阪崎肠杆菌检验培训课件

阪崎肠杆菌检验
13
简介
2006年2月，国际标准化组织(ISO)和 国际乳品联盟(IDF)联合公布了“乳和 乳制品中阪崎肠杆菌的检测”方法， 即ISO/TS 22964 IDF/RM210
阪崎肠杆菌检验
14
简介
2008-11-21，中华人民共和国卫生部联合国家 标准化委员会发布GB/T 4789.40-2008食品卫 生微生物学检验阪崎肠杆菌检验， 2009-03-01 实施。
这项标准的出台，解决了我国检测婴幼儿配 方奶粉中阪崎肠杆菌无国家标准检测方法的 问题。
阪崎肠杆菌检验
15
适用范围
规定了食品中阪崎肠杆菌的检验方法
适用于婴幼儿配方食品，乳及乳制品，及 其原料中阪崎肠杆菌的检验
阪崎肠杆菌检验
16
设备和材料
微生物实验室常规灭菌与培养设备
冰箱2℃~5℃、水浴箱44 ℃ +0.5 ℃ 、感量 0.1g天平、振荡器、均质器
2008年11月国家标准出台前，我国只有行业标准。
阪崎肠杆菌检验
12
简介
2005-5-20中国检验检疫科学研究院和天津出入境 检验检疫局牵头完成《奶粉中阪崎肠杆菌检测方 法》行业标准。
该标准建立了阪崎肠杆菌改进的传统检测方法(经 典方法)、普通PCR方法和荧光PCR方法(快速筛选 方法)，其中改进的传统方法与FDA方法比较，检 测结果一致，但效率大大提高，时间缩短1/3～ 1/2。
阪崎肠杆菌检验
7
简介
微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但 许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要 感染渠道。
以下3 种主要途径可以导致婴儿配方奶粉中阪崎 肠杆菌的污染:
A 通过生产婴儿配方奶粉的原料; B 在巴斯德杀菌后,配方粉污染或其他添加
带入; C 喂养婴儿前被污染
剂干粉
阪崎肠杆菌检验
无菌吸管10ml，0.1ml，微量移液器，吸头
阪崎肠杆菌检验
17
设备和材料
无菌锥形瓶100ml\200ml\2000ml 90mm直径无菌培养皿 PH计或精密PH试纸 VITEK全自动微生物鉴定系统（可选用其
他等效设备代替)
阪崎肠杆菌检验
18
培养基和试剂
缓冲蛋白胨水BPW（略） 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素 mLST-Vm 成分和配制方法见附录A.2，加入万古霉 素目的是抑制革兰阳性细菌等杂菌的生长
2008年10月17日，产自台湾的9.62吨配方 奶粉从香港入境时被检验出阪崎肠杆菌超 标 。不合格奶粉包括味全婴儿配方奶粉、 味全幼儿成长配方奶粉和味全较大婴儿配 方奶粉。
阪崎肠杆菌检验
10
简介
阪崎肠杆菌的检验方法？标准化？
阪崎肠杆菌检验
11
简介
美国食品和药品管理局(FDA)的检测方法是国际检 测阪崎肠杆菌的标准生化方法。此外，还有依据 该菌生理生化特征的鉴定方法和PCR法检测及荧 光PCR等分子检测方法。
3
奶粉？隐形杀手？
阪崎肠杆菌检验
4
简介
危害性：阪崎肠杆菌已被世界卫生组 织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡 的重要条件致病菌
阪崎肠杆菌检验
5
简介
阪崎肠杆菌属条件致病菌，在一般情况下，不对人体健康 产生危害,成年人感染常为轻度的胃肠道症状。
新生儿(出生28天或以下)和不足2个月的婴儿，尤其是早 产儿、体重不足2.5公斤和免疫力较弱（母亲HIV）的婴儿 的感染风险最高。可致严重脑膜炎，败血症，小肠结肠炎， 死亡率可高达50%～80%。
生化特性与阴沟肠杆菌相似，故1980年以前被称为 黄色阴沟肠杆菌，后更名为阪崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌检验
2
简介
自然界分布广泛，在水、土壤、食物、排 泄物等中都能够检出。细菌不耐热，加热 到72℃持续15秒就可以杀灭。细菌不在人与 人之间传播。
常见于生产婴儿配方奶粉的设施和家居环 境中。
阪崎肠杆菌检验
新生儿(尤其是早产婴儿)胃的酸性较成年人低（PH高）， 这可能是阪崎肠杆菌可在婴儿体内生存的一个主要因素。
阪崎肠杆菌检验
6
1961年，英国的Fr简anklin介等人首次报道了2例阪
崎肠杆菌脑膜炎，此后相继出现阪崎肠杆菌 致人类感染的散发和暴发的病例报告。
统计到2004年，全球各地报道的确诊病例在 60例以上，导致多起商业婴儿配方奶粉被广 泛召回。
注意要避光4℃ 保存
阪崎肠杆菌检验
20
阪崎肠杆菌显色培养基DFI
微生物 阪崎肠杆菌 大肠菌群 金黄色葡萄球菌
菌落颜色 蓝绿色 无色菌落 被抑制不生长
阪崎肠杆菌检验
21
培养基和试剂
胰蛋白胨大豆琼脂TSA （略） API 20E（也可选用其他等效鉴定试剂代替) 氧化酶试剂A.5 L-赖氨酸脱羧酶培养基A.6 L-鸟氨酸脱羧酶培养基A.7 L-精氨酸双水解酶培养基A.8 糖类发酵培养基A.9 西蒙氏柠檬酸盐培养基A.10
注意：新鲜配制的mLST-Vm应该24h内使用， 万古霉素溶液可在4 ℃保存15d
阪崎肠杆菌检验
19
培养基和试剂
阪崎肠杆菌显色培养基DFI
附录A.3，由英国Oxoid公司提供，也可用同等效 果的产品替代。
原 理： DFI中含有胆盐抑制革兰氏阳性菌，同时显色底物5溴-4-氯-3-吲哚-ɑ-D 葡萄糖苷则与阪崎肠杆菌中的α葡萄糖苷酶发生反应，水解底物，释放出5-溴-4-氯3-吲哚基显色基团，在深黄色平板上产生绿-蓝绿色 的菌落。
8
简介
2002年美国FDA在本土某些国际乳业巨头生产的 婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌。
2003年又一家国际乳业巨头公司主动召回在美国 生产的一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿 特殊配方奶粉。
阪崎肠杆菌从此成为世界瞩目的焦点，得到世界 多国相关部门的重视。
阪崎肠杆菌检验
9
百度文库
简介
2005年以来，广州、中山、汕头检验检疫部 门在食品工业用进口奶粉中已多次检出阪 崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌检验
简介
阪崎肠杆菌( Enterobacter sakazakii ) 分类在肠杆菌科， 肠杆菌属， G-b，无芽胞，有周身鞭毛，兼性厌氧， 棒状或球杆状，长 0.6~6.0μm，宽 0.3~1.0 μm。
生长特性：经过适宜的条件培养后在营养琼脂或血 平板上形成圆形，光滑，突起，直径 2~3 mm，黄 色菌落，黄色素在 25 ℃ 时更为明显。