肝脏病理切片形态观察步骤

肝脏病理切片形态观察

1﹑冲洗

取出已用10%甲醛固定的肝组织，用小刀将其切成小块，置包埋盒（可放多个），用纱布包裹，放于塑料瓶中，流水冲洗一晚。

2﹑脱水透明浸蜡

50%乙醇 30min

60%乙醇 30min

70%乙醇 30min

80%乙醇 30min

90%乙醇 30min

95%乙醇Ⅰ 30min

95%乙醇Ⅱ 30min

无水乙醇Ⅰ20min

无水乙醇Ⅱ20min 脱水

二甲苯Ⅰ 5min

二甲苯Ⅱ 5min 透明

石蜡Ⅰ10min

石蜡Ⅱ10min 浸蜡（提前开启水浴锅80度，待石蜡几乎融解完全后调至60度）

3﹑包埋

提前开启包埋机，预热半小时融解石蜡，将上一步已经透蜡的组织放入保温缸待用（或室内常温正常放置）。取组织至于铁包埋框，用镊子调整位置是其位于中间，上面放置包埋盒，滴入融解的石蜡进行包埋（期间同样需调组织与蜡块中间位置），待冷却后取出包埋盒，置-10度冰箱备用。

4﹑切片﹑展片﹑烤片

将包埋好的组织修整后置于切片机，调整位置且设切片厚度为4μm，连续切片（备刀片、毛笔），切好后放于白纸上，取已用30%乙醇超声漂洗后的载玻片（于烧杯乙醇浸润），在长条切片中切段依次放入装有30%乙醇小盒子中展开，几秒后用载玻片取出再放入40度水浴锅中展开，待切片展开完全整齐无褶皱后载玻片捞起放于塑料托盘中（或铁制载玻片架），于60度恒温箱烘片3h，备用。

5、染色

二甲苯Ⅰ3min

二甲苯Ⅱ3min 脱蜡

无水乙醇Ⅰ3min

无水乙醇Ⅱ3min

95%乙醇Ⅰ3min

95%乙醇Ⅱ3min

75%乙醇3min

30%乙醇3min

蒸馏水（于60度水浴）2min 复水

苏木素-伊红染色核染液染色7.5min，水洗3-5s

浆染液染色3min，增色液冲洗1-2次

滤纸吸干（或放铁制载玻片架自然晾干）

6、封片

待载玻片组织周围残余液体晾干后，立刻滴入一滴中性树胶于组织上，盖上盖玻片自然覆盖，平放，固定后显微镜观察。