微生物的实验室培养-(经典版)PPT课件

3.溶化：牛肉膏、称量牛纸肉膏、少5量g 水加热溶解 →取纸
→蛋白胨、蛋N白aC胨l→琼10脂g →补水定容
4.调pH、分装、封口：Nacl 5g
5.灭菌：培养基、H培2O养皿定容至1000ml
6.倒平板：
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2
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养.基，造成污染
类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳
源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则 只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是
存在的，如NH3可为硝化细菌提供. 能量和氮源。
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例2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
(B )
A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前
后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会
把所接菌种也杀死。
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本课题知识小结:
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避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时， 菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划 线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐 减少，以便得到菌落。
及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染
环境和感染操作者。
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⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液：
1.移液管要经过灭菌。
解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌
的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵
过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误
的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能
只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵
有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌
求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程
中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
㈢.是否进行了及时细致的观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，
及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一
些细微的变化。
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【典例解析】 例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( D )
释
灼
1
5
涂
10
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌：
1.接种： ⑴平板划线法： ⑵稀释涂布平板法： 2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基
放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，
观察并记录
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三.菌种的保藏：
1.临时保藏：试管固体斜面培养基上 4℃ 菌种易被污染、变异
培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养
微生物。
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5
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌：
1.接种： ⑴平板划线法： 接种环
菌种
防止划破培养基.
（重复实验） 划3个平板
1个不划线 （空白对6 照）
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7
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要 灼烧接种环吗？为什么？
2.长期保存：甘油管藏 1ml甘油＋1ml菌液 －20℃
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三.结果分析与评价
㈠.培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，
说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
㈡.接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，
并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要
课题1
微生物的实验室培养(2) 1.提供营养和条件 2.防止污染
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1
实验操作
大肠杆菌的纯化培养： 分散成单个细胞, 形成单个菌落 ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ： 原则
1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量：牛10肉00膏ml黏牛稠肉，膏用蛋称白量胨纸培称养取基的配方
牛肉膏、蛋白琼胨脂易2吸0.0潮g ，要快、加盖
A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量
解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生
物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有
的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如
NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮 源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种
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问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基 的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉 锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进 行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培
养基。
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4
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
2.操作时，在酒精灯 火焰附近进行。
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
101
102
103
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105
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菌液
6支试管，分别加入9ml无菌水
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稀
⑵稀释涂源自文库平板法：
释
a.梯度稀释菌液：
10 3倍
b.涂布平板：
浸
滴
不超过0.1ml
各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对.照
稀 释
1
4
稀
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后 的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可 以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的