石蜡切片原位杂交免疫组化

病理检验技术

江汉大学医学与生命科学学院

病理学与病理生理学教研室

2004年4月

内容提要

本书介绍组织病理学常用的多种技术。包括常见的技术，即福尔马林固定、石蜡包埋、HE染色技术，同时也介绍了常用的特殊染色技术，免疫组织化学技术，并简明地介绍了分子生物学技术的基本理论以及在组织病理学中的应用。

全书理论与实践并重，经典与改良结合，内容丰富，通俗易懂，实用性强，为实验室工作的必备参考书。适合从事病理学、组织学、生物学、法医学等的科研教学和临床工作的技术人员、教师、医师和研究生使用。同时也适合临床医学检验专业中专、专科生使用以及临床医学专业专升本学生和临床医学专业本科生选用。

第一篇石蜡切片技术

第一章组织标本的处理

第一节取材 (5)

第二节组织的固定 (6)

第三节大体标本的处理和固定 (14)

第四节陈列标本的固定 (15)

第五节脱钙 (16)

第六节组织的冲洗 (18)

第二章石蜡包埋技术

第一节脱水 (19)

第二节透明 (21)

第三节浸蜡 (22)

第四节包埋 (22)

第三章切片技术

第一节切片刀 (25)

第二节切片机 (27)

第三节石蜡切片的制作 (27)

第四节特殊组织石蜡切片的制作 (29)

第五节石蜡切片的异常及处理 (29)

第四章染色与染色剂

第一节染色的基本原理 (31)

第二节染色剂染色的化学基础 (33)

第三节染色剂的分类 (34)

第四节常用染色剂及配制 (35)

第五节苏木素—伊红染色法 (39)

第六节封固剂 (41)

第五章特殊染色技术

第一节结缔组织染色法 (43)

第二节脂类染色法 (47)

第三节糖原及粘液染色法 (48)

第四节色素染色法 (50)

第五节神经组织染色法 (52)

第六节核酸及核蛋白染色法 (52)

第七节肌肉组织染色法 (53)

第八节病原微生物染色法 (54)

第九节特殊染色技术的应用 (57)

第二篇免疫组织化学和亲和免疫组织化学技术

第一章免疫组织化学技术

第一节基本原理 (62)

第二节染色步骤 (67)

第三节常用试剂的配制 (72)

第二章亲和免疫组织化学技术

第一节基本原理 (77)

第二节染色步骤 (80)

第三篇分子生物学技术

第一章核酸原位杂交技术

第一节核酸原位杂交的基本原理 (83)

第二节核酸原位杂交的主要过程 (84)

第三节核酸原位杂交的基本操作步骤 (86)

第四节常用试剂的配制 (87)

第五节核酸原位杂交的应用 (89)

第二章原位PCR技术

第一节基本原理 (91)

第二节基本类型 (91)

第三节基本步骤 (92)

第四节原位PCR技术的应用 (93)

第一篇石蜡切片技术

切片技术的应用到现在已有一百年多的历史了。

最早应用的只是冰冻切片，随着冰冻切片的应用和实践又进一步利用石蜡的硬度，将要检查的组织块浸渍并包埋于这种坚实的介质之中，制成了石蜡切片。后来又利用明胶，火棉胶等物质的韧性来包埋组织，制成了明胶切片和火棉胶切片。

切片技术随着生物学和医学的发展，经过不断地改进而逐渐的完善起来，随着光学仪器和切片机器的日益的精密和不断向前发展。现代切片技术巳成为生物形态学微观结构研究的一个重要方面，更是病理检验技术中不可缺少的一个组成部分。

将各种组织制成非薄的切片标本，需要经过一系列比较繁杂的过程，每一步都要求病理技术工作者要认真，耐心，细致地使整个过程一环扣住一环，才能获得优良结果。

制作切片的主要过程有：（1）取材，（2）固定，（3）脱水，（4）包埋，（5）切片，（6）染色，（7）封固。在这七个主要过程中，又包括着若干步骤，（详见切片制作程序表）。

冰冻切片石蜡切片火棉胶切片︳↓︳

——————————→取材←——————————

↓

固定

↓

冰冻←————————冲水

∣↓

∣脱水———————————

∣↓↓

∣透明乙醚酒精

∣↓↓

∣浸蜡胶液渗透

∣↓↓

∣石蜡包埋火棉胶包埋

↓↓↓

冰冻切片切片切片

↓↓↓

染色染色染色

↓↓↓

封固封固封固

凡欲制作切片的组织，首先必须固定，以防止组织自溶而产生死后变化。组织经过固定之后，再以流水冲洗。如为冰冻切片，即可直接将组织冰冻进行切片。如欲制石蜡切片或火棉胶切片，为了使石蜡或火棉胶渗透到组织中去，以能包埋组织，在固定水洗之后，还须经过脱水，媒剂（透明），石蜡火棉胶的渗透，才能包埋切片。在切片以后，为了便于观察，还要对其进行不同的染色，最后将切片封固，制成长久保存的组织切片标本。

第一章组织标本的处理

第一节取材

取材是制作切片程序中的首要步骤，取材不当，将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要，不能随意的切取组织来制作组织切片，否则病理检验的结果是不会令人满意的。

一、取材工具：取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦，不应使用有钩镊子或血管钳等手术器械镊取标本，以免损害组织造成人为组织变化，给诊断带来困难或导致错诊，漏诊。

二、标本的选取：应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。切取标本的原则是求准而不是求量多，所以切取组织宜小不宜大，以不超过24x24mm2为佳，厚度以3—5mm为度，过大过厚会影响对标本的固定，另方面也影响切片的制作。特殊目的者应属例外。

1、了使组织切片的结构清楚，取材要及时，组织块必须争取时间及时固定。组

织的固定以愈新鲜愈好。

2、取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述。包括形状、大小，

硬度，颜色，病灶（或可疑病变）部位等。对所取的组织应定位编号。

3、切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和科研价值的肉眼标本，

不能因取材而对标本造成人为的“病变”。肠粘膜组织上沾有少量粪便，也

不应以手拭去或以水洗去。

4、下的组织块应尽量防止其弯曲扭转，如胃肠等组织，应先平展于草纸上粘着

以后，慢慢地放入固定液中（故应在动手剖验之前做好准备工作）。固定液的

量要充足，应为固定组织的10倍。

5、组织采取应在正常与病灶交界之处。组织形状最好为方形或长方形状，这样

有利于制片。切不可以形状定位，组织厚薄要均匀。因为组织块的厚度决定

固定的速度，要充分满足它在一定时间内全部达到适宜的固定。如组织厚薄

不均，在脱水时将会引起标本变形或曲，而影响制片。在典型病变部位不妨

多切数块，以备日后添制教学切片或研究的需要。