食用真菌-四川大学

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药用植物学_四川大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年

药用植物学_四川大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年

药用植物学_四川大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.药用植物菟丝子、列当等植物体内不含叶绿体,不能自制养料而完全依靠吸收寄主体内的养分维持生活,称半寄生植物。

参考答案:错误2.花序轴柔软下垂,其上着生许多无柄、无被或单被的单性小花,花后整个花序脱落,称为参考答案:柔荑花序3.药材中的根皮类,如地骨皮、牡丹皮等,是指参考答案:形成层以外的部分4.药用植物何首乌块根横切面上可看到一些大小不等的圆圈状的花状纹理,是其药材鉴别的重要特征,该特征是何首乌块根的参考答案:异常构造5.存在于被子植物根的初生构造中的维管束类型是参考答案:辐射维管束6.花序轴顶端生一花,然后在顶花下面一侧形成一侧枝,同样在枝端生花,侧枝上又可分枝着生花朵,如此连续分枝,称为参考答案:单歧聚伞花序7.下列哪种药用植物的腋芽常形成小块茎参考答案:山药8.真菌是一类典型的真核异养性植物,有细胞壁、细胞核、叶绿素和质体。

参考答案:错误9.花序轴肉质膨大而下陷呈囊状,其内壁着生多数无柄单性小花,称为头状花序。

参考答案:错误10.瘦果的果皮较薄而坚韧,内含一粒种子,成熟时果皮与种皮易分离。

参考答案:正确11.植物种加词是学名的主体,一般用拉丁名词的单数主格,首字母必须大写,斜体。

参考答案:错误12.蛋白核小球藻的营养价值很高,含丰富的蛋白质、维生素C、维生素B和抗生素(小球藻素)。

医疗上可用作营养剂,防治贫血、肝炎等。

参考答案:正确13.麦角制剂可用作子宫收缩及内脏器官出血的止血剂。

参考答案:正确14.下列哪种药用植物的根茎髓部具有呈点状的异型维管束参考答案:大黄15.块茎又称根状茎,常横卧地下,肉质膨大呈根状,有明显的节和节间,节上有退化的鳞片叶,先端有顶芽,节上有腋芽,向下常生不定根。

参考答案:错误16.规定每种植物学名主要由两个拉丁词组成,前一个词是某一植物所隶属的属名,第二个词是种加词,起着标志某一植物“种”的作用。

微生物考研方向及学校

微生物考研方向及学校

高校中微生物学的主要研究方向有:资源与应用微生物学病原微生物学微生物发酵与代谢工程生物防治微生物学环境微生物学真菌学微生物分子遗传与功能基因组学海洋微生物学1.资源与应用微生物学微生物资源是地球上三大生物资源之一,微生物资源开发与利用具有重要的意义。

许多高校已经把它作为一个独立的研究方向,并且也形成了各自的研究特色。

中科院微生物所,有微生物资源前期开发国家重点实验室,主要研究方向为微生物资源收集、微生物分类和功能评估、极端环境微生物。

该所有中国科学院院士5名,拥有一支具有国际竞争力的研究队伍,仪器装备达到了国际先进水平。

该所的微生物菌种保藏中心所保藏的菌种数量在国内首屈一指,真菌标本馆的标本数量则为亚洲之最。

云南大学,有教育部微生物资源研究开发重点实验室,主要研究领域有:放线菌生物学,微生物资源学,菌根生物学, 极端环境微生物学,其中放线菌方面研究处于全国先列,重点开展极端(重点是高温、高盐碱)环境或各种特殊环境(植物内生或海洋)下的放线菌资源收集、保存及分类学、系统学、生态学、生物地理学及其应用价值评估(活性筛选、代谢产物化学及酶学等)研究。

广西大学,有广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,主要研究方向是,利用广西省丰富的微生物资源发掘、鉴定和克隆具有特殊用途微生物的功能基因,并对重要功能基因进行改造和利用;发现、分离和克隆农作物抗病虫功能基因、构建抗病虫作物新种质。

中国农业大学,有农业部农业微生物资源及其应用重点实验室,主要研究领域有微生物分类及系统发育、微生物生理及遗传学、发酵工程、药用及食用真菌、环境微生物学、分子病毒学和分子免疫学等,微生物学专业师资力量雄厚,有中国科学院院士李季伦教授等多名著名教授。

四川大学,微生物学为省级重点学科,拥有资源微生物及微生物生物技术四川省重点实验室,主要研究方向:资源微生物,天然产物,生态环境保护。

西北农林科技大学,拥有西北农林科技大学微生物研究中心,主要研究方向之一微生物资源多样性及利用研究,包括极端环境条件微生物的菌种资源、基因资源及多样性研究;根瘤菌为主的固氮微生物多样性及利用。

这些真菌居然能吃

这些真菌居然能吃

这些真菌居然能吃真菌是一类生活在土壤中或其他有机物上的微生物,主要以分解有机物质为生。

人们常常将真菌与腐烂、毒性以及疾病联系在一起,很少将其与美味佳肴联系到一起。

但实际上,有些真菌种类是可以食用的,它们在烹饪领域有着重要的地位,并且带来了丰富的味道和营养。

本文将介绍一些能够食用的真菌种类及其特点。

1. 松茸松茸是一种珍贵的食用菌,被誉为真菌之王。

它生长在松树的树根附近,外形呈现坚实而肥厚的圆柱状。

松茸肉质鲜美,有着独特的香气和口感。

它富含蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质,对人体有很好的营养价值,被誉为“山珍之王”。

2. 牛肝菌牛肝菌是一种常见的食用菌,外观呈现棕色的球状或伞形,表面有网状纹理。

它的肉质坚实而鲜嫩,味道浓郁,可生吃或烹饪。

牛肝菌富含维生素B族、矿物质和蛋白质,对促进新陈代谢、增强免疫力等有益处。

3. 木耳菌木耳菌是一种常见的食用真菌,外形呈现黑褐色的扁平片状。

它富含纤维素、蛋白质、维生素B族和矿物质,对人体健康有好处。

木耳菌质地韧性十足,常用于烹饪中的凉拌、炒菜等菜肴中,具有清脆的口感和独特的风味。

4. 鸡腿菇鸡腿菇是一种形状独特的食用菌,外观呈现洁白色,并有类似鸡腿肉的形状。

它的肉质鲜嫩,口感柔软,富含蛋白质、纤维素和多种维生素。

由于其形状独特,鸡腿菇可以在烹饪中起到美化菜肴的作用,并且可口的口感让人回味无穷。

5. 干贝菇干贝菇是一种外观独特的真菌,呈现淡黄色或橘红色,形状像小贝壳。

干贝菇富含膳食纤维、蛋白质和多种微量元素,可以帮助促进肠道蠕动和消化功能。

干贝菇的肉质鲜嫩、口感鲜美,常常被用来烹制汤类、炒菜和火锅等菜肴。

除了上述列举的真菌种类,还有许多其他可以食用的真菌,如杏鲍菇、金针菇等。

这些真菌种类不仅丰富了菜肴的味道,还为人们提供了重要的营养素。

然而,尽管有些真菌是可以食用的,但也要注意选购安全、新鲜的品质,以确保食用过程中的健康与安全。

总结起来,真菌并不全都是有害的,还有一些真菌是可以食用的,并且拥有丰富的味道和营养。

四川大学2020级医学保健专业《营养和食品卫生学》综合能力测试卷 (含答案)

四川大学2020级医学保健专业《营养和食品卫生学》综合能力测试卷 (含答案)

四川大学2020级医学保健专业《营养和食品卫生学》综合能力测试卷考试时长:150分钟考试方式:闭卷班级学号姓名(一)单选题1.维持人体基本生命活动的热能是()。

A 体力活动耗能B 基础代谢C 非体力活动耗能D 食物特殊动力作用耗能2.容易在机体脂肪组织中贮存,排出缓慢,过量可导致中毒的维生素是()。

A 维生素B1B 维生素C C 维生素D D 维生素PP 3.断乳的最佳时期是( )A 4个月B 9~12个月C 8个月D 15个月4.多不饱和脂肪酸含量较多的食品是()A 海鱼B 江鱼 D 畜肉 D 禽肉5.膳食蛋白质中非必需氨基酸( )具有节约蛋氨酸的作用。

A 半胱氨酸B 酪氨酸C 精氨酸D 丝氨酸6.血胆固醇升高时,血中( )浓度增加。

A HDLB LDLC 糖蛋白D 球蛋白7.亚硝胺的稳定性在()中较好。

A 酸性环境B 中性及碱性环境C 中性及酸性环境D pH<48.根据动物最大无作用剂量,确定ADI时,考虑应用于人的安全系数,应为( )A 50倍B 10倍C 20倍D 100~1000倍9.维生素B2缺乏体征之一是( )A 脂溢性皮炎B 周围神经炎C “三D”症状D 牙龈疼痛出血10.黄曲霉毒素急性毒性损害主要是( )A 肝脏毒B 肾脏毒C 神经毒D 血液毒11.为了防止食品( ),延长食品可供使用的期限,常对食品进行加工处理,即食品保藏。

A 污染B 酸败C 腐败变质D 自溶12.婴幼儿和青少年的蛋白质代谢状况应维持( )A 氮平衡B 负氮平衡C 排出足够的尿素氮D 正氮平衡13.肉蛋等食品腐败变质有恶臭味,是食物中( )成份分解而致。

A 脂肪B 碳水化合物C 蛋白质D 纤维素14.蔬菜水果贮藏的关键是保持蔬菜水果的( )A 卫生B 冷藏C 防水D 新鲜度15.FAO用Engel指数划分贫困的标准是( )A >60% B、50-59% C 30% D 30%以下16.能促进钙吸收最经济的措施是( )A多吃蔬菜、水果 B 经常做理疗(热敷)C 多吃谷类食物D 经常在户外晒太阳17.能促进铁吸收的措施是( )A多吃动物血、肉类食品B多吃乳类食品C 多吃谷类食品D 多吃蔬菜、水果类食品18.促进非血红素铁吸收的因素是( )A 植酸盐B 肉因子C 草酸盐D 多酚类物质19.有机磷农药的主要急性毒性为()。

成都大学食品真题答案

成都大学食品真题答案

成都大学食品真题答案食品科学与工程专业真题答案成都大学食品科学与工程专业是该校理学院下设的一个重要学科专业。

以下是该专业部分真题的详细答案解析:1. 食品微生物学真题1【题目】请简述以下食品微生物的特点及其在食品加工和贮藏过程中的作用:•酵母菌•乳酸菌•枯草杆菌•大肠杆菌•黄曲霉菌【答案】 - 酵母菌:酵母菌是一类真菌,具有单细胞的特点。

在食品加工中,酵母菌通常被应用在酿酒、发酵面包和发酵乳制品的生产中,发挥着发酵作用。

在食品贮藏中,一些酵母菌会导致食品发霉,对食品的质量和安全性造成危害。

•乳酸菌:乳酸菌是一类革兰氏阳性菌,主要存在于发酵食品中。

在食品加工中,乳酸菌可以将蔗糖和乳糖等糖类发酵为乳酸,发酵食品中的乳酸可改善食品的口感、延长食品的保质期,并具有抗菌作用。

在食品贮藏中,乳酸菌可以抑制其他有害菌的生长,保持食品的新鲜和质量。

•枯草杆菌:枯草杆菌是一类耐热芽孢形成菌。

在食品加工中,枯草杆菌是一种常见的食源性病原菌,会引起食物中毒。

在食品贮藏中,枯草杆菌的芽孢能够抵抗环境中的极端条件,即使在高温下也能存活。

因此,在食品存储和加工过程中,要严格控制和预防枯草杆菌的污染,以确保食品的安全性。

•大肠杆菌:大肠杆菌是一类肠道内常见的细菌。

虽然大肠杆菌在肠道内对人体有益,但在食品加工和贮藏中,大肠杆菌的存在通常被视为食品受粪便污染的指示,因为它可能携带病原菌,例如致病性大肠杆菌。

食品中的大肠杆菌污染会导致食品中毒,因此在食品加工和贮藏过程中,必须严格控制大肠杆菌的存在。

•黄曲霉菌:黄曲霉菌是一种产生黄曲霉毒素的真菌。

黄曲霉菌在食品加工中可能导致食品发霉、变质,且会产生黄曲霉毒素,对人体健康有害。

黄曲霉菌常见于谷物、坚果和干燥的食品中。

在食品贮藏中,必须注意控制食品中黄曲霉菌的滋生,避免食品被黄曲霉菌污染。

2. 食品安全与卫生真题2【题目】请简述以下食品安全与卫生方面的概念,并阐述其在食品生产过程中的重要性:•HACCP(危害分析与关键控制点)系统•食品添加剂•食品中毒•食品过敏【答案】 - HACCP系统:HACCP是危害分析与关键控制点(英文全称:Hazard Analysis Critical Control Point)的缩写。

小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛

小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛

㊀Guihaia㊀Feb.2024ꎬ44(2):382-395http://www.guihaia-journal.comDOI:10.11931/guihaia.gxzw202211028易航ꎬ何静ꎬ杨希ꎬ等ꎬ2024.小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛[J].广西植物ꎬ44(2):382-395.YIHꎬHEJꎬYANGXꎬetal.ꎬ2024.DiversityanalysisofendophyticfungiandpreliminaryscreeningofantibacterialactivityinCamellialuteoflora[J].Guihaiaꎬ44(2):382-395.小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛易㊀航ꎬ何㊀静ꎬ杨㊀希ꎬ荣姝恬ꎬ王㊀丽∗(四川大学生命科学学院ꎬ成都610065)摘㊀要:为探究小黄花茶内生真菌种类和种群分布规律以及对植物病原真菌的抑制作用ꎬ该研究采用组织分离法对小黄花茶内生真菌进行分离纯化ꎬ基于形态学和分子生物学进行鉴定并结合统计学分析评价其多样性ꎬ再通过平板对峙法筛选出具有抑菌活性的菌株ꎮ结果表明:(1)从小黄花茶324份组织块中分离得到内生真菌261株ꎬ隶属1门5纲9目22属ꎬ其中优势属包括炭疽菌属(Colletotrichum)㊁间座壳属(Diaporthe)㊁拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)ꎬ分离频率分别为21.84%㊁16.86%㊁10.34%ꎮ(2)研究发现小黄花茶内生真菌在不同季节分布不同ꎬ冬季分离出的菌株数量最多ꎬ为72株(占27.59%ꎬ隶属16个属)ꎬ春季62株(隶属13个属)ꎬ夏季59株(隶属15个属)ꎬ秋季68株(隶属13个属)ꎬ冬季的香农-维纳指数(Hᶄ)㊁辛普森指数(D)㊁Pielou s均匀度指数(E)和Margalef s丰富度指数(M)最高ꎬ春季与冬季内生真菌种类相似性较高ꎬ夏季与秋季内生真菌种类相似性较高ꎮ(3)小黄花茶内生真菌不同部位分布不同ꎬ茎中内生真菌的分布最多ꎬ有102株(占39.08%ꎬ隶属15个属)ꎬ根61株(隶属10个属)ꎬ叶98株(隶属15个属)ꎻ茎的Hᶄ㊁D㊁E㊁M最高ꎬ叶部与茎部内生真菌种类最为相似ꎮ(4)平板对峙结果显示ꎬ在35株供试内生真菌中ꎬ有26株内生真菌至少对1种植物病原真菌有抑制作用ꎬ占74.29%ꎬ其中CJ ̄Ⅱ ̄2㊁XY ̄V ̄3㊁QY ̄Ⅱ ̄4㊁QJ ̄Ⅲ ̄2㊁DJ ̄I ̄2对8种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用ꎬXY ̄V ̄3对8种植物病原真菌的抑制效果最佳ꎬ抑菌率均高于50%ꎬXY ̄V ̄3和QJ ̄Ⅲ ̄2对2株小黄花茶病原真菌的抑菌率高于50%ꎬ具备防治小黄花茶自身病害的潜力ꎮ综上所述ꎬ小黄花茶内生真菌多样性丰富ꎬ部分菌株表现出较好的抑制植物病原真菌的作用ꎬ为生物防治产品的研发和小黄花茶病害的防治奠定了基础ꎮ关键词:小黄花茶ꎬ内生真菌ꎬ分离鉴定ꎬ多样性ꎬ抑菌活性中图分类号:Q945.8㊀㊀文献标识码:A㊀㊀文章编号:1000 ̄3142(2024)02 ̄0382 ̄14DiversityanalysisofendophyticfungiandpreliminaryscreeningofantibacterialactivityinCamellialuteofloraYIHangꎬHEJingꎬYANGXiꎬRONGShutianꎬWANGLi∗(CollegeofLifeSciencesꎬSichuanUniversityꎬChengdu610065ꎬChina)收稿日期:2023-03-16基金项目:四川省科技计划项目(川林规函[2021]959号 ̄002)ꎮ第一作者:易航(1998-)ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事野生动植物资源的保护㊁开发和利用研究ꎬ(E ̄mail)302925146@qq.comꎮ∗通信作者:王丽ꎬ教授ꎬ主要从事植物的起源和进化㊁细胞遗传㊁引种驯化等研究ꎬ(E ̄mail)yzxj@vip.163.comꎮAbstract:InordertoexplorethespeciesandpopulationdistributionofendophyticfungiinCamellialuteofloraꎬaswellastheirinhibitoryeffectsonplantpathogenicfungiꎬthisstudyusedtissueseparationmethodtoisolateandpurifyendophyticfungiinC.luteoflora.Thesefungiwereidentifiedbasedonmorphologyandmolecularbiologyꎬandtheirdiversitywasevaluatedthroughstatisticalanalysis.Thestrainswithantibacterialactivitywerescreenedoutbytheplateconfrontationmethod.Theresultswereasfollows:(1)Atotalof261strainsofendophyticfungiwereisolatedfrom324C.luteofloratissuesamplesꎬbelongingto1phylumꎬ5classesꎬ9ordersꎬand22genera.ThedominantgenerawereColletotrichumꎬDiaportheandPestalotiopsiswithisolationfrequenciesof21.84%ꎬ16.86%and10.34%ꎬrespectively.(2)ThedistributionofendophyticfungiinC.luteofloravariedindifferentseasons.Thehighestnumberofstrainswasisolatedinwinter(72strainsꎬaccountingfor27.59%ꎬbelongingto16genera)ꎬ62strainswereisolatedinspring(belongingto13genera)ꎬ59strainswereisolatedinsummer(belongingto15genera)ꎬand68strainswereisolatedinautumn(belongingto13genera).TheShannon ̄Wienerindex(Hᶄ)ꎬSimpsonindex(D)ꎬPielou sevennessindex(E)ꎬandMargalef srichnessindex(M)werethehighestinwinter.Thesimilarityofendophyticfungalspeciesbetweenspringandwinterwashigherꎬandthesimilaritybetweensummerandautumnwashigher.(3)ThedistributionofendophyticfungialsovariedindifferentpartsofC.luteoflora.Thestemshadthemostabundantendophyticfungiꎬwith102strainsaccountingfor39.08%(belongingto15genera)ꎬ61strainswereisolatedfromtheroots(belongingto10genera)ꎬand98strainswereisolatedfromtheleaves(belongingto15genera).TheHᶄꎬDꎬEꎬandMwerehighestinthestemsꎬandtheendophyticfungalspeciesintheleavesweremostsimilartothoseinthestems.(4)Theplateconfrontationresultsshowedthatamongthe35testedendophyticfungiꎬ26endophyticfungihadinhibitoryeffectsonatleastoneplantpathogenicfungiꎬaccountingfor74.29%ꎬamongwhichCJ ̄Ⅱ ̄2ꎬXY ̄V ̄3ꎬQY ̄Ⅱ ̄4ꎬQJ ̄Ⅲ ̄2andDJ ̄I ̄2hadinhibitoryeffectsoneightplantpathogenfungitovaryingdegrees.XY ̄V ̄3hadthebestinhibitoryeffectoneightplantpathogenicfungiꎬandtheinhibitoryratewashigherthan50%.XY ̄V ̄3andQJ ̄Ⅲ ̄2havehigherinhibitoryratethan50%ontwostrainsofpathogenicfungiinC.luteofloraꎬwhichhadthepotentialtocontroldiseaseofC.luteoflora.TosumupꎬthediversityofendophyticfungiinC.luteofloraisrichꎬandsomeofthestrainshavehighereffectofinhibitingplantpathogenicfungiꎬwhichlayafoundationfortheresearchanddevelopmentofbiologicalcontrolproductsandthediseasecontrolofC.luteoflora.Keywords:Camellialuteofloraꎬendophyticfungiꎬseparationandidentificationꎬdiversityꎬantibacterialactivity㊀㊀植物内生真菌是指生活史中的某一阶段或整个阶段ꎬ寄生在健康植物组织内部ꎬ但不会使宿主植物出现明显病害症状的微生物(Zhaoetal.ꎬ2011)ꎮ内生真菌与宿主植物形成互惠共生体ꎬ植物为内生真菌提供营养物质和栖息场所ꎬ内生真菌能够产生抑菌活性物质和促生性物质ꎬ保护宿主植物抵御病虫害ꎬ促进宿主植物的生长ꎬ两者协同进化ꎬ相互作用(Martinaetal.ꎬ2014)ꎮ研究发现ꎬ植物内生真菌种类繁多ꎬ分布广泛ꎬ其多样性体现在同一地区内同种植物在不同年龄段㊁不同部位以及所处的季节不同ꎬ分离得到的内生真菌种类和数量都不同ꎮ例如ꎬ王京等(2017)发现不同年龄段的侧柏(Platycladusorientalis)鳞叶内生真菌的多样性和相似性存在一定差异ꎻ李梦歌等(2018)发现陕西宜君核桃(Juglansregia)不同季节和不同组织部位其内生真菌多样性和相似性均不同ꎮ除此之外ꎬ不同地区的同种植物分离得到的内生真菌种类和数量也不相同ꎬ如周婀等(2023)统计分析了红河谷和蒿坪两地野生桃儿七(Sinopodophyllumhexandrum)内生真菌的多样性ꎬ发现蒿坪野生桃儿七内生真菌多样性要高于红河谷ꎮ因此ꎬ根据当地植物生长特点分析其内生真菌的多样性ꎬ筛选出优势菌株和特有菌株ꎬ是挖掘具有生防作用和其他功能性作用菌株的基础ꎮ内生真菌既可以产生抗病原真菌的次生代谢产物ꎬ如萜类㊁生物碱㊁黄酮等(Alyetal.ꎬ2010)ꎬ也能通过抢占生态位点和营养物质等竞争方式ꎬ抑制病原真菌的生长(宋金秋和田璨熙ꎬ2020)ꎮ同时ꎬ利用植物内生菌进行生物防治ꎬ具有无污染㊁无耐药性㊁安全可持续的优点ꎮ小黄花茶(Camellialuteoflora)ꎬ我国特有珍稀植物ꎬ隶属山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)ꎬ3832期易航等:小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛目前主要分布在贵州赤水市㊁四川古蔺县㊁长宁县等地区(杨雪ꎬ2014ꎻ陈锋和王馨ꎬ2016)ꎮ小黄花茶花色金黄ꎬ叶片宽厚ꎬ因其性状独特ꎬ具有较高的观赏价值ꎬ在园林绿化㊁盆栽㊁鲜切花领域都有不错的发展前景(邹天才ꎬ2000)ꎮ然而ꎬ小黄花茶病害严重ꎬ油茶饼病和鬼帚病是危害其植株健康的主要病害ꎬ对其经济和观赏价值造成了严重影响(刘清炳等ꎬ2005)ꎮ目前ꎬ针对小黄花茶病害的防治并没有得到深入的研究ꎬ如何安全有效地防治小黄花茶的病害ꎬ同时对其生境不造成破坏ꎬ是目前亟须解决的问题ꎮ小黄花茶作为濒危植物ꎬ对其内生真菌的多样性和抑菌活性进行研究ꎬ一方面能够回答其内生真菌由哪些种类组成ꎬ不同组织部位和不同季节的内生真菌的分布及多样性如何ꎬ哪些内生真菌属于优势菌株ꎮ加强对小黄花茶内生真菌资源的了解ꎬ为其内生真菌资源的开发做铺垫ꎮ另一方面ꎬ由于小黄花茶数量稀少ꎬ其病害的防治显得尤为重要ꎬ通过抑菌试验筛选出具有生防潜力的菌株ꎬ不仅能够为小黄花茶的病害防治开辟一条新的路径ꎬ同时还能缓解因化学防治对小黄花茶生境造成的影响ꎮ因此ꎬ本研究以小黄花茶为对象ꎬ采用组织分离法和分子生物学等方法ꎬ对小黄花茶内生真菌进行分离鉴定ꎬ分析其内生真菌的多样性ꎬ筛选出优势菌株和特有菌株ꎬ并通过小黄花茶内生真菌对植物病原真菌抑制作用的探究ꎬ筛选出具有广谱抑菌活性的菌株ꎬ为小黄花茶病害的防治以及小黄花茶内生真菌资源的进一步利用提供参考依据ꎮ1㊀材料与方法1.1试验材料1.1.1供试植物㊀小黄花茶样品于春(2021年4月)㊁夏(2021年7月)㊁秋(2021年10月)㊁冬(2022年1月)4个季节采自四川省古蔺县桂花乡汉溪村(海拔901mꎬ105ʎ41ᶄ17ᵡE㊁28ʎ10ᶄ52ᵡN)ꎬ随机选择5株健康的小黄花茶ꎬ每株采集其根㊁枝条㊁叶片各3份ꎬ装入无菌样品袋放入冰盒ꎬ带回实验室后于4ħ环境保存ꎮ1.1.2供试病原菌㊀8种供试植物病原真菌分别为茶叶轮斑菌(Pestalotiopsistheae)㊁尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)㊁串珠镰刀菌(F.moniliforme)㊁草莓炭疽菌(Colletotrichumfragariae)㊁油菜菌核菌(Sclerotiuasclerotiorum)㊁西瓜枯萎菌(Fusariumoxysporumf.sp.niveum)㊁小黄花茶致病菌(Colletotrichumcliviicola㊁Alternariaalternata)ꎬ由四川大学生命科学学院微生物实验室提供ꎮ1.1.3主要仪器㊀立式压力蒸汽灭菌器(LDZX ̄50KBSꎬ上海)㊁全温振荡器(HZQ ̄QXꎬ哈尔滨)㊁智能生化培养箱(SPXꎬ宁波)㊁电热恒温水浴锅(HSG ̄IC ̄2ꎬ浙江)㊁台式高速离心机(H1650 ̄Wꎬ湖南)㊁旋转蒸发仪(RE ̄5522ꎬ上海)ꎮ1.1.4主要试剂㊀无水乙醇㊁次氯酸钠溶液㊁乳酸酚棉蓝染色剂㊁马铃薯葡萄糖水(PDW)㊁真菌基因组DNA快速抽提试剂盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]㊁TaqPCRMix预混液(2X含蓝染料)㊁通用引物ITS1㊁ITS4[生工生物工程(上海)股份有限公司]㊁马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基(solarbioꎬ美国)ꎮ1.2试验方法1.2.1小黄花茶内生真菌的分离与纯化㊀首先ꎬ将小黄花茶根㊁茎㊁叶洗净后ꎬ进行表面消毒ꎬ将消毒后的组织切段ꎬ斜插入PDA培养基中ꎬ28ħ恒温暗培养ꎮ然后ꎬ待菌落长出后ꎬ挑取菌落边缘形态质地不同的菌丝于新的PDA培养基单独培养ꎬ反复操作2~3次ꎬ直至得到单一菌落ꎬ编号后拍照记录菌落特征ꎮ最后ꎬ将菌丝接入PDA斜面ꎬ28ħ培养一段时间后置于4ħ保存ꎮ表面消毒效果的检测:把最后一遍清洗液涂布在PDA培养基上ꎬ28ħ培养7d后未发现有菌落长出ꎬ说明表明消毒彻底ꎬ分离得到的菌株全部来自植株内部ꎬ属内生真菌ꎮ1.2.2小黄花茶内生真菌的鉴定1.2.2.1形态学鉴定㊀定期观察PDA培养基上的菌落生长状况和形态特征ꎬ包括形状㊁质地㊁颜色㊁生长速度等ꎮ菌落生长初期ꎬ挑取菌落边缘的菌丝孢子于载玻片上ꎬ用乳酸酚棉蓝染色剂进行染色ꎬ制成玻片后于光学显微镜下观察菌丝形态特征㊁是否产孢㊁产孢结构的形态特征㊁产孢方式及孢子形态㊁大小㊁颜色等ꎮ根据观察结果ꎬ参照«真菌鉴定手册»(魏景超ꎬ1979)和Illustratedgeneraofimperfectfungi(Barnett&Hunterꎬ1998)ꎬ结合张永杰等(2010)的方法进行鉴定ꎮ将鉴定后的内生真菌进行编号ꎬ前两位表示季节和部位的首字母缩写ꎬ中间的罗马数字表示所采植物的编号ꎬ最后一位数字表示所属组织块的编号ꎮ483广㊀西㊀植㊀物44卷1.2.2.2分子生物学鉴定㊀内生真菌DNA用真菌基因组DNA快速抽提试剂盒进行提取ꎬ于-20ħ保存ꎮ采用通用引物ITS1(5ᶄ ̄TCCGTAGGTGAACCTGCGC ̄3ᶄ)和ITS4(5ᶄ ̄TCCTCCGCTTATTGATATGC ̄3ᶄ)对提取的DNA进行PCR扩增ꎬ将扩增后的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳ꎬ条带明亮清晰的产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序ꎮ1.2.3小黄花茶内生真菌的系统进化分析㊀测序后的内生真菌ITS序列在NCBI数据库中进行BLAST(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)比对分析ꎬ在MEGA11软件中使用邻接法(neighbor ̄joiningꎬNJ)构建系统发育树ꎬ重复计算1000次ꎬ确定真菌的分类地位(Kumaretal.ꎬ2016)ꎮ1.2.4小黄花茶内生真菌的多样性分析㊀分别统计小黄花茶内生真菌的定殖率(colonizationrateꎬCR)㊁分离率(isolationrateꎬIR)㊁分离频率(isolationfrequencyꎬIF)㊁辛普森指数(Simpson sdiversityꎬD)㊁香农-维纳指数(Shannon ̄WeinerdiversityindexꎬHᶄ)㊁Pielou s均匀度指数(Pielou sevennessindexꎬE)㊁Margalef s丰富度指数(Margalef srichnessindexꎬM)ꎬ并基于小黄花茶内生真菌的种类组成ꎬ使用SPSS24.0软件对不同季节和部位的内生真菌进行聚类分析ꎮ通过以上数据分析小黄花茶内生真菌的多样性㊁优势种群㊁分布的均匀程度㊁丰富度ꎬ以及不同季节和部位间的相似水平ꎮ定殖率(CR):长真菌的组织块数量与分离的组织块总数的比值ꎬ反映植物受真菌浸染的程度ꎮ分离率(IR):某一类菌株的数量与分离的组织块总数的比值ꎬ用于度量组织中真菌的丰度以及组织块受浸染的频率ꎮ分离频率(IF):某一类菌株的数量与分离得到的菌株总数的比值ꎬ反映不同种类内生真菌的优势程度ꎮ辛普森指数(D):反映群落中物种的优势度或多样性ꎮD=1-ðSi=1P2iꎬPi=NiNꎮ香农-维纳指数(Hᶄ):反映群落种类的多样性ꎮHᶄ=-ðSi=1PiˑlnPiꎬPi=NiNꎮMargalef s丰富度指数(M):反映群落中物种的丰富度ꎮM=S-1log2NꎮPielou s均匀度指数(E):反映物种在群落中分布的均匀程度ꎮE=HᶄlnSꎮ以上式中:Ni表示不同季节或部位内生真菌i的数量ꎻN为菌株总数ꎻS为物种数ꎮ1.2.5小黄花茶内生真菌抑菌作用㊀采用平板对峙培养法测定小黄花茶内生真菌的抑菌活性ꎬ用直径为6mm的打孔器将35株供试内生真菌和8株病原菌菌株打菌饼ꎬ再将8株病原菌菌饼与35株内生真菌菌饼一一对应ꎬ接种至同一PDA培养基的对称位置ꎬ每个处理重复3次ꎬ以单独接种病原菌的PDA培养基作为对照ꎬ28ħ暗培养7dꎮ之后用十字交叉法测量病原菌对峙培养的趋向半径(r)和单独培养的半径(R)ꎬ计算抑菌率并筛选出具有抑菌性的内生真菌ꎮ抑菌率=R-rRˑ100%ꎮ分级标准:抑菌率>75%为强ꎬ50%~75%为中ꎬ10%~50%为低ꎬ<10%为无ꎮ2㊀结果与分析2.1小黄花茶内生真菌的分离从小黄花茶324份组织块中分离得到内生真菌261株ꎬ由表1可知ꎬ小黄花茶内生真菌的总定殖率和总分离率分别为71.30%和80.55%ꎮ从定殖率来看ꎬ不同部位内生真菌定殖率不同ꎬ最高的部位为茎(88.89%)ꎬ其次为叶(81.48%)ꎬ根最低(43.52%)ꎻ不同季节定殖率也不同ꎬ冬季最高(75.31%)ꎬ秋季第二(72.84%)ꎬ其次为春季(69.14%)ꎬ夏季最低(67.90%)ꎮ分离率从高到低依次为茎(94.44%)>叶(90.74%)>根(56.48%)ꎬ冬(88.89%)>秋(83.95%)>春(76.54%)>夏(72.83%)ꎮ分离频率茎最高ꎬ占39.08%ꎻ叶其次ꎬ占37.55%ꎻ根最低ꎬ占23.37%ꎮ按季节从高到低依次为冬(27.59%)>秋(26.05%)>春(23.75%)>夏(22.61%)ꎮ2.2小黄花茶内生真菌的种群组成将提取出的真菌基因组DNA以ITS1和ITS45832期易航等:小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛表1㊀小黄花茶不同季节和部位内生真菌统计结果Table1㊀StatisticalresultsofendophyticfungiindifferentseasonssandpartsofCamellialuteoflora部位/季节Part/Season组织块数Numberoftissuesegments长菌组织块数Numberoftissuesegmentswithfungi内生真菌数Numberofendo ̄phyticfungi定殖率Coloni ̄zationrate(%)分离率Isolationrate(%)分离频率Isolationfrequency(%)根Root108476143.5256.4823.37茎Stem1089610288.8994.4439.08叶Leaf108889881.4890.7437.55春Spring81566269.1476.5423.75夏Summer81555967.9072.8322.61秋Autumn81596872.8483.9526.05冬Winter81617275.3188.8927.59为引物进行扩增ꎬ得到长度为500~750bp的扩增片段ꎻ经测序后将测序结果在GenBank数据库中进行BLAST比对ꎬ根据比对结果利用MEGA11软件ꎬ取相似性大于99%的序列构建系统进化树(图1)ꎻ结合纯化后菌落的颜色㊁形态㊁质地以及显微镜下孢子和菌丝的形态ꎬ鉴定为35个种ꎬ隶属1门5纲9目22属(小黄花菜内生真菌组成如表2所示ꎬ显微形态图和菌落图如图2和图3所示)ꎮ由表2可知ꎬ小黄花茶内生真菌全部来自子囊菌门(Ascomycota)ꎮ以纲为单位划分ꎬ其中粪壳菌纲(Sordariomycetes)为优势纲ꎬ共有内生真菌197株ꎬ占总菌株数的75.48%ꎻ散囊菌纲(Eurotiomycetes)共有内生真菌20株ꎬ占总菌株数的7.66%ꎻ座囊菌纲(Dothideomycetes)共有内生真菌21株ꎬ占总菌株数的8.05%ꎻ锤舌菌纲(Leotiomycetes)共有内生真菌20株ꎬ占总菌株数的7.66%ꎻ刺盾炱纲(Chaetothyriomycetes)共有内生真菌3株ꎬ占总菌株数的1.15%ꎮ小黄花茶内生真菌在目水平上的组成包括9个目ꎬ分别为炭角菌目(Xylariales)㊁肉座菌目(Hypocreales)㊁间座壳菌目(Diaporthales)㊁刺盘孢目(Glomerellales)㊁散囊菌目(Eurotiales)㊁煤炱目(Capnodiales)㊁格孢腔目(Pleosporales)㊁柔膜菌目(Helotiales)㊁刺盾炱目(Chaetothyriales)ꎮ其中ꎬ优势目为炭角菌目㊁刺盘孢目㊁间座壳菌目ꎬ分别占总菌株数的26.47%㊁21.84%㊁18.77%ꎮ小黄花茶内生真菌在属水平上的组成包括拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)㊁炭团菌属(Hypoxylon)㊁Annulohypoxylon㊁炭角菌属(Xylaria)㊁毛壳菌属(Chaetomium)㊁多节孢属(Nodulisporium)㊁色孢子节菱孢菌属(Arthrinium)㊁镰刀菌属(Fusarium)㊁土赤壳属(Ilyonectria)㊁间座壳属(Diaporthe)㊁拟茎点霉属(Phomopsis)㊁炭疽菌属(Colletotrichum)㊁青霉属(Penicillium)㊁隐囊菌属(Aphanoascus)㊁背芽突霉属(Cadophora)㊁叶点霉属(Phyllosticta)㊁枝孢菌属(Cladosporium)㊁Acrocalymma㊁柔盘菌属(Hymenoscyphus)㊁柱霉属(Scytalidium)㊁无柄盘菌属(Pezicula)㊁Herpotrichiellaceae共22个属ꎮ其中ꎬ优势属为炭疽菌属㊁间座壳属㊁拟盘多毛孢属ꎬ分别占菌株总数的21.84%㊁16.86%㊁10.34%ꎮ2.3小黄花茶内生真菌生态分布2.3.1不同季节内生真菌分布㊀如图4所示ꎬ春季分离出的内生真菌包含13个属ꎬ夏季包含15个属ꎬ秋季包含13个属ꎬ冬季包含16个属ꎮ4个季节共有属分别是隐囊菌属㊁炭疽菌属㊁间座壳属㊁镰刀菌属㊁炭团菌属㊁炭角菌属㊁拟盘多毛孢属㊁无柄盘菌属㊁叶点霉属ꎮ仅于春季组织中分离到的属有1个ꎬ为柔盘菌属ꎻ仅于夏季组织中分离到的属有3个ꎬ分别为柱霉属㊁Acrocalymma㊁Herpotrichiellaceaeꎻ仅于秋季组织中分离到的属为Annulohypoxylonꎻ仅于冬季组织中分离到的属有2个ꎬ分别为毛壳菌属㊁色孢子节菱孢菌属ꎮ春季分离出的特有菌株为Helotialessp.和Diaporthediscoidisporaꎻ夏季分离出的特有菌株为Herpotrichiellaceaesp.2KO ̄2013㊁Scytalidiumauriculariicola㊁Acrocalymmamedicaginisꎻ秋季分离出的特有菌株为Annulohypoxylonstygium和Colletotrichumcamelliaeꎻ冬季分离出的特有菌株为Chaetomiumsubaffine㊁Arthriniumarundinis㊁Pestalotiopsischamaeropis㊁P.microsporaꎮ春季和夏季的共有菌株有12种ꎬ春季和秋季的共有菌株有16种ꎬ春季和冬季的共有菌株有15种ꎬ夏季和秋季的共有菌株有11种ꎬ夏季和冬季的共有菌株有14种ꎬ秋季和冬季的共有菌株有14种ꎮ2.3.2不同部位内生真菌分布㊀如图4所示ꎬ茎部分离出的内生真菌包含15个属ꎬ叶部包含18个683广㊀西㊀植㊀物44卷图1㊀基于小黄花茶内生真菌rDNA ̄ITS序列构建的NJ系统发育树Fig.1㊀NJphylogenetictreeconstructedbasedonrDNA ̄ITSsequenceofendophyticfungiofCamellialuteoflora属ꎬ根部包含10个属ꎮ3个部位共有的属分别是隐囊菌属㊁炭疽菌属㊁间座壳属㊁炭团菌属㊁土赤壳属㊁无柄盘菌属㊁炭角菌属ꎮ从根分离到的特有属为柔盘菌属和Herpotrichiellaceaeꎻ茎分离到的特有属为Acrocalymmaꎻ叶分离到的特有属为柱霉属㊁Annulohypoxylon㊁毛壳菌属㊁色孢子节菱孢菌属ꎮ根分离出的特有菌株为Helotialessp.和Herpotrichiellaceaesp.2KO ̄2013ꎻ茎分离出的特有菌株为Diaporthediscoidispora㊁Acrocalymmamedicaginis㊁Colletotrichumpseudomajusꎻ叶分离出的特有菌株为Scytalidiumauriculariicola㊁Annulohypoxylonstygium㊁Chaetomiumsubaffine㊁Arthriniumarundinisꎮ根和茎的共有菌株有10种ꎬ根和叶的共有菌株有8种ꎬ茎和叶的共有菌株有20种ꎮ7832期易航等:小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛表2㊀小黄花茶内生真菌的种类组成Table2㊀ClassificationstatusofendophyticfungistrainsofCamellialuteoflora分类名称Categoryname代表菌株RepresentativestrainBALST相似性最高菌株TopBALSTsimilarstrain登录号No.Acc.同源性Homology(%)分离频率IF(%)分离率IR(%)子囊菌门Ascomycota刺盾炱纲Chaetothyriomycetes刺盾炱目ChaetothyrialesHerpotrichiellaceaeXG ̄V ̄2Herpotrichiellaceaesp.2KO ̄2013AB847008.1990.380.31背芽突霉属CadophoraQG ̄IV ̄3CadophoraorchidicolaMG062775.11000.770.62锤舌菌纲Leotiomycetes柔膜菌目Helotiales柔盘菌属HymenoscyphusCG ̄Ⅱ ̄1Helotialessp.KX440158.1990.380.31无柄盘菌属PeziculaDG ̄I ̄11PeziculaericaeMT626580.11006.705.56柱霉属ScytalidiumXY ̄V ̄3ScytalidiumauriculariicolaGU591744.1990.380.31粪壳菌纲Sordariomycetes炭角菌目Xylariales拟盘多毛孢属PestalotiopsisDJ ̄Ⅲ ̄9Pestalotiopsissp.MT102582.1994.984.01DJ ̄Ⅱ ̄1P.chamaeropisMH425902.1991.150.93DJ ̄IV ̄4P.microsporaKM041703.1990.770.62DJ ̄IV ̄10P.oxyanthiKP900246.1993.452.78炭团菌属HypoxylonQJ ̄Ⅲ ̄2HypoxylonfragiformeKY703399.11008.056.48AnnulohypoxylonQY ̄Ⅱ ̄4AnnulohypoxylonstygiumMW504640.1990.770.62炭角菌属XylariaDJ ̄I ̄4XylariaarbusculaMZ853489.1994.603.70毛壳菌属ChaetomiumDY ̄IV ̄1ChaetomiumsubaffineMW008023.1990.770.62多节孢属NodulisporiumDY ̄Ⅱ ̄1Nodulisporiumsp.LC505317.1991.531.23色孢子节菱孢菌属ArthriniumDY ̄V ̄3ArthriniumarundinisMZ400522.1990.380.31肉座菌目Hypocreales镰刀菌属FusariumDJ ̄I ̄2FusariumgraminearumMZ648312.11004.984.01土赤壳属IlyonectriaXG ̄Ⅲ ̄4IlyonectrialiriodendriMF445151.1993.452.78间座壳菌目Diaporthales间座壳属DiaportheCG ̄IV ̄11DiaporthehongkongensisMZ617453.1999.587.72CJ ̄Ⅱ ̄2D.phaseolorumMT043783.1993.452.78DY ̄IV ̄12D.amygdaliMK511798.1991.921.54DY ̄Ⅲ ̄5D.biguttulataMT877049.1991.150.93CJ ̄IV ̄6D.discoidisporaMH371253.1990.770.62拟茎点霉属PhomopsisQJ ̄I ̄8Phomopsissp.MG832539.1991.921.54刺盘孢目Glomerellales炭疽菌属ColletotrichumQJ ̄V ̄4ColletotrichumpseudomajusJX009424.1991.150.93QJ ̄IV ̄7C.crassipesKY283783.1991.531.23CY ̄Ⅲ ̄3C.boninenseMZ702124.11006.134.94CJ ̄I ̄8C.acutatumMN429239.11002.682.16QY ̄IV ̄3C.camelliaeMK041380.11000.770.62CJ ̄V ̄1C.siamenseMW647834.1991.921.54XY ̄I ̄7C.gloeosporioidesKP900263.11007.666.17散囊菌纲Eurotiomycetes散囊菌目Eurotiales青霉属PenicilliumDJ ̄V ̄5PenicilliumherqueiOM278352.1991.921.54隐囊菌属AphanoascusQY ̄Ⅱ ̄6AphanoascusverrucosusMW617041.1995.754.63座囊菌纲Dothideomycetes煤炱目Capnodiales叶点霉属PhyllostictaXY ̄Ⅲ ̄5PhyllostictacapitalensisMG954332.11006.134.94枝孢菌属CladosporiumXY ̄Ⅱ ̄2CladosporiumcladosporioidesJX406506.11001.150.93格孢腔目PleosporalesAcrocalymmaXJ ̄Ⅱ ̄1AcrocalymmamedicaginisMW081367.11000.770.62883广㊀西㊀植㊀物44卷A.CJ ̄Ⅱ ̄2孢子和菌丝ꎻB.QY ̄IV ̄3孢子和菌丝ꎻC.DJ ̄Ⅲ ̄9孢子和菌丝ꎻD.XJ ̄Ⅱ ̄1孢子和菌丝ꎮA.SporesandmyceliaofCJ ̄Ⅱ ̄2ꎻB.SporesandmyceliaofQY ̄IV ̄3ꎻC.SporesandmyceliaofDJ ̄Ⅲ ̄9ꎻD.SporesandmyceliaofXJ ̄Ⅱ ̄1.图2㊀小黄花茶部分内生真菌孢子和菌丝显微形态图Fig.2㊀MicroscopicmorphologyofsporesandmyceliaofpartialendophyticfungiinCamellialuteoflora图3㊀小黄花茶内生真菌菌落图Fig.3㊀EndophyticfungicolonydiagramsofCamellialuteoflora2.3.3小黄花茶内生真菌的多样性分析㊀根据小黄花茶不同季节内生真菌的多样性指数结果(图5)可知ꎬD从高到低的顺序为冬(0.944)>春(0.929)>秋(0.926)>夏(0.919)ꎻHᶄ为冬(3.027)>春(2.820)>秋(2.813)>夏(2.670)ꎻM为冬(3.728)>春(3.359)>秋(3.285)>夏(2.890)ꎻE为冬(0.952)>春(0.926)>夏(0.923)>秋(0.906)ꎮ根据小黄花茶不同部位内生真菌的9832期易航等:小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛图4㊀小黄花茶内生真菌不同季节和部位属的相对丰度Fig.4㊀RelativeabundancesofendophyticfungiindifferentseasonsandpartsofCamellialuteoflora图5㊀小黄花茶内生真菌多样性分析Fig.5㊀DiversityanalysisofendophyticfungiinCamellialuteoflora多样性指数结果(图5)可知ꎬD从高到低的顺序为茎(0.947)>叶(0.936)>根(0.887)ꎻHᶄ为茎(3.116)>叶(2.958)>根(2.337)ꎻM为茎(3.897)>叶(3.628)>根(2.023)ꎻE为茎(0.945)>叶(0.919)>根(0.911)ꎮ小黄花茶内生真菌不同季节间ꎬ冬季种群数量最丰富且均匀程度高ꎻ不同部位间茎部093广㊀西㊀植㊀物44卷图6㊀基于种类组成的小黄花茶内生真菌不同季节和部位的聚类图Fig.6㊀ClusteringdiagramofendophyticfungiindifferentseasonsandpartsofCamellialuteoflorabasedonspeciescomposition种群数量最丰富且均匀程度高ꎬ根部内生真菌菌群单一且稳定性弱ꎮ2.3.4小黄花茶内生真菌相似性分析结果㊀基于小黄花茶内生真菌种类组成ꎬ以欧式平方距离为标准ꎬ采用组间连接法进行聚类分析ꎬ衡量不同季节和部位间小黄花茶内生真菌组成的相似性ꎮ由图6可知ꎬJ㊁Y㊁G分别代表茎㊁叶㊁根ꎬC㊁D㊁X㊁Q分别代表春㊁冬㊁夏㊁秋ꎬ其中J㊁Y㊁G集聚为一类ꎬC㊁D㊁X㊁Q聚集为一类ꎬ显示为部位和季节两大类别ꎬ这两大类别小黄花茶内生真菌组成差异明显ꎮ在部位类别中ꎬ茎部和叶部的内生真菌组成相似性最高ꎬ根部和这两个部位内生真菌组成差异明显ꎻ在季节类别中ꎬ春季和冬季内生真菌组成相似性较高ꎬ夏季和秋季内生真菌组成相似性较高ꎬ春冬两季和夏秋两季内生真菌组成差异明显ꎮ2.4小黄花茶内生真菌抑菌作用结果平板对峙结果(表3)表明ꎬ在35株供试内生真菌中ꎬ有26株内生真菌至少对1种病原真菌有抑制作用ꎬ占74.29%ꎮ对茶叶轮斑菌㊁串珠镰刀菌㊁草莓炭疽菌㊁尖孢镰刀菌㊁西瓜枯萎菌㊁油菜菌核菌㊁Colletotrichumcliviicola㊁Alternariaalternata具有抑菌活性的菌株分别占总数的17.14%㊁25.71%㊁37.14%㊁25.71%㊁20.00%㊁34.29%㊁42.86%㊁25.71%ꎮ有5株内生菌抑菌性较强且具有广谱抑菌作用ꎬ分别为CJ ̄Ⅱ ̄2㊁XY ̄V ̄3㊁QY ̄Ⅱ ̄4㊁QJ ̄Ⅲ ̄2㊁DJ ̄I ̄2ꎮ其中ꎬXY ̄V ̄3对8种病原真菌的抑菌率均高于50%ꎬ对草莓炭疽菌㊁西瓜枯萎菌㊁Alternariaalternata的抑制作用最强ꎬ抑菌率分别为76.31%㊁80.64%㊁77.49%ꎻDJ ̄I ̄2对油菜菌核菌和草莓炭疽菌的抑制作用最强ꎬ抑菌率分别为82.16%和78.43%ꎻQJ ̄Ⅲ ̄2对串珠镰刀菌的抑制作用最强ꎬ抑菌率高达75.41%(图7)ꎮ3㊀讨论与结论本研究分4个季节从小黄花茶根㊁茎㊁叶3个部位分离得到内生真菌261株ꎬ通过形态学特征㊁显微观察以及ITS序列分析鉴定为22个属ꎬ其中优势属为炭疽菌属㊁间座壳属和拟盘多毛孢属ꎬ这一结果与山茶科山茶属植物油茶(Camelliaoleifera)内生真菌的优势菌属相似(张婷等ꎬ2017)ꎮ小黄花茶内生真菌与同一纬度相邻地区的贵州赤水桫椤保护区桫椤(Alsophilaspinulosa)内生真菌所共有的属包括色孢子节菱孢菌属㊁枝孢菌属㊁炭疽菌属㊁镰刀菌属㊁炭团菌属㊁拟盘多毛孢属㊁拟茎点霉属㊁炭角菌属共8个属(刘永兰等ꎬ2021)ꎬ而与采自自贡的茶树(Camelliasinensis)的内生真菌共有属只有4个ꎬ即毛壳菌属㊁炭疽菌属㊁镰刀菌属㊁青霉属(游见明ꎬ2009)ꎬ由于地理位置相距较远ꎬ小黄花茶的内生真菌和所处同一属植物茶树的内生真菌组成差异较大ꎬ而与生长环境相近的桫椤的内生真菌组成更相似ꎬ说明环境对于植物内生真菌的组成具有较大的影响ꎮ小黄花茶分离出的35个菌株中ꎬ除Aphanoascusverrucosus(QY ̄Ⅱ ̄6)和Scytalidiumauriculariicola(XY ̄V ̄3)外ꎬ有33株在其他植物内生真菌中有分布ꎮ小黄花茶内生真菌总的定殖率和分离率分别为71.30%和80.55%ꎬ与同为南方地区的植物白花曼陀罗(Daturametel)和南方红豆杉(Taxuswallichianavar.mairei)的定殖率相近(臧威等ꎬ2014ꎻ冯美茹ꎬ2021)ꎬ但略高于北方地区生长的植物ꎬ可能与南方热带和亚热带地区降水量大ꎬ空气湿度高ꎬ更适宜内生真菌在植物体内浸染定殖有关(Porras ̄Alfaro&Baymanꎬ2011)ꎮ小黄花茶叶部和茎部内生真菌定殖率和分离率相似ꎬ高于根1932期易航等:小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛表3㊀小黄花茶内生真菌对8株病原真菌的抑制作用统计Table3㊀StatisticsofinhibitoryeffectsofendophyticfungioneightpathogenicfungiCamellialuteoflora菌株编号Strainnumber茶叶轮斑菌Pestalotiopsistheae串珠镰刀菌Fusariummoniliforme草莓炭疽病菌Colletotrichumfragariae尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum西瓜枯萎菌Fusariumoxysporumf.sp.niveum油菜菌核菌SclerotiuasclerotiorumColletotrichumcliviicolaAlternariaalternataCG ̄Ⅱ ̄1--------CG ̄IV ̄11--------CY ̄Ⅲ ̄3--+-----CJ ̄IV ̄6------+-CJ ̄Ⅱ ̄2++++++++++CJ ̄V ̄1-----+--CJ ̄I ̄8-+------XG ̄Ⅲ ̄4--+----+XG ̄V ̄2--------XY ̄Ⅲ ̄5--------XY ̄V ̄3+++++++++++++++++++XY ̄I ̄7------+-XY ̄Ⅱ ̄2-------+XJ ̄Ⅱ ̄1--------QG ̄IV ̄3---+----QY ̄Ⅱ ̄6----+---QY ̄Ⅱ ̄4+++++++++++QY ̄IV ̄3--+--++--QJ ̄I ̄8-+----+-QJ ̄Ⅲ ̄2++++++++++++++QJ ̄V ̄4--------QJ ̄IV ̄7--+---+-DG ̄I ̄11--------DY ̄IV ̄1-----++--DY ̄IV ̄12--+++-++++DY ̄V ̄3+++++-+-++DY ̄Ⅱ ̄1--+-----DY ̄Ⅲ ̄5------+-DJ ̄Ⅲ ̄9--+--+--DJ ̄I ̄2+++++++++++++++++DJ ̄I ̄4-+------DJ ̄Ⅱ ̄1----+---DJ ̄V ̄5--------DJ ̄IV ̄4---+-+++-DJ ̄IV ̄10-+---+--㊀注:+++表示抑制率ȡ75%ꎻ++表示50%ɤ抑制率<75%ꎻ+表示25%ɤ抑制率<50%ꎻ-表示无抑制作用ꎮ㊀Note:+++indicatesinhibitionrateȡ75%ꎻ++indicates50%ɤinhibitionrate<75%ꎻ+indicates25%ɤinhibitionrate<50%ꎻ-indicatesnoinhibition.293广㊀西㊀植㊀物44卷A.XY ̄V ̄3对西瓜枯萎菌ꎻB.XY ̄V ̄3对AlternariaalternataꎻC.XY ̄V ̄3对草莓炭疽病菌ꎻD.DJ ̄I ̄2对草莓炭疽病菌ꎻE.DJ ̄I ̄2对油菜菌核菌ꎻF.QJ ̄Ⅲ ̄2对串珠镰刀菌ꎮA.XY ̄V ̄3confrontationFusariumoxysporumf.sp.niveumꎻB.XY ̄V ̄3confrontationAlternariaalternataꎻC.XY ̄V ̄3confrontationColletotrichumfragariaeꎻD.DJ ̄I ̄2confrontationC.fragariaeꎻE.DJ ̄I ̄2confrontationSclerotiuasclerotiorumꎻF.QJ ̄Ⅲ ̄2confrontationFusariummoniliforme.图7㊀部分菌株的平板对峙图Fig.7㊀Confrontationpicturesofsomestrains部ꎬ多样性指数排序为茎部>叶部>根部ꎬ说明小黄花茶内生真菌对小黄花茶组织部位具有一定的偏好性ꎬ可能是由于小黄花茶叶和茎的养分与空间更加充足ꎬ更适宜内生真菌浸染定殖ꎮ小黄花茶不同季节中ꎬ秋冬季的内生真菌定殖率和分离率大于春夏季ꎬ多样性指数也是秋冬季大于春夏季ꎬ与贵州马尾松(Pinusmassoniana)(罗鑫和于存ꎬ2021)和贵州艾纳香(Blumeabalsamifera)(唐青等ꎬ2017)内生真菌多样性研究结果相近ꎬ小黄花茶耐阴喜湿ꎬ分布于四川古蔺与贵州赤水接壤的地区ꎬ该地区秋季降雨量大ꎬ9 12月平均气温17ħ(翁玲等ꎬ2010)ꎬ同时秋冬季为小黄花茶的花果期(郭能彬等ꎬ2006)ꎬ植物内部营养物质积累和激素水平变化较大(孙红梅等ꎬ2017)ꎬ可能也是小黄花茶内生真菌在秋冬季生长更活跃的一个原因ꎮ小黄花茶内生真菌聚类分析结果显示ꎬ春季和冬季内生真菌组成相似性较高ꎬ夏季和秋季内生真菌组成相似性较高ꎬ春冬两季和夏秋两季内生真菌组成差异明显ꎬ植物内部环境随季节的变化而变化ꎬ间接影响植物内生真菌的组成ꎬ这是植物内生真菌随季节环境不断变化而长期协调进化的结果(张林平等ꎬ2013)ꎮ茎部和叶部的内生真菌组成最相似ꎬ与根部的组成差异较大ꎬ这是由于植物不同组织器官之间的微环境不同ꎬ包括化学成分㊁空间大小和通气状况等ꎬ直接影响了植物不同组织器官内生真菌的类群组成(Vesterlundetal.ꎬ2011)ꎮ平板对峙结果表明ꎬ有26株内生真菌至少对1种植物病原真菌有抑制作用ꎬ有5株内生真菌对8种植物病原菌均有不同程度的抑制作用ꎬ分别为Diaporthephaseolorum(CJ ̄Ⅱ ̄2)㊁Scytalidiumauriculariicola(XY ̄V ̄3)㊁Hypoxylonfragiforme(QJ ̄Ⅲ ̄2)㊁Fusariumgraminearum(DJ ̄Ⅰ ̄2)和Annulohypoxylonstygium(QY ̄Ⅱ ̄4)ꎮScytalidiumauriculariicola(XY ̄V ̄3)对8株病原真菌均有较强的抑制作用ꎬ抑菌率均高于50%ꎮAhmad等(2020)发现柱霉属真菌S.parasiticum能够产生具有抗真菌活性的生物碱㊁黄酮类㊁脂肪酸等次生代谢产物ꎮ由此可推断ꎬ柱霉属真菌的次生代谢产物丰富多样ꎬ在抑制其他真菌的生长方面具有较强的作用ꎮ本研究表明Fusariumgraminearum(DJ ̄Ⅰ ̄2)对油菜菌核菌和草莓炭疽菌的抑制作用较强ꎬ对油菜菌核菌的抑制率为82.16%ꎮ付洁等(2006)发现F.graminearum的次生代谢产物对油菜菌核菌有较强的抑制作用ꎬ与本研究的结果相近ꎮJin等(2022)发现ꎬ与Hypoxylonfragiforme同属的山核桃(Caryacathayensis)内生真菌Hypoxylonspp.的次生代谢产物能抑制3株植物病原真菌的3932期易航等:小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛生长ꎻBecker等(2020)发现ꎬ与Annulohypoxylonstygium同属的真菌A.viridistratum的次生代谢产物对白色念珠菌(Candidaalbicans)和冻土毛霉菌(Mucorhiemalis)等真菌有较强的抑制作用ꎮ这说明ꎬAnnulohypoxylon和炭团菌属真菌的次生代谢产物具备生物防治的潜力ꎮ因此ꎬ后续可进一步对这5株内生真菌的抑菌机理进行研究ꎬ从而为其开发利用以及小黄花茶病害的防治提供理论支撑ꎮ本研究的8株植物病原真菌中ꎬColletotrichumcliviicola和Alternariaalternata为小黄花茶的致病菌ꎬColletotrichumcliviicola能使小黄花茶叶片产生黄白色斑点ꎬAlternariaalternata引起小黄花茶叶片发黑ꎬ出现黑色斑块(代玉煊ꎬ2021)ꎮScytalidiumauriculariicola和Hypoxylonfragiforme对Colletotrichumcliviicola和Alternariaalternata的抑制率均高于50%ꎬ对小黄花茶自身病害的防治具有较好的作用ꎬ在小黄花茶生物防治的开发上值得更深入的研究ꎮ参考文献:AHMADRꎬLIMCKꎬMARZUKINFꎬetal.ꎬ2020.MetabolicprofileofScytalidiumparasiticum ̄Ganodermaboninenseco ̄culturesrevealedthealkaloidsꎬflavonoidsandfattyacidsthatcontributetoanti ̄ganodermaactivity[J].Moleculesꎬ25(24):5965.ALYAHꎬDEBBABAꎬKJERJꎬetal.ꎬ2010.Fungalendophytesfromhigherplants:aprolificsourceofphytochemicalsandotherbioactivenaturalproducts[J].FungalDiversꎬ41(1):1-16.BARNETTHLꎬHUNTERBBꎬ1998.Illustratedgeneraofimperfectfungi[M].4thed.PAULꎬMinnesota:TheAmericanPhytopathologicalSocietyPress:1-218.BECKERKꎬWESSELACꎬLUANGSA ̄ARDJJꎬetal.ꎬ2020.ViridistratinsA-CꎬantimicrobialandcytotoxicbenzofluoranthenesfromstromataofAnnulohypoxylonviridistratum(HypoxylaceaeꎬAscomycota)[J].Biomoleculesꎬ10(5):805.CHENFꎬWANGXꎬ2016.AnewrecordspeciesofTheaceaeinSichuanProvince Camellialuteoflora[J].JFujianForSciTechnolꎬ43(4):167-168.[陈锋ꎬ王馨ꎬ2016.四川山茶科植物新记录种 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食品中的真菌毒素

食品中的真菌毒素

食品中的真菌毒素英东食品科学与工程学院 12食品质量与安全2班黄浩燕 12129022002 摘要:真菌毒素污染是当前国际食品安全问题的一个重要议题,介绍了真菌毒素分类及其污染对于人类健康的危害;就食品中真菌毒素的化学性质、产毒条件及影响因素、检测方法和去毒技术进行了综述。

关键词:真菌毒素;检测;去毒1.真菌毒素的定义真菌毒素( mycotoxin) 是由某些真菌( fungi) 在生长过程中产生的有毒次级代谢产物,目前已知的种类有300 多种[1]。

有30 多种真菌毒素对人类和动物有强毒性。

包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、棒曲霉素、玉米赤霉烯酮和伏马毒素等。

这些毒素可广泛污染食物、农作物及其制品等[2]。

真菌毒素可使动物呈现急性、亚急性和慢性中毒症状, 有些还引起癌症(致癌物) , 某些真菌毒素还具有诱变作用, 能够引起感染生物的突变( 也可称癌性) , 以及畸形发生, 即具有引致发育中胚胎畸形的能力。

因吃有真菌毒素的食品和饲料而造成的中毒称为中毒症。

2.真菌毒素的分类目前为止,全世界已经发现了300多种结构不同的真菌毒素,其中已经被分离鉴定的有20多种。

Hesseltine就真菌毒素对农业及人类健康的危害程度和对社会经济发展影响的重要性,对世界上30多个国家和地区进行了调查,结果表杂色曲霉素(sterigmatocystins,ST)、展青霉素(patulin,Pat)、圆弧偶氮酸(cycloplazonlc acid,CPA)等,该项调查进行之时伏马菌素(fumonisins,FMs)尚未被发现。

调查还发现,被真菌毒素污染最严重的农产品是玉米、花生和小麦。

因此,真菌及其毒素与人类健康的关系已引起全世界的广泛关注。

2.1常见的真菌毒素及其对食品的污染2.1.1 黄曲霉素( aflatoxin,AF)黄曲霉素主要是黄曲霉Aspergillusflavus和寄生曲霉Aspergillusparasiticus的代谢产物,具有极强的致癌性和毒性。

2021年四川大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)

2021年四川大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)

2021年四川大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)一、填空题1、E.coli肽聚糖双糖亚单位由______、______、______和______组成。

它与金黄色葡萄球菌肽聚糖双糖亚单位组成的区别在于______和______。

2、包膜中的类脂来源于______。

3、硝化细菌是属于______营养型微生物,它们的碳源是______。

其中亚硝酸细菌能够将______氧化为______,硝酸细菌则能够将______氧化为______,从而获得能量。

它们用于还原CO2的NADH2,是在消耗大量 ______的情况下,通过______的方式而产生,这也是它们生长缓慢和生长得率低的原因之一。

4、选用和设计培养基的原则是:______、______、______、______。

5、食用菌一般是指可食用的有大型______的高等真菌,分类上主要属于______,其次为______。

6、第一个用自制显微镜观察到微生物的学者是______,被称为微生物学研究的先驱者,而法国学者______和德国学者______则是微生物生理学和病原菌学研究的开创者。

7、对玻璃器皿、金属用具等物品可用______或______进行灭菌;而对牛奶或其他液态食品一般采用______灭菌,其温度为______,时间为______。

8、海洋细菌有______、______、______和______等共同特征。

9、基因突变的自发性和不对应性曾有三个著名实验予以证明,它们是______等人的______,______的______,以及______等的______。

10、生理上的屏障结构有______和______。

二、判断题11、放线菌具有菌丝,并以孢子进行繁殖,它属于真核微生物。

()12、在配制异养微生物培养基时,实际上只要加入6种营养要素中的4~5种即可。

()13、在肽聚糖合成过程中,其肽尾的氨基酸残基数是恒定的。

()14、E.coli T偶数噬菌体的核心是由线状双链DNA构成的。

攀西地区野生食药用真菌资源调查

攀西地区野生食药用真菌资源调查

攀西地区野生食药用真菌资源调查
刘松青;武成荣
【期刊名称】《中国食用菌》
【年(卷),期】2000(019)001
【摘要】@@ 攀西地区是指四川省的攀枝花市和凉山州.地貌以山为主,森林覆盖率达到42.8%.本区受典型的东亚季风环流影响,形成了干雨季气候十分明显的特征.山脉以南北走向为主,地势西北高,东南低,海拔从365m到5 999m,再加之冬季偏暖,构成了本区自然结构复杂、生物种类繁多的独特生态系统,真菌资源极为丰富.五年多来,我们深入攀西地区进行野生食药用真菌资源的调查,现报道如下.
【总页数】2页(P21-22)
【作者】刘松青;武成荣
【作者单位】四川省喜德米市中学生物工程技术研究所,四川,喜德米,616754;四川师范大学生命科学技术系,四川,成都,610066
【正文语种】中文
【中图分类】S75
【相关文献】
1.金城山地区野生食药用真菌资源调查研究 [J], 朱远秀;王梅;丁祥;侯怡铃
2.雾灵山地区野生食药用真菌资源调查 [J], 王谦;张会欣;张俊刚;卢婕;刘玉霞;杨立华;冀宏;陈文杰
3.豫西地区野生大型药用真菌资源调查 [J], 杜适普
4.抚顺林区野生药用真菌资源调查 [J], 李刚;邵利克;于伟鑫;张凤林
5.大别山地区野生食药用真菌资源调查 [J], 李尽哲;耿立;黄雅琴;王德芝;马俊义;;;;;;;;;;
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规模化发酵泡菜生产中的真菌多样性

规模化发酵泡菜生产中的真菌多样性

规模化发酵泡菜生产中的真菌多样性罗青春;裴乐乐;梁会朋;杨婧;吴正云;张文学【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2015(000)007【摘要】四川泡菜是四川省四大腌菜之一,为了解其真菌多样性,采用构建18S rRNA文库及 ARDRA 分型分析,对萝卜、豇豆、青菜和榨菜四种不同原料泡菜样品进行研究。

结果表明:所得到的724个阳性克隆子分布于9个类群,萝卜、豇豆、青菜和榨菜的主要优势菌分别为:Debaryomyces;Debaryomyces 和Starmerella;Debaryomyces;Starmerella,Debaryomyces 和 Candida。

检测到的次生优势菌有Zygosaccharomyces,Pichia,Halophytophthora等。

此研究结果揭示四川泡菜中的微生物多样性,反映不同原料泡菜的微生物群落结构及其差异性,可为揭示泡菜发酵机理、风味因子的形成机制以及工业化生产提供一定的理论基础。

【总页数】4页(P43-46)【作者】罗青春;裴乐乐;梁会朋;杨婧;吴正云;张文学【作者单位】四川大学轻纺与食品学院,成都610065;四川大学轻纺与食品学院,成都 610065;四川大学轻纺与食品学院,成都 610065;四川大学轻纺与食品学院,成都 610065;四川大学轻纺与食品学院,成都 610065;四川大学轻纺与食品学院,成都 610065【正文语种】中文【中图分类】TS255.54【相关文献】1.泡菜生产中乳酸菌的发酵条件、机理及意义 [J], 林子昭2.四川泡菜中两株优良乳酸菌的鉴定及不同发酵条件对其发酵泡菜品质的影响 [J], 敖晓琳;张小平;史令;张先琴3.泡菜生产中乳酸菌的发酵条件、机理及意义 [J], 林子昭;4.固态发酵在真菌除草剂规模化生产中的应用及展望 [J], 杨爽;张建萍;段桂芳;余柳青5.贵州泡菜中乳酸菌的分离鉴定及其在泡菜发酵中的应用 [J], 赵山山;杨园园;周玉岩;刘贵巧;郝光飞因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

一种具有抗炎活性的红色食用真菌色素及其制备方法[发明专利]

一种具有抗炎活性的红色食用真菌色素及其制备方法[发明专利]

专利名称:一种具有抗炎活性的红色食用真菌色素及其制备方法
专利类型:发明专利
发明人:李国友,杨涛,吴林蔚,陈晓珍,方冬梅
申请号:CN201810361313.8
申请日:20180420
公开号:CN109400527A
公开日:
20190301
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明涉及一种新的具有抗炎活性,且安全无毒的天然真菌食用红色素的制备方法以及青霉(Penicilliumsp.)CIB411,保藏编号为CGMCC No.14993。

通过特定的青霉素菌株发酵得到红色真菌色素,具体结构如式I所示。

该红色色素对多种炎症具有抑制作用,同时能够显著改善食品的颜色,可作为功能性食用色素开发利用。

申请人:中国科学院成都生物研究所
地址:610042 四川省成都市武侯区人民南路四段9号
国籍:CN
代理机构:成都金英专利代理事务所(普通合伙)
代理人:袁英
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四川松茸内生细菌群落结构与多样性_李强

四川松茸内生细菌群落结构与多样性_李强

四川松茸内生细菌群落结构与多样性*李强1李小林2黄文丽3熊川1杨阳1杨志荣1郑林用1,4**(1四川大学生命科学学院,成都610065;2四川省农业科学院土壤肥料研究所,成都610066;3四川省农业科学院生物技术核技术研究所,成都610066;4四川省农业科学院,成都610066)摘要为了解松茸的内生细菌群落结构与多样性,以采自四川7个松茸主产区的14个松茸样品为材料,通过变性梯度凝胶电泳(DGGE )分析其内生细菌的群落结构与多样性差异.结果表明:各个产区松茸样品的内生细菌群落结构与多样性存在明显差异.但采自相近地点、相似环境的松茸样品内生细菌群落结构相似性较高;样品的丰度范围为15 25,多样性指数依次为盐源>冕宁>会东>木里>雅江>盐边>小金;条带回收测序构建的系统发育树显示,松茸内生细菌种群丰富,各个产区松茸优势种群存在一定的差异,但假单胞菌属、爱文菌属、芽孢杆菌属在所有样品中均有分布,而且都占据一定的优势地位.产碱杆菌属与鞘氨醇杆菌属在大部分样品中为优势种群;而杜擀氏菌属、赖氨酸芽孢杆菌属在特定样品中为优势种群.表明松茸内生细菌具有丰富的多样性,研究结果可为筛选促进松茸生长的内生菌提供依据.关键词松茸内生细菌群落结构PCR-DGGE 促生细菌文章编号1001-9332(2014)11-3316-07中图分类号Q938.1文献标识码ACommunity structure and diversity of entophytic bacteria in Tricholoma matsutake inSichuan Province ,Southwest China.LI Qiang 1,LI Xiao-lin 2,HUANG Wen-li 3,XIONGChuan 1,YANG Yang 1,YANG Zhi-rong 1,ZHENG Lin-yong 1,4(1College of Life Sciences ,Sichuan University ,Chengdu 610065,China ;2Soil and Fertilizer Research Institute ,Sichuan Academy ofAgricultural Sciences ,Chengdu 610066,China ;3Institute of Biological &Nuclear Technology ,Si-chuan Academy of Agricultural Sciences ,Chengdu 610066,China ;4Sichuan Academy of Agricultur-al Sciences ,Chengdu 610066,China ).-Chin.J.Appl.Ecol .,2014,25(11):3316-3322.Abstract :In order to understand the diversity and community structure of endophytic bacteria inTricholoma matsutake ,14Tricholoma matsutake samples were collected from 7main production counties of Xiaojin ,Yajiang ,Muli ,Yanyuan ,Yanbian ,Huidong and Mianning.The entophytic bacterial community structure and diversity were investigated by PCRdenaturing gradient gel elec-trophoresis (PCR-DGGE ).The results showed that the diversity and community structure of endo-phytic bacteria in T.matsutake varied significantly ,while those from the environments alike had high similarity.In addition ,each T.matsutake sample contained more than 15species of endo-phytes ,with that from Yanyuan having the highest endophytes diversity index and abundance ,while those from Xiaojin were the lowest.Phylogenetic tree showed that endophytic bacterial species in T.matsutake were abundant.Dominant bacterial population in T.matsutake collected from different places varied ,and Pseudomonas ,Ewingella and Bacillus were distributed in all samples and retained a certain advantage.Alcaligenes and Sphingobacterium distributed in most samples ,while Duganella and Lysinibacillus only in certain ones.This study demonstrated that the endophytic bacteria in T.matsutake were abundant and diversified ,which could be in favor of searching the dominant bacteria promoting the growth of T.matsutake.Key words :Tricholoma matsutake ;entophytic bacteria ;community structure ;PCR-DGGE ;growth-promoting bacteria.*四川省财政创新能力提升工程青年项目(2014CXSF-030)、四川省科技支撑计划项目(2013NZ0029,2014FZ0004,2012NZ0003)和以精深加工为核心的食药用菌产业关键技术集成与产业化项目(成财教[2013]265号)资助.**通讯作者.E-mail :zly6559@126.com 2014-04-11收稿,2014-08-25接受.应用生态学报2014年11月第25卷第11期Chinese Journal of Applied Ecology ,Nov.2014,25(11):3316-3322DOI:10.13287/j.1001-9332.20140829.012松茸(Tricholoma matsutake),学名松口蘑,隶属担子菌亚门(Basidiomycotina)口蘑科(Tricholomata-ceae),是松、栎等树木外生的菌根真菌,世界上名贵的天然食药用菌.松茸对生长环境要求极为苛刻[1],生长过程也极为缓慢,从孢子和松树的根系形成共生关系到子实体的发生一般需要5 6年.而且对共生树种也有一定的要求,共生树种年龄必须在20年以上,能为松茸菌丝的生长与子实体的发生提供足够营养支持,才能长出健康的子实体[2].目前,全世界尚无人工栽培的成功先例.在松茸周围环境中分布着大量的微生物[3],它们可能会影响松茸菌丝的生长与菌根的合成,并且可能在松茸菌丝与共生植物物质交换与生长代谢过程中发挥着某些作用[4],有些病原微生物还可能给松茸带来病虫害,影响松茸的品质与产量.因此,了解松茸根际及其内生细菌的群落结构,分析其内生菌的优势种群,将为促进松茸生长及防治松茸病虫害微生物的筛选打下基础,对松茸的人工驯化栽培具有重要意义[5].目前,已有学者通过传统培养[6]与分子生物学方法[7]研究了松茸根际微生物群落结构,发现了松茸根际微生物群落分布规律.但尚未有学者对松茸内生菌群做过研究.自然界大多数微生物由于难于模拟其生长繁殖的真实条件而不能获得纯培养,因此,为了更好地了解微生物的群落结构及其在自然生态系统中的作用,需要其他的补充技术.自从1993年变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)被引入微生物生态学以来,该技术已被广泛地用作分子工具比较微生物群落的多样性和监视种群动态[8-12].这一技术能够提供群落中优势种类信息并同时分析多个样品.具有检测极限低、可重复和容易操作等特点,适合于调查种群的时空变化,并且可通过对切下的带进行序列分析或与特异性探针杂交分析鉴定群落成员[13-15].本文以采自四川7个松茸主产区的野生松茸子实体为材料,通过PCR-DGGE方法研究松茸的内生细菌群落结构,旨在为松茸的人工驯化栽培提供科学参考.1材料与方法1.1松茸样品采集松茸样品于2013年7月30日至8月15日采集于四川省阿坝藏族羌族自治州小金县、甘孜藏族自治州雅江县、凉山彝族自治州木里藏族自治县、盐源县、会东县、冕宁县以及攀枝花市盐边县.在每个县的松茸产区依据海拔差异选取2个采样点,每个样点采集20m2内的3株松茸子实体作为一个样品,样品装于无菌封口袋中,并保存于冰盒,带回实验室做后续研究.后文分别采用XJ、YJ、ML、YY、HD、MN、YB代表各县所采松茸菌株编码.采样数据记录见表1.1.2主要试剂DNA标志物(Marker)、PCR胶回收试剂盒、pUCm-T载体试剂盒、大肠杆菌DH5α感受态细胞及2ˑTaq PCR混合液购自TAKARA公司;D3390-02 E.Z.N.A.TM Fungal DNA Kit(200)真菌DNA提表1松茸样品采集信息Table1Information of Tricholoma matsutake samples collected样品编号Sample 采集地Site经度Longitude纬度Latitude海拔Altitude(m)植被类型VegetationYY1盐源Yanyuan101ʎ43'20ᵡ27ʎ32'13ᵡ3151高山栎林Alpine oakYY2盐源Yanyuan101ʎ43'13ᵡ27ʎ32'18ᵡ3132高山栎林Alpine oakYB1盐边Yanbian101ʎ12'37ᵡ27ʎ08'18ᵡ3207高山栎林Alpine oakYB2盐边Yanbian101ʎ12'33ᵡ27ʎ08'17ᵡ3191高山栎林Alpine oakYJ1雅江Yajiang101ʎ11'37ᵡ30ʎ04'56ᵡ3847高山栎林Alpine oakYJ2雅江Yajiang101ʎ11'36ᵡ30ʎ04'56ᵡ3843高山栎林Alpine oakXJ1小金Xiaojin102ʎ35'08ᵡ31ʎ12'44ᵡ3214高山栎林Alpine oakXJ2小金Xiaojin102ʎ35'07ᵡ31ʎ12'44ᵡ3235高山栎林Alpine oakML1木里Muli101ʎ07'38ᵡ28ʎ01'42ᵡ3337松栎混交林Pine and oak ML2木里Muli101ʎ07'28ᵡ28ʎ00'37ᵡ3584松栎混交林Pine and oak MN1冕宁Mianning102ʎ12'23ᵡ28ʎ21'23ᵡ3100松栎混交林Pine and oak MN2冕宁Mianning102ʎ12'23ᵡ28ʎ21'23ᵡ3157松栎混交林Pine and oak HD1会东Huidong102ʎ32'44ᵡ26ʎ36'49ᵡ3055松栎混交林Pine and oak HD2会东Huidong102ʎ32'48ᵡ26ʎ36'49ᵡ3115松栎混交林Pine and oak 713311期李强等:四川松茸内生细菌群落结构与多样性取试剂盒购于OMEGA公司;PCR引物T1、T2和T1-GC由上海生工生物技术有限公司合成.1.3松茸样品表面消毒将采集的松茸子实体用蒸馏水清洗干净,放置于超净台晾干.然后将晾干的松茸子实体用75%的酒精浸泡1 3min,再用3%次氯酸钠浸泡2min,75%乙醇浸泡3min.最后用无菌水冲洗3 4次,然后取最后一次清洗的无菌水100μL涂布到LB平板上,30ħ倒置培养72h,检测表面灭菌效果.1.4松茸组织总DNA的提取与纯化用灭菌的解剖刀剖开松茸菌柄,用灭菌的镊子取松茸菌柄内部中心部位组织0.5g,置于灭菌的研钵中,加入一定量的液氮,充分研磨.然后按照D3390-02E.Z.N.A.TM真菌DNA提取试剂盒(200)说明书按步骤操作,提取总DNA.提取的总DNA用1%琼脂糖凝胶电泳检测,并在凝胶成像系统中观察、拍照,然后置于-20ħ冰箱中保存备用.1.5细菌16S rDNA V3区PCR扩增将每个样点的3株松茸子实体总DNA混合,进行16S rDNA V3区扩增,扩增采用细菌通用引物T1-GC(5'-GCCGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCG-GGGGCATTACCGCGGCTGCTGG-3')和T2(5'-ACG-GGGGGCCTACGGGAGGCAGC-3'),PCR采用50μL 反应体系,其中2ˑTaq PCR混合液25μL,10μmol·L-1的引物各1μL,DNA模板1μL,超纯水(ddH2 O)补齐至50μL.PCR反应程序为:95ħ变性5 min,94ħ变性1min,54ħ退火1min,72ħ延伸1 min,35个循环,然后72ħ延伸10min.PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测,然后用凝胶成像系统观察、拍照.并用PCR胶回收试剂盒回收纯化目的条带.1.6DGGE电泳及图谱分析DGGE电泳采用美国Bio-Rad变性梯度凝胶电泳仪,条件为:8%聚丙烯酰胺凝胶,电泳缓冲液为1ˑTAE,凝胶变性梯度为40% 70%,每孔上样量为20μL与5μL10ˑ加样缓冲液.电泳温度60ħ,电压150V,电泳时间6h.电泳完成,凝胶银染后通过凝胶成像系统观察、拍照.凝胶图谱通过QUANTITY ONE软件处理,并进行聚类,分析样品的多样性指数(H),丰度(S)以及均匀度(E H).H=-∑P i ln P iEH =H/Hmax=H/ln S式中:S代表每泳道的条带数量;P i为泳道中第i条带灰度(height of the peak)占该泳道总灰度的比例.1.7DGGE条带克隆测序及系统发育分析将DGGE凝胶的优势条带切下,加一定量的无菌水,用枪头捣碎凝胶,4ħ放置过夜.以上清液为模板,以T1(不带GC夹子)和T2为引物,程序参考上文,对回收的条带进行PCR扩增.扩增产物用胶回收试剂盒回收纯化,然后连接到pUCm-T载体,转化到DH5α大肠杆菌感受态细胞,涂布到含X-gal与IPTG的氨苄青霉素LB平板上,37ħ倒置培养过夜,筛选出具有氨苄青霉素抗性的白色菌落转化子,利用载体通用引物M13-47(5'-CGCCAGGGTTTTC-CCAGTCACGAC-3')和M13-48(5'-AGCGGATAA-CAATTTCACACAGGA-3')进行菌落PCR检测,筛选出阳性菌落后,进行摇瓶培养,然后送Invitrogen测序.序列通过BLAST比对,选取GenBank中序列同源性最高的模式菌株作为参照,采用邻接法利用MEGA5.2软件构建系统发育树.所有序列提交GenBank(序列号KJ725091—KJ725112).1.8数据处理凝胶图谱通过QUANTITY ONE软件进行数据化处理,并进行UPGMA聚类,分析样品的多样性指数(H)、丰度(S)以及均匀度(E H).2结果与分析2.1松茸组织总DNA的提取与16S rDNA V3区扩增取表面消毒最后一次淋洗用的无菌水100μL涂布于LB平板上,30ħ倒置培养72h后无菌落长出,表明表面消毒成功.采用细菌16S rDNA V3区通用引物扩增产物,在琼脂糖凝胶上呈单一条带(图1),无明显非特异扩增现象,条带大小为190bp左右.将此次扩增所用的引物序列结合GenBank中松图1松茸内生细菌16S rDNA V3区扩增图谱Fig.1PCRamplification pattern of entophytic bacterial16SrDNA V3fragments.8133应用生态学报25卷图2不同松茸样品内生细菌DGGE 图谱Fig.2DGGE map of entophytic bacteria in different Tricholo-ma matsutake samples.茸的全序列通过Primer premier 分析,发现细菌通用引物无法扩增出松茸的基因片段,证明此次扩增产物为松茸内生细菌的遗传序列.2.2松茸内生细菌DGGE 图谱分析通过DGGE 图谱(图2)发现,每个样品至少分离出15个条带,理论上每个松茸样品至少含15种内生菌,但由于DGGE 方法的局限性,实际的微生物种类数要略高于或略低于条带数量;各样品条带迁移率及条带强度有所不同,在一定程度上表明松茸内生菌多样性丰富.根据条带数量及迁移率做出的样品相似度矩阵(表2)及聚类图(图3)显示:条带相似度最高的为YJ 1与YJ 2样品,相似度为89%;其次为YB 1与YB 2样品,相似度达到85%;而XJ 1与ML 1样品条带相似度最低,仅为29%.通过聚类图及相似度矩阵可以看出,采自相近地点、相似环境的松茸样品内生菌DGGE 图谱相似度较高,内生菌图3不同松茸样品内生细菌群落DGGE 图谱聚类分析图Fig.3UPGMA dendrogram of DGGE of entophytic bacterial community in different Tricholoma matsutake samples.群落结构相似,而环境条件差异较大的样品内生菌群落结构则差异明显.表明松茸内生菌群落结构与多样性和环境条件有一定的关系,环境条件会对松茸内生菌的种类与分布产生影响.2.3松茸内生细菌DGGE 条带多样性指数、丰度、均匀度分析条带的多样性指数、丰度、均匀度都能用来描述及比较微生物的群落结构与多样性.通过对条带进行数据化处理并计算后发现,各样品的多样性指数、丰度、均匀度都存在一定的差异.其中,采自盐源的样品YY 2内生菌多样性指数与丰度最高,分别达到了3.2与25;而采自小金的样品XJ 1内生菌多样性指数与丰度最低,分别为2.69与15.均匀度最高的样品为采自雅江的YJ 2,为1.03;小金的XJ 2样品均匀度最低,仅为0.99.通过比较样品的多样性指数与丰度可以发现,采自相近地点的样品多样性指数表2不同松茸样品内生细菌群落相似性比较Table 2Similarity coefficients of entophytic bacterial community in different Tricholoma matsutake samples (%)样品Sample XJ 1XJ 2YJ 1YJ 2ML 1ML 2YY 1YY 2YB 1YB 2HD 1HD 2MN 1XJ 237.9YJ 143.744.3YJ 240.146.089.0ML 129.151.856.954.3ML 236.758.952.454.773.2YY 154.854.063.859.559.267.8YY 254.249.956.555.246.357.067.8YB 164.644.470.869.848.250.058.556.7YB 269.849.858.057.341.746.955.057.785.2HD 156.751.148.746.943.346.356.247.763.067.6HD 246.842.439.037.341.040.052.744.447.845.664.3MN 147.846.744.046.541.845.463.147.951.347.842.764.1MN 239.144.042.441.547.457.462.051.042.138.633.649.465.8913311期李强等:四川松茸内生细菌群落结构与多样性及丰度差异相对较小,这与聚类图所反映的结果较为一致.综合来看,样品内生细菌的多样性与丰度依次为:盐源>冕宁>会东>木里>雅江>盐边>小金.2.4松茸内生细菌克隆条带分析将DGGE图谱中22个优势条带进行回收、克隆、测序,然后与GenBank数据库中的序列进行比对,发现所有样品序列与GenBank中的序列相似性都在96%以上.其中,条带1 10、15、16、17、19、21为大部分样品共有条带,11、20为木里样品特有条带,12、13、14、18为盐源样品特有条带,显示盐源与木里样品内生细菌特有优势种群较多.通过构建系统发育树(图4)发现,所有序列分为8个簇,显示出松茸内生细菌种群较为丰富.在所有克隆条带中,有6个条带聚集在簇Ⅰ,属于假单胞菌属(Pseudo-monas),占所有克隆条带的27%.有7个条带聚集在簇Ⅱ,属于爱文菌属(Ewingella),占32%.有3个条带聚集在簇Ⅴ,属于芽孢杆菌属(Bacillus),占14%.木里的特有条带11、20分别聚集在簇Ⅳ与簇Ⅵ,分别属于杜擀氏菌属(Duganella)和赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus),表明这些不太常见的微生物可以在松茸内生菌群落中占据一定的优势地位.盐源的特有条带18号聚集于簇Ⅲ,与寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)序列相似性较高.22号条带聚集于簇Ⅶ,与产碱杆菌属(Alcaligenes)序列较近,16、17图4不同松茸样品内生细菌群落DGGE优势条带系统进化树Fig.4Phylogenetic tree of the dominant DGGE bands of entophytic bacterial community in different Tricholoma matsutake samples.0233应用生态学报25卷号条带则与鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)序列较近.综上,松茸内生菌群种类丰富,多样性高,且一些在自然界中不太常见的种类,在松茸内生菌群落中占据着一定的优势地位.虽然每个产区的松茸样品内生细菌群落结构有一定的差异,但假单胞菌属、爱文菌属、芽孢杆菌属在所有样品中均有分布,而且都占据优势地位.产碱杆菌属与鞘氨醇杆菌属在大部分样品中都有分布;而杜擀氏菌属、赖氨酸芽孢杆菌属仅在特定样品中有分布,并占据一定的优势地位.3讨论有些内生菌在寄主生长发育过程中发挥着重要作用[16-17],可以参与寄主的代谢过程,合成重要的生物大分子,有促生、抑菌作用[18-19],甚至还能影响寄主的产量与品质[20-21].但目前对内生菌的研究主要集中于植物方面[22-25],对大型真菌的内生菌研究则鲜有报道.很多珍贵的大型真菌生活史复杂,对环境要求苛刻.掌握它们的内生菌群落结构,对实现珍贵野生食用菌驯化栽培意义重大.松茸是一种外生菌根菌[26-27],目前尚未实现人工栽培.因此,亟需了解松茸的内生菌群结构及其与松茸间的相互作用关系,为实现松茸人工栽培打下基础.本研究利用PCR-DGGE技术了解松茸内生细菌的群落结构,并比较了不同产区野生松茸内生菌的多样性差异.DGGE图谱分析发现,采自相近地点、相似环境的松茸样品,内生菌群落结构相似性较高,表明环境对松茸内生菌的种群与分布有一定的影响,这与马同锁等[28]的研究结果一致;通过比较DGGE图谱上条带的强度、迁移率及条带数量可以看出,不同样品内生菌的多样性及丰度存在一定差异,优势种群有所区别,但综合来看,内生细菌的多样性依次为:盐源>冕宁>会东>木里>雅江>盐边>小金.通过建立系统发育树发现,假单胞菌属、爱文菌属、芽孢杆菌属在所有样品中均有分布,产碱杆菌属与鞘氨醇杆菌属在大部分样品中是优势种群,而杜擀氏菌属、赖氨酸芽孢杆菌属等存在于特定样品中.表明松茸内生细菌具有丰富的多样性,而且其共有优势种群的部分种属被证明具有一定的促生作用[29],以后可从这些优势种群入手,探讨其与松茸之间的相互作用关系,分离促进松茸生长或具有抵抗松茸病虫害作用的菌剂,改善并提高松茸的品质与产量,最终实现松茸的人工栽培.参考文献[1]Vaario LM,Heinonsalo J,Spetz P,et al.The ectomy-corrhizal fungus Tricholoma matsutake is a facultativesaprotroph in vitro.Mycorrhiza,2012,22:409-418[2]Amend A,Keeley S,Garbelotto M,et al.Forest age correlates with fine-scale spatial structure of Matsutakemycorrhizas.MycologicalResearch,2009,113:541-551[3]Vaario LM,Fritze H,Spetz P,et al.Tricholoma mat-sutake dominates diverse microbial communities in differ-ent forest soils.Applied and Environmental Microbio-logy,2011,77:8523-8531[4]SummerbellRC.Root endophyte and mycorrhizosphere fungi of black spruce,Picea mariana,in a boreal foresthabitat:Influence of site factors on fungal distributions.Studies in Mycology,2005,53:121-145[5]Hu J-C(胡江春),Xue D-L(薛德林),Ma C-X(马成新),et al.Research advances in plant growth-promoting rhizobacteria and its application prospects.Chinese Journal of Applied Ecology(应用生态学报),2004,15(10):1963-1966(in Chinese)[6]Yang M-H(杨民和),Yang X-M(杨新美),Chen L-G(陈立国).The relationship between Tricholoma mat-sutake and rhizosphere microorganisms.Acta Agricultu-rae Universitis Jiangxiensis(江西农业大学学报),1997,19(4):76-80(in Chinese)[7]Kim M,Yoon H,You YH,et al.Metagenomic analysis of fungal communities inhabiting the fairy ring zone ofTricholoma matsutake.Journal of Microbiology and Bio-technology,2013,23:1347-1356[8]Wu F-Z(吴凤芝),Wang P(王澍),Yang Y(杨阳).Effects of rotation and intercropping on bacterialcommunities in rhizosphere soil of cucumber.ChineseJournal of Applied Ecology(应用生态学报),2008,19(12):2717-2722(in Chinese)[9]Liu L(刘丽),Xu M-K(徐明恺),Wang S-L(汪思龙),et al.Effect of different Cunninghamia lanceo-lata plantation soil qualities on soil microbial communitystructure.Acta Ecologica Sinica(生态学报),2013,33(15):4692-4706(in Chinese)[10]Wu L-L(吴莉莉),Wang H-Y(王海燕),Xu Y(徐岩),et al.Differences of lactic acid bacteria communi-ty between soy sauce aroma style and light aroma styleliquor fermentation.Microbiology(微生物学通报),2013,40(12):2182-2188(in Chinese)[11]Li XL,Petri P,Gu YF,et al.Diversity of nifH gene in rhizosphere and non-rhizosphere soil of tobacco in Pan-zhihua,China.Annals of Microbiology,2012,62:995-1001.[12]Zhang B(张波),Li X-L(李小林),Jiang H-M (江华明),et al.Diversity and community structures ofthe endophytic actinomycetes isolated from Medicagoruthenica.Acta Prataculturae Sinica(草业学报),2013,22(5):113-119(in Chinese)[13]Zhao Y,Chen M,Bai J,et al.Response of microbial community to petroleum stress and phosphate dosage in123311期李强等:四川松茸内生细菌群落结构与多样性sediments of Jiaozhou Bay,China.Journal of OceanUniversity of China,2014,13:249-256[14]Dubey SK,Singh A,Watanabe T,et al.Methane pro-duction potential and methanogenic archaeal communitystructure in tropical irrigated Indian paddy soils.Biologyand Fertility of Soils,2014,50:369-379[15]Oueriaghli N,Gonzalez-Domenech CM,Martinez-Checa F,et al.Diversity and distribution of Halomonas inRambla Salada,a hypersaline environment in the south-east of Spain.FEMS Microbiology Ecology,2014,87:460-474[16]Zhang Y(张烨),Liao Y(廖怡),Chen S-W(陈尚武),et al.Isolation,preliminary identification andnitrogen-fixation activity of endophytes from roots of one-and two-year-old Xanthoceras sorbifolia plants.ChineseJournal of Plant Ecology(植物生态学报),2010,34(7):839-844(in Chinese)[17]Yi T(易婷),Miao Y-X(缪煜轩),Feng Y-J(冯永君).Plant-endophyte interaction:Growth-promotingeffect of endophytes and their biofilm formation.Micro-biology(微生物学通报),2008,35(11):1774-1780(in Chinese)[18]Wang M-Q(王美琴),Ma L(马林),Han J-C(韩巨才),et al.Identification of endophytic actinomyceteSt24from tomato plants and its application in bio-controlof gray mold disease.Chinese Journal of Applied Ecology(应用生态学报),2012,23(9):2529-2535(inChinese)[19]Dai C-C(戴传超),Yu B-Y(余伯阳),Zhao Y-T(赵玉婷),et al.Correlation between inhibition activity ofendophytic fungus from Euphorbia pekinensis and itshost.Chinese Journal of Applied Ecology(应用生态学报),2005,16(7):1290-1294(in Chinese)[20]Shi Y-W(史应武),Lou K(娄恺),Li C(李春),et al.Effects of endophytic Paenibacillus poly-myxa S-7on photosynthesis,yield,and quality of sugarbeet.Chinese Journal of Applied Ecology(应用生态学报),2009,20(3):597-602(in Chinese)[21]Yang B(杨波),Chen Y(陈晏),Li X(李霞),et al.Research progress on endophyte-promotedplant nitrogen assimilation and metabolism.Acta Ecolog-ica Sinica(生态学报),2013,33(9):2656-2664(in Chinese)[22]Xu Y-J(徐亚军),Zhao L-F(赵龙飞),Chen P(陈普),et al.Isolation,screening and characterization ofphytopathogen antagonistic endophytes from wild Artemi-siaargyi.Acta Ecologica Sinica(生态学报),2013,33(12):3697-3705(in Chinese)[23]Huang X-H(黄晓辉),Yang Y-C(杨友才),Tan Z-J (谭周进),et al.Distribution characteristic of endo-phytic microbes in four different tobacco species.ActaEcologica Sinica(生态学报),2009,29(12):6827-6833(in Chinese)[24]Samaga PV,Rai VR,Rai KML.Bionectria ochroleuca NOTL33:An endophytic fungus from Nothapodytes foeti-da producing antimicrobial and free radical scavengingmetabolites.Annals of Microbiology,2014,64:275-285[25]Xu MS,Sheng JP,Chen L,et al.Bacterial community compositions of tomato(Lycopersicum esculentum Mill.)seeds and plant growth promoting activity of ACC deami-nase producing Bacillus subtilis(HYT-12-1)on tomatoseedlings.World Journal of Microbiology&Biotechnolo-gy,2014,30:835-845[26]Yamada A,Endo N,Murata H,et al.Tricholoma mat-sutake Y1strain associated with Pinus densiflora shows agradient of in vitro ectomycorrhizal specificity with Pina-ceae and oak hosts.Mycoscience,2014,55:27-34[27]Murata H,Yamada A,Maruyama T,et al.Root endo-phyte interaction between ectomycorrhizal basidiomyceteTricholoma matsutake and arbuscular mycorrhizal treeCedrela odorata,allowing in vitro synthesis of rhizos-pheric‘shiro’.Mycorrhiza,2013,23:235-242[28]Ma T-S(马同锁),Tian M-Z(田苗珍),Yuan H-L (袁红楼),et al.Effect of the different growth environ-mental conditions on the distribution of endophytes intwo species of vegetables.Journal of Anhui AgriculturalSciences(安徽农业科学),2009,37(17):7812-7813(in Chinese)[29]Liu F-C(刘方春),Xing S-J(邢尚军),Ma H-L(马海林),et al.Effects of inoculating plant growth-promoting rhizobacteria on the biological characteristicsof walnut(Juglans regia)rhizosphere soil under droughtcondition.Chinese Journal of Applied Ecology(应用生态学报),2014,25(5):1475-1482(in Chinese)作者简介李强,男,1989年生,硕士研究生.主要从事资源微生物学研究.E-mail:leeq110@126.com责任编辑肖红2233应用生态学报25卷。

食品微生物预防

食品微生物预防
2016/11/11 四川大学华西公卫 裴晓方 xxpei@
pH
限制微生物种类和数量 微生物生长改变食品的pH

机制: 改变膜电位,影响膜的功能 影响酶的功能 影响基质中各类物质的性质
2016/11/11
四川大学华西公卫 裴晓方 xxpei@
动物食品的pH值
四川大学华西公卫 裴晓方 xxpei@
2016/11/11
为人类服务 防止间接危害——食品变败 防病:Food borne disease(食源性疾病 )

需 要 记 住 喔
2016/11/11 四川大学华西公卫 裴晓方 xxpei@
食品生境特征
丰富的营养物质 :碳源、氮源、无机盐及 维生素 基质条件:水、pH、渗透压 天然防御结构/抑菌物质 鸡蛋:壳胶膜-蛋壳-壳膜-蛋白-蛋黄 贮存条件/环境条件:温度、气体
1、现象:细胞代谢活动旺盛,分
裂速度最快、代时最短,细胞数 以几何级数的方式增加
2、原因:细胞完成生理调整,基
质营养和环境适宜
3、影响因素:
遗传特性 培养条件和环境
2016/11/11 四川大学华西公卫 裴晓方 xxpei@
稳定期(stationary phase)
1、现象:体系内新生细胞数与死亡
延滞期(lag phase)
1 、现象: 培养体系内细胞数 目几乎保持不变 2 、原因: 细胞需要合成分裂 所需的酶、 ATP 和其他成分, 为细胞分裂作准备
3、影响因素:
菌种的生理活性 培养基的组分 接种量 2016/11/11 四川大学华西公卫
裴晓方 xxpei@
对数期(Logarithmic phasc)

2016/11/11

四川省螺髻山地区食用牛肝菌资源与高档野生食用菌的可持续发展

四川省螺髻山地区食用牛肝菌资源与高档野生食用菌的可持续发展

/ 螺髻山高档野生食用菌资源所面临 的问题
通过对螺髻山地区食用牛肝菌的调查,螺髻山 野生食用菌资源面临诸多问题: 采收过渡 /. ? 供需不平, !@ 世纪 A@ 年代后期,随着野生食用菌的出口 贸易的增加, 对野生菌的需求急剧上升, 尤其是对高 档野生食用牛肝菌、 松口磨等菌类的出口, 掠夺式的 过度采收,导致蕴藏量不断减少,资源受到严重破 坏。 /. ! 生态环境恶化 野生食用菌是自然资源的重要组成部分,随着 社会经济的发展, 旅游资源的开发, 高档野生食用菌 的适生环境遭到破坏, 导致生态平衡失调, 从而危及 了野生食用菌的生长。 /. / 无科学规划 缺少科学规划造成野生食用菌资源, 尤其是经济 价值高的高野生食用菌资源的减少, 原因是多方面 的, 应综合、 系统地研究, 多角度审视问题, 科学合理 的规划, 使资源得到可持续的利用和保护。 /. 0 部分高档野生食用牛肝菌、松口磨等缺乏必要 的研究
1 - 2 周与良, 邢来君编 % 真菌学 1 3 2 % 北京: 高等教育出版社, .450% 1 ! 2 王治农主编 % 西昌螺髻山邛海旅游资源开发研究 1 3 2 % 成都: 四川民族出版社, .44-%
!"#$%& ’(%&)*+ (, -*(.# /(*,)0#, #, 1#23*0, 45(6#,2& 0," 1*+)0#,0$%& 7&6&%(89&,) (: ;#<3 = <50"& >#%" 18&2#&+ (: !"#$%& /*+35((9
31供需不平采收过渡20世纪80年代后期随着野生食用菌的出口贸易的增加对野生菌的需求急剧上升尤其是对高档野生食用牛肝菌松口磨等菌类的出口掠夺式的过度采收导致蕴藏量不断减少资源受到严重破32生态环境恶化野生食用菌是自然资源的重要组成部分随着社会经济的发展旅游资源的开发高档野生食用菌的适生环境遭到破坏导致生态平衡失调从而危及了野生食用菌的生长

食用真菌在我国饮料工业中的应用

食用真菌在我国饮料工业中的应用

食用真菌在我国饮料工业中的应用
宁超美;范贵增
【期刊名称】《食用菌》
【年(卷),期】1997(019)002
【摘要】食用菌具有高蛋白、低脂肪、营养价值高的特点。

一般干菇含蛋白质为30%,鲜菇含蛋白质3%~5%。

据报道,食用菌营养价值仅决于牛奶。

李兆兰等研究了云芝等7种干菌丝体,每100g干菌丝体中氨基酸总含量10.06~26.23g,必需氨基酸总量3.547~10.827g,支链氨基酸(缬氨酸、酪氨酸)总量0.650~2.050g。

1989年汪麟等报道了他们对28种食用菌子实体中氨基酸分析结果,证明每
100mg样品中氨基酸总量一般为13.24~19.71mg,高的达20.13~32.89mg,且氨基酸种类齐全,7种必需氨基酸(色氨酸未测)与氨基酸总量的百分比,大多在35%~40%之间。

【总页数】2页(P41-42)
【作者】宁超美;范贵增
【作者单位】江西省科学院微生物研究所;江西省科学院微生物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TS275.5
【相关文献】
1.食用真菌发酵饮料的研制 [J], 卫军;熊卫东;刘凤珠;王花俊
2.食用真菌发酵饮料的研制 [J], 王利火;沈家骧
3.食用真菌营养饮料的研制 [J], 饶绍信;熊大维;范贵增
4.在孕育难产的食用仙人掌饮料工业中贵州山翁青仙人掌汁饮料率先投产 [J], ;
5.食(药)用真菌深加工及其在饮料工业上的应用 [J], 张信仁;张云;陈泽宇
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一种竹寄生真菌的分离鉴定及其有效成分发酵的初步研究

一种竹寄生真菌的分离鉴定及其有效成分发酵的初步研究

一种竹寄生真菌的分离鉴定及其有效成分发酵的初步研究李达旭;赵建;何颖;杨志荣【期刊名称】《四川大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2003(040)001【摘要】从乐山峨边县采集了一种竹寄生真菌,经过形态比较、菌丝特征的显微观察、组织切片和孢子的显微观察,以及其有效成分的比较,鉴定为竹黄(shiraiabambusicola).其菌丝分离纯化后,以大米及马铃薯汁为基础培养基,分别研究了温度, pH值, 碳源, 氮源, 水份等对该菌在固态条件下产(艹)/(北)醌化合物的影响.并用正交实验选择了固态发酵的最佳培养条件:每kg基础培养基(大米)中添加硝酸铵20g、麦芽糖50 g和马铃薯汁1200mL,温度26℃ ,自然pH值下,每克菌丝(艹)/(北)醌类化合物的产量可达到2.4色价.【总页数】5页(P139-143)【作者】李达旭;赵建;何颖;杨志荣【作者单位】四川大学国家草原生物防治工程专业实验室,成都,610064;四川大学国家草原生物防治工程专业实验室,成都,610064;四川大学国家草原生物防治工程专业实验室,成都,610064;四川大学国家草原生物防治工程专业实验室,成都,610064【正文语种】中文【中图分类】Q949.32;TQ92【相关文献】1.黄芪内生真菌发酵液中有效成分的初步研究 [J], 马伟;孙丽英;张喜武;贾艳姝;孔祥军;谢家全2.一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究 [J], 权春善;王军华;徐洪涛;范圣第3.发酵产鸢尾酮真菌的分离鉴定及生香特性的初步研究 [J], 张玲琪;谷Shen4.云南重楼叶片寄生真菌的初步分离鉴定 [J], 张晓云;李维蛟5.除虫菊内生真菌Y2菌株的分离鉴定及其发酵产物抑菌活性初步研究 [J], 易晓华;冯俊涛;王永宏;郭小炜;张兴因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

食用真菌基因工程实践技术(连载)

食用真菌基因工程实践技术(连载)

食用真菌基因工程实践技术(连载)
吕作舟
【期刊名称】《中国食用菌》
【年(卷),期】1992(011)003
【摘要】实验(六)蔗糖密度梯度超离心密度梯度离心在分子生物学和基因工程实验中应用极其广泛,并取得了许多重要的研究成果(齐义鹏,基因工程原理和方法,1988,四川大学出版社,成都)。

其主要特点是分辨率高,容易分离回收样品。

进行密度梯度离心,首先需要制备一个密度梯度系统。

【总页数】2页(P16-17)
【作者】吕作舟
【作者单位】华中农业大学,武汉430070
【正文语种】中文
【中图分类】S646.032
【相关文献】
1.植物抗病基因工程研究进展(Ⅲ):抗真菌植物基因工程 [J], 王伍;伍建宏
2.食用真菌基因工程实验技术(连载) [J], 吕作舟
3.食用真菌基因工程实验技术(连载) [J], 吕作舟
4.食用真菌基因工程实验技术 [J], 吕作舟
5.A型食用菌制种消毒剂对食用菌污染真菌杀菌效果的研究 [J], 周明德;郭振东因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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发酵过程
• 发酵前期:蔬菜刚入坛时,表面带入的微生物,主要是以不抗酸的大肠杆菌 和酵母菌等较为活跃,它们进行异型乳酸发酵和微弱的酒精发酵产生较多的 乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等,二氧化碳以气泡从水槽内放出,逐渐使坛 内形成嫌气状态。
• 发酵中期:由于前期乳酸的积累,pH下降,嫌气状态的形成,乳酸杆菌活跃, 进行同型乳酸发酵,乳酸积累pH达3.5~3.8.大肠杆菌、酵母菌、霉菌等的活动 受到抑制。这一期为完全成熟阶段,泡菜有酸味且清香品质最好。
• 腌制过程中,亚硝酸盐的含量是——先增加后减少。坛内中硝酸还原 菌的繁殖,促进硝酸盐还原成亚硝酸盐,腌制久了,乳酸菌大量繁殖, 抑制硝酸还原菌的繁殖,亚硝酸盐含量逐渐下降。
发酵香肠 鱼酱
发酵肉制品
发酵香肠
• 加工工艺 :肉破碎成肉糜,然后与盐、糖、色泽稳定剂、调味剂和硝 酸盐或亚硝酸盐(或两者都加入)等混合,将其灌入肠衣中,室温下 发酵(25-35℃)。
• 微生物 :啤酒片球菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、布氏乳 杆菌、微球菌、葡萄球菌、嗜盐和耐盐细菌、青霉、曲霉及酵母菌,作用后,发生解离或酯键受 到破坏,易于被机体吸收。
05
发酵过程中,乳酸菌还会产生人体所必需的的维生 素B1、维生素B2、维生素B6,维生素B12、烟酸和 叶酸等营养物质。
豆腐乳 豆酱 豆豉 天培 纳豆 酸豆汁
发酵豆制品
• 豆腐乳:利用毛霉、根霉等菌 种在豆腐块上生长时分泌的多 种酶,使豆腐坯中的蛋白质分 解成氨基酸,淀粉质糖化,发 酵成乙醇、有机酸、酯类等物 质,使豆腐乳具有独特的风味 和细腻的质地。
牛奶中的乳糖经乳酸菌发酵,其中20-30%被分解成葡 萄糖和半乳糖。前者进一步转化成为乳酸或其他有机酸, 这些有机酸有利于身体健康;后者被人体吸收后,可参 与幼儿脑苷脂和神经物质的合成,并有利于提高乳脂肪 的利用率。
牛奶中的蛋白质经发酵作用后,乳蛋白变成微细的 凝乳粒,易于被人体消化吸收。
03
酸奶中的磷、钙和铁易被吸收,有利于防治婴幼佝 偻病和老人骨质疏松病。
泡菜
• 泡菜古称菹,是指为了利于长时间存放而经过发酵的蔬菜。它是一种 以湿态发酵方式加工制成的浸制品,为泡酸菜类的一种。泡菜制作容 易,成本低廉,营养卫生,风味可口,利于贮存。在我国四川、东北、 湖南、湖北、河南、广东、广西等地民间均有自制泡菜的习惯。目前 较受欢迎的是川味和韩味泡菜,在许多风味餐馆和家庭中,都有其踪 影,它鲜嫩清脆,可以增进食欲,帮助消化与吸收,还可用以配菜, 烹成各种菜肴。但是泡菜含有一定量的亚硝酸盐,危害身体健康,所 以不宜多吃。
灵芝
杏鲍菇
茶树菇
营养价值
一高 高蛋白 二无 无淀粉、无胆固醇 二低 低糖、低脂肪 四多 维生素、氨基酸、矿质元素、膳食纤维素
被评价为
• 集中了食品的一切良好特性 • 营养价值达到植物性食品的顶峰 • 植物肉 • 上帝食品 • 长寿食品(功能性食品)
相当于
12公斤牛奶
保健作用
• 提高免疫力 • 抗肿瘤 • 降低血清胆固醇 • 改善血液循环、提高血液载氧能力 • 提高肝脏解毒能力
牛肝菌
松茸
灵芝
其他可食 用微生物
酵母 细菌(乳酸菌、光合细菌、根瘤菌、地衣芽孢杆菌) 微型藻(地木耳、小球藻、螺旋藻)
地木耳(地皮菜)
• 念珠藻,为常见的固氮蓝藻。一般生长在阴暗潮湿的地方,暗黑色, 有点象泡软的黑木耳。 地皮菜富含蛋白质、多种维生素和磷、锌、钙等矿物质,科学家 还研究发现,地皮菜所含的一种成分可以抑制人大脑中的乙酰胆碱酯 酶的活性,从而能对老年痴呆症产生疗效。
• 豆酱:米曲霉分泌蛋白酶、淀 粉酶及纤维素酶的能力较强, 它们把原料中的蛋白质分解为 氨基酸,淀粉变为糖类,在其 他微生物共同作用下生成醇、 醛、酸、酯等,形成豆酱特有 的风味。
• 天培(Tempeh ,天贝):为高蛋白大 豆发酵食品,由印度尼西亚传入我国。 以大豆为原料,由家庭作坊通过自然发 酵工艺制作,后来发展到工业化生产。 曾在二次世界大战中,拯救了无数盟军 的性命 。天贝的营养价值让世人惊奇, 被誉为“肉的替代食品”,是素食者喜 爱的食材, 从上世纪九十年代始,天贝 成为欧美餐饮健康的代表食物,至今风 行。
天赐的美味
食用真菌
蕈菌:真菌中能形成大型肉质子实 体并能供食用的种类,包括食用菌和药 用菌。在分类上属于菌物界真菌门。
• 全球2000多种,我国有1500余种。
• 我国已鉴定食用菌981种,其中人工栽培的70余种,大规 模生产 20余种,包括常规菌类、药用菌类和珍稀菌类。
香菇


草菇 平菇

猴头
转化的灵感
• 发酵乳制品 • 发酵豆制品 • 发酵果蔬制品 • 发酵肉制品
发酵乳制品
• 发酵乳制品是指良好的原料乳经过杀菌后,接种特定的微生物进行发 酵,产生具有特殊风味的食品。它们通常具有良好的风味、较高的营 养价值、还具有一定的保健作用。常用发酵乳制品有酸奶、奶酪、酸 奶油、马奶酒等。
酸奶
• 纳豆(Natto):是日本的一种传统豆 类发酵食品,在日本已被食用了2000 多年,现在是一种流行的保健食品。 新鲜的纳豆色泽金黄、吃时有很多长 长拉丝样物质,再配以适宜的佐料, 深受日本人民的喜爱。纳豆除了具有 风味独特的口感、较低热量、较高的 蛋白含量外,还具有多种保健功能。
发酵果蔬制品
泡菜 酸菜 酱腌菜 果酒 果醋
• 以新鲜的牛奶为原料,经过巴氏杀菌后再向牛奶 中添加有益菌(发酵剂),经发酵后,再冷却灌 装的一种牛奶制品。目前市场上酸奶制品多以凝 固型、搅拌型和添加各种果汁果酱等辅料的果味 型为多。酸奶不但保留了牛奶的所有优点,而且 某些方面经加工过程还扬长避短,成为更加适合 于人类的营养保健品。
营养价值
01 02
• 发酵后期:继续进行乳酸发酵,乳酸积累达1.2%以上时,乳酸杆菌 的活性受到抑制,发酵速度逐渐变缓甚至停止。
• 腌制1周左右即可开坛食用。也可随时加入新鲜蔬菜,不断取用。
亚硝酸盐的控制
• 温度过高、食盐用量不足10%、腌制时间过短,容易造成细菌大量繁 殖,亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后,亚硝酸盐的含量开始下 降。
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