血型鉴定与交叉配血 ppt课件

完全不凝:血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐， 用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升， 随即成为均匀的悬液；
轻微凝集:必须将液体转到载玻片上镜检后判 定凝集程度。
试管法(反定型)
Ac
Bc
受检者血清 2滴
2滴
2滴
5%的A型红细胞悬液
1滴
5%的B型红细胞悬液
1滴
立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心 15秒。
主
者红细胞进行试验
侧
次
次测配血
献
侧
供血者血清与患
者红细胞进行试验
血
者
交叉配血的要求
主侧配血要求：
绝对不可以有凝集或溶
凝
血现象。
集
次测配血要求：
供血者血清加受血者红
细胞在允许范围内，可 以有凝集现象，但不可
不
以有溶血。
凝
集
交叉配血试验方法
盐水介质配血
酶介质配血 菠萝酶，无花果酶，木瓜酶
抗球蛋白试验
不完全抗体多于相应红细胞结合，在盐 水介质中不出现凝集，利用抗球蛋白抗 体作为第二抗体，链接致敏红细胞表面 的特异性抗体，使致敏红细胞出现特异 性凝集。
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
反定型是用已知A细胞和B细胞来测 定血清中有无相应的抗A或抗B。
ABO血型鉴定实验原理
抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红 细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗 体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗 体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→ 从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B 抗原→判断血型。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与 红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐 解聚液以消除聚凝胺的正电荷，使IgM或 IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开； 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体， 加入解聚液可使非特异性凝集消失。
凝聚胺(Polybrene)配血方法
患
者
主
献
侧
次 侧
室温放置 1 分钟
时间长 凝集较弱时易导致定型错误
实验原理
血型不相容的两人血液 混合,则红细胞可凝集成簇
含某种凝 集原的红 细胞
含相应凝
+ 集素的血 清
红细胞凝集反应 (agglutination)
观察结果 如有凝集反应可见到呈红色点 状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有 无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低 倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见 红细胞聚集成团。
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血型抗原
判断血型 根据被试者红细胞是否被A， B型标准血清所凝集，判断其血型。
2.试管法(正定型)
A
B
A标准血清
2滴
B标准血清
2滴
受试者的红细胞悬液
1滴
1滴
混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。
取出观察结果:
完全凝集:管底部有红细胞的凝块，管底细胞 边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；
轻轻扣动试管底部，观察结果----同前
时间短 可发现较弱凝集
血型判定
正定型
反定型
抗A
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
-Hale Waihona Puke Baidu
-
B
+
+-
-
-
AB
凝胶微柱法
质量控制
人血清ABO血型抗体
高度特异性
效价 抗A不低于1:128 抗B不低于1:64 高亲和性 15秒内出现凝集，3min凝块
某些疾病如多发性骨髓瘤、慢性肝病患 者所致的高球蛋白血症可能使红细胞出 现凝集
标本无溶血
Rh血型鉴定
Reaction of antibodies
血型血清学检测的基本原理
凝聚胺实验
凝聚胺是带高价阳离子的季铵盐，溶解 后产生正电荷中和红细胞表面的负电荷， 减少红细胞表面的排斥力，有利于红细 胞凝集。
1、原理 血型抗体与对应红细胞抗 原在室温下的盐水介质中出现凝集 反应。通过离心，观察受血者血清 与供血者红细胞(主侧)以及受血者 红细胞与供血者血清(次侧)之间有 无凝集现象，判断受血者与供血者 之间有无ABO血型不合的情况。
红细胞血型系统交叉配血试验
交叉配血试验的内容
患
主侧配血
者
用患者血清与供
抗球蛋白介质配血 经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法
聚凝胺介质配血
凝胶方法配血
盐水介质配血方法
患
者
阳
主
性
侧 离心
次 看结果
献
侧
阴
血
性
者
只能检测IgM抗体，不能检测IgG抗体
凝聚胺(Polybrene)配血法
原理：凝聚胺分子是带高价阳离子多聚
季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中 和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝 聚，低离子强度溶液也能降低红细胞的 Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的 吸引力。
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
原理
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗 原，将血型分为A型、B型、AB型 及O型四种。通常利用红细胞凝集 试验，通过正定型和反定型鉴定 ABO血型。
血型鉴定
正定型是用已知抗A和抗B分型血清 来测定红细胞上有无相应的A抗原或 B抗原；
酶介质法
红细胞表面的唾液酸带负电荷，使用木 瓜酶或唾液酶破坏红细胞表面的唾液酸， 降低红细胞表面的负电荷，减少红细胞 表面的排斥力，促进Rh抗原与相应的抗 体结合而产生凝集。
低离子强度溶液实验
红细胞外围的阴离子是红细胞稳定因素 之一，降低反应介质的离子强度，可减 少外围阴离子，促进带正电荷的IgG性 Rh抗体与红细胞发生凝集反应，从而增 加凝集强度。
>1mm2 无冷凝集素 无菌
人ABO血型单克隆抗体
特异性 亲和性 抗A对A1/A2/A2B出现凝集时
间分别为15秒、30秒、45秒，抗B出现 时间为15秒 效价 抗A1和抗B均为1:128 灭活补体 否则可能发生溶血，影响血 性判断
被检红细胞
标本新鲜 细菌污染的红细胞上T抗原激 活，与标准血清中抗T抗体结合，发生凝 集