茶叶中主要成分含量、蛋白质、金属元素的测定

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蛋白质的测定
1） 凯氏定氮法 2） SDS－PAGE 电泳分析法
十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳法
3） 色谱法
试剂及主要仪器
1)浓硫酸(A.R)
3) 硫酸铜(A.R) 2) 硫酸钾(A.R) 4) 3.0% NaOH溶液
5) 2% 硼酸溶液
6) 0.05mol/L的标准HCl溶液 7) 0.1% 混合指示剂: 0.1% 甲基红酒精溶 液和0.1%甲基蓝酒精溶液按1：1混合
准确称取 3.0000g均匀地磨碎茶样于500mL 锥形 准确称取均匀磨碎的茶样3.0000g于500mL 锥形瓶中,加沸 瓶中,加沸蒸镏水 450mL,立即移入沸水浴中，浸提 蒸镏水 450mL,立即移入沸水浴中，浸提完毕立即趁热减压 完毕立即趁热减压过滤。滤液移入500mL容量瓶中， 过滤。滤液移入500mL容量瓶中，残渣用少量热蒸镏水洗涤 残渣用少量热蒸镏水洗涤 2～3次，并将滤液拼入 2～3次，并将滤液倒入上述容量瓶中，用水稀释至刻度。 上述容量瓶中，用水稀释至刻度。
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称取磨碎茶叶试样0.3g(准确至0.0001g) 于 100mL容量瓶中,加蒸馏水40mL,用密封带密 封瓶口,橡皮筋系紧,置于微波炉内,于中档功 率微波加热5min,端出转盘,取下密封带,过滤 至50mL容量瓶中,定容。准确吸取上述试液 1.00mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒 石酸亚铁溶液5mL,充分混合再加pH=7.5的缓 冲液至刻度,用10mm比色杯,在波长540nm处, 以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)
6) 锥形瓶 5) 移液管 7) 碱性乙酸铅溶液: 称取50g碱性乙酸铅, 加水100mL, 静置过夜； 8) 0.01N HCl溶液: 取比重 1.19的浓HCl 0.83 ｍL, 稀释至１升。
9) 咖啡碱标液: 准确称取100mg咖啡碱（纯度不低于 99％）溶于100mL水中，作为母液。准确吸取5.00 mL加水至100mL作为工作液。（每毫升含0.05mg）
生物碱
2％～5％
以咖啡碱的含量最多
提神；利尿；促进血液循环； 降胆固醇；防止动脉粥样硬 化等
降血脂；消炎抑菌；防辐射； 抗癌、抗突变等
茶多酚 糖类 类脂类
20％～35％ 20％～25％ 8％
儿茶素、黄酮类、花青 素和酚酸等四大类物质 淀粉、纤维素、半纤维 素、木质素 脂肪、磷脂、甘油脂、 糖酯和硫酯 维生素A、维生素D、维 生素C、维生素B族
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茶多酚的测定
1) 高锰酸钾容量法
2) 微波加热法 3) 分光光度法 4) 原子吸收法
试剂及主要仪器
1) 微波炉 2) 724型分光光度计
3) 酒石酸亚铁溶液: 称取1000g硫酸亚 铁和5000g酒石酸钾钠,用水溶解并 定容至1L, pH=7.5
mol／L的 4) 磷酸盐缓冲液: 取 1 磷酸二氢钾溶液850ml和 15 mol／L 磷酸二氢钾溶液150ml混合均匀
调节人细胞的渗透压 保护视力；增加抵抗力；抗 坏血病，抗氧化、抗衰老等 防止味觉异样；防止皮肤过 敏；抗氧化；增强免疫力； 预防蛀牙等
维生素
0．6％～1％
矿质元素
3．5％～7．0％
Ca、K、P、Mg、Mn、F、 Cu、Zn、I、Se等
蛋白质的测定
茶多酚的测定
茶叶中主要成分含量的测定
咖啡碱的测定 金属元素的测定
粗蛋白百分含量=
(V1-V2) C 0.014 6.25 100% 10 W 100
式中: V1 — V2 — C — 0.014— 样品消耗盐酸标准液的毫升数; 试剂空白消耗盐酸标准液的毫升数; 盐酸标准液的浓度; 1mol／L HCl标准液1mL相当于氮 的克数; 6.25 — 氮换算成蛋白质的因数。
8) 微量凯氏定氮仪
处理 处理 样品 样品
准确称取样品2g,小心移入烧瓶中,再 CuSO4 1g, K2SO4 10 g和浓H2SO4 50mL。 用电炉加热消化至液体变成蓝绿透明后,冷 却,定容至100 mL。
测 测 定 定
先用蒸汽洗涤微量凯氏定氮装置后,精确移取 消化液10.00 mL,量取NaOH 25mL,加至反应 室中,蒸气蒸馏直至硼酸溶液由葡萄紫色变成 绿色,最后再用0.05 mol／L HCl溶液滴定至淡 葡萄紫色。
结束语
本文所述的对 分含量的测定 但只要我们能 情况选取合适 用提供参考依据。 茶叶中主要成 各有优缺点。 够根据具体 的方法，都会
为研究茶叶作为药用及保健品的进一步开发利
参考文献
1. 贾林艳，宋伟新，庄志萍，周 靖，宿艳华 《高效液相色谱法测定茶叶中水溶性维生素的含量》 《中国农林 副产品》 2003年5月 2. 张国文 刘永华 杨振华 朱志怀 《赣南信丰茶叶中蛋白质、茶多酚、咖啡碱的测定》 《南昌大学学报》(工科版) 1996年12月 3. 杨 明 索 南 《微波加热快速测定茶叶中的茶多酚》 《青海大学学报》(自然科学版) 1998年 第4期
引言
茶叶的神奇功效：利尿排毒；除脂解 腻，促进消化；消除疲劳；增强记忆 力；消炎抑菌；预防龋齿；抗癌、抗 辐射、抗衰老；防止高血压等
分类
蛋白质 氨基酸
含量（在干重中）
20％～30％ 1％～4％
具体成分
各种蛋白质 茶氨酸、谷氨酸、天门 冬氨酸和异亮氨酸等25 种以上
生理作用
是人体必须的营养成分；降 低血氨，治疗肝昏迷；调整 脂肪代谢
4) 硝酸、盐酸、高氯酸：分析纯。
样品来源及样品的制备
准确称取茶叶5.0ｇ于烧瓶中,加20 mL HNO3,静置消 化12min,次日加入5mL高氯酸,于小火加热至无色透 明近干为止,冷却后转移到25mL容量瓶中,用3%HNO3 定容,摇匀备用。
标准工作曲线绘制
配制各元素标准工作使用液,按仪器工作参数表测定溶 液的吸光度,绘制工作曲线,并计算回归方程和相关系 数。
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金属元素的测定
1) 火焰原子吸收法 2) 离子色谱法 3) 电感耦合等离子体质谱法
试剂与主要仪器
1) WFX－1 F2B2原子吸收分光光度计; 2) Ca ,Mg ,Mn ,Fe ,Zn ,Cu ,Ni ,Co 的标准贮备液：1ｍg/ｍＬ(北京国家标 准物质研究中心);
3) 二氯化锶：5%分析纯;
样品测定
按仪器工作参数表上所列仪器的工作条件,分别测定 样品液中Ca, Mg ,Mn ,Fe ,Zn ,Cu ,Ni 和Co的质量分数, 测定5次,将测得值乘以稀释倍数即为样品中上述七种 离子的质量分数。
讨论
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仪器工作参数表
其中ｂ为光谱通带宽度,ｈ为燃烧器高度。
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4. 林郑和
严兰芳 《紫外分光光度法测定茶叶中的
咖啡碱》 《茶叶科学技术》 2001年 第4期 5. 曾建民 伍炳华 杨亚军 《茶叶可溶性蛋白质的SDS-PAGE电泳分析法》 《中国茶叶》 1998年6月
6. 谢立群 《火焰原子吸收法测定茶叶中的金属元素》 北华大学学报(自然科学版) 2000年12月
用移液管准确吸取试液 10.00mL，移入100mL容量瓶,加入 5mL0.01N 盐酸和1mL碱性乙酸铅溶液，用水稀释至刻度， 充分混匀，静置过滤。准确吸取 25.00mL 滤液注入50mL 容量瓶中，加入3滴6N硫酸溶液，加水稀释至刻度、混匀、 静置过滤。用10mm比色杯，在波长274nm 处，以试剂空白 为溶液参比，测定其吸光度（Ａ）。
茶多酚(%)=
A 1.957 2 L1 100 1000 L2 M m
式中: L1 — 试样的总量(ml); L2 — 测定时的用液量(ml); M — 试样的质量(g); m — 试样干物质含量的百分率(%);
1.957 — 用10mm比色杯,当吸光度等于0.50 时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
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咖啡碱的测定
碘量法 紫外分光 光度法
重量法
为什么？
利用咖啡碱结构上的嘌呤环具有共轭双键 体系，因而具有独特的吸收光谱，在 波长 272～274nm处具有最大吸收值，其消光度 与咖啡碱含量呈线性关系。故可通过消光 度求其含量
试剂及主要仪器
1) 电子分析天平
3) 恒温水浴锅 2) 752分光光度计 4) 吸滤装置