地中海贫血单基因突变遗传病检测的新方法

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地中海贫血单基因突变遗传病检测的新方法二、立论依据

（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处）

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三、研究方案

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四、研究基础

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* 论文：作者·题目·刊名·年份·卷（期）·页码

专著：作者·书名·出版者·年份

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五、经费预算

注: 预算支出科目按下列顺序填写: 1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4. 实验室改装费5. 协作费 6. 项目组织实施费。

（3）DNA甲基转移酶的活性分析用于抑制剂药物筛选DNA甲基化在原核细胞和真核细胞中起着重要作用，因此通过应用DNA甲基转移酶抑制剂，可以特异性抑制异常甲基化的发生，使因DNA甲基化失活的抑癌基因恢复其自身转录功能，逆转肿瘤细胞的生物学活性，以达到预防和治疗肿瘤的目的。选择具有代表性的两种抗癌药物5-氮杂胞苷(5-Aza)和5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作为检测方法中的抑制剂，分别得到其对DNA甲基转移酶的IC50值（酶活性降低50%时抑制剂的浓度）。

（4）研究药物5-氮杂-2-脱氧胞苷对白血病细胞HL-60生物学行为的影响

DNA甲基化是恶性肿瘤的一个重要特征，DNA甲基化与DNA甲基转移酶活性和表达量的变化密切相关，是导致肿瘤细胞DNA甲基化紊乱的关键。研究表明，DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR 可恢复多种基因活性，使许多肿瘤的恶性表型发生逆转。拟通过DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR作用于白血病细胞株HL-60，检测其对细胞增殖、细胞生长周期和细胞凋亡的影响及DNA甲基转移酶活性变化情况，以阐明5-Aza-CdR作用白血病细胞株HL-60的机制，为5-Aza-CdR临床治疗白血病提供理论基础。

(4)研究药物5-氮杂-2-脱氧胞苷对白血病细胞HL-60生物学行为的影响

体外培养白血病细胞株HL-60细胞，使用不同浓度5-Aza-CdR 处理白血病细胞株HL-60细胞。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色实验来检测5-Aza-CdR对白血病细胞株HL-60存活率的影响。应用流式细胞术检测5-Aza-CdR对白血病细胞株HL-60的细胞周期及细胞凋亡的影响。利用智能荧光探针检测5-Aza-CdR处理HL-60细胞前后DNA甲基转移酶活性变化。蛋白质印迹检测相关蛋白表达水平等。