3种培养基植物组织培养实验方案

植物组织培养实验方案

一、实验仪器：

烧杯、三角瓶、玻棒、电子天平、药匙、量筒、三角瓶、镊子、剪刀、手术刀、酒精灯、容量瓶（1L）、PH试纸、移液管、牛皮纸、橡皮筋、培养皿、高压灭菌锅、无菌操作台

二、实验药品：

大量元素：硝酸钾KNO3、硝酸铵NH4NO3、磷酸二氢钾KH2PO4、硫酸镁MgSO4.7H2O、氯化钙CaCl2.2H2O、硝酸钙Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾KCl

微量元素：硼酸H3BO3、硫酸锰MnSO4.4H2O、硫酸锌ZnSO4.7 H2O、钼酸钠Na2MoO4.2 H2O、硫酸铜CuSO4.5 H2O、氯化钴CoCl2.6H2O、碘化钾KI、浓硫酸Concentrated H2SO4

注：NB培养基中用浓硫酸代替碘化钾

铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)

有机成分：肌醇Myo-inositol、盐酸硫胺素Thiamin HCl VB1、盐酸吡哆醇Pyridoxin HCl VB6、烟酸Nicotinic acid VB5或VPP、甘氨酸、泛酸钙Calcium pantothenate、腺嘌呤Adenine、L-半胱氨酸L-cysteine、生物素D-biotin

葡萄糖、琼脂

70%酒精，NaClO2%，0.1%生汞（HgCl2）

三、实验材料：

无性系菊科蒿属植物蒌蒿嫩茎、叶、根

四、实验步骤

1、培养基的配制

以MS为基本培养基，附加不同浓度的IAA、NAA和6-BA、琼脂0.7%，蔗糖3%，PH5.8~6.0，于121℃下灭菌20min，放置备用

2、外植体的取材与消毒

采取直径0.8cm左右的嫩芽、嫩茎、嫩根，用清水将其洗干净，再用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%HgCl2灭菌7min或者用2% NaClO浸泡30min，无菌水冲洗4~5次后备用。3、接种培养

在无菌条件下，用手术刀切去部分枝叶，接种于诱导培养基上，诱导芽的分化。

4、培养条件

每天光照10h，光照强度为2000lx，温度25℃±1℃

5、继代培养

待丛生芽生成后，将丛生芽切成单株接种到继代培养基（MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA）上

6、生根与移栽

待继代获得较多丛生芽后，将丛生芽切成单株，大部分接种到生根培养基（MS+0.25mg/LNAA+0.25mg/LIAA）上，其余再继代一次。待生根后，将生根试管苗开盖炼苗，移栽。

五、实验结果与分析：

NB培养基

NB Medium

NB培养基产品价格用途：用于植物组织培养

【求助】请教用作水稻愈伤诱导再生的CC培养基配方

以前用MS,N6基,现在做籼稻,需要用CC基,可是查了不少地方，都没有配方。请有具体配方的战友告知,或者告知原始出处.

PM偶。或者，EMAIL: daofu001@

非常感谢!

以下为抄录

1，CC无机大量：20×母液（g/L）

KNO3 24.24

NH4NO3 12.80

KH2PO4 2.72

MgSO4.7H2O 4.94

CaCl2.2H2O/ CaCl2 11.16/8.8

2，CC无机微量I：100×母液（g/200ml）MnSO4.4H2O/MnSO4.H2O 0.233/0.169

H3BO3 0.062

ZnSO4.7 H2O 0.115

3，CC无机微量II：1000×母液（mg/500ml）KI 4.5

Na2MoO4 120

CuSO4.5 H2O 12.5

CoCl2.6H2O 14

4，CC有机100×母液（g/100ml）

VB1 0.17

VB6 0.02

烟酸0.12

肌醇 1.8

甘氨酸0.04

5，CC铁盐100×母液（g/L）

FeSO24.7H2O 2.78

Na2.EDTA 3.73

配制1L CC培养基，加

麦芽糖20g

甘露醇25g

phytagel/ Agar 3g/8g

VC 60mg