蟾蜍血涂片
实验三 蛙血涂片制作和蛙的解剖
外鼻孔 枕骨大孔 鼓膜
2.躯干部
• 无明显颈部 • 鼓膜之后为躯干部，短而宽，背腹扁平 • 末端两腿之间偏背侧有一小孔为泄殖孔
3.四肢
• 5趾型附肢 • 前肢短小，从近体起依次为上臂、前臂、腕、掌和指（4 指，蹼不发达），生殖季节雄蛙第1指基部内侧有一膨大 突起，称为婚瘤，在抱对时用以抱握雌蛙。 • 后肢长而发达，从近体侧起依次为股、胫、腓跗、跖、趾 （5趾，蹼发达）
• 固定和镜检，滴3-4滴70%酒精，10min后镜下观察
推片方法
蛙血细胞
（二）蛙外形及标本观察
1.头部 三角形，扁平，吻端稍尖 • 口 宽大，横裂型 • 外鼻孔 1对，位于上颌前端背面 • 眼 眼圆、大而突出于头的两侧，有上、下眼睑和 瞬膜。眼睑的存在为陆生动物的特征。 • 鼓膜 1对圆形鼓膜，位于眼后方，暗褐色 • 声囊 雄蛙口角两侧、浅褐色凹陷皮膜，鸣叫时鼓 起泡状
二、实验原理
• 将一小滴蛙血滴在载玻片上推开成单层的血膜 • 蛙是两栖类脊椎动物,属由水生到陆生的过度类型 • 蛙作为实验动物广泛应用于生理、药理、发育和 临床等科研中，青蛙的皮肤松弛，表面光滑富含 粘液，可辅助呼吸。而成体蛙呼吸器官肺的结构 简单，呼吸功能差。蛙的血液循环系统比较原始， 心脏有二房一室组成，是不完全的双循环。蛙的 跳跃运动能力来自后肢粗大的骨骼和发达的肌肉。
4.皮肤
• 皮肤较薄，湿润有黏滑感觉，背面粗糙色深，腹面光滑色 浅
5.标本观察
• 了解蛙的骨骼系统，各骨骼的位置和名称
（三）内部解剖结构观察
1.呼吸系统 • 鼻腔和口咽腔 呼吸通道 • 喉气管 粗短 • 肺 左右两侧，粉红色
蛙的骨骼系统
青蛙腹面
2.消化系统
• 口咽腔
实验八 甲基绿一派洛宁法
实验八核酸细胞化学——甲基绿一派洛宁法(methyl green—pyronin method)【目的要求】(1) 学会制作血涂片。
(2) 熟悉甲基绿一派洛宁法显示核酸的原理及操作步骤。
(3) 观察DNA、RNA在细胞中的分布。
【实验原理】甲基绿、派洛宁为两种碱性染料，与带负电荷的磷酸根形成盐键。
甲基绿分子有两个正电荷，易与双链DNA分子结合，使DNA显示绿色，派洛宁分子有一个正电荷，易与单链RNA结合使RNA显示红色。
也有人认为染色原理与核酸分子的空间构型有关(图5—5)。
【实验用品】(1) 器材：注射器、载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜。
(2) 试剂：①0.2mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：A．冰醋酸1.2ml加蒸馏水至100ml。
B．醋酸钠(NaAc·3H20)2.72g溶于100ml。
使用时，A液与B液按2：3比例混合。
②甲基绿一派洛宁染色：A．2 g甲基绿加0.2mol／L醋酸缓冲液至100ml；B．1.0g派洛宁Y加醋酸缓冲液至100ml；临用时：甲液与乙液5：2混合即成。
甲基绿中常混有甲基紫，如不除去，会影响染色效果。
纯化甲基绿的方法是：先把甲基绿倒入分液漏斗，加入氯仿，用力摇匀，静置，弃去溶有甲基紫的氯仿，再换入新氯仿。
如此，反复几次，直到氯仿无甲基紫的颜色为止，干燥之后备用。
此法为显示DNA、RNA的经典方法，配制染色试剂时要注意比例适当。
(3) 材料：蟾蜍血涂片。
【方法与步骤】(1) 蟾蜍血涂片，干燥后入70％乙醇溶液固定10min，取出晾干。
(2) 滴染色液于血膜上，染15min。
(3) 蒸馏水冲洗。
(4) 95％乙醇溶液分色，晾干，封片。
【观察结果】蟾蜍红细胞的核因含DNA显绿色，细胞质及核仁因含RNA显示红色。
【作业】绘蟾蜍红细胞图示DNA、RNA的分布。
碱性蛋白与酸性蛋白的显示
1取一滴血滴于玻片的一端 2以另一玻片以30-45度的角度匀速向前推片，中间不 要停顿，不可反复涂片，动作要快以防止血液凝固。 3自然干燥后固定。
方法与步骤
1.新鲜血涂片自然干燥10min，入70%乙醇溶液中 固定10min。 2.取 出 晾 干 入7 0 － 9 0 ℃ 5 ％ 三 氯 醋酸 溶 液1 5 － 20min。 3.在冷5％三氯醋酸溶液漂洗后，蒸馏水洗3次 （每次5min）。 4.分别插入染色液中染色（酸性蛋白染色液染色 15min，碱性蛋白染色液染色45min） 5.取出，蒸馏水洗。 6.风干，二甲苯透明2min，树胶封片。
观察结果
酸性蛋白染色时，蟾蜍红细胞质内 遍布绿色，细胞核内绿色稀少。 碱性蛋白染色时，蟾蜍红细胞核为 绿色。
酸性蛋白与碱性蛋白的分布 有何区别？
显示细胞核内酸性蛋白 显示细胞内酸性蛋白
显 示 细 胞 核 内 碱 性 蛋 白
蟾蜍取血
常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组 织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体 和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头 部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及 一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直 l 2mm 插入此凹陷约l～2mm，随即将针尖转向头侧 插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转 向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其 四肢松软，呼吸消失为止。 以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡 盘中，剪开胸腔，打开心包。小心将心脏剪一 小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推 片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。
碱性蛋白与酸性蛋白 的显示
目的要求
1.学会制血涂片 2.了解碱性蛋白与酸性蛋白的显示方法的 原理及操作步骤 3.了解碱性蛋白与酸性蛋白的分布
细胞生物学实验(本科生)实验内容
细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。
实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。
细胞生物学实验报告——甲基绿-派洛宁染色
山东大学细胞生物学实验报告蟾蜍红细胞甲基绿—派洛宁染色姜政2012/10/9实验目的：学习用甲基绿—派洛宁染色观察验证蟾蜍红细胞中DNA和RNA的分布，掌握血涂片制作，了解甲基绿—派洛宁染色的基本原理和应用以及细胞化学的基本概念。
实验原理：核酸（脱氧核糖核酸，DNA；核糖核酸，RNA）的结构单体核苷酸由核糖、碱基和磷酸基团构成。
由于嘌呤碱基和嘧啶碱基环上都有含孤对电子的N，胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤都含有-NH2，因此，在水溶液中，核苷酸碱基（图1）上这些含有孤对电子的N既可以接受质子（-NH2+H+→-NH3+，N：+H+→N+:H），也可以释放质子（-NH3+→-NH2+H+，N+:H- H+→N：+H+）。
通常，核苷酸中的磷酸基团存在两步解离，且碱基N上H+的解离常数在磷酸基团一级解离（-PO3H2→-PO3-H+H+）常数和二级解离（-PO3-H→-PO32-+H+）常数之间，所以，当磷酸基团一级解离与碱基N上H+的解离恰好使核苷酸静电荷为零时，核苷酸就达到了等电点。
因此，在水溶液中，核酸分子可以被看作是两性电解质，由于DNA与RNA的组成不同，两者等电点不同，在同一份溶液中的电性就略有不同。
图1. 五种核苷酸碱基的结构和孤对电子示意图（左，引自Stacey D. Wetmore等，2000）和甲基绿、派洛宁的分子结构（右）。
甲基绿（Methyl Green）和派洛宁（Pyronin）都是具有芳香体系且能够发生电离的染料分子（图1），在水中发生电离后都成为带正电的分子。
因此，甲基绿和派洛宁都是碱性染料，专染酸性核酸分子。
电离后的甲基绿分子带两个正电荷，派洛宁分子带一个正电荷。
这种电荷上的差异使两种染料分子具有不同的染色性质。
加之两种染料分子具有完全不同的颜色（甲基绿是亮绿色，派洛宁是红色），两种染料配合使用的染色剂（Unna试剂）很早就成为区分细胞中DNA与RNA分布的常用试剂[1]。
甲基绿-派洛宁对核酸着色的机理可以分解为两步，第一步是电荷相互作用下染料分子向特定核酸分子的靠近，第二步是疏水相互作用下染料分子与核酸分子的结合[2,3]。
蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应
蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应侯艳香;任来峰【摘要】目的熟悉并掌握孚尔根反应的原理及实验操作方法,观察DNA细胞的形态和结构.方法取蟾蜍血细胞涂片,60℃ 1NHCL水解后,用Schiff试剂染细胞核,亮绿复染细胞质.结果显微镜下观察到细胞核被染成紫红色,细胞质为绿色.结论 DNA 细胞的核质红绿染色鲜明且清晰美观,让学生对生物学研究有了初步的认识.【期刊名称】《延安大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2015(013)004【总页数】2页(P9-10)【关键词】DNA;蟾蜍血细胞涂片;孚尔根反应【作者】侯艳香;任来峰【作者单位】山西医科大学汾阳学院检验系,山西汾阳032200;山西医科大学汾阳学院检验系,山西汾阳032200【正文语种】中文【中图分类】R394-33;Q954.6DNA(脱氧核糖核酸)是生物遗传的物质基础，主要存在于细胞核中。
DNA的分子结构中带有醛基-CHO，在60℃1NHCL水解作用下，糖苷键断裂，在脱氧核糖的C1位置形成游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的复合物，这是DNA特有的显色反应，为孚尔根反应(Feulgen)[1]。
蟾蜍的红细胞较大，具有细胞核，是一种显示细胞核内DNA的较理想材料。
亮绿复染后细胞质呈绿色，核质红绿对比染色，便于学生认识、区分、观察和研究生物细胞。
[2]1.1 材料活蟾蜍、麻醉缸、剪刀、玻片、水浴箱、解剖盘、镊子、酒精灯、乙醚、1NHCL、Schiff试剂、1%亮绿染液、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。
1.2.1 取材用乙醚将蟾蜍麻醉后置于解剖盘中，腹面向上，用镊子夹起腹面后部中央的皮肤，用剪刀剪一丁字口，自后向前将皮肤剪开。
用同样的方法，将肌肉从后往前剪至剑胸骨处，用手分开左右肩带部分，露出心脏，再用剪刀将心包膜剪开，在心室部分剪一裂口，用玻片的一边蘸取少量血液，进行涂片。
1.2.2 涂片将蘸血的玻片以30°～45°角置于另一玻片边缘上，轻轻向前推进，制成薄而均匀的舌状血膜，将血涂片在酒精灯上微烘干燥。
蟾蜍血涂片
实验二细胞的形态结构和化学组成院系：基础医学院课程名称：医学生物学实验授课时间：2007年10月27日实验目的：一、 熟悉光镜下细胞的一般形态结构。
二、 初步学会从电镜照片和录相片上观察细胞的亚显微结构。
三、 了解细胞化学反应的基本原理。
四、 掌握DNA、RNA在细胞内分布的显示方法。
实验用品：一、 材料：兔肾切片、平滑肌制片、神经细胞制片、猫脊髓横切片、兔脊神经节切片、蟾蜍二、试剂：70%乙醇、0.1%酸性固绿染液（PH2.0-2.5）、0.1%碱性固绿染液（PH8.0-8.5）、甲基绿-派咯宁混合染液实验内容与方法：.一、动物细胞的各种形态结构（一）、上皮细胞：上皮组织分布于各种器官的内表面或外侧。
上皮组织中的细胞叫上皮细胞。
今日看的肾切片，因为肾脏是管状组织，所以其是上皮细胞。
HE染色（苏木素-伊红染色）：细胞质，嗜酸性，染成红色，细胞核，嗜碱性，染成蓝色。
肉眼：呈一锥体形的红蓝色组织切片，锥体底染色较深，尖端染色较浅。
低倍镜：观察尖端染色较深的部分，有许多形状不一、大小不等的小管切面，肾小管是弯曲的，切面中的视野有横、纵、斜等，管壁有许多单层上皮细胞组成，细胞间界限清楚，细胞的形状有的呈柱状，有的立方形，有的扁平。
高倍镜：可见细胞质被染成极浅的红色，圆形的细胞核被染成蓝色。
（二）、平滑肌细胞：取平滑肌细胞制片，低倍镜下可见许多长梭形的细胞，注意在高倍镜下观察的呈柱状的细胞核位于细胞中间。
（三）、神经细胞：神经细胞是高等动物神经系统的结构单位和功能单位，镜下呈星形，每个神经细胞体都具有长短不一、数目不等的细胞质突起，因为切法不一样，可能又有不完整的，一半一半的。
细胞中央有一个圆形的核，核内有着色深的核仁。
二、光镜下的细胞器（一）、线粒体（蟾蜍肾切片）线粒体是细胞中能量储存和供应的中心，视野中有许多圆形或椭圆形的肾小管断面，中央为管腔，管壁细胞彼此界限不甚分明，但可依据核的位置大致确定细胞的范围。
细胞生物学实验本科生实验内容
细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。
实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。
细胞生物学实验教材-『新乡医学院』资料精
⑷记下两重合线间目尺和台尺的格数，按下式计算出目尺每格等于多少μm:
台尺的格数
目尺每格的长（μm）=─────×10μm
目尺的格数
例如上图中台尺 68 格等于目尺的 50 格，将此代入上式可得出：
68
的刻度尺，长 5～10mm，分成 50-100 格（见图 2-10）。每格的实际长度因不同的物镜的放大
倍数和不同镜筒长度而有所不同。因此，用前必须用台尺进行标定后，才有圆形的测微尺，它的长度为 1 或 2mm，分成 100 或 200
格，每格实际长度是 0.01mm（10μm），（见图 2-11）。
实验一 细胞的形态结构与显微测量
【实验目的】 1.掌握人体及动物等真核细胞的基本形态结构。 2.掌握临时玻片标本的制备方法。 3.进一步掌握光学显微镜的使用方法。 4.掌握显微测量的基本方法。
【实验原理】 细胞是生物体的结构和功能的基本单位。构成人体或其他高等生物体的细胞种类繁多、 形态各异，而且这些细胞的形态与其功能往往相适应，如具有收缩功能的肌细胞呈条形或长 梭形；运输O2和CO2的红细胞(RBC)为双凹圆盘状，便于在血管中流动；具有感受刺激、传导 冲动功能的神经细胞一般附有长短不一的树枝状突起；精子细胞具有一根长长的鞭毛，故很 善于运动；巨噬细胞（macrophage）呈不规则形状，能伸出伪足，吞噬和消灭外源的病原微 生物。 细胞的体积差别很大，一般来讲，真核细胞的体积要大于原核细胞，高等动物的卵细胞 大于体细胞（卵细胞含有较多的营养物质──卵黄）。对于大多数人体及动物的细胞来说， 其体积一般在 20～30μm 之间，必须借助于光学显微镜才能被观察到。由于细胞体积微小， 而且含有较大比例的水，故大多是无色透明的，如果不经染色处理，在显微镜下难以看清细 胞的结构。因此，要观察某种细胞时，通常先进行染色处理。在普通光镜下，一般可见人体 及动物细胞的基本结构分为细胞膜、细胞质和细胞核等 3 个部分。 细胞中分布有多种具有一定结构与功能的细胞器，它们有的体积较大，如线粒体和高尔 基复合体，可通过不同的染色方法将其在光镜下分别显示出来，这些在光镜下常可见的结构 通常称为细胞的显微结构。 【器材与试剂】 1.器具：显微镜、载玻片、盖玻片、蜡盘、牙签、纱布、药棉、吸水纸、擦镜纸、剪刀、 小尖摄、解剖针、玻璃缸、显微测微尺。 2.材料：小白鼠、青蛙、蟾蜍、人口腔上皮细胞、洋葱、鸡血液、人血液、小鼠精子、 兔或猪脊髓、蛙肾小管切片、猫卵巢切片、猫小肠切片、兔或大鼠肝脏切片。 3.试剂：1％碘液、1％甲苯胺蓝、瑞特染液，Ringer 液，显微镜油，乙醚酒精，二甲 苯。 4.试剂的配制： ⑴1％碘液：称取 1g 碘片和 2g 碘化钾溶于 100ml 的 80％乙醇或蒸馏水中即可。 ⑵1％甲苯胺蓝：称取 1g 甲苯胺蓝染料加蒸馏水 100ml溶解即可。 ⑶瑞特染液：称取 0.1g 瑞特染料（Wright's stain）粉放入研钵中研细，从 60ml 甲醇中取少许加入研钵中反复研磨，最后加入全部甲醇混匀，装入棕色瓶中保存备用。 【内容与方法】 一、细胞标本的制备及细胞基本形态结构的观察 所有需观察的细胞都应放置到无色透明的载玻片上制备成临时或永久玻片标本后才适 于在光镜下观察，在很多情况下，在细胞或组织上还需加盖一张薄而小的玻片──盖玻片， 以起到保护标本的作用。 制备玻片标本所用载玻片和盖坡片要进行清洁，其步骤如下：载玻片先用洗衣粉水刷洗， 清水冲洗后，经洗液浸泡 24 小时以上，再用流水充分冲洗，最后烤干备用。对于临时制片 所用的载玻片和盖玻片若要求不高也可用揩擦的办法来清洁，即取一张载玻片，用左手拇指 和食指夹持载玻片的两端，右手的拇指和食指夹着一块清洁而柔软的布或卫生纸巾，把载玻
(完整版)医学细胞生物学实验1
酸性蛋白的显示结果
（左图×100，右图×400）
碱性蛋白的显示结果
(左图×100，×400）
作业
实验一 光学显微镜的使用与细胞化学成分的分析
• 实验内容
• 一、显微镜的结构及使用方法
• 1、光学显微镜的主要构造
• 机械部分
• 照明部分
• 光学部分
• 2、光学显微镜的使用方法
• 对光 置片 低倍 高倍
• 低倍镜使用
•
高倍镜使用
• 3、使用光学显微镜的注意事项
复原
二、细胞化学成分的分析
1 、酸性蛋白和碱性蛋白的显示 •制作蟾蜍血涂片三张，编号。 •1#、2#血涂片→凉干→70%乙醇中固定5 分钟→冲洗→90℃的5%三氯醋酸处理15 分钟→冲净 → 1#→0.1%酸性固绿染色3分钟
2#→0.1%碱性固绿染色30分钟 →冲洗→吸干→观察
2、DNA和RNA的显示
3#血涂片→凉干→70%乙醇中固定5-10 分钟→冲洗→甲基绿一哌罗宁混合染液 染色20分钟→冲洗→吸干→观察 四、作业 （1）绘制蟾蜍红C所显示的酸性蛋白或 碱性蛋白的分布图 （2）绘制蟾蜍红C所显示的DNA和RNA 分布图
生物形态学实验
植物学部分：1、用梨核观察石细胞制片过程应注意些什么？答：首先在梨核中用镊子取一粒砂子大小的石细胞团放在载玻片上，用镊子柄把它碾成粉末，一定要细，把它分散成单个的石细胞，然后加一滴水，盖上盖玻片，放显微镜下观察，先低倍，后高倍观察，能看到单个石细胞，次生壁非常厚，细胞腔很小，为死细胞，次生壁上还能看到分枝纹孔。
2、用黄瓜观察你能看到几心皮几室？为什么胎座？什么果实类型？答：用黄瓜作一横切，在横切上能看出为三心皮一室的子房，胚珠长在心皮的腹缝线上，胎座为侧膜胎座，果实类型为瓠果。
3、讲讲蚕豆种子的结构。
答：蚕豆种子最外是它的种皮，上有种脐、种孔、种脊等结构。
剥去种皮里面为蚕豆的胚，无胚乳结构，其胚包括胚芽、胚根、胚轴和二片肥厚的子叶，养分都贮藏在子叶中。
4、用白菜叶柄观察输导组织，制片过程中要注意什么？能观察到哪些东西？答：在制片时，先把白菜叶柄横切成断的一段，然后通过有维管束的地方纵切，再纵切出一薄片，必须带有维管束，制成临时装片，在显微镜下观察，能看到：环纹导管、螺纹导管、梯纹导管、筛管等输导组织。
5、用青菜叶下表皮观察初生保护组织，制片过程中要注意什么？能看到些什么结构？答：在撕取青菜叶下表皮时，要找青菜叶的背面无叶脉的部位，撕取的下表皮既不要太大，也不要太小，在放入载玻片的水中时一定要展平，不能有折又能叠。
盖上盖玻片时不能有气泡，否则影响观察。
显微镜下能看到，表皮细胞、保卫细胞、气孔。
表皮细胞内无叶绿体，保卫细胞内有叶绿体，表皮细胞壁互相嵌合得很紧密，无细胞间隙。
保卫细胞的壁加厚不均匀，二个保卫细胞靠气的一面特别加厚，其余壁为薄壁。
6、你能用一个公式表示百合花的结构吗？并说明它所包含的意义。
答：*P3+3A3+3G(3:3∞)此公式表示：百合花为整齐花，二性，花被同被，二轮，分离，外轮三片，内轮三片。
雄蕊二轮，每轮三个，分离。
雌蕊为合生雌蕊，三心皮合生形成三室，每室胚珠多数，子房上位。
动物学部分：1、此次实验观察的动物组织有哪几大类？每类请举1-2例上皮：扁平、柱状、立方结缔：血液、软骨、疏松、致密、骨等肌肉：横纹肌、心肌、平滑肌神经：牛脊髓2、写出鳌虾解剖的步骤（1）分离，（2）剪去头胸甲，（3）去腹部背甲3、解剖鲫鱼时，看到心脏的白色圆球状结构是什么？其胰腺分布有何特点？鱼类解剖时，看到心脏的白色圆球状结构是动脉球。
蟾蜍血细胞实验报告
一、实验目的1. 了解蟾蜍血液的组成和血细胞的类型。
2. 观察并分析蟾蜍血细胞的形态和功能。
3. 掌握显微镜观察血细胞的方法。
二、实验原理蟾蜍血液中含有多种血细胞，包括红细胞、白细胞和血小板。
红细胞主要负责运输氧气和二氧化碳；白细胞具有吞噬和消灭病原体的作用；血小板则参与血液凝固过程。
通过显微镜观察蟾蜍血液涂片，可以了解蟾蜍血细胞的形态和功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜蟾蜍血液、生理盐水、盖玻片、载玻片、吸管、显微镜等。
2. 仪器：显微镜、离心机、显微镜载物台、滴管等。
四、实验步骤1. 处理蟾蜍：取一只健康的蟾蜍，用酒精消毒其四肢，用剪刀剪开蟾蜍的后肢，挤出少量血液。
2. 制备血涂片：将血液滴在载玻片上，用另一张载玻片边缘刮取血液，制成均匀的血涂片。
3. 干燥与固定：将血涂片在空气中自然干燥，然后用95%酒精固定10分钟。
4. 染色：用瑞氏染液染色5分钟，然后用蒸馏水冲洗。
5. 水洗与干燥：用蒸馏水冲洗染色的血涂片，然后用吸水纸吸干。
6. 观察与记录：在显微镜下观察血涂片，记录红细胞、白细胞和血小板的形态和数量。
五、实验结果与分析1. 红细胞：蟾蜍红细胞呈圆形，直径约为7-8微米，边缘较薄，中央较厚，含有大量的血红蛋白，负责运输氧气和二氧化碳。
2. 白细胞：蟾蜍白细胞主要有两种类型，一种为大型多核白细胞，直径约为15-20微米，呈圆形或椭圆形，核较大，染色较深；另一种为小型单核白细胞，直径约为5-10微米，呈圆形或椭圆形，核较小，染色较浅。
白细胞具有吞噬和消灭病原体的作用。
3. 血小板：蟾蜍血小板呈不规则形状，大小不一，直径约为2-5微米，无细胞核，参与血液凝固过程。
六、实验讨论1. 通过本次实验，我们成功观察到了蟾蜍血细胞的形态和功能，了解了蟾蜍血液的组成。
2. 在实验过程中，需要注意血涂片的制备、干燥、固定和染色等步骤，以确保实验结果的准确性。
3. 实验过程中，我们发现蟾蜍白细胞数量较多，说明蟾蜍的免疫系统较为发达，能够有效抵御病原体的侵袭。
蟾蜍心血涂片实验报告
一、实验目的1. 观察蟾蜍心脏的结构和功能。
2. 了解血液的组成和分布。
3. 学习使用显微镜观察细胞和组织的技巧。
二、实验原理蟾蜍的心脏由四个腔室组成，分别是左心房、左心室、右心房和右心室。
心脏的跳动通过心瓣膜的开启和关闭，使血液在心脏和全身循环中流动。
血液由红细胞、白细胞和血小板组成，通过显微镜观察可以了解血液的组成和分布。
三、实验材料1. 实验动物：蟾蜍一只2. 实验器材：解剖剪、镊子、培养皿、载玻片、盖玻片、显微镜、生理盐水、碘酒、酒精、蒸馏水3. 实验试剂：瑞氏染液四、实验步骤1. 杀死蟾蜍，解剖心脏，取出心脏放入生理盐水中。
2. 用解剖剪沿心脏中线切开，暴露心脏内部结构。
3. 取出左心室，用生理盐水冲洗干净。
4. 将左心室放在载玻片上，用解剖剪剪取一小块心肌组织。
5. 将心肌组织放入生理盐水中，用镊子轻轻搅动，使细胞分散。
6. 取出细胞悬液，滴加瑞氏染液，染色约5分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染液。
8. 将载玻片放在显微镜下观察。
五、实验结果1. 心脏结构：蟾蜍心脏由四个腔室组成，左右心房和左右心室，心房和心室之间有瓣膜连接，保证血液单向流动。
2. 血液组成：显微镜下观察到红细胞呈圆形，无细胞核，白细胞呈球形或椭圆形，有细胞核，血小板呈圆形或不规则形状。
3. 血液分布：血液在心脏内流动，通过心瓣膜的开启和关闭，使血液在心脏和全身循环中流动。
六、实验讨论1. 蟾蜍心脏的结构与哺乳动物心脏相似，但蟾蜍心脏没有动脉瓣，血液在心脏内流动时可能存在返流现象。
2. 红细胞是血液中主要的细胞成分，负责运输氧气和二氧化碳。
白细胞具有防御功能，可以吞噬病原体。
血小板具有凝血功能，可以防止出血。
3. 通过显微镜观察血液的组成和分布，可以了解血液在身体内的作用。
七、实验结论本次实验成功观察了蟾蜍心脏的结构和功能，以及血液的组成和分布。
通过实验，我们了解了心脏在血液循环中的作用，以及血液的组成和功能。
常用动物和细胞实验讲义
绪言一、实验课目的本学科是一门实验性很强的学科，其实验课教学是整个教学的重要组成部分。
目的有如下几方面：（一）验证理论。
通过对理论课所学理论的验证，进一步加深对教学内容的理解、巩固和提高。
（二）通过基本技能的训练以及对实验结果的观察分析，使学生了解并掌握细胞生物学有关的实验技术方法，进而培养学生动手实践、观察分析和解决问题的能力。
（三）培养学生实事求是的科学态度和科学的思维方法，为其后续课的实验及今后的医学研究打下基础。
二、实验课要求（一）学生在实验前应认真预习实验指导及教材中与实验有关的章节，对实验课的原理、内容及方法有初步的了解。
（二）在实验中要认真操作、仔细观察、分析并及时做好记录。
（三）要注重动手能力的培养。
（四）在实验中要注重基本技能的训练及实验仪器、器械的使用方法。
对基本的实验技能要反复训练直至基本掌握。
（五）实验结束后，要根据实验过程中的记录和实验指导的要求，实事求是、认真的写好实验报告，不得抄书或借阅他人的报告参考。
三、实验室规则（一）遵守实验纪律，不迟到、不早退或无故缺席。
（二）进入实验室要穿好白大衣。
（三）进实验室后要按学号对号入座，不能随意更换座位。
要保持肃静。
（四）要严肃认真地进行实验。
实验期间不得进行任何与实验无关的活动。
（五）实验中各种用品使用后应放回原处。
示教标本应按顺序观察，不能任意移动标本，以免妨碍他人观察。
（六）要爱护仪器、标本和器械，如有损坏，应及时报告老师，以便修理或更换。
损坏仪器、器械和标本者应按规定进行赔偿。
（七）要注意节约实验材料、药品和水、电等资源。
（八）保持实验室内清洁整齐。
实验废物及纸屑应放到指定地点，不得随意乱丢。
实验结束后要认真清理各自的实验台面，将器械清洗后点清数目并摆放整齐。
值日生负责清扫实验室，清扫结束后要关好水、电、门窗等，经教师允许方可离开实验室。
附：实验课绘图要求学生每人准备一支HB铅笔、直尺和橡皮。
四、实验教学的内容实验顺序实验内容实验一普通光学显微镜的结构和使用实验二动物细胞的基本形态观察和显微测量实验三细胞组分的化学反应实验四线粒体的活体染色实验五液泡系的活体染色实验六细胞膜通透性的观察实验七细胞计数实验八细胞超微结构电镜照片的识别实验九细胞分裂实验十细胞的原代和传代培养实验十一细胞融合第一次实验：普通光学显微镜的结构和使用动物细胞的基本形态观察和显微测量第二次实验：细胞组分的化学反应线粒体的活体染色液泡系的活体染色第三次实验：细胞膜通透性的观察细胞计数第四次实验：细胞超微结构电镜照片的识别细胞分裂细胞的原代和传代培养录像常用实验动物的了解和解剖器械的使用一、常用实验动物常用的实验动物有蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、猫、兔和狗等。
动物细胞的基本形态观察和显微测量【实验目的】制备不同细胞的临时...
动物细胞的基本形态观察和显微测量【实验目的】制备不同细胞的临时制片，观察、了解细胞的基本形态，学会使用测微尺，通过测量对红细胞的进化进行分析。
【实验用品】一、材料和标本蟾蜍一只，人血液一滴。
二、器材和仪器配有目镜测微尺的显微镜一台、载片十张、盖片三张、吸水纸、手术器材一套、解剖盘一个、镜台测微尺一个、小平皿一个、牙签。
三、试剂 1％甲苯胺兰、1％甲基兰、Ringer氏液(两栖类用)。
【实验内容】一、细胞的基本形态观察(一)原理细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。
例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。
不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜、细胞质和细胞核。
但也有例外。
例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。
(二)观察方法与结果1．制备蟾蜍脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞。
取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，剪开椎管，可见乳白色脊髓，取下脊髓放在平皿内，用Ringer氏液洗去血液后放在载片上，剪碎。
将另一载片压在脊髓碎块上，用力挤压。
将上面的载片取下即可得到压片。
在压片上滴一滴甲苯胺兰染液，染色10分钟，盖上盖片，吸去多余染液。
在显微镜下观察，染色较深的小细胞是神经胶质细胞。
染成兰紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁(参照照片)。
2．蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察剪开蟾蜍腿部皮肤，剪下一小块肌肉，放在载片上，用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌束，继续剥离，可得到很细的肌纤维(肌细胞)。
尽可能拉直肌纤维。
在显微镜下观察，肌细胞为细长形，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边(参照照片)。
3．蟾蜍肝脏压片的制备与观察剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约2～3mm 3)肝放在平皿内，用Ringer氏液洗净，用镊子轻压将肝中的血挤出。
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实验二细胞的形态结构和化学组成
院系：基础医学院
课程名称：医学生物学实验
授课时间：2007年10月27日
实验目的：
一、 熟悉光镜下细胞的一般形态结构。
二、 初步学会从电镜照片和录相片上观察细胞的亚显微结构。
三、 了解细胞化学反应的基本原理。
四、 掌握DNA、RNA在细胞内分布的显示方法。
实验用品：
一、 材料：兔肾切片、平滑肌制片、神经细胞制片、猫脊髓横切片、兔脊神经节切片、蟾蜍
二、试剂：70%乙醇、0.1%酸性固绿染液（PH2.0-2.5）、0.1%碱性固绿染液（PH8.0-8.5）、甲基绿-派咯宁混
合染液
实验内容与方法：
.一、动物细胞的各种形态结构
（一）、上皮细胞：
上皮组织分布于各种器官的内表面或外侧。
上皮组织中的细胞叫上皮细胞。
今日看的肾切片，因为肾脏是管状组织，所以其是上皮细胞。
HE染色（苏木素-伊红染色）：细胞质，嗜酸性，染成红色，细胞核，嗜碱性，染成蓝色。
肉眼：呈一锥体形的红蓝色组织切片，锥体底染色较深，尖端染色较浅。
低倍镜：观察尖端染色较深的部分，有许多形状不一、大小不等的小管切面，肾小管是弯曲的，切面中的视野有横、纵、斜等，管壁有许多单层上皮细胞组成，细胞间界限清楚，细胞的形状有的呈柱状，有的立方形，有的扁平。
高倍镜：可见细胞质被染成极浅的红色，圆形的细胞核被染成蓝色。
（二）、平滑肌细胞：取平滑肌细胞制片，低倍镜下可见许多长梭形的细胞，注意在高倍镜下观察的呈柱状的细胞核位于细胞中间。
（三）、神经细胞：神经细胞是高等动物神经系统的结构单位和功能单位，镜下呈星形，每个神经细胞体都具有长短不一、数目不等的细胞质突起，因为切法不一样，可能又有不完整的，一半一半的。
细胞中央有一个圆形的核，核内有着色深的核仁。
二、光镜下的细胞器
（一）、线粒体（蟾蜍肾切片）
线粒体是细胞中能量储存和供应的中心，视野中有许多圆形或椭圆形的肾小管断面，中央为管腔，管壁细胞彼此界限不甚分明，但可依据核的位置大致确定细胞的范围。
核圆形，浅灰色，内有一深染的核仁。
核周围的细胞质中有许多蓝黑色呈颗粒状或短线状的结构即线粒体。
（二）、尼氏小体（密集的核蛋白体和粗面内质网）-------猫脊髓横切片
肉眼：蝴蝶形染色深的部位
低倍镜下：可见脊髓灰质中的运动神经原，其胞体有突起，胞体中央有一圆形的核，内有一深染的核仁。
高倍镜下：核周围的细胞质中有许多大小不等、形态不定的嗜碱性物质即尼氏小体（虎斑）。
（苏木素染色使嗜碱性物质染成蓝色）
作用：传递神经递质。
（三）、高尔基体（内网器）------兔脊神经节切片
低倍镜下：圆形且大的淡黄色的感觉神经细胞
高倍镜下：细胞中央圆形呈空泡状核的周围，有些卷曲的断断续续的呈深棕色网状结构。
功能：是将细胞中合成的物质进行加工、浓缩、包装，然后向一定方向运输。
高尔基体与细胞的分泌机能有关，与多糖的合成有关，
三、细胞的超微结构
电子显微镜有很高的分辨力，是现代细胞形态学研究中较为先进的仪器之一。
通过细胞超微结构录象片，认识以下结构：
（一）、细胞膜
电镜下呈三层结构，中间一层电子密度低（照片上较亮），两侧电子密度较高（照片上较暗）。
为单位膜。
（二）、粗面内质网
由膜构成的长形小管或囊泡，其末端膨大称为池，膜的胞质面上附有核蛋白体，照片上狭长的电子密度较低
的亮处为内质网腔，膜的临腔面上无核蛋白体附着。
（三）、滑面内质网
以多分支的小管为主，表面无核蛋白体附着。
（四）、高尔基体
5-10个弓形扁囊紧叠，在扁囊附近附有小泡群，以及扁囊末端膨大而形成的大泡。
（五）、线粒体
双层膜构成的封闭结构，外膜平滑，内膜向内折叠成嵴，嵴间充满基质。
嵴膜上有基本微粒，是偶联磷酸化
的关键位置。
（六）、溶酶体
单层膜包围的卵圆形小体，内部可以喊有衰老的细胞残骸。
从形态上不易区分初级溶酶体和次级溶酶体。
（七）、核膜和核孔
核膜为双层结构，外层附有大量核蛋白体，内层光滑。
核膜上有核孔，即照片上不连续的部分，是细胞质与
细胞核之间进行物质交换的通道。
（八）、过氧化氢体（微体）
单层膜包围的卵圆形小体，内有似晶体状结构的类核体。
（九）、中心粒
一对中心粒常互相垂直。
每一中心粒呈圆筒状，其壁由九组大小相等、且平行于圆筒长轴的三联微管以风车
旋叶角度排列成圆。
筒的一端开口，另一端闭合，筒内充满低密度的基质。
（十）、微管、微丝
微管主要含微管蛋白，为中空结构，有的微管是纤毛、鞭毛和中心粒的基本结构。
微丝为实心细丝。
四、 细胞内DNA 和RNA 的显示与定位
（一）、原理
利用化学试剂与细胞中的某些物质结合，产生有色沉淀，来确定细胞中某些化学成分的分布，是细胞化学实验的基本原理。
由于DNA 和RNA 两种核酸的聚合程度不同（DNA 分子比RNA 分子聚合程度高），在用两种特异性染料甲基绿 --哌罗宁染液混合时，两者发生竞争，DNA 位于核内，因为是脱氧核苷酸，高聚分子，与甲基绿结合被染成绿色；RNA 位于细胞质中，低聚分子，与哌罗宁结合被染成红色，据此反应特点，就能立即使细胞中的两种核酸从形态方面区别开来。
（二）、操作步骤 1、取材和涂片：（一人两张片，一张推，一张涂，切记标记正反面，因为一会要放在染色缸内染色）
处死蟾蜍：在枕骨可以摸到一个空，用针穿入前后连贯，上下破坏（上破坏延髓，下破坏脊髓），这个时候，蟾蜍已经不能动，但是心脏还可以跳动，剪开胸腔，打开心包，小心将心脏剪一小口。
涂片：取心脏血滴一滴在干净载玻片一端，用另一载玻片的一端边缘紧贴在血滴处，待血液沿其边缘展开后，以45度角均匀地向另一端推片，使血液在玻片上成为较薄的血膜，切记不要来回推，因为这样会破坏细胞的完整性，推成单层是最好的，利于观察。
室温下晾干。
血涂片的制备
2、固定：
在一端标号，浸入70%乙醇中固定5-10分钟，室温下晾干。
3、染色：
甲基绿-哌罗宁混合染液染色15-20分钟，清水冲洗，吸水纸吸去片上多余的水分。
4、镜检结果
空气干燥后，高倍镜下仔细观察蟾蜍红细胞的核质和细胞质各被染上什么颜色？如能见到核仁应被染成什么颜色？你对这种染色差异能说明点什么？DNA（核质）呈蓝色或绿色，RNA（细胞质）呈淡红色。
核仁主要是由RNA-蛋白质和DNA-蛋白质组成，主要功能是rRNA的转录和核糖体亚单位的装配，故呈红色。
复习思考题：
1、 细胞形态的多样性与什么有关？
2、 什么叫细胞器？你看到的细胞器主要有哪几种？其超微结构怎样？与功能有何关系？
3、 在我们所观察的几种细胞器标本为什么只能见到其中的一部分在细胞质中？为什么所见到的形态结构和电
镜照片不同？
4、 如果用同样方法对哺乳动物或人的成熟红细胞进行核酸的显示和定位将会出现什么样的结果？为什么？
作业：
画图注意线条平滑，不要有阴影，用点表示。
1、 绘制兔肾的柱状、立方细胞图。
2、 绘制线粒体、尼氏小体和高尔基体在细胞内的分布图。
绘图标明蟾蜍红细胞内DNA和RNA显示的部位。