微生物的实验室培养-(经典版)PPT课件
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微生物的实验室培养-(共26张PPT)
1.接种： Nacl 5g
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当选择合适的方法。
⑴平板划线法： 培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
微生物生存的环境和营养物质
⑵稀释涂布平板法： 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖
（3） 实验操作者的双手 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又
可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 121℃、15～30min
二.无菌技术：防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌：
平板划线法
平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连 续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的 表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁 殖而来的肉眼可见的子细胞群体。
1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧 接种环吗？为什么？
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存 在的微生物污染培养物
6.倒平板：
约50℃
倒平板
灼烧灭菌，
防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温 度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，
感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
3．平板划线法和稀释涂布平板法的比较
牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解
微生物的实验室培养PPT教学课件
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，
将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥 发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在 皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养 微生物吗？为什么？
牛奶
接种室、接种箱或超净工作台
常用的灭菌方法：
灼烧灭菌 接种工具，接种环、接种针或其他金属用具 干热灭菌 玻璃器皿（吸管、培养皿） 高压蒸汽灭菌 ：100kPa 121℃ 15-30min
判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。
（1）豆浆 （2）游泳池 （3）超净工作台 （4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 （5）培养细菌用的培养皿 （6）无菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培养基 （8）接种环、接种针（9）实验操作者的双手
垃圾污染 矿山开发以煤渣、矿渣堆积，占用大量土地
大气污染、 工厂排放大量废气；化工厂和炼钢厂排放污水污
水污染
染了河流
热污染
热力发电产生大量废热
各种污染对鲁尔区的生态环境造成了巨大危害
总结：鲁尔区衰落的主要原因 1.生产结构单一：形成以煤炭工业为基础、以钢铁工业为主导，
并高度集中了电力、机械、化工等工业生产的格局。 2.煤炭的能源地位下降：20世纪50年代以后，石油和天然气开
鲁尔区的发展，有以下几方面的优势区位 条件：
• （1）丰富的煤炭资源 鲁尔区是在开发鲁尔煤田的基础上发展起来的， 鲁尔煤田储量大、煤质好、煤种齐全，并且含硫 量低、发热量高、埋藏浅，开采条件好。这样以 采煤工业开始兴起，随着煤炭的综合利用，又发 展了炼焦、电力、煤化工等工业，进而促进了钢 铁、化学、机械制造等工业的发展。
微生物的实验室培养公开课ppt课件
微生物的实验室培养公 开课ppt课件
2024/1/30
1
contents
目录
2024/1/30
• 微生物实验室培养概述 • 微生物培养基制备 • 微生物接种与培养技术 • 微生物分离纯化技术 • 微生物鉴定与保藏技术 • 实验安全与防护知识
2
微生物实验室培养
01
概述
20义
法生长的情况。
2024/1/30
17
其他分离纯化方法
单细胞挑取法
利用显微操作技术，从混杂的微生物群体中挑取单个细胞进行培养 ，获得纯培养物。
选择培养基法
利用微生物对营养物质或生长条件的需求差异，配制特定的选择培 养基，使目标微生物能够生长而杂菌受到抑制，达到分离纯化的目 的。
膜过滤法
利用微孔滤膜过滤微生物悬液，将微生物截留在滤膜上，然后将滤膜 转移到培养基表面进行培养，获得纯培养物。
2024/1/30
27
THANKS.
2024/1/30
28
20
生理生化鉴定方法
生长条件测定
测定微生物在不同温度、 pH值、氧气条件下的生长 情况，了解其生理特性。
2024/1/30
代谢产物分析
通过分析微生物的代谢产 物，如酸、碱、气体等， 推断其代谢途径和类型。
酶反应试验
利用特定的酶反应试验， 检测微生物体内酶的活性 和种类，进一步确定其分 类地位。
21
微生物的生长需要一定的营养物质，包括碳源、氮源、无机盐等。需 要根据微生物的需求设置合适的营养条件。
13
生长曲线测定与分析
生长曲线的测定
通过定期测量微生物的数量或生物量 ，可以绘制出生长曲线。常用的测量 方法包括显微镜计数法、比浊法等。
2024/1/30
1
contents
目录
2024/1/30
• 微生物实验室培养概述 • 微生物培养基制备 • 微生物接种与培养技术 • 微生物分离纯化技术 • 微生物鉴定与保藏技术 • 实验安全与防护知识
2
微生物实验室培养
01
概述
20义
法生长的情况。
2024/1/30
17
其他分离纯化方法
单细胞挑取法
利用显微操作技术，从混杂的微生物群体中挑取单个细胞进行培养 ，获得纯培养物。
选择培养基法
利用微生物对营养物质或生长条件的需求差异，配制特定的选择培 养基，使目标微生物能够生长而杂菌受到抑制，达到分离纯化的目 的。
膜过滤法
利用微孔滤膜过滤微生物悬液，将微生物截留在滤膜上，然后将滤膜 转移到培养基表面进行培养，获得纯培养物。
2024/1/30
27
THANKS.
2024/1/30
28
20
生理生化鉴定方法
生长条件测定
测定微生物在不同温度、 pH值、氧气条件下的生长 情况，了解其生理特性。
2024/1/30
代谢产物分析
通过分析微生物的代谢产 物，如酸、碱、气体等， 推断其代谢途径和类型。
酶反应试验
利用特定的酶反应试验， 检测微生物体内酶的活性 和种类，进一步确定其分 类地位。
21
微生物的生长需要一定的营养物质，包括碳源、氮源、无机盐等。需 要根据微生物的需求设置合适的营养条件。
13
生长曲线测定与分析
生长曲线的测定
通过定期测量微生物的数量或生物量 ，可以绘制出生长曲线。常用的测量 方法包括显微镜计数法、比浊法等。
微生物的实验室培养公开课ppt
培养基选择原则
根据微生物的营养需求、生长条件 以及实验目的等因素，选择合适的 培养基类型和配方。
无菌操作技术要点
无菌操作概念与重要性
无菌操作是指在无菌室或超净工作台上进行的，防止微生 物污染的实验操作，对于保证实验结果的准确性和可靠性 至关重要。
无菌操作技术要点
包括实验前准备、实验过程中保持无菌、实验后处理等方 面，如实验器具的灭菌处理、操作过程中的避免交叉污染 等。
染等。
污染识别方法
02
掌握细胞污染的识别方法，如观察培养基颜色变化、细胞形态
变化等。
污染处理策略
03
学会针对不同污染类型采取相应的处理策略，如更换培养基、
使用抗生素等。
细胞在微生物研究中的应用实例
病原菌研究
利用细胞培养技术研究病原 菌的生长特性、毒力因子等 ，为疾病防治提供理论依据 。
抗病毒药物筛选
通过细胞培养技术建立病毒 感染模型，筛选具有抗病毒 活性的药物。
疫苗研发
利用细胞培养技术生产疫苗 ，提高疫苗的安全性和有效 性。
基因工程研究
将外源基因导入细胞中表达 ，研究基因功能及调控机制 。
06
实验设计与数据分析
实验设计原则和方法
对照原则
设置对照组和实验组，以消除非处理因素对实验 结果的影响。
微生物在自然界中的作用
微生物在自然界中扮演着重要角色， 参与物质循环、能量流动等生态过程 。
微生物分类
根据形态、结构、生理生化特性等， 微生物可分为细菌、真菌、病毒、原 生动物等大类。
实验室常用设备介绍
显微镜
用于观察微生物形态、 结构等特征的仪器，包 括光学显微镜和电子显
微镜等。
培养箱
提供稳定的温度、湿度 等环境条件，用于微生
根据微生物的营养需求、生长条件 以及实验目的等因素，选择合适的 培养基类型和配方。
无菌操作技术要点
无菌操作概念与重要性
无菌操作是指在无菌室或超净工作台上进行的，防止微生 物污染的实验操作，对于保证实验结果的准确性和可靠性 至关重要。
无菌操作技术要点
包括实验前准备、实验过程中保持无菌、实验后处理等方 面，如实验器具的灭菌处理、操作过程中的避免交叉污染 等。
染等。
污染识别方法
02
掌握细胞污染的识别方法，如观察培养基颜色变化、细胞形态
变化等。
污染处理策略
03
学会针对不同污染类型采取相应的处理策略，如更换培养基、
使用抗生素等。
细胞在微生物研究中的应用实例
病原菌研究
利用细胞培养技术研究病原 菌的生长特性、毒力因子等 ，为疾病防治提供理论依据 。
抗病毒药物筛选
通过细胞培养技术建立病毒 感染模型，筛选具有抗病毒 活性的药物。
疫苗研发
利用细胞培养技术生产疫苗 ，提高疫苗的安全性和有效 性。
基因工程研究
将外源基因导入细胞中表达 ，研究基因功能及调控机制 。
06
实验设计与数据分析
实验设计原则和方法
对照原则
设置对照组和实验组，以消除非处理因素对实验 结果的影响。
微生物在自然界中的作用
微生物在自然界中扮演着重要角色， 参与物质循环、能量流动等生态过程 。
微生物分类
根据形态、结构、生理生化特性等， 微生物可分为细菌、真菌、病毒、原 生动物等大类。
实验室常用设备介绍
显微镜
用于观察微生物形态、 结构等特征的仪器，包 括光学显微镜和电子显
微镜等。
培养箱
提供稳定的温度、湿度 等环境条件，用于微生
微生物的实验室培养(课件)
详细描述
分批培养是将微生物接种到一定量的培养基中，在一 定时间内完成生长繁殖的过程。该方法可以控制微生 物的生长环境，便于观察和控制。连续培养则是让微 生物在恒定条件下持续生长繁殖的方法，通过不断地 补充新鲜的培养基和排除老的培养基，使微生物在恒 定的条件下快速生长繁殖。该方法适用于大规模工业 生产，可以提高生产效率和产品质量。
微生物培养
在适宜的温度、湿度、 pH等条件下，将纯化 的微生物菌株接种到培 养基中，让其生长繁殖 。根据需要，可以选择 不同的培养方式和培养
基类型。
微生物观察与检测
在培养过程中，定期观 察微生物的生长情况， 记录生长曲线、菌落形 态等数据，并进行相关 的检测和鉴定，如生化 反应、抗原抗体反应等
。
微生物保藏与利用
微生物的生长需求。
培养基的pH值
培养基的pH值对微生物的生长具 有重要影响，不同微生物对pH值 的要求不同，因此需根据实际情况 调整。
培养基的灭菌
灭菌是培养基制备的重要环节，通 过高温或高压灭菌，消除培养基中 的杂菌，保证微生物纯种培养。
实验室设备与器材
显微镜
观察微生物形态和生长情况，是微生物实验 室的基本设备。
实验室安全防护措施
实验室应配备必要的安全设施， 如灭火器、急救箱、洗眼器等，
并定期进行检查和维护。
实验室应保持通风良好，确保空 气流通，以降低感染和污染的风
险。
实验室应定期进行消毒和清洁， 确保实验环境的卫生和安全。
实验废弃物的处理与环保要求
实验废弃物应按照规定进行分类和处 理，避免对环境和人类健康造成危害 。
培养获得的微生物可以 用于后续的研究和应用 ，如生产生物制品、进 行疾病诊断和治疗等。 同时，对于有价值的菌 种可以进行长期保藏，
高中生物选修1微生物的实验室培养ppt(共54张PPT)
稀释涂布平板法
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结 合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想， 第2步应如何进行无菌操作？
应从操作的各个细节保证“无菌”。例如， 酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触 任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
3类。
（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后
分装前，要进行的是
。 调整pH
（6）右表中各成分重量确定的原则
是 依微生物的生长需要确定 。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该
增加的成分
琼脂（或凝固。剂）
一、课题目标：
了解有关微生物及培养基的基础知识，进 行无菌技术的操作，进行微生物的培养。
二、课题重点和难点：
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
生殖 孢子生殖
直立菌丝 营养菌丝
腐生生活
（二）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制
而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养
液。
1.培养基的类型
（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、
半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。
（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。
芽孢又小又轻，可以随风飘散。
平板划线的操作方法
C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；
且体内一般不含有叶绿素.
寄生菌 大部分病原菌
消毒与灭菌的概念及两者的区别
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
有的碳源同时是能源，如葡萄糖；
掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。
微生物的实验室培养ppt课件
26
（1）碳源
① 可作为碳源的物质有: a. 含碳无机物: 碳酸盐 、碳酸氢盐 、二氧化碳等 b. 含碳有机物： 糖类（主要）
蛋白质 脂肪酸
②不同微生物所利用的碳源不同 a.异养型微生物的碳源为 含碳有机物（有机碳） b.自养型微生物的碳源为 含碳无机物（无机碳）
27
（2）氮源
① 可作为氮源的物质有: a. 含氮无机物： 氮气 、氨气 、氨盐 、硝酸盐
无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀 释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止 杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地 培养微生物。
专题2 :微生物的培养与应用
1
主要内容
一、培养基作用、种类 二、无菌技术 三、制备牛肉膏蛋白胨培养基 四、纯化大肠杆菌
2
病毒界 (噬菌体、艾滋病毒)
微生物
约有10万种
原核生物界 (细菌、放线菌、蓝藻) 真菌界 (酵母菌\霉菌\大型真菌) 原生生物界 (草履虫\变形虫\衣藻)
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常 要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚 至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能 进行光合作用.
据物理性质分 半固体培养基
用于微生物的分离、
固体培养基
计数 常用于分类、鉴定
常用于工业生产
在培养基中加入某种化学物质，以抑
天然培养制基不需要的微生物的生长，促进所需
据化学成分分
要的微生物的生长。例如，在培养基
合成培养中基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ入青霉素，以抑制细菌、放线菌
根据的微生生长物，的从代而谢分特离点到，酵在母培菌养和基霉中菌加。入
大变形虫
草履虫
14
（1）碳源
① 可作为碳源的物质有: a. 含碳无机物: 碳酸盐 、碳酸氢盐 、二氧化碳等 b. 含碳有机物： 糖类（主要）
蛋白质 脂肪酸
②不同微生物所利用的碳源不同 a.异养型微生物的碳源为 含碳有机物（有机碳） b.自养型微生物的碳源为 含碳无机物（无机碳）
27
（2）氮源
① 可作为氮源的物质有: a. 含氮无机物： 氮气 、氨气 、氨盐 、硝酸盐
无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀 释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止 杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地 培养微生物。
专题2 :微生物的培养与应用
1
主要内容
一、培养基作用、种类 二、无菌技术 三、制备牛肉膏蛋白胨培养基 四、纯化大肠杆菌
2
病毒界 (噬菌体、艾滋病毒)
微生物
约有10万种
原核生物界 (细菌、放线菌、蓝藻) 真菌界 (酵母菌\霉菌\大型真菌) 原生生物界 (草履虫\变形虫\衣藻)
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常 要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚 至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能 进行光合作用.
据物理性质分 半固体培养基
用于微生物的分离、
固体培养基
计数 常用于分类、鉴定
常用于工业生产
在培养基中加入某种化学物质，以抑
天然培养制基不需要的微生物的生长，促进所需
据化学成分分
要的微生物的生长。例如，在培养基
合成培养中基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ入青霉素，以抑制细菌、放线菌
根据的微生生长物，的从代而谢分特离点到，酵在母培菌养和基霉中菌加。入
大变形虫
草履虫
14
微生物的实验室培养(课件)
无机盐种类
Cncnc-micro
微生物生长不可缺少的 微量有机物质叫生长因子。 维生素 氨基酸 碱 基
Cncnc-micro
生长因子
有的微生物自己不能合成维生素，需要外加，主要是B族维生素、硫胺素、叶酸、泛酸、核黄素等，如生产味精需加生物素（是B族中的一种即VH）。
四大营养类型
C、H、O、N、P、S
微生物主要的化学元素组成：
4、微生物的五种营养要素
碳源 （carbon source）
氮源（nitrogen source）
生长因子（growth factor）
无机盐（mineral salts）
水（wahtor）
Cncnc-micro
凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质都称为碳源 。
维生素
Cncnc-micro
有些微生物自己不能合成某种氨基酸，必须给予补充，如赖AA发酵所用的黄色短杆菌不能合成环丝AA，为环丝AA缺陷型菌株，在培养基中必须添加含环丝AA的氮源。如豆饼水解液或毛发水解液等。
氨基酸
Cncnc-micro
嘧啶和嘌呤是核酸和辅酶的重要组分，是许多微生物必须的生长因素。 有些微生物不仅不能合成嘧啶和嘌呤，而且不能将补充的嘧啶和嘌呤结合在核苷酸上，还必须供给核苷酸，有的菌需补充卟啉或其衍生物，还有的菌需供给（低碳）脂肪酸等。
天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。
优点：营养成分丰富，培养效果好
天然培养基：
2.营养
碳源 氮源 水 无机盐
另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
Cncnc-micro
微生物生长不可缺少的 微量有机物质叫生长因子。 维生素 氨基酸 碱 基
Cncnc-micro
生长因子
有的微生物自己不能合成维生素，需要外加，主要是B族维生素、硫胺素、叶酸、泛酸、核黄素等，如生产味精需加生物素（是B族中的一种即VH）。
四大营养类型
C、H、O、N、P、S
微生物主要的化学元素组成：
4、微生物的五种营养要素
碳源 （carbon source）
氮源（nitrogen source）
生长因子（growth factor）
无机盐（mineral salts）
水（wahtor）
Cncnc-micro
凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质都称为碳源 。
维生素
Cncnc-micro
有些微生物自己不能合成某种氨基酸，必须给予补充，如赖AA发酵所用的黄色短杆菌不能合成环丝AA，为环丝AA缺陷型菌株，在培养基中必须添加含环丝AA的氮源。如豆饼水解液或毛发水解液等。
氨基酸
Cncnc-micro
嘧啶和嘌呤是核酸和辅酶的重要组分，是许多微生物必须的生长因素。 有些微生物不仅不能合成嘧啶和嘌呤，而且不能将补充的嘧啶和嘌呤结合在核苷酸上，还必须供给核苷酸，有的菌需补充卟啉或其衍生物，还有的菌需供给（低碳）脂肪酸等。
天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。
优点：营养成分丰富，培养效果好
天然培养基：
2.营养
碳源 氮源 水 无机盐
另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
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解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌
的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵
过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误
的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能
只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵
有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌
求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程
中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
㈢.是否进行了及时细致的观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，
及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一
些细微的变化。
.
13
【典例解析】 例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( D )
培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养
微生物。
.
5
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌：
1.接种： ⑴平板划线法： 接种环
菌种
防止划破培养基.
（重复实验） 划3个平板
1个不划线 （空白对6 照）
.
7
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要 灼烧接种环吗？为什么？
A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量
解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生
物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有
的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如
NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮 源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种
3.溶化：牛肉膏、称量牛纸肉膏、少5量g 水加热溶解 →取纸
→蛋白胨、蛋N白aC胨l→琼10脂g →补水定容
4.调pH、分装、封口：Nacl 5g
5.灭菌：培养基、H培2O养皿定容至1000ml
6.倒平板：
.
2
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养.基，造成污染
避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时， 菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划 线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐 减少，以便得到菌落。
及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染
环境和感染操作者。
8
⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液：
1.移液管要经过灭菌。
后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会
把所接菌种也杀死。
.
15
本课题知识小结:
.
16
类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳
源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则 只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是
存在的，如NH3可为硝化细菌提供. 能量和氮源。
14
例2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
(B )
A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后 的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可 以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的
2.操作时，在酒精灯 火焰附近进行。
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
101
102
103
104
105
106
菌液
6支试管，分别加入9ml无菌水
.
9
稀
⑵稀释涂布平板法：
释
a.梯度稀释菌液：
10 3倍
b.涂布平板：
浸
滴
不超过0.1ml
各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对.照
稀 释
1
4
稀
释
灼
1
5
涂
10
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌：
1.接种： ⑴平板划线法： ⑵稀释涂布平板法： 2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基
放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，
观察并记录
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三.菌种的保藏：
1.临时保藏：试管固体斜面培养基上 4℃ 菌种易被污染、变异
2.长期保存：甘油管藏 1ml甘油＋1ml菌液 －20℃
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三.结果分析与评价
㈠.培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，
说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
㈡.接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，
并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要
课题1
微生物的实验室培养(2) 1.提供营养和条件 2.防止污染
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实验操作
大肠杆菌的纯化培养： 分散成单个细胞, 形成单个菌落 ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ： 原则
1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量：牛10肉00膏ml黏牛稠肉，膏用蛋称白量胨纸培称养取基的配方
牛肉膏、蛋白琼胨脂易2吸0.0潮g ，要快、加盖
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问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基 的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉 锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进 行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培
养基。
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3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？