光材料的卤化银晶体，从而产生潜影，这种潜影可用显影液显示，成为可见的"像"，因此，它是利用卤化银乳胶显像检查和测量放射性的一种方法。
放射性核素的原子不断衰变，当衰变掉一半时所需要的时间称为半衰期。
各种放射性核素的半衰期长短不同(表)，在自显影实验中多选用半衰期较长者。
对于半衰期较短的核素，应选用较快的样品制备方法，所用剂量也应加大。
表自显影实验中常用核素的半衰期与能量名称半寿期粒子类型能量(MeV) 名称半寿期粒子类型能量(MeV)3H 12.3 yr β 0.018 45Ca 152 d β 0.2611C 20 min β 0.981 59Fe 45 d β 0.4614C 5700 yr β 0.155 γ 1.3032P 14.3 d β 1.71 60Co 5.3 yr β 0.30835S 87.2 d β 0.167 64Cu 12.8 hr β 0.657131I 8.0 d β0.25 γ 1.35放射自显影技术放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。
放射自显影术（radioautogra phy；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。
其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。
然后经过显影、定影处理显示还原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量，放射自显影的切片还可再用染料染色，这样便可在显微镜下对标记上放射性的化合物进行定位或相对定量测定。
第7章 放射自显影术
26
• 灵敏度影响因素
– 核射线的能量：射线能量愈小，在乳胶中能量损失愈大，引起潜影的能力 核射线的能量：射线能量愈小，在乳胶中能量损失愈大，
9
电泳谱
肿瘤组织切片原位杂交 检测细胞内EB病毒 检测细胞内 病毒
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五、常用核素
• 发射下列粒子流的核素： 发射下列粒子流的核素：
–α、β、β＋射线、俄歇电子、内转换电子 α 射线、俄歇电子、 –能量低的优先，因分辨率高 能量低的优先， 能量低的优先
• 如3H、14C、125I
–短T1/2的核素尽量避免用 短
– 核乳胶干板
• 涂在玻片上，直接使用；光镜ARG 、宏观 涂在玻片上，直接使用；光镜 宏观ARG
– 揭膜核乳胶
• 涂在胶质或纤维质衬底上，而衬底贴合在玻片或薄膜托片上，用时揭下 涂在胶质或纤维质衬底上，而衬底贴合在玻片或薄膜托片上， 定量光镜ARG 来；定量光镜
14
15
液体核乳胶配方举例
• 取所需乳胶量在40℃水浴中融化后，按下列比例 取所需乳胶量在 ℃水浴中融化后， 顺序缓缓加入，并用玻棒轻轻搅匀。 顺序缓缓加入，并用玻棒轻轻搅匀。
灵敏度低；温度高，雾点增加， 灵敏度低；温度高，雾点增加，分辨率下降
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3. 本底
– 除标本内放射性核素外，由于其他原因造成银 除标本内放射性核素外， 颗粒的显影所产生的影像 1）红灯过度照射、过亮 ）红灯过度照射、 2）显影时间过长 ） 3）显影温度过高 ） 4）机械压力、张力 ）机械压力、 5）化学物质沾污 ） 6）环境放射性 ） 7）乳胶中杂质 ）
放射自显影术
放射自显影术需要使用放射性同位素作为标记物，存在一定的
放射性危害，需要采取适当的防护措施。
操作复杂
02
放射自显影术需要进行一系列的实验操作，包括标记、分离、
洗涤等步骤，操作较为复杂。
成本较高
03
放射自显影术需要使用昂贵的仪器和特殊的试剂，成本较高，
限制了其在一些实验室和临床环境中的应用。
未来展望
技术改进
原理
放射自显影术利用放射性同位素发出的射线，在感光材料上产生感光效应，从 而形成图像。由于放射性同位素在不同组织或细胞内的分布不同，因此可以通 过图像分析来确定标记物的位置和浓度。
发展历程
19世纪末，科学家发现放射性 同位素及其在生物体内的分布
；
20世纪初，放射自显影术开始 应用于生物学和医学领域；
03
放射自显影术的应用
生物学研究
染色体研究
通过放射自显影术，可以对染色 体进行定位和计数，有助于研究
染色体的结构和变异。
细胞生物学研究
放射自显影术可以用于标记细胞内 的特定分子或结构，从而研究其在 细胞内的分布、功能和动态变化。
分子生物学研究
通过放射自显影术，可以对DNA、 RNA和蛋白质进行标记和追踪，有 助于研究基因表达、蛋白质合成和 代谢等过程。
定位准确
通过标记特定分子或细胞成分，放射 自显影术能够准确地定位这些分子或 细胞在组织或器官中的位置。
定量分析
通过测量放射性信号的强度，可以对 标记物的数量进行定量分析，提供更 精确的生物学信息。
无创性
放射自显影术是一种非侵入性的技术 ，不会对生物样本造成损伤，可以重 复进行实验。
缺点
放射性危害
01
随着技术的不断发展，放射自显影术有望在灵敏度、特异性、操作 简便性和降低成本等方面得到进一步改进。
放射自显影技术名词解释
放射自显影技术名词解释
放射自显影技术，简称放射自显影（Radiographic Imaging），是一种常见的医学成像技术，用于检查人体内部组织和器官的形态、结构和功能。
在这种技术中，患者接受放射线照射，然后通过感光片或数字探测器捕捉到透过身体的放射线，形成一幅影像。
以下是一些与放射自显影技术相关的常见名词解释：
1. 放射线：高能量的电磁波或粒子，通过人体组织时能够穿透并被捕捉成影像。
2. 导影剂：一种用于增强影像对比度的药物，通过在人体内注射或口服，可以使特定组织或器官在放射线下更容易被看清楚。
3. 感光片：一种类似于胶片的光敏物质，用于捕捉透过身体的放射线的影像。
4. X射线机：一种专门用于产生X射线的装置，包括X射线
管和加速器，可以产生高能量的电磁辐射。
5. 造影技术：一种利用导影剂增强特定组织或器官对比度的技术，常用于放射自显影中。
6. 数字放射机：使用数字化探测器来捕捉和显示透过身体的放射线形成的数字影像的设备。
7. CT扫描：又称为计算机断层扫描（Computed Tomography），一种结合X射线和多个角度扫描技术，生成
具有高分辨率的三维体像的成像技术。
8. MRI扫描：又称为磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging），一种使用强磁场和无线电波来生成人体内部详细的影像的成像技术。
9. 放射科医师：专门从事解读和分析放射自显影影像的医生，能够发现异常，并与其他医生一起诊断和治疗疾病。
10. 辐射剂量：患者从放射线照射中所接受的辐射量，需要控制在一定范围内以确保安全。
放射自显影
3、干燥、染色和封固
经显影、定影和冲洗等处理的乳胶可空气或 人工干燥，但干燥过程应避免尘粒沾污乳胶，也
可用酒精进行脱水干燥。干燥后可按常规方法染
色（如苏木精-伊红），染色后可用盖玻片封固。
第四节 放射自显影的影 响因素
一、放射自显影的分辨力
（一）放射自显影的分辨力
放射自显影的目的在于研究放射性核素或其标记化 合物在组织内的位臵，所以放射自显影的分辩力， 主要是指位臵的分辩力。故分辨力就是指两个相邻 的放射性核素分子在标本中的距离近到多少能在显 影银颗粒上显示为两个颗粒。
乳胶膜。将其敷在电镜切片所放臵的铜网上，4℃
曝光制备自显影。
（四）曝射
曝射量和示踪剂量：正相关
曝射时间
(五)照相处理
（一）显影和定影 （二）显影液和定影液 （三）干燥、染色和封固
1、显影和定影
感光材料与标本接触后，经射线的作用溴化银 晶体形成潜影，未受核射线作用的溴化银则不形 成潜影。这两种晶体经显影和定影，才能将其区 分。显影的作用是使银盐还原，有潜影的结晶比 无潜影者显影快，因此适当控制显影时间可只使 受照射的结晶呈现黑色颗粒，定影的作用是洗去
乳胶厚度仅相当银颗粒的直径（约140nm）。
超微结构和动态观察
（二）放射自显影的基本方法
医学生物学示踪研究中的自显影实验，一般环节： 1、示踪剂的引入
2、标本制备：取生物标本并制备成含放射性核素的切片、
涂片或电泳、层析分离的标本。
3、自显影制备：暗室中在标本上敷加感光材料。
4、曝光处理：避光条件下核射线作用于感光材料。
备涂片。固定涂片的固定液应根据研究对象进行选
择，如研究核酸时用甲醇：冰醋酸（3：1），蛋白
质则选用10%福尔马林做固定液，干燥后进行自显
7.放射自显影术
二、潜影的形成和消退 （一）潜影的形成 感光乳胶中的溴化银以微晶体颗粒悬 浮于明胶中，溴化银晶体是由Ａg+和Ｂr的点阵组成，在制备乳胶的过程中，使点 阵产生缺陷，这些缺陷便构成潜影形成的 敏化中心（sensitivity speck），当核射线 、光线、热、压力或张力等作用于溴化银 时，离子中的电子便向敏化中心移动，形 成带阴电荷的静电层，然后带正电荷的银 离子便向此处聚集而变为银原子。
中国原子能科学研究院生产的几种核乳胶
乳胶型号 核-2 核-４ ＨＷ-３ ＨＷ-４
银晶体直 径 适用范围
０.17
α粒子
0.24
所有带电 粒子
0.10～ 0.11 所有带电 粒子
0.14
（电镜自显 影用）
２、核乳胶干板（Nuclear emulsion plate) 是将液体核乳胶均匀地涂布于玻片上， 经干燥后制成。专用于宏观及光镜自显影， 其乳胶层的厚度视实验要求而定。 ３、揭膜核乳胶（stripping film emulsion) 又称脱底核乳胶膜。制备方法与核乳 胶干板一样。不同的是，将核乳胶干版上 的膜揭下来供放射自显影用。多用于光镜 自显影的定量研究。
（五）显像处理
１、显影 显影过程是使感光材料中已感光的银 盐还原成金属银。显影是通过显影液完成的。目 前最常用的显影液是由显影剂、促进剂、保护剂 及抑制剂组成。显影剂主要起还原作用，常用米 吐尔（硫酸甲苯对氨基苯酚）及海得尔（对苯二 酚）等。促进剂是提供碱性环境，增加显影作用， 常用碳酸钠。保护剂是中和还原剂的氧化产物， 延长显影液的作用效果，常用亚硫酸钠。抑制剂 能抑制未形成潜影的银盐的分解，防止本底升高， 常用溴化钾。目前常用的显影液Ｄ-１９b配方如 表所示。
ARG常用的几种放射性核素及物理特性
放射自显影 磷酸化
放射自显影（Autoradiography）是一种在生物学和分子生物学领域中广泛应用的技术，用于检测和定位含有放射性同位素标记物质的样品。
在蛋白质磷酸化研究中，放射自显影主要用于可视化和量化蛋白质磷酸化事件。
具体应用步骤如下：
1.标记过程：首先，研究人员会在细胞或组织样本中引入放射性同位素标记
的磷酸盐（如³²P），这些标记的磷酸盐会被细胞内的激酶用于蛋白质的磷
酸化过程，因此，当蛋白质被磷酸化时，相应的氨基酸残基（如丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸）会携带放射性标记。
2.蛋白质提取与分离：之后，收集并提取样本中的蛋白质，通常使用SDS-
PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）来分离不同大小的蛋白质。
3.凝胶转移：在某些情况下，为了更方便地检测和后续分析，分离出的蛋白
质还会通过Western Blotting转移到固相支持介质（如硝酸纤维素膜或
PVDF膜）上。
4.放射自显影：将分离或转移后的蛋白质凝胶或膜置于感光胶片上，经过一
段时间的曝光，使得放射性同位素发射的β粒子或γ粒子使胶片感光，形
成黑度图像。
黑度较高的区域对应着放射性标记较高的蛋白质分子，即磷酸化水平较高的蛋白质。
5.数据分析：通过分析放射自显影图上的斑点或条带，可以确定蛋白质的磷
酸化位点数量、位置以及相对的磷酸化程度。
这种技术的优势在于它能够非常灵敏地检测到微量的磷酸化蛋白质，并且可以在分子水平上提供定位信息。
然而，随着非放射性检测技术的发展，如质谱法（Mass Spectrometry）的普及，虽然放射自显影仍然是经典的方法之一，但在某些场合下已经被更为安全和高效的新型技术所替代或补充。
放射自显影名词解释
放射自显影名词解释
放射自显影是一种在暗室环境下，照射已暴露于光线或其他辐射下的物体或物质后产生可见影像的现象。
这种现象通常出现在一些物质暴露于光线或其他辐射后，随着时间的推移，在光线消失的情况下仍然保持影像的能力。
放射自显影的原理涉及物质在暴露于光线或其他辐射后，通过吸收和存储能量，形成暂时性的激发状态。
即使光线或辐射停止，这些物质仍然能够在一定时间内释放被吸收的能量，并产生可见的光，形成影像。
最常见的放射自显影是在摄影和影像技术中使用的自显影片或类似物质。
这种物质在受到光线曝光后，在黑暗环境中依然可以产生可见的影像。
这种特性使得它们在暗室条件下工作变得可能，例如X 光片、一些辐射影像技术和光学显微镜的使用中都可以看到类似的效果。
放射自显影的原理使得这些物质成为影像技术中的重要工具，能够在没有直接光源的情况下产生可见的影像，对于医学诊断、科学研究和工程领域的检测有着重要的应用。
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放射自显影
（二）显微镜自显影（light microscopic
ARG）：又称光学显微镜自显影，是借助显 微镜进行组织或细胞学观察，分辨能力要求较 高。根据银颗粒来判断示踪剂的分布部位和数 量的多少。适用于组织切片、细胞涂片等标本 的研究。可以对不同细胞进行比较，并根据不 同示踪剂在不同时间的分布，研究细胞水平的 代谢过程。制备一般采用液体乳胶法。
三、常用的感光材料
放射自显影常用的感光材料包括各种类型 的原子核乳胶、X线胶片、电影正片、氚片 或幻灯片。
（一）原子核乳胶
简称核乳胶，由溴化银和明胶组成。常温 上呈半固体，低温为明胶状，温度升至 40℃左右为液态。使用时乳胶涂层厚度可 由乳胶量和稀释度（用去离子水稀释）进 行调节。
液体乳胶直接涂在标本或支持物上，多用于 光镜和电镜自显影。将液体核乳胶涂在玻片
上，可抽成核乳胶干板（nuclear emulsion
plate），再于标本接触形成自显影像，多用 于光镜自显影或宏观自显影。也可将干板将
乳胶层从玻片上揭下来，称为揭膜核乳胶
（stripping film emuslon），多用于定量的光 镜自显影。
（二）氚片（tritum film）
由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗 粒平均直径1μm，对低能β射线敏感度高， 对暗室的安全光也有相当耐受。乳胶涂在 醋酸纤维素酯片基的单面，乳胶面没有保 护层。使用时要注意保护乳胶层面，该面 直接与标本接触，以获得最佳灵敏度。主 要用于3H标记化合物的宏观自显影或低倍 光镜自显影。
D-19b显影液和F-5定影液5℃）(ml) 700
米吐尔（g） 2
无水亚硫酸钠(g) 72
对苯二酚（g） 8.8
无水碳酸钠(g) 48
溴化钾(g)
放射自显影术
放射自显影术是利用放射性核素放出的核射线使感光材料中的卤化银感光，形成图像，来记录、检查和测量(半定量测量)标本中放射性示踪剂的部位及强弱的方法。
这种技术得到的图像，称为放射白显影像(autorad—gram，ARG)。
ARG 用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机制、作用部位等。
放射自显影技术是研究细胞增殖、代谢活动和各种理化因素对细胞影响的重要手段．能够解释细胞分子水平的动态变化．使之成为显微镜下可见的形态，并可用于定位和定量分析．是生命科学研究中一项应用广泛的重要技术。
放射自显影术的原理和普通光学摄影的原理基本相同，都是使感光材料曝光后，发生化学变化，经过显影和定影处理．得到图像。
放射自显影技术是利用放射性核素标记生物分子，并使其掺人细胞内。
由于放射性核素在衰变过程中放出的射线可以使核乳胶感光，形成潜影，经过显影剂作用，把潜影部分的溴化银还原成黑色颗粒，再经过定影剂处理，把未还原的溴化银颗粒溶解洗掉，就得到了清晰的自显影图像。
经过放射自显影的标本还可再用染料染色．根据样品中银颗粒的所在部位和数量进行定位和定量分析．了解细胞代谢的状态和动态变化过程。
ARG的原理可通过以下步骤来理解：(1)感光材料中的溴化银被带电粒子作用，释放出电子：A gBr+β→Ag+ +Br十e一(2)该电子立即被荷正电的银离子所俘获：e一+Ag+→Ag(3)很多荷正电的银离子被还原．在溴化银分子中形成潜影：Ag......Ag→nAg在潜影处聚集的银原子数量很少．只占原晶体量的十亿分之一。
然而，这微量的金属银却起着重要的催化作用，促使溴化银晶体还原成金属银，因而称为显影中心。
(4)潜影经显影、定影处理后，即显示放射自显影图像，其图像银粒黑化的程度取决于组织标本中放射性活度的多少，呈正比关系。
对核乳胶曝光后形成潜影的过程及其机制还不完全清楚。
一般认为．感光乳胶中的溴化银是以微晶体颗粒悬浮于明胶中，每颗溴化银晶体如‘和Br一的点阵组成，在制备乳胶的过程中，又要使点阵产生缺陷，这些缺陷便构成潜影形成的敏化中心(sensitivity speck)，当核射线、光线、热、压力或张力等作用于溴化银时，离子中的电子便向敏化中心移动，形成带阴电荷的静电层，然后荷阳电的银离子便向此处聚集而变为银原子。
放射性自显影技术
二、光学显微自显影
(一)方法 1. 接触法
将试验样品制成石蜡切片，用蛋白甘油
将石蜡切片贴在载片上，可先染或曝光后
染色，干燥后在暗室中将乳胶面对切片，
紧密接触，进行曝光。
2 . 液体乳胶法
在暗室安全灯下，将所需的乳胶称 出，使其装入烧杯中，置于40º C水浴溶 解。然后采用滴涂或浸蘸法将乳胶直接 加在载玻片上，并使均匀地铺开。凉干 后连同标本一起进行曝光。 具体又可分为：涂布法和浸蘸法。
本章总结
一、讲述的内容：
放射自显影技术，包括：原理、一般操作程 序、宏观和光学自显影的制作方法及影响自显影 质量的几个因素及其在科学研究中的应用。 其中 重点：一般操作程序；
难点：曝光时间的选择
二、课后复习的要求
×曝光时间 = （0.5 ~ 1）×107 粒子/cm2
c）实验曝光法
（三）显 影
显影
指感光后形成潜影的乳胶，在显影剂 的作用下，使潜影转化为金属银的过程。
（1）显影液的组成：
显影剂：常用米吐尔，主要起还原作用。 促进剂：常用碳酸钠，维持碱性条件。 保护剂：常用亚硫酸钠，中和氧化产物。 抑制剂：常用溴化钾，抑制未感光的银盐。
第四章
第一节
第二节 第三节
放射性自显影技术
原理和一般制作程序
放射自显影的制作方法
与自显影质量有关的几个因素
第四节 放射性自显影技术的应用
第一节 原理和一般制作程序
一、放射性自显影的原理和特点
放射性自显影
利用照相乳胶记录、检查和测量样 品中放射性核素的分布、定位和定量的 方法。
放射性自显影的特点
（1）准确定位； （2）灵敏度高； （3）能保持机体的完整结构； （4）可以长期保存； （5）操作简便，不需要复杂的仪器和设备。
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放射自显影技术
实验核医学
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概念：
放射性核素所产生的射线直接作用于感光材料，使其产生潜影，经显影、定影处理而得到与生物标本中放射性核素所在部位、强度一致的由银颗
粒组成的影像。
这种利用感光材料记录、检查和测量放射性示踪剂在生物体内准确位置和数量的方法，称为放射性自显影术。
(autoradiography,ARG radioautogram)
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(二)潜影的消退
第二节放射自显影的材料
一、感光材料的种类和选择
(一)核乳胶(nuclear emulsion)
1.液体核乳胶
2.核乳胶干板
3.揭膜核乳胶
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第三节放射自显影的基本技术和方法
一、放射自显影术的主要类型（一）宏观自显影术
(macroscopic autoradiography,M-ARG)
观察的范围比较大，要求的分辨率较低，只
能用肉眼或放大镜观察，可根据黑度判断示踪的部位和定量。
是研究物质代谢的主要方法。
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（二）光镜自显影术
(light microscopic autradiography,LM-ARG)
研究放射性物质在组织或细胞内的定位情况，观察范围较小，分辨率要求较高，以银颗粒判断示踪剂的部位和定量。
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1.石蜡切片自显影：
2.冰冻切片自显影(易扩散)：
3.细胞涂片自显影：
(三)电镜自显影术
(electronmicroscopicautoradiography, EM-ARG)研究放射性物质在亚细胞结构水平上的精确定位，观察范围更小，分辨率要求极高，以单层银颗粒的分布判断示踪剂的部位和定量。
要求用电子显微镜制片技术。
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二、放射自显影的基本方法
用放射自显影进行生物医学示踪实验，一般包括下列几个环节：
1.引入示踪剂
2.标本制备
3.自显影片制备
4.曝光
5.显像处理
6.阅读分析
(一)示踪剂引入的方法
1.从引入的途径可分为：(1)体内注入(2)离体培养
2.从引入的方式可分为：
(1)持续标记(2)瞬时标记或脉冲标记
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(二)标本制备方法
1.宏观自显影
2.光镜自显影
3.电镜自显影
(三)自显影片制备方法
1.接触法
2.裱贴法
3.接触-裱贴法
4.液体乳胶法
5.揭膜乳胶法
6.融裱法
7.单层乳胶法(1)金属环法(2)浸膜法
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2.曝光时间：采用实验曝光法
( 五)显像处理
1. 显影：是形成潜影的卤化银晶体还原为金属银的过程。
2.停影：
3.定影：是溶去未感光的银盐，使图像清晰。
(六)染色
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第四节放射自显影的影响因素与排除方法一、自显影的分辨率
(一)生物学的分辨率:指生物材料的亚显微结构水平可分辨的最小距离。
(二)自显影分辨率：放射性与显影颗粒之间最小可能距离。
目的是从显影颗粒来判断放射性物质在细胞亚显微结构的精确位置。
自显影分辨率的影响因素主要有以下几个方面：1.乳胶中银粒的大小2.乳胶层厚度3.切片标本厚度4.标本与乳胶的距离
5.放射性核素的射线类型与能量
6.曝光时间
7.显影时间
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二、自显影的灵敏度
放射自显影的灵敏度（效率）是指放射自显影曝光期间乳胶中的显影颗粒数与标本内放射性核素的衰变之比，若用百分数表示则称自显影效率。
核乳胶产生的显影颗粒数
自显影灵敏度= —————————
标本中放射性核素衰变数
自显影效率=自显影灵敏度x100%影响自显影灵敏度的因素主要有：1.核射线的能量 2.切片标本厚度3.乳胶的敏感度 4.乳胶层厚度5.切片标本与乳胶层间的距离6.曝光时间7.显影条件
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三、自显影的本底
1.化学物质
2.暗室红灯
3.显影条件
4.温度
5.压力、张力
6.周围环境的放射性
7.乳胶超过规定使用期限
四、剂量与曝光时间
1.所用放射性核素的特点
2.所用放射性核素或标记物在代谢上的特点
3.引入方式与剂型
4.所取组织
5.标本制备
6.感光材料
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五、潜影的消退
1.核乳胶颗粒越小，潜影消退越快。
2.由低能粒子所形成的潜影易于消退。
3.曝光过程中温度越高，湿度越大，潜影消退越快。
4.空气中的氧能使潜影中心的银原子氧化成银离子而使潜影消退。
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防止潜影消退的方法有：
1.核乳胶的保存和曝光过程都要在低温下进行。
2.曝光过程最好在干燥、无氧、有CO 2的条件进行。
3.曝光时间在三个月至半年时，最好在惰性气体或N 2气下进行，真空条件下进行曝光最好。
4.电镜自显影中，锇酸会引起潜影消退，在涂布乳胶前应先喷涂一层碳膜，将超薄切片与核乳胶分开。
第五节自显影的阅读与分析
一、宏观自显影二、光镜自显影三、电镜自显影
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