血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤.doc
血型鉴定与交叉配血
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原， 将血型分为A型、B型、AB型及O型四 种。通常利用红细胞凝集试验，通过 正定型和反定型鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血 清中有无相应的抗A或抗B。
血型抗原
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
--B来自++-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
血型抗体
常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类
*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)---单体结构
1、 IgG 抗体
分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠 或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应 抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不 完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白） 使致敏红细胞发生凝集。
2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。
3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程1.目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7(2)条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于医疗机构输血科对临床疑难交叉配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血(AlHA)患者的交叉配血试验。
3.职责医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。
4.原理本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。
配血前需确定受血者的ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性,选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。
5.所需设备和试剂普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。
6.检测环境条件室温应控制在18-27°C,湿度应保持30%-70%°7.步骤与方法7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。
7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。
7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能：③详细告知家属，决定是否送市血液中心。
7.2.3家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血科。
7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。
7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行7.2.2-7.2.4程序8.交叉配血结果判定主侧、次侧交叉配血均无溶血、无凝集，表示配血相合。
对于AlHA患者，已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。
交叉配血操作规程
1.目的：检查受血者与献血者的抗原及抗体成分是否相容,以保证安全输血;
2.要求：
要求全科人员能够熟练掌握原理及操作;
3.
,
4.
4.1
4.2
4.3
4.4
5.
5.1 首先查看输血申请单,核对姓名、科室、床号等内容,无误后方可进行配血;★5.2盐水介质配血法
1首先对患者血样充分离心后,吸出血清于另一试管中并标记;
2取试管12支,分别标记患者细胞、患者抗A、抗B、抗D、A C、BC、O C、主侧、次侧、献血者抗A、抗B、献血者细胞管;对患者血样进行ABO血型正反定性和Rh血型检定,主侧管加受血者血清2滴,献血者2%~5%红细胞悬液1滴；次侧管加献血者血清2滴,受血者2%~5%红细胞悬液1滴,对献血者血辫进行ABO血型复查,以
1000g离心15秒,观察结果
6.结果判断
ABO同型配血,主侧和次侧均无凝集及溶血现象;为盐水介质配血结果阴性,可将原标本接着做聚凝胺法或抗人球蛋白法配血;
6.1聚凝胺法：具体方法见聚凝胺法;
6.2 抗人球蛋白法：具体方法见抗人球法;
7.
7.1
7.2
7.3,然后再离心;
7.4
误,,37℃或7.5
7.6 各医院前来配血时,要有输血申请单方可配血;
8.相关文件
8.1中国输血技术操作规程
9.相关表单
9.1 CB—004血型参比室实验记录单
9.2 CB—005青海省血液中心交叉配血报告单
起草人：批准人：审核人：。
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点临床治疗当中，输血治疗属于移植细胞治疗，红细胞作为运输氧气的重要载体，是治疗或者辅助治疗的重要手段，但不适当的血液制品的输注将造成不良后果，严重者可以危及生命，因此应该按照相关程序对受血者和供血者的血液进行准确的输血前血型血清学检查才能保证受血者的输血安全。
血型复查红细胞上的抗原纷繁复杂，但是具有重大临床意义的，也是现在临床上运用的是ABO 血型系统和Rh 血型系统，通常所有住院患者在一开始会常规查一个血型定性，就包括ABO 系统和Rh 系统。
大型医院一般微柱凝胶法，而在输血前也需要再进行血型复查，包括正定型（用抗-A 及抗-B 的试剂与被检测血细胞反应，检测红细胞表面是否存在A 抗原B 抗原），和反定型（用标准A 细胞和B 细胞与被检血清反应，检测血清中是否含有抗体），此时复查多采用试管法或者玻璃法，由于ABO 系统的天然抗体多属于IgM 型抗体，属于温抗体，盐水介质下就可以看见凝集，一般不需要离心即可看出结果，当受血者的抗体较弱时可以离心观察，临床上反定型防止假阴性均采用盐水介质法离心后观察。
不规则抗体筛查受血者有输血史、妊娠史或者短期内需要大量输血时应按规定进行不规则抗体的筛查和鉴定，以便及时发现有临床意义的不规则抗体从而避免输血反应的发生，不规则抗体指除了抗-A 和抗-B 抗体以外的抗体，分为自身抗体和同种异体抗体。
自身抗体是指受血者体内产生的抗体，针对自身红细胞的抗原，这种抗体不仅可以和自身红细胞反应还可以和大多数红细胞反应，而同种异体抗体是指多次输血或者妊娠刺激机体产生的针对同种异基因的红细胞的抗体。
不规则抗体按照抗体的类型可以分为IgM 和IgG 类，根据次分类可以选择不同的筛选方法，主要有盐水介质法、聚凝胺法、抗球蛋白实验，以及微柱凝胶法等。
交叉配血实验在完成前个试验后，复查收到的受血者血样的ABO、Rh 血型以及不规则抗体筛查实验，进行最后一步，交叉配血实验，主要是检查受血者血清中有无破坏供者的红细胞的抗体，使受血者和供血者的血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分，实验包括以下几项：1、主侧配血：受血者的血清和供血者的血细胞反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细胞的抗体。
血型鉴定与交叉配血
＋表示凝集，－表示无凝集
对抗血清的要求※
①高度特异，只能与相应的红细胞抗原发
生凝集，无非特异性凝集， ABO
血 抗B血清效价在1:64以上。 型 鉴 ③高亲和力，15秒内出现凝集，其强度 为3分钟时凝块>1mm2。 定
②高效价，抗A血清效价在1:128以上，
④无冷凝集素。
⑤无菌。分离血清后56℃，30min灭活。
型 （2）立即水平离心1000r/min, 10min. 鉴 定 （3）观察及判断血型结果①阳性：对照管细胞沉
淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。 ②阴性：对照管和检测管细胞沉淀均在管底。 ③试验失败：对照管细胞在胶上或 胶中，应重新做试验。
（4）报告方式：同生理盐水法。
注意事项
ABO 血 型 鉴 定
【注意事项】
交 1.如果对患者的输血史或妊辰史不明， 叉 必须使用48h内的标本。 配 血 2.不能使用溶血标本。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
3.配血后，受血者/供血者的全部标本 须于2～6℃冰箱保存7d以备复查。
交 叉 配 血
（ 盐 水 凝 集 法 ）
【方法学评价】
本法简易、经济、快速，缺点是
仅用于检查ABO血型系统的IgM 血型抗体是否相配，不能检出不 相配的IgG血型抗体。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
查找原因。
②异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧
有凝集无溶血，可以输少量血；如主侧、
次侧均不凝集或主侧凝集，不能输血，
需查找原因
交 叉 （1）受血者xxx（X型）血清＋供血者xxx 配 （X型）红细胞 凝集与否及强弱程度 血 （ （2）供血者xxx（X型）血清＋受血者xxx
交叉配血试验的注意事项
稀有血型、不规则抗体阳性、及配血不相合等及时报告程序范本.docx
稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序
为保证临床安全用血、合理用血，制定稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序，输血科人员在进行交叉配血实验时，如发生此类情况，应按照以下程序报告。
一、输血科人员在进行交叉配合实验时，应严格按照操作规程，认真完成配血实验，在多人值班时，应由另一人进行复核，确保无误后，方可签字发出血液。
二、对稀有血型的输血，输血科应立即通知用血临床科室，在血液无充足储备情况下，应暂停手术。
输血科人员应上报输血科主任，立刻与市中心血站取得联系，保证血液的供应，对紧急的稀有血型输血，输血科人员应立即上报输血科主任，输血科主任应立即与血站联系，确保急症抢救用血并上报医务科。
三、对不规则抗体阳性及配血不相合等情况，输血科人员应重新做不规则抗体及交叉配合实验并复查血型，必要时更换试剂，重做试验。
如仍然不相符，应上报输血科主任，输血科主任应上报医务科和主管院长。
上述工作制服规范了不规则抗体阳性及配血不相合等情况的报告程序，输血科人员应认真学习掌握，确保临床安全、有效、合理用血。
ABO血型鉴定及交叉配血
血型基因位于第9对染色体上， 基因名为ABO，由A、B和O三个 等位基因控制遗传。
基因特性
ABO血 型系统
ABO血型系统中A和B基因是显性基 因，O基因是隐性基因。
各基因编码产物
O基因编码产物无酶活性
各基因编码产物
B基因编码半乳糖转移酶
各基因编码产物
A基因编码N-乙酰半乳糖胺 转移酶
根据红细胞膜上所具有的抗原，将血型分为四个血型
（一）排除人为因素或操作失误(第一步) 复检ABO血型:
1)重新采集血样:分抗凝血和不抗凝血的2管, 排除血样采错、静脉输液处采样和血样 不规范等因素。 2)核对试剂、器材：核对试剂效期, 仔细阅读试剂说明书, 特别是操作规程和注意事 项;核对离心机转速、时间、离心力, 以及其它器材有无污染, 排除试剂、器材, 特别是 离心力不标准的干扰。
受检者血清（浆）与标准红细 胞（反定型）
抗-A + +
抗-B + +
Ac
Bc
Oc
-
+
-
+
-
-
+
+
-
-
-
-
受检者血型
A B O AB
思考题？
ABO反定型鉴定
1.ABO反定型中试剂为什么会有O型细胞？
如果在反定型试验中，受检者的血清（血浆）与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自 身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性， 则表明被检者血清（血浆）中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。 2.只做ABO反定型，结果出来后能否直接报告血型？
1 A型
红细胞膜上只具有A抗 原
血型及交叉合血操作规程
血型及交叉合血操作规程一、引言作为医疗机构中常见的操作流程之一，血型及交叉合血是确保输血安全的重要环节。
本文将介绍血型和交叉配血的基本概念、操作步骤以及注意事项，以提供规范的操作指南。
二、血型的基本概念血型是指个体红细胞膜上存在的抗原和抗体的组合情况，分为A、B、AB和O四种类型。
在血型鉴定中，需要使用抗A和抗B两种血清对被测血液进行试验，从而确定其血型类型。
此外，还需要测试被测血液中是否存在抗D抗体，以判断其Rh阴性或Rh阳性。
三、交叉配血的基本概念交叉配血是在输血前进行的一项重要试验，旨在检测受血者的血清中是否存在与供血者红细胞的抗体相对应的抗原，以避免输血反应的发生。
具体操作如下：1. 取受血者的血清和供血者的红细胞，将它们分别置于两个试管中。
2. 依次加入适量混合胶体试验红细胞悬液和抗人球蛋白试剂，轻轻振荡混合。
3. 观察反应是否出现凝集、增浊或溶解等现象。
4. 凝集或增浊反应表示交叉配血不合格，需停止输血操作；溶解反应则表示血型和抗体基本匹配，可以进行输血。
四、血型及交叉合血操作规程以下为血型及交叉合血操作的具体步骤，操作人员应根据实际情况进行：1. 准备工作a. 确认受血者的基本信息，包括姓名、住院号、血型等。
b. 根据受血者血型，选择相应的供血者。
c. 根据病情和输血需求，估计所需输血量。
d. 消毒操作台面和操作器具。
2. 操作步骤a. 将受血者的血液样本采集到干燥无菌试管中，标明受血者信息。
b. 将受血者的样本送至血库，进行血型鉴定。
c. 根据受血者的血型和抗体情况，在血库选择适当的供血者。
d. 从血库获取供血者的血液样本。
e. 将供血者样本标记并送至血型试验室进行交叉试验。
f. 根据交叉试验结果判断是否合适进行输血操作。
g. 如满足输血条件，按照医嘱进行输血操作。
五、注意事项1. 操作人员应进行严格的洗手和穿戴手套等防护措施，以防交叉感染。
2. 每一步操作都需要仔细核对患者信息，确保输血操作正确。
实验7ABO血型鉴定及交叉配血实验_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验七ABO血型鉴定及交叉配血实验一、实验目的通过鉴定实验和配血实验来学习、掌握人类ABO血型的原理和方法。
二、实验原理血型是特指血细胞膜表面抗原的类型。
ABO血型系统是一类常用的血液分型体系。
在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。
A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。
血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。
在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型(表7-1)。
统不同，人群中Rh血型的不匹配非常罕见，尤其在黄种人中，Rh(+)型占到99.7%,而Rh(-)型还不到0.3%。
所以在医疗输血中，通常只考虑献血者和输血者之间ABO血型是否匹配。
ABO血型在人群中的分布，存在着地理环境及民族、种族的差异，在我国汉族人群中，各血型的比例由多到少依次是O(34.11%)﹥ B(28.98%)﹥A(28.29%)﹥AB(8.69%)。
交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。
输血时，主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集，其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。
前者叫交叉配血的主侧，后者称为交叉配血的次侧。
只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”。
如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。
三、实验材料人外周血四、实验器材与试剂(一)器材采血针、尖头滴管、载玻片、1.5ml Eppendorf管、75%酒精棉球、消毒干棉球和记号笔。
(二)仪器显微镜、离心机。
(三)试剂标准A血清、标准B血清、生理盐水、碘酒。
五、实验操作（一）ABO血型鉴定1．用记号笔在载玻片两端分别作好标记A、B。
血型鉴定、交叉配血操作规程
⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。
备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。
⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。
【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。
【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。
【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。
不规则抗体检测操作规程14-22
红细胞不规则抗体检测操作规程1．0 目的规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
2．0 适用范围适用于输血科（血库）抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。
3．0 材料抗球蛋白试剂、筛选细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管。
4．0 设备普通离心机、血型血清专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。
5．0 抗体筛选操作步骤5．1 取试管3支，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，各加入患者血清2滴，再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞2滴。
5．2 混匀，37℃孵育1h。
5．3 1300g离心15s。
5．4 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。
若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
5．5 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。
5．6 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
5．7 按试剂说明书加最适释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。
5．8 1300g离心15s。
轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
6．0 抗体鉴定步骤6．1 抗体筛选阳性，应作抗体鉴定试验以确定其特异性。
6．2 依据谱细胞数量的多少（一般由8～16个单人份的已知血型表型的O型红细胞组成）取相应数目的试管，分别标记序号，各加入患者血清2滴，再分别加入谱细胞2滴。
6．3 混匀，37℃孵育1h。
6．4 1300g离心15s。
6．5 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。
若肉眼不见凝集，以显微镜检查。
6．6 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。
6．7 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
6．8 按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。
6．9 1300g离心15s。
轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
7．0 注意事项7．1 按《临床输血技术规范》第十七条要求，必须对交叉配血不合时，对有输血史、妊娠史或短期内接受多次输血者进行抗体筛选试验。
7．2 抗体筛选有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，并可在配血前有足够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者不能及时输血。
实验三血型鉴定(交叉配血)
盐水介质法
原理及目的
交叉配血试验是指受血者血清加供血者红细胞悬液;供血 者血清加受血者红细胞悬液，同时进行凝集试验。前者称 主试验，后者称副试验。其目的是验证供者与受者ABO血 型鉴定是否正确，防范引起溶血性输血反应。此外，也可 检出ABO血型系统的不规则凝集素以及发现ABO系统以外 的其他血型抗体。
3.分别混匀，低速离心约2 分钟，轻轻摇匀，观察结果。 4.结果判定： 同型配血，主测、次测均不凝集，表示无配血禁忌，可以
输血； 异型配血时，主测无凝集，次测凝集，无溶血，可以输给 少量。输异型血时，如次测不凝集，不可以输血，应重新 复查血型或追查其原因。
患 者
献 血 者
交叉配血试验
主侧配血用患者血清与供试剂和器材生理盐水 小试管、尖嘴滴管、离心机、试管架、显微镜等
操作步骤
1.取受血者和供血者血液各2ml，注入一清洁干燥试管内， 按常规方法分离血清。同时留数滴滴加于含少量生理盐水 的小试管内，制成5％的红细胞生理盐水悬液。注意要分 别标明供血者与受血者的血液管、血清管、红细胞悬液管 的姓名。 2.另取清洁试管2支，标明主测和次测。主测：受血者血清 1 滴加供血者红细胞悬液1滴。次测：供血者血清1滴加受 血者红细胞悬液1滴。
主
者红细胞进行试验
侧
次
次测配血
侧
供血者血清与患
者红细胞进行试验
交叉配血的要求
主侧配血要求：
绝对不可以有凝集或溶血
凝
现象。
集
次测配血要求：
供血者血清加受血者红细
胞在允许范围内，可以有 凝集现象，但不可以有溶
不
血。
凝
集
交叉配血试验结果图例
无溶血 无凝集
疑难血型鉴定和疑难交叉配血
疑难血型鉴定与疑难交叉配血1、疑难血型鉴定疑难血型就是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）得现象,多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。
因此,疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体与特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学与分子生物学研究方法对患者样本进行检测。
而对于不规则抗体筛查与鉴定，主要就是对抗体种类与特性进行研究，尤其就是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确得分析患者血清抗体得特异性。
在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析与处理：(１)分析可能存在得原因先排除人为操作因素,再通过了解患者临床资料分析可能得原因，主要包括抗原类影响因素与抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等,抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。
（2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。
流程图1 疑难血型鉴定流程2014年１月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例,经一系列血清学试验确证该患者为P１Pｋ血型系统得ｐ表型，经分子生物学基因测序,初步推断Ａ4GALT 基因第3外显子得９０3Ｃ＞G突变就是患者p表型形成得分子生物学基础,该研究成果从不同角度与深度撰写论文,先后发表《临床军医杂志》与《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。
在此之后得工作中，通过阅读文献自修学习,鉴定出Am、Bm、B３等血型亚型，形成了一套相对完整得疑难血型鉴定思路与流程。
２014年2月与2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗得患者,经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。
在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查与鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体得分布特征有了较为清晰得了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》,并形成了一套相对完整得不规则抗体筛查与鉴定流程。
交叉配血试验标准操作程序
SOP_10-3 交叉配血试验标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：交叉配血试验。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：随着临床输血实践的增多,输血一方面在临床治疗中特别是在对失血性患者的救治发挥了前所未有的作用;另一方面也出现了不少不良反应和致命的事故。
这对输血技术的进一步发展提出新的挑战,输血医学出现了奇迹般的创新。
血型学、血液免疫学和输血相关病毒学的深入发展,使输血置于更加安全的轨道。
1. 原理：交叉配血试验也称配合性试验，是保证安全输血。
此试验是检查不配合性，使献血员与受血者(病人)的血液间没有可测的不相配合的抗原-抗体成分。
配血试验阴性，输血后患者的血清（红细胞）不会与献血员的红细胞（血清）发生反应。
即使已知患者和献血员的ABO及Rh(D)血型相同，配合性试验也是必要的。
因为除了ABO、Rh(D)外还有其他红细胞血型系统存在。
2. 试剂和材料：（1）受血者血清与3%红细胞悬液（2）供血者血清与3%红细胞悬液3. 操作方法：3.1 受血者配血试验的血标本必须是输血前3天之内的。
3.2 逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型(正、反定型),并常规检查患者Rh(D)血型(急诊抢救患者紧急输血时Rh(D)检查可除外)。
3.3 凡输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩白细胞、手工分离浓缩血小板等患者,应进行交叉配血试验。
机器单采浓缩血小板应ABO血型同型输注。
3.4 交叉配血不合时；有输血史、妊娠史或短期内需要接收多次输血者必须作抗体筛选试验。
3.5.交叉配血试验包括：(1)受血者血清对供血者红细胞的主侧配血。
(2)受血者的红细胞对供血者血清的次侧配血。
(3)受血者的红细胞对受血者血清的自身对照。
3.6 盐水介质配血法本法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性。
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程
疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。
2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。
3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。
）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。
2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。
3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。
③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。
4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。
）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。
6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。
4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。
二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。
2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。
3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。
4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。
5、试验系统被污染。
（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。
2、病人与供血者的ABO血型不相合。
3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。
4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。
（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。
血型鉴定及交叉配血
血型不符：重新核对血样和 血型鉴定结果，确保准确无 误。
溶血现象：血液中红细胞破 裂导致溶血，需重新进行交源自叉配血试验。交叉配血的注意事项
血型鉴定必须准确无误 受血者与供血者血型要匹配 交叉配血试验中应避免外界干扰因素 输血前必须进行全面检查，确保血液安全
血型鉴定和交叉配血的实 验操作
章节副标题
血型鉴定的重要性：在输血、器官移植和 新生儿溶血病诊断等方面具有重要意义。
血型鉴定的基本原理和方法
血型鉴定的定 义：通过检测 红细胞表面抗 原，确定个体 血型的过程。
血型分类：A 型、B型、AB 型和O型，每 种血型又分为 阳性和阴性两
种亚型。
血型抗原：红 细胞表面的抗 原物质，包括 AB抗原和H抗
原等。
血型抗体：存 在于血清中的 抗体，与红细 胞表面的抗原 发生特异性结
合。
血型鉴定的应用场景
输血：确保受血者血 型与供血者血型相匹 配，避免输血反应
亲子鉴定：通过血型 遗传规律，判断父母 与子女之间的亲缘关 系
法律鉴定：在刑事 案件或民事纠纷中， 通过血型鉴定来辅 助判定身份或亲子 关系
人类学研究：通过血 型分布研究人类迁徙、 种族起源等问题
实验前的准备
实验器材：试管、 注射器、抗A抗B 标准血清等
实验试剂：生理 盐水、A型血和B 型血样本
实验步骤：准备 器材和试剂，进 行交叉配血实验
注意事项：确保 器材和试剂无菌 、无污染，遵循 实验室安全规定
血型鉴定实验操作流程
准备试剂和器 材：确保所需 的试剂和器材 已经准备好， 包括抗A、抗B 血清、血型抗
记录结果：记录交叉配血试验的结果，并进行分析。如果存在凝集反应，则表明供血者和受血者之间的血液 不匹配，不能进行输血。如果未发现凝集反应，则表明供血者和受血者之间的血液匹配，可以进行输血。
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤一.血型鉴定1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者2%-5%红细胞悬液。
3.加样ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
ABO反定型：1滴（50ul）患者血清加1滴（50ul）反定型试剂红细胞。
RhD定型：1滴（50ul）抗D血清加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
4. 结果判断离心（2档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
二.不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）1.排管标记01、02、03及自身对照管2.加样各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1滴（50ul）。
3.结果观察离心（2档），观察结果先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留约0.1ml，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min内消失显微镜检查三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）1.标本准备分离供血者血浆与红细胞三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液2.排管标记排管，主侧、次侧及自身对照管3.加样各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul）4. 结果观察离心（2档），观察结果先看上清液有无溶血轻轻混匀，肉眼观察有无凝集结果判断并记录各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留0.1ml，轻轻混匀.肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min内消失肉眼观察阴性者，显微镜检查记录交叉配血结果A、B、O试验红细胞悬液的制备1. 分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）红细胞悬液的配置悬液浓度（%）压实红细胞（滴）盐水（滴）2 1 2.0ml（40）5 1 0.8ml（16）10 1 0.4ml（8）20 1 0.2ml（4）2. 为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个以上健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。
血型鉴定、交叉配血、不规则抗体筛查标本的采集
血型鉴定、交叉配血、不规则抗体筛查标本的采集1患者准备及原始标本识别1.1患者血液采集前，应避免跑步、骑自行车、爬楼梯等剧烈的运动，要求患者休息 15 分钟后进行采血。
冬季采血时应保持血液循环通畅；1.2.静脉血标本由临床医护人员采集，遵照医嘱准备好标本采集前所用的容器以及消毒器材、一次性注射器、标本条形码、检验申请单或输血申请单等备用。
首先确认患者姓名、住院号和血型，并将带有姓名、住院号、床位、检测项目的标本条形码贴于标本采血真空试管上；1.3.采血前应向患者作适当解释，以消除疑虑和恐惧。
如遇患者采血后发生晕厥，可让患者平卧，通常休息片刻即可恢复。
必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中、合谷等穴位； 1.4.认真核对医嘱及患者信息，严格执行查对制度，询问患者姓名而不是询问你是 XX;. 采血前必须询问病人或病人家属，核对腕带，对受检者的身份信息进行确认，采血完成后必须再次核对病人与标本的条码信息是否一致。
1.5.标本条形码上的条形码是原始标本惟一标识。
1.6 非急诊输血时，ABO、RHD 血型鉴定和交叉配血标本不允许同一时间采集完成。
2 临床医生的指导2.1.临床医生必须对患者讲清楚血型鉴定、交叉配血检测的目的、采血时间(住院患者应在早晨卧床时取血；其他人员应最好在空腹时采血，急诊除外)及相关注意事项；2.2.临床医生应向患者讲清楚采集血液标本前，使用青霉素、非那西丁、氨基比林、磺胺、甲基多巴、肝素、右旋糖苷等药物可能会影响检验结果；临床医生确认患者近期使用上述药物，应在申请单中注明或直接通知检验科工作人员，以利于实验结果的正确判断。
3申请单的填写、处理及保存3.1.临床医生在开具输血申请单时，应采用计算机程序进行申请，填写完整，包括患者姓名、性别、年龄、申请科室、病人住院号、申请日期、标本类型、申请目的等。
输血申请单还需要填写患者输血前检测项目结果，包括 ABO 及RhD 血型、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、凝血酶原时间、凝血酶时间、部分活化凝血酶原时间、ALT、HBsAg 抗-HCV、抗HIV、梅毒实验结果；急诊申请输血时可写待定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
一.
1. 血型鉴定
排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者 2%-5%红细胞悬液。
3.加样
ABO正定型： 1 滴（ 50ul ）抗 A、抗 B 试剂加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
ABO反定型： 1 滴（ 50ul ）患者血清加 1 滴（ 50ul ）反定型试剂红细胞。
RhD定型： 1 滴（ 50ul ）抗 D 血清加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
4.
二. 结果判断
离心（ 2 档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）
1.排管标记 01、 02、 03 及自身对照管
2. 加样各试管分别加入相应的患者血清 2 滴（ 100ul ）及筛选细胞 1 滴（ 50ul ）。
3.结果观察
离心（ 2 档），观察结果
先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液，留约，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min 内消失
显微镜检查
三. 交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）
1.标本准备
分离供血者血浆与红细胞
三次洗涤，制备供血者 2%-5%红细胞悬液
2.排管标记
排管，主侧、次侧及自身对照管
3.加样
各试管分别加入相应的备检血清 2 滴（ 100ul ）及 2%-5%备检红细胞悬液 1 滴（ 50ul ）4.结果观察
离心（ 2 档），观察结果
先看上清液有无溶血
轻轻混匀，肉眼观察有无凝集
结果判断并记录
各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液，留，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min 内消失
肉眼观察阴性者，显微镜检查
记录交叉配血结果
A、 B、O试验红细胞悬液的制备
1.分别采取已知A、 B、O 三种血型的红细胞，经盐水洗涤 3 次，以压紧红细胞配成不
同浓度的红细胞悬液（见表格）
红细胞悬液的配置
悬液浓度（ %）压实红细胞（滴）盐水（滴）
2 1 （ 40）
5 1 （ 16）
10 1 （ 8）
20 1 （ 4）
2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取 3 个以上健康成人血液，按A、B、O 型分别混合后，按上法制备。