蛋白质及氨基酸的呈色反应
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
蛋白质和氨基酸的呈色反应
一、目的 1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。 2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、呈色反应
（一）双缩脲反应 1．原理 蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生 此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。一切蛋白质或 二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质 不一定都是蛋白质或多肽。
此反应的适宜pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜 色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
3．操作
（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液（鸡蛋清溶液）和甘氨酸溶液 1mL，再各加 0.5 mL 0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1～2 分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。 （2）在一小块滤纸上滴一滴0.5％甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一 滴0.1％茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色观察紫红色斑点的出现。
（三）黄色反应
1．原理 含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化 成黄ห้องสมุดไป่ตู้物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。反 应式如下：
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不 易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
3．操作
向7个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的 试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下 逐滴加入 10％氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。
（二）茚三酮反应
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及 一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和 肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反 应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定 量测定中，应严防干扰物存在。
2.操作 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化 的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10 ％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。 观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧 化铜能掩盖粉红色。 向另一试管加鸡蛋清溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约 2 mL，摇匀， 再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。
一、目的 1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。 2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、呈色反应
（一）双缩脲反应 1．原理 蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生 此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。一切蛋白质或 二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质 不一定都是蛋白质或多肽。
此反应的适宜pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜 色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
3．操作
（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液（鸡蛋清溶液）和甘氨酸溶液 1mL，再各加 0.5 mL 0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1～2 分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。 （2）在一小块滤纸上滴一滴0.5％甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一 滴0.1％茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色观察紫红色斑点的出现。
（三）黄色反应
1．原理 含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化 成黄ห้องสมุดไป่ตู้物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。反 应式如下：
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不 易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
3．操作
向7个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的 试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下 逐滴加入 10％氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。
（二）茚三酮反应
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及 一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和 肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反 应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定 量测定中，应严防干扰物存在。
2.操作 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化 的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10 ％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。 观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧 化铜能掩盖粉红色。 向另一试管加鸡蛋清溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约 2 mL，摇匀， 再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。