3种培养基植物组织培养实验方案
植物组织培养实验报告
摘要：以大豆子叶为外植体，在MS 培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。
实验结果显示第 2 组即 MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即 MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。
关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织1.1 实验材料：大豆子叶1.2 实验试剂与仪器〔1〕试剂： 75%酒精、MS 干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂〔NAA、2，4-D、KT、6-BA〕、无菌水、升汞、 NaOH 溶液〔2〕仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。
1.3 实验方法培养基的配制与灭菌1.3.1.1 配制培养基的准备阶段〔1〕准备 80 个培养试管及封口膜， 2 个小培养皿、 1 个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每一个培养试管、润洗一下。
带晾干后将试管编号 1-80；〔2〕在称量纸上用百分之一天平分别称取 1.5g 琼脂 4 份， 7.5g 蔗糖 4 份，在烧杯里用千分之一天平上称取 1.185g MS 干粉 4 份〔烧杯不要清洗〕；〔3〕剪小圆纸片 40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。
然后分别用报纸包好。
〔4〕把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。
1.3.1.2 配制培养基〔1〕在装有 MS 干粉的烧杯中按下表参加植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为 0.5mg/mL编号培养基配置激素的加样量(ml)6-BA N A A K T2,4-D1 23 4 MS+6-BA〔1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L)MS+KT〔1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)0.51.00.250.50.250.50.51.0〔2〕用量筒量取250ml 〔稍多〕蒸馏水，取一个不锈钢杯子参加150ml 蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾 2min，再参加混合好的 MS 培养基 1 号和蔗糖，混合沸腾 2min，用剩余的蒸馏水定容至 250ml；〔3〕当温度降到 60℃摆布时，将溶液 pH 调至 5.8，普通加 4 滴 NaOH 溶液即可；〔4〕取编号 1-20 的培养试管，用大量注射器以每瓶 12.5ml 摆布培养基分装在培养试管中，用封口膜封口， 4 支一捆捆扎好。
植物组织培养实验报告
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师）年级13级学号17130208 组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6指导老师实验名称植物组织培养综合实验一、实验目的1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法；3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法；4.了解组织培养的基本程序；5.掌握接种的方法和材料的培养过程；6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术；7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体；8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别二、实验原理1.植物细胞的全能性一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。
植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。
2.植物细胞表现出全能性的条件1.离体状态；2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）；3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型3.无菌条件把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。
用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。
在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。
组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。
4.脱分化与愈伤组织已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。
脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。
所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。
5.培养基植物组织培养常用的培养基为MS培养基。
常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。
第五章植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术实验方案一、实验目的：1.了解植物组织培养的基本原理和方法。
2.掌握植物组织培养的实验操作技巧。
3.培养植物组织并观察其生长和发育情况。
二、实验材料和设备：材料：麦芽糖、琼脂、植物激素（如IAA、ABA、GA3等）、幼绿豆胚轴组织。
设备：平板培养器、显微镜、高压锅、移液器、无菌操作器具等。
三、实验步骤：1.制备琼脂培养基a）称取适量琼脂加入适量蒸馏水中，搅拌均匀。
b）高压锅加热至沸腾，放入琼脂溶液，保持沸腾10-15分钟，使琼脂充分溶解。
c）将高压锅冷却后取出，倒入洁净的培养器中，晾凉并凝固。
2.准备植物组织a）将绿豆种子浸泡于水中，待种子发芽至一定程度。
b）取出绿豆胚轴组织，用刀切割成适当大小的组织片段。
3.制备植物组织培养基a）取适量砂糖和植物激素（如IAA、ABA、GA3等），溶解于蒸馏水中。
b）加入适量制备好的琼脂培养基，搅拌均匀。
4.进行组织培养a）将准备好的植物组织片段放入培养器中，倒入制备好的植物组织培养基，使组织片段完全浸没其中。
b）盖上培养器盖子，用透明胶带密封，防止细菌浸入。
c）将培养器置于适当的温度和光照条件下，进行培养。
5.观察和记录a）每天观察组织的生长和发育情况，记录变化。
b）使用显微镜观察细胞结构和细胞分裂情况。
c）观察是否有细菌感染或其他异常情况。
d）记录实验数据，如生长速率、生长周期等。
四、实验要点：1.所有实验操作都要在无菌环境下进行，避免细菌和其他微生物的污染。
2.组织培养基的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
3.培养条件也根据不同植物种类的要求进行调整，如温度、光照等。
4.实验中要注意观察并记录实验数据，对结果进行分析和总结。
五、预期结果：通过植物组织培养技术，可以观察到植物组织的生长和发育情况，研究不同因素对植物生长的影响，培养出健康的植物组织，为其他相关研究提供基础数据和实验材料。
六、安全注意事项：1.操作时要小心使用实验器具，避免切伤或烫伤等事故发生。
植物组织培养实验指导
实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制实验二植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌实验三番茄子叶愈伤组织诱导培养阿实验四马铃薯茎段的扩繁培养实验五海棠叶片的离体培养实验六胡萝卜离体根的培养实验七组织培养物的继代培养实验八马铃薯脱毒与组培快繁实验九沙棘组织培养实验方案设计及实施实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制常用组织培养的玻璃容器及接种用的玻璃器皿如锥形瓶、培养皿、试管、配置培养基用的试剂瓶、烧杯等以及金属的镊子、剪刀、接种铲等，用前必须经过洗涤，有的还要消毒。
一器皿的洗涤方法1.一般玻璃器皿，特别是第一次使用的新的玻璃器皿，首先用清水充分浸泡后用碱水刷洗，然后用清水充分除去碱液，再用无离子水或蒸馏水刷洗干净后烘干或晾干，待用。
检查玻璃器皿是否洗刷干净的标准是：洗后的玻璃器皿沾水后，布满于整个玻璃表面并形成完整的水膜，而不会有不均匀的水珠出现。
当玻璃器皿十分肮脏，带有不同的污渍时，则需要特殊的洗涤液浸泡4-12小时，然后再用清水漂洗干净，较常用的是铬酸洗液，它是用重铬酸钾加入浓硫酸配制而成，其腐蚀性极强，对衣物、皮肤等均十分有害，一般尽量避免使用。
目前生产有各种合成的化学洗涤剂，可清除各种污物，使用方便，是实验室内常用的。
2.金属用具在第一次使用前必需先用四氯化碳或乙醚等有机溶剂将其表面的防锈油擦洗干净，用布擦干方可使用，每次使用后需用水清洗并保持干燥。
二器皿及环境的消毒方法器皿的消毒方法分为：1.物理方法又可细分为：（1）干热消毒法（Dry heat sterilization）：适用于玻璃器皿、金属和一些不怕高温的物品，如培养皿、锥形瓶、各种试剂瓶、刀、剪、镊子等。
一般在150℃烘箱内烤2-3小时，在消毒灭菌前将所要消毒的物品包装于固定容器或耐热的包装材料内（如饭盒、培养皿灭菌筒、铝箔纸等），防止在使用前的再次污染。
（2）湿热消毒法（Wet heat sterilization）：不能用干热消毒的物品，如配置好的培养基、易燃的棉花、工作服、口罩等，要使用高压灭菌锅，通过水蒸气压达到灭菌消毒的目的，常用气压为15磅或1.2kg/cm2，温度为121-124℃，灭菌20分钟即可达到杀灭细菌、消毒的目的。
植物组织培养实验(2)
（二）实验原理
在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶 等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤 组织。
（三）实验材料和用具
实验材料：黄瓜无菌苗 实验药品： MS、 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA、
1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、灯 用酒精、70％酒精、无菌水 。 灭菌培养基：MS1 （MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA）
实验用具：
天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三 角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。
无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、 解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、 滴管、记号实验步骤
1. 配制以下培养基各100ml ： MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAA MS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAA MS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA ① 取200ml烧杯3只，标记，各加入4g MS培养基和
4. 接种 ① 进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒
精灯。 ② 解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。 ③ 再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润
湿。 ④ 在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊
子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。 ⑤ 剪成5～10mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后
剪成50mm2左右的小片），每平皿接种3～5段（片）。 每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。 ⑥ 光照培养箱25℃暗培养。
作业
1. 1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿 内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染 菌原因。
植物组织培养实验
取后各放入50-100ml的烧杯中，加蒸馏水约
50ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中，
转移到储液瓶中，贴好标签保存于4℃冰箱。
配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液
10ml。
表2 MS培养基微量元素的称量及定容（50×） MnSO4.4H2O 22.3 1115 ZnSO4.7H2O 8.6 430 CuSO4.5H2O 0.025 1.25 H3BO3 6.2 310 Na2MoO4.2H2O 0.25 12.5 KI 0.83 41.5 CoCl2.6H2O 0.025 1.25
培养基配制
移母液 确定配方 称取蔗糖、琼脂 二次定容 定 容 培养基熬制 调pH值
接
种
灭
菌
扎
口
分
装
母液吸取量的计算
公式1：
配制培养基的升数 母液吸取量= 母液体积×———————— 母液浓缩倍数 公式2： 培养基要求的含量 母液吸取量= —————————— 母液每ml的含量
调pH值：
•ｐH影响培养基的硬度 ｐH ＞6.5 ｐH ＜5.0 培养基会变硬 培养基不易凝固
容于500ml重蒸馏水中。
表1 MS培养基大量元素的称量及定容（5×） KNO3 1900 9500 NH4NO3 1650 8250 KH2PO3 170 850 MgSO4.7H2O 370 1850 CaCl2.2H2O 440 2200 定容于500ml重蒸馏水中，最后加入 CaCl2.2H2O，每升培养基取此液100ml
表3 MS培养基铁盐母液的称量及定容（100×） FeSO4.7H2O Na2-EDTA.2H2O 27.8 37.3 2780 3730
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
菊花的组织培养实验设计
菊花的组织培养实验设计引言概述：菊花的组织培养是一种常见的实验方法，它可以用来研究菊花的生长发育、遗传变异以及植物组织的再生能力等。
本文将介绍一种菊花的组织培养实验设计，包括实验材料的准备、实验步骤的安排以及实验结果的分析等。
一、实验材料的准备1.1 菊花的种子：选择健康、无病虫害的菊花种子作为实验材料。
1.2 培养基：准备含有适当濃度的植物激素的培养基，如MS培养基。
1.3 高温消毒器具：为了防止细菌和真菌的污染，需要准备高温消毒的器具，如高温培养箱。
二、实验步骤的安排2.1 种子表面消毒：将菊花的种子表面进行消毒处理，以杀灭种子表面的细菌和真菌。
2.2 菊花的离体培养：将消毒后的种子放置在含有培养基的培养皿中，进行离体培养。
2.3 培养条件的调节：调节培养皿中的温度、光照和湿度等条件，以促进菊花的生长和发育。
三、实验结果的分析3.1 菊花的生长情况：观察菊花在培养基上的生长情况，包括根系的形成、茎的生长以及叶片的展开等。
3.2 菊花的再生能力：观察菊花在培养基上的再生能力，包括新芽的形成、花蕾的发育以及花朵的开放等。
3.3 菊花的遗传变异：通过观察不同菊花品种在培养基上的生长情况和形态变化，分析菊花的遗传变异情况。
四、实验注意事项4.1 实验环境的准备：实验室应保持整洁，避免细菌和真菌的污染。
4.2 实验操作的规范：实验操作要严格按照实验步骤进行，避免误操作导致实验结果的偏差。
4.3 实验结果的记录：实验过程中要及时记录实验结果，以便后续的数据分析和讨论。
综上所述，本文介绍了一种菊花的组织培养实验设计，包括实验材料的准备、实验步骤的安排以及实验结果的分析等。
通过这种实验方法，可以深入研究菊花的生长发育、遗传变异以及植物组织的再生能力等方面的问题。
希望本文能为菊花的组织培养实验提供一定的参考和指导。
植物组织培养实验教案
一、教案基本信息1. 课程名称：植物组织培养实验教案2. 课程类型：实验课3. 课时：2课时4. 年级：八年级5. 学科：生物二、教学目标1. 让学生了解植物组织培养的基本概念和原理。
2. 培养学生运用实验方法探究植物组织培养的能力。
3. 提高学生对生物技术的认识，培养学生的创新意识和实践能力。
三、教学内容1. 植物组织培养的定义和意义。
2. 植物组织培养的基本原理。
3. 植物组织培养的步骤和操作方法。
4. 植物组织培养的应用实例。
四、教学重点与难点1. 教学重点：植物组织培养的基本原理、步骤和操作方法。
2. 教学难点：植物组织培养过程中条件的控制和实验操作技巧。
五、教学过程1. 课前准备：教师准备植物组织培养实验所需的材料和仪器。
2. 导入新课：介绍植物组织培养的基本概念和意义，激发学生的兴趣。
3. 讲解原理：讲解植物组织培养的基本原理，让学生理解其科学依据。
4. 演示实验：教师演示植物组织培养的实验步骤和操作方法，强调注意事项。
5. 学生实验：学生分组进行植物组织培养实验，教师巡回指导。
6. 总结拓展：总结植物组织培养实验的原理和操作要点，引导学生思考植物组织培养在生产生活中的应用。
六、教学评价1. 学生实验报告的质量：评估学生在实验过程中的观察、操作和分析能力。
2. 学生课堂表现：评估学生在课堂上的积极参与程度、提问和回答问题的能力。
3. 学生作业完成情况：评估学生对课后作业的认真程度和思考深度。
4. 学生小组合作能力：评估学生在实验过程中的团队协作和沟通能力。
七、实验材料与仪器1. 植物材料：选择具有良好再生能力的植物组织，如茎段、叶片等。
2. 培养基：含有植物激素、营养物质和抗生素的培养基。
3. 容器：无菌培养瓶、三角瓶等。
4. 仪器：显微镜、消毒器、恒温培养箱、移液器等。
八、实验步骤与操作方法1. 准备材料：选择健康的植物组织，切割成适当大小，进行消毒处理。
2. 制备培养基：按照配方配制培养基，分装到培养瓶中。
植物组织培养的方法
植物组织培养的方法植物组织培养（Plant tissue culture）是指利用无菌条件下培养植物细胞或组织，以实现繁殖、繁育新品种、生物合成化合物、环境污染处理等目的的技术。
其不仅可以大幅度提高植物材料的品质和数量，还可以在无限制地产生同一种植物。
方法一：赤潮法（Embryogenesis）这一方法是利用赤潮细胞发生器官（如胚性板）的细胞分化，诱导植物组织的胚胎发生，进而实现植物再生。
该方法适用于很多种植物，如玉米、大麦、水稻等。
步骤为：1. 准备培养基：含有赤潮素、氨基酸、维生素、植物激素和适当的糖类和盐类的基础培养基。
2. 处理材料：将植物的姿态板或种子材料在高温（35-40C）下进行消毒，使其无菌。
3. 材料分离：将消毒材料放入无菌条件下进行材料分离。
4. 培养细胞：将细胞或组织放入含有培养基的无菌培养皿中，保持恒定的温度、湿度和光照条件，促进发生素感应化。
5. 发生胚胎体：促进胚胎形成，通过培养发生胚胎胶囊或胚胎体。
6. 块茎冷藏：利用低温存储胚胎体或胚胎胶囊。
方法二：组织培养（Organogenesis）组织培养方法是通过培养植物的基本组织如叶片、茎尖、芽分根进而再生整个植株。
步骤为：1. 材料处理：对种子或植株进行表层消毒处理。
2. 制备组织片：将消毒好的植株切成组织片段，如茎尖、叶片等。
3. 培养基准备：准备无菌的培养基，其中含有植物的必需胰凡陈列如糖类、氨基酸、维生素、生长因子和植物激素等。
4. 组织分化：将组织片段放入含有培养基的培养皿中，使其分化成根、茎、叶等。
5. 干涸与移栽：将培养的加上适量水后，移栽到含有生长素适量的培养基中，促进植物以正常生长的形式营养。
方法三：悬浮细胞培养（Suspension Culture）在此方法中，使用悬浮培养细胞进行植物细胞或组织的生物合成和生物转化。
步骤为：1. 培养基准备：通常使用植物基础培养基加入氨基酸、维生素和植物激素等。
2. 细胞处理：将细胞分散在含有培养基的匀浆器中，使其悬浮在培养基中。
植物组织培养实验教案
一、实验背景植物组织培养技术是一种在无菌条件下，将植物的茎尖、茎段或叶片等切成小块，通过人工方法在特制的培养基上进行培养，使其逐渐发育成完整植物体的技术。
本实验旨在让学生了解植物组织培养的基本原理，掌握实验操作技能，培养学生的创新意识和实践能力。
二、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理及应用。
2. 掌握植物组织培养实验的操作步骤。
3. 培养学生的创新意识和实践能力。
三、实验材料与仪器1. 材料：植物茎段、叶片、茎尖等；培养基；植物激素；消毒剂等。
2. 仪器：无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、移液器、解剖刀、镊子、滤纸等。
四、实验步骤1. 准备实验材料：选取健康的植物茎段、叶片或茎尖，去除杂质，清洗干净。
2. 消毒：将实验材料用70%酒精浸泡30秒，再用无菌水清洗，用消毒剂处理1-2分钟。
3. 切割材料：用解剖刀将消毒后的实验材料切割成适当大小的小块。
5. 培养：将接种后的培养皿放入培养箱中，控制温度、光照等条件，进行培养。
6. 观察与记录：定期观察植物组织的生长状况，记录实验现象。
五、实验注意事项1. 实验过程中需严格无菌操作，避免污染。
2. 切割材料时要注意刀片的消毒和更换。
3. 培养过程中要定期观察，调整培养条件。
4. 实验结果可能存在差异，要注重数据分析与讨论。
教案编写仅供参考，具体实验操作请根据实际情况进行调整。
祝实验成功！六、实验拓展1. 探索不同植物激素对植物组织培养的影响。
2. 尝试用植物组织培养技术繁殖难生根或珍贵植物。
3. 研究植物组织培养在基因工程中的应用。
七、实验报告要求1. 描述实验材料、仪器和实验步骤。
2. 记录实验现象和结果。
3. 分析实验结果，探讨可能的原因。
4. 提出实验中存在的问题及改进措施。
八、实验评价1. 评价学生对植物组织培养原理的理解。
2. 评价学生对实验操作的熟练程度。
3. 评价学生对实验现象的观察与分析能力。
4. 评价学生在实验过程中的团队合作精神。
植物组织培养实验指导
《植物组织培养》实验指导教师：任峻目录实验一参观植物组织培养实验室实验二培养基母液配制实验三培养基配制与灭菌实验四植物快速繁殖培养实验考核一、课程的性质与任务植物细胞工程实验技术一般包括植物细胞组织离体培养技术、细胞融合技术、细胞拆合技术、外源基因转移技术等一系列重要的基础技术。
通过实验课程的学习，实验方法立足于初学者的专业基础和一般实验室的条件，将《植物细胞组织培养技术》课程的理论知识、一般的实验技能和科学研究的初步方法融为一体。
培养学生理论联系实际、独立思考及实践动手能力。
二、实验的目的与基本要求通过本课程的学习使学生掌握植物细胞工程技术的基本原理和实验操作方法，掌握植物细胞体外培养技术，结合科研和生产实际，提高学生分析问题、解决问题的能力。
以适应今后在教学、科研和生产开发等各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。
在实验教学过程中，要求学生学习态度严谨，操作动作规范，观察记录耐心细致，独立思考，综合分析实验结果，充分理解后认真地完成实验报告。
09本《植物组织培养》实验考核一、考核方式：实验操作。
二、考核时间：三、考核地点：四、监考教师：实验考核以实验操作形式进行，根据实验4或实验5实验的实验结果（失败或成功）决定实验方案，如果失败，分析失败原因，提出改进措施，在重做中进行实验操作考核，如果成功则继续下一步的实验，实施实验操作考核。
二．考核办法：考核方法主要观察学生的实验操作是否正确，污染率是否高，并要求学生写出实验报告，总结实验中常出现的问题。
在3个课时内小组协作完成实验内容。
包括以下几个方面：1．对实验仪器设备的选择及操作。
湿热灭菌操作过程；无菌操作过程。
2.培养基的配制试剂的配制；母液的移取；实验配方计算。
3.培养条件的设置。
4.实验报告的规范性与科学性。
实验一 参观植物组织培养实验室一、实验的目的和要求掌握植物组织培养实验室的设计要点和必备的仪器设备。
二、实验内容：1. 植物组织培养实验室的设计要点。
植物组织培养设计方案
植物组织培养设计方案植物组织培养是一种繁殖植物的方法，通过在无菌条件下培养植物的组织或细胞，可以获得大量的健康无病害的植株。
植物组织培养广泛应用于植物保护、育种、快速繁殖和基因转化等领域。
本文将重点介绍植物组织培养的设计方案。
1.实验材料准备：-植物种子或幼苗：选择优良品种的无病害种子或幼苗作为材料。
- 生长基质：常用的基质包括MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamely和Ribble培养基）等。
根据不同的植物种类和实验目的，选择适宜的培养基。
2.无菌操作：-实验室要保持高度的无菌操作环境，使用无菌操作台、无菌培养器等工具设备。
-使用无菌操作工具，如无菌钳、无菌刀片等进行操作。
-使用无菌材料：培养基、培养瓶、培养器等都要在高温高压下灭菌处理。
3.组织处理和培养：-种子处理：以浓度为0.1%的漂白水处理种子表面，去除外层的外壳，并在无菌条件下接种到培养基上。
-组织切割：从植株中选择新鲜、无病害的茎、叶、根等组织切取，注意避免外界微生物的污染。
-培养基配制：根据实验目的和植物种类，调整培养基的配方，添加适量的植物生长调节剂（如激素）。
-培养条件控制：控制培养瓶内温度、光照强度和光周期，以及湿度等因素，提供适宜的生长环境。
4.培养过程监测与处理：-观察细胞分裂和不定芽发生情况，根据需要进行不定芽分离和转移。
-监测培养器内的细菌和真菌污染，及时采取措施防止蔓延。
-过程中温度、光照等条件的调节，根据实验需要和细胞、组织的生长情况进行调整。
5.培养结束处理：-移除培养器中的植株，将其进行除菌处理，避免对环境产生影响。
-将培养基进行无菌处理，以免细菌或真菌残留造成二次污染。
-对根据实验结果分析，总结经验教训，为后续的实验提供参考。
总之，植物组织培养设计方案需要从材料选择、无菌操作、组织处理和培养、监测与处理以及培养结束处理等方面进行全面考虑。
只有在严格的无菌条件下进行操作，并根据实验需求和植物特性进行科学的调控和管理，才能获得高效的植物组织培养。
植物组织培养实验(1)
实验报告内容
实验名称 实验目的 实验原理 实验材料和用具 实验步骤 实验结果与分析
2. 分装。将培养基分装到8个50ml三角瓶中，培养 三角瓶中， 分装。将培养基分装到8 50ml三角瓶中 基厚度约为5mm。做好标记。 基厚度约为5mm。做好标记。 3. 灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、 0.1MPa条件 灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃ 0.1MPa条件 下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。 下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。 灭菌后待压力下降到0Pa时取出 凝固后待用。 时取出， 灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。
（三）实验材料和用具
实验材料： 实验材料：黄瓜种子 实验药品：灯用酒精、 70％酒精、 95％酒精、 实验药品：灯用酒精、 70％酒精、 95％酒精、 0.1％氯化汞，吐温-80，无菌水。 0.1％氯化汞，吐温-80，无菌水。 灭菌培养基： 灭菌培养基：MS 实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、 实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧 解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、 杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、 滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。 滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。
当植株的其他部位难以消毒时，可以选用 当植株的其他部位难以消毒时， 种子， 种子，消毒后的种子在无菌条件下播种到 含有水－琼脂培养基上或1/10 MS培养基上 含有水－琼脂培养基上或1/10 MS培养基上 使其发芽。将无菌培养的幼苗切成小片， 使其发芽。将无菌培养的幼苗切成小片， 作为外植体。 作为外植体。
作业
1. 1 周后观察灭菌培养基有无污染 ， 计算污 周后观察灭菌培养基有无污染， 染率（染菌瓶数/总瓶数×100％ 染率（染菌瓶数 /总瓶数 ×100％ ），分析 染菌原因。 染菌原因。 2. 1 周后观察初代培养体系有无污染 ， 计算 周后观察初代培养体系有无污染， 每一瓶内染菌外植体数和外植体外的菌落 分析染菌原因。 数，分析染菌原因。 3. 1 周 后 观 察 种 子 发 芽 情 况 ， 计 算 发 芽 率 （发芽种子数/种子总数×100％）。 发芽种子数/种子总数×100％
植物组织培养方案设计
植物组织培养方案设计
植物组织培养是一种人工控制环境下培养植物细胞或组织的方法，用于繁殖植物、进行基因转化和生物技术研究等。
设计一个植物组织培养方案需要考虑以下几个方面：
1. 原料准备：选择优质的植物种子或组织样品作为培养材料，并进行消毒处理，以去除外来的微生物。
2. 培养基配方：设计适合植物生长和发育的培养基配方，包括基础培养基和添加物。
基础培养基主要包括植物营养物质（如无机盐和糖）、植物生长调节剂（如植物激素和维生素）和琼脂等。
添加物可以根据实验需要进行调整，例如抗生素、激素和诱导剂等。
3. 培养条件调控：根据植物种类和培养目的，设置适当的培养条件，包括光照、温度、湿度和pH值等。
光照可以使用植物
生长灯提供，温度和湿度需根据植物的适宜生长条件进行调控。
4. 培养过程管理：培养过程中需定期对培养基进行补充和调整，并观察培养物的生长情况。
如有需要，可以进行子培养和分化培养等操作。
5. 培养物处理：根据实验目的，对培养物进行不同处理，如增殖、分化、转染等。
处理过程需要注意操作无菌技术，以防止外部微生物的污染。
6. 培养物保存：培养成功后，可以选择将培养物进行保存。
保
存方式可以是继续培养，也可以是冷冻保存或冷藏保存。
总之，设计一个植物组织培养方案需要根据具体实验目的和植物种类进行合理的选择和操作，提供适宜的营养、环境和处理条件，以确保培养物的生长和发育。
同时，注意无菌操作和风险防范，确保实验的成功和安全进行。
培养基制备 — 植物组织培养实验方案
培养基制备 — 植物组织培养实验方案•从包装粉末制备•从基础盐溶液制备•香蕉粉的制备和使用•椰子水的制备和使用从包装粉末制备粉末极易吸湿，必须防止空气中的水分对其潮解。
单个包装的全部粉末应尽可能在打开后立即使用。
不建议以浓缩形式制备培养基，否则一些盐复合物可能会沉淀。
添加到培养基中的补充剂可能会影响其保质期和储存条件。
制备培养基的基本步骤如下：1. 量出组织培养级纯水（产品编号：W3500）最终所需体积的90％左右，举例来说，如果最终体积为1000 mL，则量出900 mL。
选用两倍于最终体积大小的容器。
2. 在搅拌水的同时加入粉末状培养基并搅拌直至完全溶解。
某些情况下可能需要加热将粉末溶解。
3. 用少量组织培养级纯水冲洗原始容器，以去除痕量的粉末。
添加到步骤2的溶液中。
4. 加入所需的热稳定补剂（例如蔗糖、胶凝剂、维生素、生长素、细胞分裂素等）。
5. 添加额外的组织培养级纯水，使培养基达到最终体积。
6. 一边搅拌，一边添加NaOH、HCl或KOH，以将培养基调节至所需pH。
7. 如果加入胶凝试剂，则加热直至溶液澄清。
8. 根据需要，在高压灭菌之前（或之后）将培养基加样到培养皿中。
高压灭菌后加入热不稳定的组分。
9. 在经过验证的杀菌釜中，以1 kg/cm2（15 psi）、121°C对培养基进行灭菌，持续时间为培养基灭菌实验方案所述时间长度。
10. 待培养基冷却后使用。
粉末状培养基和碱性盐混合物仅供实验室使用。
不适用于医用、家用或其他用途。
未提供的材料•去离子组织培养级水（货号W3500）• 1 N盐酸(HCl)（货号H9892）• 1 N氢氧化钠(NaOH)（货号S2770）储存将干燥培养基储存于0-5°C的干燥器中。
粉末培养基变质可以通过以下方式识别：1）颜色变化；2）粉末中的颗粒化、结块或颗粒物；3）不溶性；4）pH变化；或5）正确使用时无法促进生长。
培养基中的沉淀植物组织培养基中随着时间推移会产生沉淀。
植物组织培养实验
植物组织培养实验植物组织培养是指将植物的一些组织细胞分离出来，在特殊的培养基中进行培养和生长，目的是繁殖和获取大量的纯种植物。
本次实验通过试验实现相应的目标。
实验材料及器械：1. 培养基：MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamborg培养基）、N6培养基（Chu培养基）、KN培养基（Knudson培养基）等；2. 植物组织：初代愈伤组织，生长点、芽，小叶片；3. 水平台，无菌工作台，培养箱，显微镜，中性纸，平板培养瓶，筛网，剪刀，酒精灯，卷尺，移液枪，枪头等。
实验步骤：1. 资料准备：对不同材料的特点、培养基的制备方法及组成、实验的目的等进行归纳、总结和分析。
2. 组织处理：先将绿色植物的各种组织根据类型进行分离，选取具有分化能力的愈伤组织或生长点进行培养。
去除杂质后，取少量组织接种到平板培养瓶中，有的需要进行酶解，提高细胞分裂能力。
3. 培养基准备：按照MS、B5、N6、KN等培养基制备方法，称取培养基粉末，加入适量的蔗糖、植物激素等，将pH调整到5.8-6.2。
接种前对制备的培养基冷藏保存。
4. 组织接种：取出平板培养瓶，用无菌水加热消毒后，将组织以均匀的分布覆盖于培养基表面。
将试管装入培养箱中，控制温度、湿度、光照等条件进行培养。
5. 观察记录：每隔一段时间拿出培养样本，进行显微镜观察。
观察组织细胞的形态、颜色、大小、分化程度、生长情况等。
根据实验进程记录主要观察的实验数据。
实验结果及分析：1. 愈伤组织培养：初始培养时，愈伤组织的生长状况不同，在不同的培养条件下，细胞分化能力、再生器官的形成也有所不同。
初步培养的愈伤组织有不同的再生能力和生长状态：生长状况下降、枯死、增殖等。
愈伤组织需要在适宜温度、适宜光照的情况下进行培养，严格执行无菌操作，才能获得大量高质量的细胞。
在不同的培养环境下，诱导他们进行特定细胞分化，从而提高愈伤组织再生的成功率。
2. 生长点培养：生长点培养时，需要先将其消毒，以免污染飞溅到培养基上。
植物组织培养设计方案
植物组织培养设计方案植物组织培养是一种通过从原植物体中取样并将其放入适当培养基中，以便在无菌条件下培养和繁殖植物的方法。
这种技术可用于繁殖和繁殖珍稀植物、繁殖病毒和病原体的植物、选择特定性状的植物、研究植物生理和生物学等方面。
植物组织培养分为外植体培养和内源性植株再生两个步骤。
外植体培养是从植物中取得外植体（例如种子、根、茎、叶等）并将其在培养基中进行培养，以促进发根和再生植株。
内源性植株再生是通过取得植物中的原始细胞并在无菌培养条件下培养和分化成植株。
下面是一个植物组织培养的设计方案：1.实验目标：-繁殖珍稀植物-研究植物生理和生物学-选择特定性状的植物2.实验材料：-外植体（种子、茎、叶等）-无菌工作台-清洁工具（灭菌剪刀、火柴、酒精等）-培养基（包括植物激素和营养物质）3.实验步骤：a.外植体处理：-选择适当的外植体并将其取下-用酒精擦拭工具以维持无菌条件-对外植体进行消毒，例如将外植体浸泡在消毒液中或在火焰中消毒-切割外植体并将其转移到培养基中b.培养基准备：-准备含有植物激素和营养物质的培养基-调整pH值并添加琼脂以固化培养基-使用高压灭菌器灭菌培养基c.培养基接种：-将外植体放置在无菌工作台上-使用灭菌工具将外植体放置在培养基上-盖上培养基容器并将其放入培养箱中d.培养条件：-确保培养箱的温度、湿度和光照条件适宜-定期观察外植体的生长情况并记录e.植株再生：-观察外植体开始发芽和生根-将发芽的植株转移至新的培养基容器进行进一步培养4.结果和分析：-观察不同外植体在培养基上的生长情况-分析不同培养基对植株再生的影响-记录植株的生长速度、株高和叶片数量等指标5.结论：-总结不同外植体和培养基条件下植株再生的效果-提出优化实验设计的建议-总结实验的应用前景和潜在问题以上是一个简单的植物组织培养设计方案，可以根据具体实验要求和植物种类进行适当调整。
在实际操作中需要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可重复性。
组织培养实验(植物部分)
组织细胞培养技术实验实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训实验二植物的离体培养实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训【目的要求】学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
【实验用品】1.实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2.药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCL、各种培养基母液、激素母液【内容与方法】1.分组配制培养基激素用分析天平称取生长素或细胞分裂素50-100mg。
生长素用少量95%的酒精或0.1mol/L 的NaOH溶解，细胞分裂素用0.1mol/LHCL加热溶解。
加蒸馏水定容至100ml配制成0.5-1mg/L 的溶液。
∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.湿热灭菌培养基称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
分装培养基，包好或盖好，标明编号。
121℃(103kPa)灭菌15-20min。
3.作好植物组织培养的各项准备工作制备无菌水：121℃ (103kPa) 灭菌40min；配制0.1% HgCl2溶液（放置棕色瓶中）；准备接种用培养皿、金属器械等用具。
注意：1.实验前1天，无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。
然后紫外线消毒。
2.实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。
3.用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。
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植物组织培养实验方案
一、实验仪器：
烧杯、三角瓶、玻棒、电子天平、药匙、量筒、三角瓶、镊子、剪刀、手术刀、酒精灯、容量瓶（1L）、PH试纸、移液管、牛皮纸、橡皮筋、培养皿、高压灭菌锅、无菌操作台
二、实验药品：
大量元素：硝酸钾KNO3、硝酸铵NH4NO3、磷酸二氢钾KH2PO4、硫酸镁MgSO4.7H2O、氯化钙CaCl2.2H2O、硝酸钙Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾KCl
微量元素：硼酸H3BO3、硫酸锰MnSO4.4H2O、硫酸锌ZnSO4.7 H2O、钼酸钠Na2MoO4.2 H2O、硫酸铜CuSO4.5 H2O、氯化钴CoCl2.6H2O、碘化钾KI、浓硫酸Concentrated H2SO4
注：NB培养基中用浓硫酸代替碘化钾
铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)
有机成分：肌醇Myo-inositol、盐酸硫胺素Thiamin HCl VB1、盐酸吡哆醇Pyridoxin HCl VB6、烟酸Nicotinic acid VB5或VPP、甘氨酸、泛酸钙Calcium pantothenate、腺嘌呤Adenine、L-半胱氨酸L-cysteine、生物素D-biotin
葡萄糖、琼脂
70%酒精，NaClO2%，0.1%生汞（HgCl2）
三、实验材料：
无性系菊科蒿属植物蒌蒿嫩茎、叶、根
四、实验步骤
1、培养基的配制
以MS为基本培养基，附加不同浓度的IAA、NAA和6-BA、琼脂0.7%，蔗糖3%，PH5.8~6.0，于121℃下灭菌20min，放置备用
2、外植体的取材与消毒
采取直径0.8cm左右的嫩芽、嫩茎、嫩根，用清水将其洗干净，再用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%HgCl2灭菌7min或者用2% NaClO浸泡30min，无菌水冲洗4~5次后备用。
3、接种培养
在无菌条件下，用手术刀切去部分枝叶，接种于诱导培养基上，诱导芽的分化。
4、培养条件
每天光照10h，光照强度为2000lx，温度25℃±1℃
5、继代培养
待丛生芽生成后，将丛生芽切成单株接种到继代培养基（MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA）上
6、生根与移栽
待继代获得较多丛生芽后，将丛生芽切成单株，大部分接种到生根培养基（MS+0.25mg/LNAA+0.25mg/LIAA）上，其余再继代一次。
待生根后，将生根试管苗开盖炼苗，移栽。
五、实验结果与分析：
NB培养基
NB Medium
NB培养基产品价格用途：用于植物组织培养
【求助】请教用作水稻愈伤诱导再生的CC培养基配方
以前用MS,N6基,现在做籼稻,需要用CC基,可是查了不少地方，都没有配方。
请有具体配方的战友告知,或者告知原始出处.
PM偶。
或者，EMAIL: daofu001@
非常感谢!
以下为抄录
1，CC无机大量：20×母液（g/L）
KNO3 24.24
NH4NO3 12.80
KH2PO4 2.72
MgSO4.7H2O 4.94
CaCl2.2H2O/ CaCl2 11.16/8.8
2，CC无机微量I：100×母液（g/200ml）MnSO4.4H2O/MnSO4.H2O 0.233/0.169
H3BO3 0.062
ZnSO4.7 H2O 0.115
3，CC无机微量II：1000×母液（mg/500ml）KI 4.5
Na2MoO4 120
CuSO4.5 H2O 12.5
CoCl2.6H2O 14
4，CC有机100×母液（g/100ml）
VB1 0.17
VB6 0.02
烟酸0.12
肌醇 1.8
甘氨酸0.04
5，CC铁盐100×母液（g/L）
FeSO24.7H2O 2.78
Na2.EDTA 3.73
配制1L CC培养基，加
麦芽糖20g
甘露醇25g
phytagel/ Agar 3g/8g
VC 60mg。