2_6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
生物化学实验：维生素C定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
ʺ目的要求
学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法
ʺ实验原理
还原性Vc + 氧化性染料
氧化性Vc + 还原性染料
粉红色 (中性和碱性)
无色
•Vc放在滴定瓶中 •2,6-二氯酚靛酚放在微量滴定管中 •终点前, 2,6-二氯酚靛酚全部被还原为无色
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
•终点时, 剩下有2,6-二氯酚靛酚.呈现粉红色
【取10ml 1%草酸作空白对照 【用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V2
V1 - V2相当于0.1mg抗坏血酸
四、 样品抗坏血酸液的滴定V3
【取滤液10ml(相当于样品Vc的1/10)置100ml锥形瓶中
【 用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V3。
ʺ试剂和器材
一、试剂
•2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 •1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。 •标准抗坏血酸溶液（0.1mg/ml）: 准确称取50mg纯抗坏血
酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶 液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用 前配制。
ʺ操作方法
一、提取 •水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸
吸干表面水分
•称取5g蔬菜或水果，剪碎,加入少量(1-3ml) 2%草酸，用研 钵研磨至浆状，倒入至100ml的容量瓶中，往研钵中加入少 量多次2%草酸，把研磨后的样品完全转移，并定容至100ml 容量瓶中（研磨，转移，定容）。
五、2%草酸的滴定V4
维生素C的测定(2-6-二氯酚靛酚滴定法
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法一、测定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。
2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。
在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。
根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
反应式如下：二、实验仪器与试剂1.仪器组织捣碎机；水果刀；托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒；蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸；20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。
及试剂本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。
(3)抗坏血酸标准溶液：称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。
(4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液：称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C文章来源：/目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。
当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
操作步骤1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。
2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。
由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。
3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前注意：1. 滴定过程宜迅速，一般不超过2min，因为样品中某些杂质亦能还原二氯酚靛酚，尽管其还原能力较弱且还原速度较Vc更慢。
2. 滴定所用染料宜控制于1~4ml，如果样品含Vc含量过高/低，可酌量增/减样液)。
3. 样品提取液应避免日光直射，否则会加速Vc氧化。
计算m=VT/m0×100式中m：100g样品中含Vc的质量(mg)V：滴定时所用去染料体积(ml)T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml)m0：10ml样液相当于含样品之质量数(g)试剂和器材试剂1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验七-维生素C的定量测定-2-6-二氯酚靛酚法
抗坏血酸标准溶液(0.2mg/ml):称取50mg(准确至 0.1mg)抗坏血酸,溶于浸提剂 中并稀至250ml。现配现 用。
2,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取 碳酸氢钠52mg溶解在200ml 热蒸馏水中,然后称取2,6 －二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定 容至 250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用 前,用标准抗坏血酸标定其滴定度。
(3) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反 应进行得很慢
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五、思考题
1、指出本实验采用的定量测定维生素C的 方法有何优缺点？
2、简述维生素C的生理意义。
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1、为了测得准确的维生素C浓度，实验过 程中应注意哪些操作步骤？为什么？
（1）在操作过程中某些步骤一定要快，避免Vc的氧化，因 为Vc具有还原性，还要向样品中加入草酸溶液，保护Vc；
(2)对于Vc标准溶液要现用现配，尽量精确，避免Vc氧化， 避免因为标准溶液的误差造成的误差； (3) 整个操作过程 要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超 过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样 品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提 取液稀释度。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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标定
吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用 2 ,6－二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取 10ml浸提剂做空白试验。
滴定度(mg/ml)＝cv/V1－V2 s─每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数; C—抗坏血酸的浓度,mg/ml; V—吸取抗坏血酸的体积, ml; V1—滴定抗坏血酸溶液所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml; V2—滴定空白所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml。 白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。
维生素C的定量测定
维生素C的定量测定维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的：掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理1、维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2、在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品中的维生素C被完全氧化后，在滴加过量的2，6-二氯酚靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
3、如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯酚靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。
三、实验仪器1、新鲜猕猴桃2、50ml容量瓶3、微量滴定装置4、100ml锥形瓶5、研钵6、漏斗7、吸管四、实验试剂1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水2、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液五、实验步骤1.样品中抗坏血酸的提取：1）将猕猴桃去皮，准确称取果肉5.090g，加2%草酸试剂10ml 置研钵中研成浆状；2）将浆状物倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。
2.滴定样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分别放入两个100ml 锥形瓶中，用2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色。
滴定终点要保持15秒钟；六、实验结果：已知：1ml2，6-二氯酚靛酚染料相当于1毫克抗坏血酸初始读数/ml 最终读数/ml共用染液/ml抗坏血酸毫克数/mg10ml滤液平均含抗坏血/mg50ml滤液含抗坏血/mg滤液1 0.011 1.604 1.593 1.593 1.589 7.945 滤液2 0.048 1.633 1.585 1.585由上表可知5.090g猕猴桃果肉含7.945mg抗坏血酸素，则100g 猕猴桃果肉中含抗坏血酸素约156.090mg.七、实验结果分析与思考：1.2,6-二氯酚靛酚滴定法测定Vc含量的优缺点?优点：它具有简便易行、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
2_6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效。
氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。
当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
操作步骤1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。
2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。
由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。
3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前注意：1. 滴定过程宜迅速，一般不超过2min，因为样品中某些杂质亦能还原二氯酚靛酚，尽管其还原能力较弱且还原速度较Vc更慢2. 滴定所用染料宜控制于1~4ml，如果样品含Vc含量过高/低，可酌量增/减样液3. 样品提取液应避免日光直射，否则会加速Vc氧化计算m = VT /m0 × 100式中m：100g样品中含Vc的质量(mg)V：滴定时所用去染料体积(ml)T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml)m0：10ml样液含样品之质量数(g)试剂和器材试剂1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。
[精品]2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
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[精品]2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C维生素C，也被称为抗坏血酸，是人体所需的一种重要营养物质，具有抗氧化、促进铁吸收等重要作用。
由于人体无法自行合成维生素C，因此需要从食物中摄取。
然而，维生素C很容易被氧化破坏，因此在分析检测过程中需要选择一种敏感、精确、简便的方法对维生素C进行定量分析。
2,6-二氯酚靛酚滴定法是一种广泛应用于维生素C分析的方法之一。
下面将介绍这种方法的原理和操作步骤。
原理：2,6-二氯酚靛酚是一种指示剂，可以在酸性条件下呈现红色，而在还原剂作用下会褪色。
维生素C是一种还原剂，可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原物。
因此，在维生素C存在的条件下，将2,6-二氯酚靛酚逐滴加入已知浓度的维生素C溶液中，当维生素C 耗尽时，2,6-二氯酚靛酚不再被还原，呈现出由红色变为无色的转变。
在此过程中记录2,6-二氯酚靛酚的加入量即可计算维生素C的浓度。
操作步骤：1. 器材准备称取约100mg的2,6-二氯酚靛酚，加入100ml的95%乙醇中，摇匀即可得到表现绿色的溶液。
同时准备0.1mol/L的氢氧化钠溶液、2%的硫酸溶液，以及待测样品。
a. 将待测样品取约2g加入研钵中，加入10ml的2%的硫酸溶液，反复挥发至浓缩，使样品保持在干燥状态。
b. 加入20ml的去离子水，研钵放入热水浴中，加热溶解。
c. 实验设一个平衡水平标志线，定量转移10ml溶液到较大的滴定瓶中，加入几滴2,6-二氯酚靛酚溶液，搅拌均匀。
d. 向滴定瓶中逐滴加入氢氧化钠溶液至溶液呈深黄色，为初始色。
e. 开始滴定，滴定钠氢氧化溶液至溶液呈现红色，即为维生素C耗尽时，记录钠氢氧化溶液的滴定量。
f. 重复操作并求得平均数，计算维生素C浓度。
注意事项：1. 滴定瓶上方要留有足够的空间，以免在滴定时水溅出来。
2. 滴定时要缓慢滴加氢氧化钠溶液，以避免过量反应。
3. 滴定时要注意加入2,6-二氯酚靛酚溶液后，溶液会变为紫色，此时需要加入氢氧化钠溶液搅拌均匀使其还原为黄色，然后再开始滴定。
2,6-二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量
2,6-二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量2,6-二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量一、实验目的维生素C是生物体内抗氧化体系成员之一。
因此，维生素C含量可作为植物抗衰老和抗逆境的重要生理指标，也可作为果品质量、选育良种的鉴别指标。
通过本实验掌握用2,6-二氯酚靛酚钠法测定植物组织维生素C含量的方法。
二、实验原理2，6-二氯酚靛酚钠是氧化性染料，可将还原态的维生素C氧化成脱氢维生素C，而染料本身从深蓝色被还原成无色的衍生物。
2，6-二氯酚靛酚钠在酸性条件下呈红色。
在滴定终点之前，滴下的2，6-二氯酚靛酚钠立即被还原成无色。
当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。
三、实验材料新鲜生菜四、设备与试剂滴定管、三角瓶、研钵、量筒、移液管1％草酸，0.1%2，6-二氯酚靛酚钠溶液五、实验步骤（一）维生素C的提取称取1.0 g新鲜样品（已称好），置研钵中，分次加20ml 1％草酸，研成匀浆（用1%的草酸定容20ml）。
通过纱布过滤后取10ml 放于离心机中3000r/min离心10min,吸取上清使用。
（二）维生素C 的测定吸取滤液10 ml，放入50 ml三角瓶中，立即用0.1% 2，6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的粉红色在15 s内不消失为止。
记录所用滴定液体积（另取10ml 1%草酸作空白对照）。
（三）标准液的标定取1mg/ml抗坏血酸溶液1ml置于锥形瓶中，加9ml 1%草酸，用0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色15s不消失。
计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸（取10ml 1%草酸作空白对照）。
1.2ml 染料相当于1mg抗坏血酸（四）含量计算维生素C（mg/g样品）=（样品消耗染料体积-空白消耗染料体积）╳提取定容后的体积╳1ml染料能氧化抗坏血酸的毫克数/滴定用的样品体积╳水果质量六、注意事项1. 操作要尽可能快，并防止与铁、铜器具接触，以减少维生素C 的氧化。
2. 草酸及样品的提取液避免日光直射。
维生素C的测定——2,6一二氯靛酚滴定法
实验六、维生素C的测定——2，6一二氯靛酚滴定法（1）原理还原型抗坏血酸可以还原染料2，6一二氯靛酚。
该染料在酸性溶液中是粉红色（在中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原后颜色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。
（2）试剂①1%草酸溶液（m/V）②2%草酸溶液（m/V）③抗坏血酸标准溶液准确称取20mg抗坏血酸，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，置冰箱中保存。
用时取出5ml，置于50ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，配成0.02mg／ml 的标准使用液。
标定吸取标准使用液 5ml于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液 0.5ml、1%淀粉溶液 3滴，以 0.001mol/L碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。
计算 c＝088.021VV式中 c——抗坏血酸标准溶液的浓度，mg/ml；V1—一滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，ml；V2—一滴定时所取抗坏血酸的体积，ml；0.088—一1ml 0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/ml④2，6-二氯靛酚溶液称取 2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml 含有 52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。
次日过滤于 250ml棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。
每星期标定一次。
标定取 5ml已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1%草酸溶液 5rnl，摇匀，用 2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色，在15s不褪色为终点。
计算：T＝21V Vc式中 T—一每毫升染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/ml；c—一抗坏血酸的浓度，mg/ml；V1－一抗坏血酸标准溶液的体积，ml；V2——消耗2，6-二氯靛酚的体积，ml。
⑤ 0.000167mol／L碘酸钾标准溶液精确称取干燥的碘酸钾0.3567g，用水稀释至100ml，取出 lml，用水稀释至100ml，此溶液 lml相当于抗坏血酸 0.088mg。
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法实验十五抗坏血酸含量测定(2,6-二氯酚靛酚法)一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素 C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素 C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素 C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果(如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等)和蔬菜(觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等)中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素 C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素 C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素 C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用 2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1(仪器(1)天平(2)组织捣碎机(3)微量滴定管(5ml)(4)容量瓶(50ml)(5)刻度吸管(5ml，10ml)(6)锥形瓶(100ml)2(试剂(1)l,草酸溶液:草酸1g溶于 100ml蒸馏水中(2)2,草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中(3)抗坏血酸标准溶液(0.1 mg,ml):精确称取10mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)用1,草酸溶液溶解并定容至100ml。
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法实验十五抗坏血酸含量测定(2,6-二氯酚靛酚法)一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素 C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素 C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素 C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果(如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等)和蔬菜(觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等)中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素 C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素 C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素 C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用 2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1(仪器(1)天平(2)组织捣碎机(3)微量滴定管(5ml)(4)容量瓶(50ml)(5)刻度吸管(5ml，10ml)(6)锥形瓶(100ml)2(试剂(1)l,草酸溶液:草酸1g溶于 100ml蒸馏水中(2)2,草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中(3)抗坏血酸标准溶液(0.1 mg,ml):精确称取10mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)用1,草酸溶液溶解并定容至100ml。
维生素C的定量测定—2,6-二氯酚靛酚滴定法
维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法实验目的1.学习定量维生素C的原理和方法2.掌握微量滴定技术实验原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。
它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。
维生素C是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。
它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。
维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。
在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素C氧化成脱氢维生素C。
氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。
当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。
但当溶液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。
所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。
其化学反应式如下：仪器、试剂（一）仪器：研钵、天平、容量瓶（100ml）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml）、微量滴定管、漏斗（二）材料、试剂1、新鲜蔬菜或新鲜水果2、1%草酸溶液1g草酸溶于100ml蒸馏水中3、2%草酸溶液2g草酸溶于100ml蒸馏水中4、标准维生素C溶液准确称取20mg纯维生素C 粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml，再取其中10ml稀释至100ml，即得0.02mg/ml的维生素C溶液。
在使用前临时配制。
5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液溶解50mg2，6—二氯酚靛酚于约200ml含有52mg的NaHCO3的热水中，冷后稀释至250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。
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实验五食品中维生素C含量测定
维生素C是人类营养中最重要维生素之一，缺少它是会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。
今年来，发现它可以预防和治疗感冒，增强机体对肿瘤的抵抗力，并对化学致癌物具有阻断作用。
维生素C是己糖醛酸，属于水溶性维生素。
主要分为还原性和脱氢型两种，它广泛分布在植物的组织中，新鲜的水果、蔬菜特别是枣、辣椒、柿子叶、苹果、猕猴桃、芹菜等果蔬中含量较多，果蔬中维生素C含量受果树种类、品种、栽培条件、成熟度和贮藏条件有关。
因此，测定维生素C的含量，可以作为果蔬的营养品质和贮藏效果的评价之一。
一、目的要求
1.学习并掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
2.进一步掌握滴定法的基本操作技术。
3. 了解测定蔬菜和水果中维生素C含量意义。
二、实验原理
维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。
当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
三、操作步骤
1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。
2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。
由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。
3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前
计算
m=VT/m0×100
式中m：100g样品中含Vc的质量(mg)
V：滴定时所用去染料体积(ml)
T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml)
m0：10ml样液相当于含样品之质量数(g)
试剂和器材
试剂
1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。
2. 1%草酸溶液：溶1g草酸于100ml蒸馏水中。
3. 标准抗坏血酸溶液(0.1mg/ml)：准确称取50.0mg纯抗坏血酸，溶于1%草
酸溶液，并稀释至500ml。
贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配置。
4. 1%HCl溶液。
5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液：溶500g 2,6-二氯酚靛酚于300ml含有104mg
NaHCO3热水中，冷却后加水稀释至500ml，滤去不溶物，贮棕色瓶内，
冷藏(4℃约可保存一星期)。
每次临用时以标准抗坏血酸液标定。
器材
1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等)
2. 吸管1.0ml、10.0ml
3. 容量瓶25ml, 100ml
4. 微量滴定管5ml
5. 天平
6. 研钵
7. 漏斗Φ8cm.
注意事项
1. 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。
2. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。
滴定过程一般不超过2分钟。
因为在本滴定条件下，一些非维生素C的还原性物质也可与2，6-二氯酚靛酚发生反应，影响结
果。
3. 滴定所用2，6-二氯酚靛酚的量应在1-4毫升之间，超出或低于此范围，应增减样品液用量或改变提取液稀释度。
4. 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用。
5. 如果提取液中色素影响测定结果，应用白陶土脱色或加1mL的氯仿，氯仿层呈现淡红色为滴定终点。
6. 绝不容许刻度吸管和容量瓶放在桌面上
思考题
1.为什么滴定终点以淡红色存在15s内为准？
2.要测得准确的Vc值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？。