奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法研究

研究报告

奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法研究

高旗利 张 霞 罗茂凰 张海滨 张海英 姚 霞 张宏伟(天津出入境检验检疫局,天津塘沽,300456) 刘 寅 黄熙泰

(南开大学,天津,300071)

摘 要: 目的 建立和提出奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法。 方法 利用细菌16S和23S rDNA的保守区作为通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S~23S rDNA间区序列(ISR)进行了扩增和测序,在比较阪崎肠杆菌与其近源株16S1~23S rDNA间区序列的基础上,设计了11条阪崎肠杆菌PCR检测引物,组合成30对PCR引物并筛选出一对阪崎肠杆菌PCR检测的特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法。 结果 用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌验证试验表明,本文所建立的PCR方法特异性强;加菌试验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为2.2~5.4cfu/100g,灵敏度高;新建的PCR方法与FDA BAM方法比较试验表明,两种方法的检测结果完全符合。 结论 本文提出的奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法填补了国内空白,达到了国际先进水平,可在实际工作中推广。

关键词:奶粉;阪崎肠杆菌;PC R

DETECTION OF Enterobacter sakazakii FROM D EHYDRATED POWDERED MILK BY PCR

Gao Qili,Zhang Xia,Luo M aohuang,Zhang Haibin Zhang Haiying,Yao Xia,Zhang Hongwei.

(Tianji n Exit-Entry Inspection and Quaran tine Bureau,T ianjin,300456)

Liu Yin,Huang Xitai

(Tianjin Nankai University,T ianjin,300071)

Abstract:[Objective] To establish a PCR method for detection of Enterobacte r saka z a kii in dehydrated powdered milk.[Method] T he conserved sequences in16S rRNA and23S rRNA genes of bacteria were used as a pair of universal pri mers to amplify the16S-23S in terspacer region of6strains of Ente r obacter saka z a kii.On the basis of comparative sequence analysis of the16S-23S interspacer regions,11primers were designed and30pairs of these pri mers were combined so that a pair of pri mers specific for Enterobacte r saka z a kii was screened out.Even-tually,we established the PCR method for detection of dehydrated powdered milk from dehydrated powdered milk.[Result] The PCR method established in this article is hi ghly specific and sensitive for detection of Ente r obacter saka zakii through the testing of10strains of En-te robacter sakazakii and18strains of other relative bacteria and artificial inoculation.The sensi tivity can reach to2.2~5.4cfu/100g.[Conclu-sion] This PCR method,which fills the domestic blank and reaches to international advanced level,should be generalized and applied to routine detection.

Key words:Dehydrated powdered milk;Enterobacter saka z akii;PCR

1 前言

阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii),又名黄色阴沟肠杆菌,为肠杆菌科肠杆菌属的一个种,1980年改名为阪崎肠杆菌[1]。Urmenyi and Franklin两位科学家在1961年首次报道了由该菌引起的两例脑膜炎病例,随后在全球范围内相继出现了由阪崎肠杆菌引起的脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎的报道。2001年4月,在美国某医院新生儿重症监护室,一早产儿发烧、心动过速,脑脊液培养发现阪崎肠杆菌,诊断为脑膜炎,用抗生素治疗无效,9天后死亡,扩大检查该院49名婴儿的粪便和尿液,发现10人为阪崎肠杆菌阳性,其原因是使用了某批Portagen的婴儿配方奶粉,而且在该批奶粉中也检查出了阪崎肠杆菌,结果导致Portagen婴儿配方奶粉于2002年4月被召回[2]。1998年,在比利时有12名婴儿因哺喂同一牌号的婴儿配方奶粉而发生小肠结肠坏死,在这些婴儿的粪便和该批奶粉中同时分离出阪崎肠杆菌,当停用该批奶粉后,未有新的病例发生[3]。从大多数病例看,阪崎肠杆菌主要危害婴儿,也有小部分成人感染骨髓炎和菌血症的报道,虽然有抗生素的治疗,但总体死亡率高达80%[4]。目前,该菌感染源头还不十分清楚,但多数报告表明奶

作者简介:高旗利(1964-),男,毕业于南开大学,硕士,已发表论文20余篇。

本研究为科技部农社司2003DIA6N002-002和天津出入境检验检疫局TK005-2003项目资助。

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