2_6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C

实验五食品中维生素C含量测定

维生素C是人类营养中最重要维生素之一，缺少它是会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。今年来，发现它可以预防和治疗感冒，增强机体对肿瘤的抵抗力，并对化学致癌物具有阻断作用。

维生素C是己糖醛酸，属于水溶性维生素。主要分为还原性和脱氢型两种，它广泛分布在植物的组织中，新鲜的水果、蔬菜特别是枣、辣椒、柿子叶、苹果、猕猴桃、芹菜等果蔬中含量较多，果蔬中维生素C含量受果树种类、品种、栽培条件、成熟度和贮藏条件有关。因此，测定维生素C的含量，可以作为果蔬的营养品质和贮藏效果的评价之一。

一、目的要求

1.学习并掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。

2.进一步掌握滴定法的基本操作技术。

3. 了解测定蔬菜和水果中维生素C含量意义。

二、实验原理

维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。

氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。

三、操作步骤

1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。

2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。

3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前

计算

m=VT/m0×100

式中m：100g样品中含Vc的质量(mg)

V：滴定时所用去染料体积(ml)

T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml)

m0：10ml样液相当于含样品之质量数(g)

试剂和器材

试剂

1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。

2. 1%草酸溶液：溶1g草酸于100ml蒸馏水中。

3. 标准抗坏血酸溶液(0.1mg/ml)：准确称取50.0mg纯抗坏血酸，溶于1%草

酸溶液，并稀释至500ml。贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配置。

4. 1%HCl溶液。

5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液：溶500g 2,6-二氯酚靛酚于300ml含有104mg

NaHCO3热水中，冷却后加水稀释至500ml，滤去不溶物，贮棕色瓶内，

冷藏(4℃约可保存一星期)。每次临用时以标准抗坏血酸液标定。

器材

1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等)

2. 吸管1.0ml、10.0ml

3. 容量瓶25ml, 100ml

4. 微量滴定管5ml

5. 天平

6. 研钵

7. 漏斗Φ8cm.

注意事项

1. 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。

2. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2分钟。因为在本滴定条件下，一些非维生素C的还原性物质也可与2，6-二氯酚靛酚发生反应，影响结

果。

3. 滴定所用2，6-二氯酚靛酚的量应在1-4毫升之间，超出或低于此范围，应增减样品液用量或改变提取液稀释度。

4. 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用。

5. 如果提取液中色素影响测定结果，应用白陶土脱色或加1mL的氯仿，氯仿层呈现淡红色为滴定终点。

6. 绝不容许刻度吸管和容量瓶放在桌面上

思考题

1.为什么滴定终点以淡红色存在15s内为准？

2.要测得准确的Vc值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？