抗体筛选和鉴定58页PPT

应用生物化学-抗体技术PPT课件

抗体技术的挑战
抗体生产成本高
01
由于抗体的大规模生产需要大量的细胞培养和纯化过程，因此
生产成本较高，限制了抗体的广泛应用。
抗体特异性问题
02
抗体的特异性是影响其应用的关键因素之一，如何提高抗体的
特异性是当前面临的重要挑战。
抗体稳定性不足
03
一些抗体在存储和运输过程中容易失去活性，影响其应用效果。
抗体技术的发展前景
生物制药
药物研发
抗体作为药物载体，可以用于药物的定向输送，提高药物的疗效
和降低副作用。
免疫检测试剂
抗体可以用于制备免疫检测试剂，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光等，用于检测生物体内
的物质。
单克隆抗体药物
利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体药物，具有高度特异性、低毒性和长效性等特点，已广泛应用于肿瘤、自身免疫性疾病等领域。
应用生物化学-抗体技术PPT 课件
• 引言 • 抗体的产生与种类 • 抗体技术的原理与流程 • 抗体技术的应用实例 • 抗体技术的挑战与前景 • 结论
01
引言
抗体的定义与特性
抗体
指免疫系统产生的一种蛋白质，能够特异识别并结合抗原，发挥免疫效应。
特性
高度特异性、结合力强、种类多样。
抗体技术的历史与发展
历史
自19世纪末发现抗体以来，抗体技术不断发展，经历了免疫学、单克隆抗体技术、基因工程抗体等阶段。
发展
目前抗体技术已广泛应用于生物医药、诊断、治疗等领域，为人类健康和疾病治疗做出了巨大贡献。
抗体技术的应用领域
01
02
03
生物医药
用于药物研发、疾病诊断和治疗，如肿瘤免疫治疗、自身免疫性疾病治疗等。

抗体筛选试验PPT课件

酶法等当中的至少一种，第一步盐水法必须要离心判断结果。 • 3、患者红细胞、供者红细胞必须至少用生理盐水洗涤一遍以上。
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配血中出现问题的解决方法
• 1、调查患者的年龄、性别、种族、疾病诊断、用药史、家族史、输血史、输血反应史、妊娠史、生育史等（非常重要，对于后续的配血给血方案有很重要的意义）。
谱细胞 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 自身
IS
- -- - - - -- - - -
I AT
2+ - 2+ 3+S 2+ - - - - 1+S -
• 结果判断：IgG型抗-E抗体
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四、交叉配血的作用
• 1、确认受血者和供血者ABO血型的相合性。 • 2、可检测出受血者血清中不规则抗体，此抗体可能在抗体筛选试验中，由于筛
抗体筛选试验（试管法）
• 抗体筛选试验患者两滴血清+筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、三洗的自身细胞各一滴立即离心看结果。
• 结果分析： • 阳性：IgM型抗体、冷抗体、蛋白凝集、自身抗体等情况。 • 阴性：需要进一步鉴定
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盐水介质中阳性如何处理
1、IgM型抗体：患者血清+谱细胞进行特异性检查，一般以抗-M、抗-Lea、抗-Leb、抗-P1、早期形成的抗-D、E等抗体。
选试剂红细胞缺乏相应的抗原而漏检。
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• 交叉配血试验是保障临床输血安全、及时、有效的重要手段，其方法主要有盐水法、凝聚胺法或抗人球蛋白法等，使用安全、有效的方法进行交叉配血试验，分析确定交叉配血不合的原因，并采取相应的处理方法对预防输血反应发生和解决临床疑难输血有重要意义。交叉配血试验，也称为配合性试验。要使患者与献血员血液间没有相对应的抗原、抗体存在。

ELISA检测抗体ppt课件

抗体水平（ELISA后续步骤）
※重点实验※(写实验报告）
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2
成绩
◦ 课堂表现及出勤情况，占5分 ◦ 实验报告，占10分 ◦ 期末考试，占10分
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3
复习第一次课操作
SRBC冻融稀释（得到比例适当的抗原，非完整的红细胞）
↓
每孔加包被液（碳酸盐缓冲液，含抗原）100μl, 37℃ 1h （包被）
4 加完后统一放入37度温箱1h(大于1h)。
加入酶（HRP）标记二抗
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9
加入底物-酶促反应-反应终止
1 弃液 2 用PBS洗板7次，200μl/每孔，每次一分钟以上，
水平轻微晃动，切勿串孔、溢出。每次洗完用滤纸拍板，拍干。
3 于8个ELISA孔中分别加入底物100μl/每孔。 4 加完后，室温避光反应10min。 5 反应10min后，于8个ELISA孔中分别加入终止
该法敏感性强，非特异着色浅，背景清晰，因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。
酶免疫测定技术
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是把放射性核素测定和抗原、抗体间的免疫化学反应两种方法结合起来所形成的一种超微量物质的测定方法。将抗原抗体反应的特异性与同位素测定技术的敏感性相结合的一项新技术，具有特异性强、目前为止灵敏度最高、准确性和精密度好等优点。而且操作简便、易于标准化，其灵敏度较高，可达10-9-10-12g水平,是其他分析方法所无法比拟的。
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ELISA步骤包被
↓ 封闭
↓ 加入待测样本
↓ 加入酶标二抗
↓ 加入底物
↓ 加入终止液，终止反应
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自身抗体的实验室检测及临床意义PPT课件

自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。
临床意义：对系统性红斑狼疮（SLE）特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在相关性，因此抗体滴度的检测可为监控治疗提供有用的依据。
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抗RNP/Sm抗体
荧光模式：
Hep-2片：细胞核粗颗粒，核仁阴性。
肝组织切片：同上。
荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。
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抗肝肾微粒体抗体（LKM）
有三种荧光模式：
LKM-1：肝细胞胞浆明显荧光，呈细颗粒到均质状，肾脏近近端肾小管有荧光。
LKM-2：门静脉周围的肝组织荧光比其他部位强，肾脏近近端肾小管有荧光。
LKM-3：肝和肾均为阴性，灵长类睾丸间质细胞荧光明显。
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抗肝肾微粒体抗体（LKM）
肝组织片：分布于细胞核的10~20 个颗粒，荧光弱，易被忽略。
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抗着丝点抗体
自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A、B、C，主要抗原为着丝点蛋白B。
临床意义：对进行性系统性硬化症亚型（CREST综合征）有诊断意义。阳性率 80~95%。还可见于PBC、SS等。
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13.5, 28, 29KD 22, 32,70KD 52KD 45, 47KD 68-70KD 55KD 15, 16.5, 38KD
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间接免疫荧光法
细胞核阳性核仁阳性细胞浆阳性分裂期细胞阳性
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细胞核阳性
细胞核均质型（Homogeneous）：抗 dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体
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分裂期细胞阳性

不规则抗体筛选PPT课件

2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临床医师重视。（理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl), 保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。
YOU
SUCCESS
2019/4/8
Polybrene法

原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而真正的凝集不消失。(见图).+源自自身在注意事项

必须进行间接抗人球蛋白试验。必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转速、。观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起事故。若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进一步进行抗体特异性的鉴定.(以判断抗体的临床意义并给予配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生儿溶血病等疾病) 建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法

自身抗体的检测及其临床意义幻灯片PPT

抗着丝点抗体局限型弥散性硬皮病〔30%〕；CREST综合
征〔50-80%〕；原发性雷诺现象〔25%〕；原发性胆汁性肝硬化〔10-20%〕。抗M2抗体原发性胆汁性肝硬化特异性抗体〔96%〕；其它慢性肝病〔30%〕；进展性系统性硬化症〔7-25%〕。抗核糖体P蛋白是SLE的特异性抗体〔5-20%〕。
抗Scl-70抗体进展性系统性硬化症〔25-75%〕，与皮肤硬
化、肺部受累及肿瘤有关；抗体滴度与疾病活动性无关。抗PM- Scl抗体多肌炎/皮肌炎〔8%〕，弥散性硬皮病〔3% 〕；50% PM- Scl抗体阳性见于皮肌炎与硬化症的重叠综合征。抗Jo-1抗体多肌炎特异性抗体〔25-35%〕，伴肺间质纤维化时可高达75%。高度提示抗合成酶综合征。
自身免疫性疾病的共同特征
1.可以有诱因，也可以无诱因，但多数病因不清。无诱因者多称为“自发〞性或“特发〞性。
2.患者以女性居多，并随年龄增加发病率有所增加。 3.有遗传趋向。 4.血清中有自身抗体或体内有针对自身组织细胞的致
敏淋巴细胞。自身抗体在不同的自身免疫病中有穿插和重叠现象。即在不同的自身免疫病患者中查到一样的自身抗体;在同一自身免疫病患者体内可查到多种自身免疫抗体。 5.疾病的重叠现象,即一个病人可同时患一种以上自身免疫病。 6.自身免疫病一般病程较长,病情开展和缓解呈反复交替现象,易成为终生痼疾。免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。
抗SS-A抗体与各类自身免疫性疾病相关，最常见于枯燥
综合征〔40-80%〕。SLE〔20-60%〕；新生儿红斑狼疮〔100%〕，可引起先天性新生儿心脏传导阻滞。与狼疮肾病的发生相关。抗天然SS-A〔60kDa〕抗体对SS和SLE 的特异性高。该抗体的产生与HLA有关。抗Ro-52抗体不具有疾病特异性，而且还可与抗Jo-1和 RNP抗体发生穿插反响。抗SS-B抗体枯燥综合征〔40-95%〕；SLE〔10-20%〕；亚急性皮肤狼疮〔25-35%〕。

自身抗体的检测及应用ppt(共49张PPT)

系统性红斑狼疮系统性硬化症干燥综合征类风湿关节炎
抗体滴度的高低可判断疾病的活动性
▪ 抗双链DNA 自身免疫性疾病的特点：
（抗环瓜氨酸肽抗体）特异性较高（1）类风湿因子（RF）
SLE
动性及严重性呈正相关。
RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提
特异性指标阳性，人无相应症状
▪ 健康人 --- 一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后
复查可能转阴或者下降。
▪ 貌似健康人--- 检测—自身抗体（微观）
影像---组织
表现---器官（最晚）
▪ 患者
--- 但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴
度变化，一般会下降
▪ 自身免疫性疾病---但不是指标对应的疾病
临床表现阳性，实验室检查阴性
实验室检查阳性，临床表现阴性
自身免疫病自身抗体非常复杂
SLE患者中存在100多种自身抗体
Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37.
自身免疫病自身抗体非常复杂
APS患者中存在30种自身抗体
J Autoimmun, 2008. 30(1-2): p. 74-83.
▪ 抗rRNP 狼疮脑病
自身抗体的意义
▪ 自身免疫性疾病的诊断； ▪ 疾病活动性的判断； ▪ 疗效的观察及预后； ▪ 指导临床用药等； ▪ 进行不同疾病的鉴别诊断。
自身抗体常用检测方法
自身抗体的检测方法：
（1）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制。

自身抗体的检测演示幻灯片

ANA检测的临床意义
ANA可见于多种自身免疫性疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织疾病的诊断，病情判断和疗效观察的指标
已证实ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间，其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低，为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类型风湿病意义重大。
临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengener’s肉芽肿，约占ANCA阳性率的80~95%。cANCA被认为是活动性 Wengener’s肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。
抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）
pANCA
荧光模式：
正常的健康人
女性＞男性，出现率随年龄而增加
风湿性疾病患者亲属？孕妇
SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释
技术方面
临床方面
经皮质激素或免疫抑制剂治疗。
终末期肾病。
隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组织。
由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。
ANA的荧光染色型别
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
抗SSA／SSB抗体
自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD 的磷酸化蛋白。
临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。