生长曲线测定方法
细菌生长曲线的测定的实验步骤
细菌生长曲线的测定的实验步骤一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1.实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2.培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
细胞生长曲线实验步骤
细胞生长曲线实验步骤一、准备细胞与培养基1.选择适宜于实验的细胞系，并确保细胞状态良好，无污染。
2.准备所需的培养基，按照说明书进行配制，并在使用前进行无菌过滤处理。
3.准备所需的无菌器械、吸管、离心管等。
二、接种细胞至培养板1.在无菌操作台上，用无菌吸管吸取适量的细胞悬液。
2.将细胞悬液均匀接种至培养板中，每个孔内的细胞数量应保持一致。
3.将接种好的培养板放入培养箱中，设置适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
三、定时观察与计数1.在接种后的不同时间点（如每天或每24小时）观察细胞的生长情况。
2.使用倒置显微镜观察细胞的贴壁生长和形态变化，以及细胞数量的变化。
3.在特定时间点，使用血细胞计数板或自动细胞计数器对细胞进行计数。
四、记录数据1.将每次观察和计数的结果详细记录下来，包括细胞数量、形态变化等。
2.记录实验过程中的温度、湿度、二氧化碳浓度等环境参数。
五、绘制生长曲线1.根据记录的数据，以时间为横轴，细胞数量为纵轴，绘制细胞生长曲线图。
2.生长曲线应反映出细胞数量随时间的变化趋势。
六、数据分析1.分析生长曲线，计算细胞的倍增时间、生长速率等参数。
2.比较不同条件下的细胞生长情况，分析影响细胞生长的因素。
七、清洗与消毒1.实验结束后，将使用过的器械、培养板等进行清洗和消毒处理。
2.清洗可使用去离子水或清洗剂，消毒可使用75%酒精或紫外线照射等方法。
八、实验总结1.总结实验过程中的经验教训，分析可能存在的误差来源。
2.根据实验结果，提出改进实验方法的建议或对未来研究方向的展望。
请注意，以上步骤仅为一般性的细胞生长曲线实验步骤，具体实验过程可能因细胞类型、实验条件等因素而有所不同。
在实际操作中，请遵循实验室的安全规定和操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定
蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定蜡样芽孢杆菌是一种常见的细菌，它在生物学和医学领域中都有着重要的应用。
为了更好地了解蜡样芽孢杆菌的生长规律，科学家们通常会使用生长曲线来进行测定。
本文将介绍蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定方法和结果。
一、蜡样芽孢杆菌的生长特点蜡样芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，它的生长需要一定的温度和营养物质。
在适宜的条件下，蜡样芽孢杆菌的生长速度非常快，可以在短时间内形成大量的细胞。
同时，蜡样芽孢杆菌的生长也受到环境因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。
蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定通常采用光密度法。
具体步骤如下：1.准备培养基：将适量的蜡样芽孢杆菌接种到含有营养物质的培养基中，使其在适宜的条件下生长。
2.测定光密度：在培养过程中，每隔一段时间就用分光光度计测定培养液的光密度。
光密度的值反映了细胞数量的变化，因此可以用来绘制生长曲线。
3.绘制生长曲线：将测定到的光密度值绘制成时间的函数图像，即可得到蜡样芽孢杆菌的生长曲线。
三、蜡样芽孢杆菌生长曲线的结果分析蜡样芽孢杆菌的生长曲线通常可以分为四个阶段：潜伏期、指数期、平稳期和衰退期。
1.潜伏期：在培养开始的早期，蜡样芽孢杆菌的生长速度较慢，此时的生长曲线呈现出一个平缓的上升趋势。
2.指数期：当蜡样芽孢杆菌适应了培养条件后，它的生长速度会迅速加快，此时的生长曲线呈现出一个急剧上升的趋势。
3.平稳期：当蜡样芽孢杆菌的生长速度达到最大值后，它的生长速度会逐渐趋于稳定，此时的生长曲线呈现出一个平缓的上升趋势。
4.衰退期：当蜡样芽孢杆菌的生长环境变得不适宜时，它的生长速度会逐渐减缓，此时的生长曲线呈现出一个下降的趋势。
通过对蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定和分析，我们可以更好地了解蜡样芽孢杆菌的生长规律，为其在生物学和医学领域中的应用提供更加准确的数据支持。
蜡样芽孢杆菌生长曲线的测定是一项非常重要的实验技术，它可以帮助我们更好地了解蜡样芽孢杆菌的生长规律，为其在生物学和医学领域中的应用提供更加准确的数据支持。
实验6-2酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定
实验酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定1 目的要求（1）了解酵母菌、细菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理；（2）学习用血球计数板计数法和比浊法分别测定酵母和细菌的生长曲线。
2 基本原理生长曲线是单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
测定时一般将一定数量的微生物纯菌种接种到一定体积的已灭菌的适宜的新鲜培养液中，在适温条件下培养，定时取样测定培养液中菌的数量，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，绘制得到生长曲线。
不同的微生物其生长曲线不同，同一微生物在不同培养条件下其生长曲线亦不同。
但单细胞微生物的生长曲线规律基本相同，生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。
测定一定培养条件下的微生物的生长曲线对科研和实际生产有一定的指导意义。
测定生长曲线时需要对生长的单细胞微生物定时取样计数，对于酵母细胞和比较大的细菌细胞可采用血球计数板计数法计数，亦可采用比浊法计数，但对于小的细菌细胞一般采用比浊法。
比浊法是根据培养液中菌细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比的关系，利用光电比色计测定菌悬液的光密度值（OD值），以OD值来代表培养液中的浊度即微生物量，然后以培养时间为横坐标，以菌悬液的OD值为纵坐标绘出生长曲线。
此方法所需设备简单，操作简便、迅速。
血球计数板法是利用一块血球计数板来进行计数的。
血球计数板是一块特制的厚玻璃片，中央平台比两边平台低0.1mm，上有两个被精细刻化为400个小方格的格网，面积为1mm2，加盖盖玻片后即构成0.1 mm3体积的计数室。
血球计数板有两种规格：一种是将1 mm2面积的网格划分为25个大格，每个大格再分成16个小格，既25´16；另一种为16´25。
计数时只需无菌操作将稀释到适宜浓度的菌悬液取一滴从盖玻片一侧渗入到计数室，待静置平衡后于显微镜高倍镜下计数，用下面公式算出菌液中细胞数。
单细胞微生物细胞数/mL=5个中格内细胞数¸5´25（或16）´104´菌液稀释倍数3 实验材料3．1 菌种酵母菌和大肠杆菌。
MTT法测定细胞生长曲线
MTT法测定细胞生长曲线
1、取生长状况良好的细胞，常规消化制成单细胞悬液并计数，调整细胞成六个浓度梯度，依次为：5x103、1x104、2x104、3x104、4x104、5x104/ml，均匀接种细胞于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬。
液200ul，每个浓度组设6个复孔,共接种7块培养板，37℃、5%C02浓度，饱和湿度培养箱中连续孵育24/48/72/96/120/148/172小时后。
2、每孔加入20ulMTT溶液(smg/m1用PBS<ph=7.4>配)，继续孵育4h后终止培养。
3、快速翻转培养板,弃去上清液,每孔加入150ulDMSO,振荡10min，使MTT蓝紫色结晶完全溶解。
4、用酶联免疫检测仪于490nm处检测各孔的吸光值(OD值)，并以未接种细胞只加培养基孔的吸光值为空白对照调零，取6孔平均值。
5、实验重复3次，以培养“时间”为横轴，“吸光值”为纵轴绘制细胞生长曲线。
[精品]细菌生长曲线的测定
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[精品]细菌生长曲线的测定细菌生长曲线的测定是细菌学中的一项重要实验。
它可以帮助我们了解细菌的生长繁殖规律及其影响因素，为控制细菌繁殖提供理论依据。
本次实验将介绍如何通过外观观察、菌落计数及测定细菌生物量的方法，获得细菌在液体培养基中的生长曲线。
实验步骤：一、准备实验材料和试剂1、选取一种细菌菌株，本次实验选择了大肠杆菌（Escherichia coli）；2、配置好液体培养基，一般为普通营养琼脂培养基、肉汤培养基等；3、消毒好实验室的工作台面及实验仪器；4、准备好移液管、试管、比色管和加热消毒的线圈镊子等实验用具。
二、制备不同浓度的菌液1、挑选一根菌棒，从培养基上接入一些带有细菌的菌落，将菌落均匀涂抹于培养基表面；2、将含有细菌的培养基放置在恒温摇床中，在适宜的温度下进行培养；3、当细菌生长至一定程度（一般在对数生长期）时，用无菌的移液管，在培养基中取出一定量的菌液；4、分别将不同体积的菌液加入到含有培养基的试管中，制备成不同浓度的菌液。
三、测定不同浓度菌液对应的OD600值1、将制备好的不同浓度菌液放入洗涤过的比色管中；2、由于细菌太小，肉眼观察不能得出其数量的增多或减少，因此需要使用分光光度计在600nm处测量各个浓度的菌液的吸光度（OD）值；3、重复测量3次，取平均值计算OD600；4、根据OD600值和菌液中细胞数量的线性关系，可通过OD600值推算出细胞数。
2、每隔2-3个小时，取出一定量的菌液，测量其OD600值，记录下菌液对应时间的值；3、采用计数培养法，每隔一定时间取出一定体积的菌液，进行菌落数的计数；4、利用OD600值曲线和菌落数曲线绘制出细菌生长曲线。
实验注意事项：1、实验期间需在无菌条件下操作，防止细菌的外界感染对实验结果的影响；2、实验者需佩戴适当的防护手套及实验服，以免对人体造成伤害；3、制备好菌液后需要及时放置在摇床中，防止菌落外的细菌感染进去；4、测量OD600值时比色管必须清洗干净，用甲醇或无菌去离子水。
细胞生长曲线的测定
（一）细胞生长曲线的测定（细胞计数法）1．取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成细胞悬液后计数(见四、细胞传代培养的实验步骤)。
如是非粘壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。
2．根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104／mL作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。
3．24 h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数。
计算平均值。
连续计数7 d。
4．根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数／mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。
(细胞计数方法请参照实验三)(二)细胞生长曲线测定(MTT法) 1．制备1 mL细胞悬液。
空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。
加入0．1 mL MTT于37℃孵育4 h。
使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。
2．加1 mL DTW脱色液，37℃至少静置30 min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。
3．吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570 nm，参考波长630 nm。
4．每隔24 h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。
（二）细胞蛋白电泳一.细胞总蛋白抽提细胞裂解液三去污裂解液:50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)，150 mmol/L NaCl，0.2 g/L叠氮钠，1 g/LSDS，100 mg/L Aprotin，10 g/L NP-40，5 g/L去氧胆酸钠，100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF)总蛋白抽提程序：1.PBS洗细胞3 次2.加入裂解缓冲液（1.5x10 6 个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液），冰上放置20min3.收集裂解液4.离心，12000转，2~10min5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-78度备用。
试剂：1. 30% 聚丙烯酰胺：29g 丙烯酰胺，1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺，100ml 水，0.45um 滤膜过滤，棕色瓶，室温保存2. 10% 过硫酸铵：1g 过硫酸铵，10ml 水，4℃保存3. 10% SDS：100g SDS，1000ml 水，68℃助溶，pH 7.24. TEMED：lml TEMED，99ml 水，棕色瓶，4℃保存5. 5X Tirs-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tirs碱，94g 甘氨酸，50ml 10%SDS，1000ml 水，使用时配制成1X【操作步骤】l.将电泳槽玻璃板洗净，吹干，安装好；2.用1％的琼脂糖电泳缓冲液（1g琼脂糖溶于100ml电泳缓冲液）封严玻璃板的边和底（保证不漏胶）；3.配分离胶，将配好的分离胶立即倒入凝胶槽内，至凝胶槽高三分之二处，加入蒸馏水密封。
MRC-5体外培养细胞生长曲线测定 - 详细
MRC-5体外培养细胞生长曲线测定一．实验目的认识细胞接种和传代培养中细胞生长增殖规律。
二．实验原理在培养接种或每一次传代培养过程中，培养物都要经历相似的恢复和生长过程。
细胞生长曲线反映的是培养细胞从接种到传代之前的生长状况，也是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，紧接着进入大量分裂的指数生长期。
在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平台期及退化衰亡4个部分。
以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标绘制细胞的生长曲线坐标图。
三．实验准备3.1实验人员用品工作服、帽子、口罩、手套、肥皂、医用手臂消毒桶、0.1%新洁尔灭消毒液；3.2消毒和灭菌用品电炉、高压蒸汽灭菌锅、铝盒、24孔细胞培养板、移液管、枪头、洗耳球、离心管（规格：1.5mL/5mL/10mL）；3.3药品和试剂DMEM细胞培养液（10%血清）、0.25%胰蛋白酶-0.53Mm EDTA、PBS(-)；3.4 细胞MRC-5人二倍体细胞；3.5设备与器材CO2培养箱、离心机、移液枪（规格：1000uL、200uL）、二级生物安全柜、血细胞计数板、显微镜、记号笔、废液瓶；四．实验步骤4.1细胞接种4.1.1选择生长良好的MRC-5人二倍体细胞，移液管移除原细胞培养液至废液瓶中；4.1.2 DPBS润洗三次，每次5mL；4.1.3 吸管吸取1mL胰蛋白酶溶液浸润培养层细胞，37℃恒温消化2～10min；4.1.4用含10%血清的DMEM培养液4mL终止消化；4.1.5将终止消化后的细胞悬液用移液管转移至离心管中，1000r/min离心8min，弃上清；4.1.6吸管吸取2mL DMEM细胞培养液悬浮细胞；4.1.7对细胞悬浮液进行细胞计数；4.1.8调整悬浮液的细胞浓度分别为5×103个/mL(A) 、2×104个/mL(B)、 5×104个/mL(C)3种不同的细胞浓度（细胞理论数：1.575×104个）；4.2 细胞培养4.2.1依次将浓度为5×103个/mL(A) 、2×104个/mL(B)、 5×104个/mL(C)的细胞悬液分装于3个有盖的24孔细胞培养板，分别按每孔接种1mL，每种浓度各接21孔，进行细胞的悬浮培养；4.3 细胞换液细胞接种培养后，分别按照每间隔3d和5d换液一次。
生长曲线和细胞生长周期的测定
生长曲线和细胞生长周期的测定MTT比色法绘制生长曲线生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。
原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。
活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。
终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。
每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。
4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
流式细胞仪测细胞生长周期：流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。
流式细胞仪细胞周期检测流程1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。
2，遇冷PBS 清洗两次3，加入胰酶（Tripsin），静止2-3分钟（消化时间不要过长，以免损伤细胞），加入2-3mlDMEM慢慢吹打细胞成单细胞悬液。
4，1000rpm 离心3min5，去上清，加入遇冷PBS 1000rpm 离心3min6，去上清，加入0.5ml PBS（预冷）悬浮细胞7，加入1.5ml无水乙醇在漩涡器上涡旋（逐滴加入）8，-20℃固定过夜（overnight）9，拿出已固定细胞，1000rpm 离心3min 去上清10，加入预冷PBS 100rpm 离心3mim11，去上清加入500ul---1000ul 预冷PBS 悬浮细胞12，加入5-10ul RNA酶37℃水浴消化30min13，过400目细胞筛注入EP管,封口膜封口。
无乳链球菌生长曲线测定方法
无乳链球菌生长曲线测定方法无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）是一种常见的致病菌，特别是在新生儿和免疫系统低下的人群中。
测定无乳链球菌的生长曲线是研究其生长特性和病原机理的重要方法之一。
以下是一种常用的无乳链球菌生长曲线测定方法：1. 培养基的制备：选择适用于细菌生长的培养基，如Tryptic Soy Broth（TSB）。
按照厂家指示配制TSB，并进行无菌过滤。
2. 菌种接种：从冷冻保存的菌种中选择一株适当的无乳链球菌菌株，用无菌环针将菌株接种于含有TSB的试管中。
接种量可根据需要进行调整。
3. 孵育条件：将含有菌种的试管放置在37摄氏度恒温培养箱中培养。
维持培养箱内的氧气浓度和湿度。
4. 生长曲线测定：在菌液培养过程中，每隔一定时间，取出一定量的菌液样品，并在无菌平板上进行稀释和涂布。
然后，将平板放入恒温培养箱中孵育。
5. 菌落计数：培养一定时间后，取出孵育的平板，并用适当的方法进行菌落计数，如使用计数器进行手工计数，或者使用自动计数仪。
6. 统计分析：将菌落计数结果记录下来，并进行相应的统计分析。
可以使用软件进行数据处理和绘制生长曲线图。
通过以上步骤，可以得到无乳链球菌在一定时间范围内的生长曲线。
该生长曲线包括菌落形成的滞后期、对数生长期、稳定期和死亡期等阶段。
这些数据可以用于研究无乳链球菌的生长速率、最适生长条件、耐受性等生物学特性，并有助于了解其在感染和致病过程中的相关特征。
无乳链球菌生长曲线测定方法是研究其生长特性和病原机理的重要手段，通过适当的培养基和孵育条件，以及精确的菌落计数和统计分析，可以获得关于无乳链球菌生长曲线的有价值的数据。
这些数据对于预防和控制无乳链球菌感染以及发展治疗策略具有重要的指导意义。
细菌生长曲线的测定的实验步骤
细菌生长曲线的测定的实验步骤一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1.实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2.培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
细菌生长曲线测定实验方法的研究
细菌生长曲线测定实验方法的研究一、本文概述细菌生长曲线测定实验方法的研究对于深入了解细菌的生长规律、生长环境、生长条件以及生长过程中的代谢变化等方面具有重要意义。
本文旨在探讨细菌生长曲线测定的实验方法，包括实验原理、实验步骤、实验条件的选择与优化等方面，以期为提高细菌生长曲线测定的准确性和可靠性提供理论支持和实践指导。
本文将介绍细菌生长曲线测定的基本原理，包括细菌生长曲线的定义、特点以及影响因素等。
在此基础上，本文将详细阐述细菌生长曲线测定的实验步骤，包括实验材料的准备、实验条件的设置、实验过程的操作以及实验结果的记录与分析等。
本文将重点讨论实验条件的选择与优化。
实验条件是影响细菌生长曲线测定结果的关键因素，包括培养基的成分、温度、pH值、接种量等。
本文将通过对比实验和数据分析，探讨不同实验条件对细菌生长曲线的影响，从而确定最佳的实验条件组合。
本文将总结细菌生长曲线测定实验方法的优缺点，并提出改进意见和建议。
通过本文的研究，将为细菌生长曲线测定的实验方法提供更为准确、可靠的理论支持和实践指导，有助于推动细菌学研究的深入发展。
二、细菌生长曲线的理论基础细菌生长曲线测定实验方法的理论基础主要源自微生物生长动力学。
微生物生长动力学描述了微生物在特定环境下的生长规律，其中包括细菌生长曲线的形成机制。
细菌生长曲线是反映细菌群体生长状态的重要指标，通过对细菌生长曲线的分析，可以了解细菌生长的不同阶段，以及影响细菌生长的各种因素。
细菌生长曲线通常可分为四个主要阶段：延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
在延迟期，细菌适应新的生长环境，进行必要的代谢准备，此阶段细菌数量增长缓慢。
进入对数生长期后，细菌以指数方式迅速增长，这是细菌生长最为旺盛的阶段。
稳定期时，由于营养物质的消耗和代谢产物的积累，细菌增长速率逐渐减缓，细菌数量趋于稳定。
进入衰亡期，细菌由于营养物质的耗尽和代谢产物的毒性作用，生长速率急剧下降，细菌大量死亡。
细菌生长曲线的测定
细菌生长曲线的测定细菌生长曲线的测定是研究细菌生长过程中数量的变化规律的重要实验方法。
通过测定不同时间点上细菌的数量，我们可以了解细菌的繁殖速度、生命周期以及适宜生长环境等信息。
本文将介绍细菌生长曲线的测定步骤，并探讨其在科学研究和实际应用中的指导意义。
首先，测定细菌生长曲线的实验需要准备培养基、平板、试管等实验器材，以及待测的细菌样品。
将培养基倒入平板中，使其均匀地附着在平板表面上。
取一定量的细菌样品，接种在试管中的培养基中，然后将试管放入恒温培养箱中。
在不同时间点上，分别取出试管，通过将样品进行稀释后在平板上接种细菌来测定其数量。
通过计数细菌在平板上形成的菌落数，我们可以得到细菌数量随时间的变化规律。
细菌生长曲线通常可以分为四个阶段：潜伏期、指数期、平稳期和衰亡期。
在潜伏期，细菌数量较低，适生环境适宜时，细菌开始繁殖。
进入指数期后，细菌数量呈指数增长，繁殖速度较快。
在平稳期，细菌数量达到平衡，新生细菌数量与死亡细菌数量相等。
最后，在衰亡期中，细菌数量逐渐减少。
细菌生长曲线的测定对于科学研究和实际应用中有着重要意义。
在科学研究中，通过测定细菌生长曲线可以获得细菌的生命周期信息，了解其生长特性和繁殖机制。
这对于研究细菌的生物学特性、药物敏感性以及探索新的治疗方法具有指导意义。
此外，测定细菌生长曲线还可用于评估食品、水源等环境中的细菌污染情况，为公共卫生和食品安全提供重要依据。
在实际应用中，细菌生长曲线的测定可用于制定细菌培养条件和控制措施。
通过了解细菌的繁殖速度和繁殖条件，我们可以优化培养条件以提高细菌产量，或者通过调节环境因素来控制细菌的滋生。
此外，在药物研发和微生物工程中，测定细菌生长曲线可以评估抗生素对细菌的杀菌效果、药物毒性及其机制，为药物设计和微生物工程提供重要参考。
综上所述，细菌生长曲线的测定是一项生动、全面且具有指导意义的实验方法。
通过测定细菌数量随时间的变化规律，我们可以了解细菌的生长特性、繁殖机制和生命周期等信息。
生长曲线的测定
实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术指导教师：张建丽姓名：高熹学号：1120152430测定细菌生长曲线一．实验目的1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。
2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。
3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。
二．实验原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。
将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。
延迟期：又叫调整期。
细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。
此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。
此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期：又称指数期。
此期生长曲线上活菌数直线上升。
细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。
此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。
抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。
由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。
细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。
细胞生长曲线的测定方法
细胞生长曲线的测定方法细胞生长曲线是啥玩意儿？嘿，其实就是用来观察细胞在一段时间内生长情况的曲线呗！那咋测定呢？首先，得准备好细胞和合适的培养基呀！就像厨师准备食材一样，可不能马虎。
把细胞接种到培养瓶或培养板里，然后在合适的条件下培养。
这就好比种下一颗种子，等着它发芽长大。
接着，要定期观察细胞的生长情况。
可以用显微镜看看细胞长得咋样了，数数有多少个。
这就像你时不时去看看自己养的花长得好不好一样。
可别偷懒哦！不然数据就不准确啦。
在测定过程中有啥要注意的呢？那可多了去了。
比如，培养条件一定要稳定，温度、湿度啥的都不能变来变去。
这就跟人需要一个稳定的生活环境一样，细胞也不例外呀！要是条件不稳定，细胞可能就不开心了，生长也会受影响。
还有啊，操作的时候一定要小心，别把细胞弄伤了。
这就像你小心翼翼地对待一个宝贝一样，轻拿轻放。
要是不小心把细胞搞坏了，那可就前功尽弃啦！那这个过程安全不？当然安全啦！只要你按照正确的方法操作，就不会有问题。
就像开车遵守交通规则就不会出事故一样。
而且，细胞生长曲线的测定通常在实验室里进行，有专业的设备和防护措施。
稳定性咋样呢？如果操作规范，数据是很稳定的哦！就像一座坚固的大楼，不会轻易倒塌。
只要你认真做好每一步，得到的结果就会很可靠。
细胞生长曲线有啥用呢？用处可大啦！可以用来研究细胞的生长规律，看看不同条件下细胞的生长情况有啥不同。
这就像侦探通过线索破案一样，细胞生长曲线就是我们研究细胞的线索。
还可以用来筛选合适的药物。
如果一种药物能抑制细胞生长，那在生长曲线上就能看出来。
这就像给病人选药一样，要选最适合的。
优势也不少呢！可以直观地看到细胞的生长情况，不用瞎猜。
就像你看天气预报知道明天会不会下雨一样，心里有底。
而且操作相对简单，不需要太复杂的设备。
举个实际案例呗！比如说在癌症研究中，就经常用细胞生长曲线来观察癌细胞的生长情况。
看看不同的药物对癌细胞的抑制效果如何。
这就像跟癌症这个大坏蛋打仗，细胞生长曲线就是我们的武器。
实验八 细菌生长曲线的测定及【内容充实】
实验八细菌生长曲线的测定及血球计数板测定微生物生长一、细菌生长曲线的测定及★细菌的生长曲线就是把一定量的菌体细胞接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，在此过程中，其细胞数目将随培养时间的延续而发生规律性的变化，如以细胞数目的对数值(或O.D.值)为纵坐标，以培养时间为横坐标作一条曲线，即为细菌的生长曲线，它反映了细菌的群体生长规律。
★大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。
★依据其生长速率的不同，可把细菌的生长曲线划分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期等四个时期。
★微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。
通常400～700nm 都是微生物测定的范围，505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。
★本实验测定细菌生长曲线的方法是，将待测菌种接入一只大试管的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通气状态下，定时取出此试管，在600纳米波长处测定菌液浓度(O．D．值)，在一定的范围内，菌液浓度与光密度值成线性关系。
因此，根据菌液的O．D．值可以推知细菌生长繁殖的进程。
将所测得的一组O．D．值与其相应的培养时间作图，即可绘制出该菌的生长曲线。
☆实验操作1、菌种培养：取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液（LB）中，静止培养12--14h，备用。
2、制备LB培养基100ml置于200ml三角瓶内，备用。
3、标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
4、接种：分别用5ml无菌吸管吸取5ml大肠杆菌培养液(培养12~14h)转入盛有100ml LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。
5、培养：将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率250r/min)，分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。
细菌生长曲线的测定
细菌生长曲线的测定1 目的1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线2 原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。
这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。
因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。
3 材料3.1菌种大肠杆菌3.2培养基肉膏蛋白胨培养基3.3 仪器和器具721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。
4 流程种子液→标记→接种→培养→测定5 方法5.1种子液制备取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液中，静止培养18h作种子培养液。
5.2标记编号取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
5.3接种培养用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中，于37℃下振荡培养。
然后分别按对应时间将三角瓶取出，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD 值。
5.4生长量测定将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。
记录生长曲线方法
记录生长曲线方法
记录生长曲线的方法有很多，以下是一些常见的方法：
1. 定期测量：按照固定的时间间隔，如每周或每月，对生物体进行测量，例如身高、体重、体长等。
2. 选择标准测量工具：使用准确、可靠的测量工具，如尺子、体重秤等，以确保测量结果的准确性。
3. 记录数据：将每次测量的数据记录下来，可以使用电子表格或纸质图表，以便直观地观察生长趋势。
4. 绘制曲线：将测量数据绘制成曲线图，可以更清晰地看出生长的趋势和变化。
5. 标记关键事件：在生长曲线上标记一些关键事件，如生病、饮食改变等，以便分析这些事件对生长的影响。
6. 比较和分析：将不同个体或不同时间段的生长曲线进行比较和分析，观察差异和变化。
7. 长期坚持：为了得到更有意义的结果，最好进行长期的记录，这样可以更全面地了解生长过程。
8. 寻求专业帮助：如果对记录生长曲线的方法或结果有疑问，可以咨询医生、营养师或相关专业人士。
通过记录生长曲线，你可以及时发现问题，采取适当的措施来促进生物体的健康成长。
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二、间接法：与微生物生长量平行的生理指标很多，可以根据实验目的和条件适当选用。
如测含氮量（一般霉菌的含氮量为其干重的6.5%，含氮量乘以6.25为粗蛋白含量），还有如测含碳量以及测磷、DNA、RNA、ATP、DAP、几丁质或N-乙酰胞壁酸等含量等。
具体测定时你还要得查点相关资料。
请问各位大侠放线菌生长曲线改怎么测呢?谢谢!
三角瓶摇床生长发酵，加入足量的玻璃珠不让菌体长成团状，使菌体均匀分布在液体培养基中！然后每隔一定时间取样分析。
用分光光度计测定OD值即可。
如果菌体浓度过大可先稀释后在测OD值！波长大概在600nm左右！
一般情况下，形成菌丝的微生物的生长曲线，是取培养液离心收集沉淀（工业上通常3000~4000rpm，10min），测沉淀占总体积的百分比，也有称量菌丝体干重的。
楼上的说的方法不能符合发酵过程的真实情况。
另外不同的菌测定OD使用的波长不同。
大肠杆菌是600nm。
使用波长的选择应该跟菌的大小及形态有关。
这方面有一篇文献，大家感兴趣的话可以查询一下。
其实放线菌要看哪些属了，有些属容易产生菌丝，而有些属不产生菌丝球。
本人在做课题的时候就筛选得到一株放线菌，属于北里孢菌属，在摇瓶发酵和发酵罐中发酵时，就没有菌丝球的产生，所以我在实验时就采用测量OD660的方法来测定生长情况的。
但我也做过链霉菌菌的发酵，链霉菌很容易产生菌丝球，我所采用的是称干重法做的。
所以我觉得楼主应该根据实际情况来具体确定你的实验应该采用哪种测量方法了。