第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
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沉淀反应与凝集反应yhl
二、间接血凝试验
Patient
1 2 3 4 5 6 7 8
反向间接血凝试验
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
Titer
64 8
512 <2 32 128 32
4
血凝试验强度
三、胶乳凝集试验
孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。 反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不能消耗掉抗HCG抗体。
第一节 凝集反应的特点
一．凝集反应定义
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结 合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集现象。参与凝集反应的抗体有IgM和IgG,IgM的凝集作用比IgG大数百倍。
01
1. 玻片凝集试验 2. 试管凝集试验
（一）玻片凝集试验
01 Y
02 +
方法评价:
定性试验，简便和快 速；敏感度低。
临床应用:
单击此处添加正文，文 字是您思想的提炼，为 了演示发布的良好效果， 请言简意赅地阐述您的 观点。
菌种鉴定；血清学分
型；血型鉴定。
Y
03
04 Y
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—
—
+
+
+
—
二、免疫浊 度测定
一．原理
当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时， 在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复 合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对 浊度进行测定从而检测抗原含量。
凝集反应和沉淀反应课件
第五章 凝集反应和沉淀反应 （P37）
凝集反应 (agglutination reaction)
概念：
细菌、细胞等颗粒性抗原悬液加 入相应抗体，在电解质存在下，两者 特异性结合，出现肉眼可见的凝集现 象。
Ag 凝集原 agglutinogen Ab 凝集素 agglutinin
颗粒性抗原： 凝集反应
原理：将已知抗体吸附于颗粒性载体 上，检测未知抗原
反向间接血凝试验结果判定
3.间接凝集抑制反应
方法：
待测样本（可溶性Ag？）+已知Ab
→ +已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性 Ag） → 观察是否有凝集现象
凝集为阴性，说明标本中无相应Ag; 不凝集为阳性，说明标本中有相应Ag
如： 用胶乳凝集抑制试验检测尿液 中绒毛膜促性腺激素（HCG）
体液免疫测定种类及敏感度
反应名称 抗原 结果 敏感度（m g/ml)
直接凝集 颗粒 凝集
0.5~1.0
间接凝集 抗原 现象
0.001~0.003
环沉
20~30
双扩
可溶 沉淀
3~5
单扩
抗原 现象
12~110
放射扩散
3~10
免疫电泳
50~200
思考题：
1.玻片凝集试验和试管凝集试验的区 别
2.反向间接凝集试验、间接凝集抑制 试验的原理及实例
协同凝集试验
协同凝集试验实际是用已知 抗体检测未知抗原，可用于的 细菌、病毒的直接检测
5 明胶凝集试验（gelatin-gglutination ,GAT)
属正向间接凝集反应 方法：
粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原（称为致敏 Ag颗粒）+待测血清→观察有无凝集现象。 凝集为阳性，说明血清中含相应的病毒Ab; 不凝集为阴性，说明无相应Ab。 用途：常用于抗HIV-1抗体及抗精子抗体的 检测
凝集反应 (agglutination reaction)
概念：
细菌、细胞等颗粒性抗原悬液加 入相应抗体，在电解质存在下，两者 特异性结合，出现肉眼可见的凝集现 象。
Ag 凝集原 agglutinogen Ab 凝集素 agglutinin
颗粒性抗原： 凝集反应
原理：将已知抗体吸附于颗粒性载体 上，检测未知抗原
反向间接血凝试验结果判定
3.间接凝集抑制反应
方法：
待测样本（可溶性Ag？）+已知Ab
→ +已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性 Ag） → 观察是否有凝集现象
凝集为阴性，说明标本中无相应Ag; 不凝集为阳性，说明标本中有相应Ag
如： 用胶乳凝集抑制试验检测尿液 中绒毛膜促性腺激素（HCG）
体液免疫测定种类及敏感度
反应名称 抗原 结果 敏感度（m g/ml)
直接凝集 颗粒 凝集
0.5~1.0
间接凝集 抗原 现象
0.001~0.003
环沉
20~30
双扩
可溶 沉淀
3~5
单扩
抗原 现象
12~110
放射扩散
3~10
免疫电泳
50~200
思考题：
1.玻片凝集试验和试管凝集试验的区 别
2.反向间接凝集试验、间接凝集抑制 试验的原理及实例
协同凝集试验
协同凝集试验实际是用已知 抗体检测未知抗原，可用于的 细菌、病毒的直接检测
5 明胶凝集试验（gelatin-gglutination ,GAT)
属正向间接凝集反应 方法：
粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原（称为致敏 Ag颗粒）+待测血清→观察有无凝集现象。 凝集为阳性，说明血清中含相应的病毒Ab; 不凝集为阴性，说明无相应Ab。 用途：常用于抗HIV-1抗体及抗精子抗体的 检测
凝集反应、沉淀反应
29
钩状效应时分析浓度与检测信号关系图：
抗体过剩带 检 测 信 号
抗原过剩带
抗原分析浓度
30
2、抗体的质量 特异性高，无交叉反应； 效价高，避免低效价抗体引起的非特异性浊度； 亲和力高，免疫复合物形成快，结合牢固； R型抗体，等价带宽，亲和力强。 3、抗原抗体反应的溶液 最适pH6.5-8.5；在一定范围内，离子强 度大，IC形成快。 4、增浊剂 PEG，tween-20。消除抗原抗体周围的电子云和 水化层，促进加速IC的形成。
7
第三节
间接凝集反应
将可溶性抗原或抗体预先吸附或偶联在 与免疫无关的大小合适的颗粒上，与相 应抗体或抗原作用，在适当电解质参与 下，出现特异性凝集现象称为间接凝集 反应。 一、间接凝集反应的类型： 1、正向间接凝集试验：用抗原致敏载体检测 相应抗体； 2、反向间接凝集试验：用抗体致敏载体检测 相应抗原；
18
第四节 自身红细胞凝集试验
反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜 红细胞。主要试剂材料为抗人O型红细胞的 单克隆抗体，这种抗体能与各种血型的红 细胞结合，但不引起凝集反应。这种抗体 与另一特异性抗体连接成的双功能抗体可 用于检测标本中的抗原；如与特异性抗原 连接，则可用于检测标本中的抗体。反应 中的标本为受检者的全血。 检测标本为全血，检测速度快。 灵敏度低，不能用于HIV抗体和HBsAg检测。
22
（二）间接Coombs试验
检测血清中的抗红细胞抗体
23
第六章 沉淀反应
可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的 条件下，两者比例适合，即可有沉淀物出现，叫 沉淀反应。 1898年Kraus首次发现毒素-抗毒素的沉淀现象； 1905年Bechgold 发现沉淀可以在明胶中进行； 1965年Mancini发明单向免疫扩散技术； 上世纪70年代免疫浊度法出现。 上述技术的发明发展，使得沉淀反应向快速、准 确、微量、自动化方向发展，在医学检验中的应用 越来越广泛。
钩状效应时分析浓度与检测信号关系图：
抗体过剩带 检 测 信 号
抗原过剩带
抗原分析浓度
30
2、抗体的质量 特异性高，无交叉反应； 效价高，避免低效价抗体引起的非特异性浊度； 亲和力高，免疫复合物形成快，结合牢固； R型抗体，等价带宽，亲和力强。 3、抗原抗体反应的溶液 最适pH6.5-8.5；在一定范围内，离子强 度大，IC形成快。 4、增浊剂 PEG，tween-20。消除抗原抗体周围的电子云和 水化层，促进加速IC的形成。
7
第三节
间接凝集反应
将可溶性抗原或抗体预先吸附或偶联在 与免疫无关的大小合适的颗粒上，与相 应抗体或抗原作用，在适当电解质参与 下，出现特异性凝集现象称为间接凝集 反应。 一、间接凝集反应的类型： 1、正向间接凝集试验：用抗原致敏载体检测 相应抗体； 2、反向间接凝集试验：用抗体致敏载体检测 相应抗原；
18
第四节 自身红细胞凝集试验
反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜 红细胞。主要试剂材料为抗人O型红细胞的 单克隆抗体，这种抗体能与各种血型的红 细胞结合，但不引起凝集反应。这种抗体 与另一特异性抗体连接成的双功能抗体可 用于检测标本中的抗原；如与特异性抗原 连接，则可用于检测标本中的抗体。反应 中的标本为受检者的全血。 检测标本为全血，检测速度快。 灵敏度低，不能用于HIV抗体和HBsAg检测。
22
（二）间接Coombs试验
检测血清中的抗红细胞抗体
23
第六章 沉淀反应
可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的 条件下，两者比例适合，即可有沉淀物出现，叫 沉淀反应。 1898年Kraus首次发现毒素-抗毒素的沉淀现象； 1905年Bechgold 发现沉淀可以在明胶中进行； 1965年Mancini发明单向免疫扩散技术； 上世纪70年代免疫浊度法出现。 上述技术的发明发展，使得沉淀反应向快速、准 确、微量、自动化方向发展，在医学检验中的应用 越来越广泛。
凝集反应和沉淀反应
21
自身红细胞凝集试验
RBC为未经致敏 的受检者新鲜红 细胞，试剂：抗 人O型红细胞的 单克隆抗体
临床应用： HIV检测 HBV检测
22
四、胶乳凝集试验
致 敏 于 胶 乳 颗 粒
23
24
五、明胶凝集试验
将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明 胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用 时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉 眼可见的粉红色凝集
抗体球蛋白
带负电荷较少，籍 ＋
电渗作用向负极泳
动
43
对流免疫电泳
结果分析： ✓ 无沉淀线出现则表明无相
应的抗原。 ✓ 沉淀线位于抗原抗体孔中
间，说明两者比例较适合 。 ✓ 沉淀线偏向抗原孔一方， 表示抗体浓度＞抗原，反 之，则是抗体浓度＜抗原 浓度。
44
二、火箭免疫电泳
+
Ab
-
单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术 注：只能测定ug/ml以上的含量
反应特点：
IgM 的作用比IgG大数百倍 IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗 体
5
可见反应形成
6
第二节 直接凝集反应和间接凝集反应
一、直接凝集反应(direct agglutination)： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用
下，出现肉眼可见的凝集现象
常用的凝集试验有玻片法和试管法
25
第三节 抗球蛋白参与的血凝试验
抗球蛋白试验是 抗球蛋白参与的 间接血凝试验， 又称Coombs试验
直接Coombs试验 间接Coombs试验
26
（一）直接Coombs试验
抗球蛋白抗体
全血操作
检测红细胞上不完全抗体
应用：检测新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自
自身红细胞凝集试验
RBC为未经致敏 的受检者新鲜红 细胞，试剂：抗 人O型红细胞的 单克隆抗体
临床应用： HIV检测 HBV检测
22
四、胶乳凝集试验
致 敏 于 胶 乳 颗 粒
23
24
五、明胶凝集试验
将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明 胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用 时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉 眼可见的粉红色凝集
抗体球蛋白
带负电荷较少，籍 ＋
电渗作用向负极泳
动
43
对流免疫电泳
结果分析： ✓ 无沉淀线出现则表明无相
应的抗原。 ✓ 沉淀线位于抗原抗体孔中
间，说明两者比例较适合 。 ✓ 沉淀线偏向抗原孔一方， 表示抗体浓度＞抗原，反 之，则是抗体浓度＜抗原 浓度。
44
二、火箭免疫电泳
+
Ab
-
单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术 注：只能测定ug/ml以上的含量
反应特点：
IgM 的作用比IgG大数百倍 IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗 体
5
可见反应形成
6
第二节 直接凝集反应和间接凝集反应
一、直接凝集反应(direct agglutination)： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用
下，出现肉眼可见的凝集现象
常用的凝集试验有玻片法和试管法
25
第三节 抗球蛋白参与的血凝试验
抗球蛋白试验是 抗球蛋白参与的 间接血凝试验， 又称Coombs试验
直接Coombs试验 间接Coombs试验
26
（一）直接Coombs试验
抗球蛋白抗体
全血操作
检测红细胞上不完全抗体
应用：检测新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自
凝集反应与沉淀反应
凝集效价的判断：与相应菌液发生++凝集反应的血清最高稀释浓度为该被 检血清的凝集效价
双向琼脂扩散实验
1.材料
琼脂液，待测血清（未提供），肝癌患者AFP阳性血清（阳 性对照），生理盐水（阴性对照），AFP诊断血清（含AFP抗 体），载玻片，打孔器，毛细滴管
2.实验原理
AFP诊断血清中含有AFP的特异性抗体，肝癌患者阳性血清中含有AFP抗原作 为阳性对照，当待测血清中含有AFP抗原时，就会和AFP诊断血清中的AFP特异 性抗体发生抗原抗体反应，产生免疫沉淀线，反之则无免疫沉淀线，通过观察免 疫沉淀线的有无并和阳性对照对比，就可以判断待测血清中AFP的阳性或阴性。
Ag Ag + 生理 盐水 Ab Ag：肝癌病人AFP阳性血清 Ab：AFP诊断血清
实验结果 Ag与Ab间应出现乳白色免疫沉淀线 Ag与生理盐水间无乳白色免疫沉淀线出现
3. 实验方法
（1） 将配好的1%琼脂放到电炉子上融化，室温自然冷却 到 约60摄氏度。 （2）用玻璃吸管吸取琼脂液加入到载玻片上，使其铺满玻 片，等待其自然凝固。 （3）玻片下垫上打孔纸，用打孔器在凝固的琼脂板上打四 个相邻的孔。每两个相邻的孔不要太远，便于抗原抗体相遇。
对流免疫电泳
（4） 抗原孔内分别加入待测血清和AFP阳性血清，抗体孔 内加入AFP诊断血清和生理盐水阴性对照。 （5）将加好样的琼脂板置于电泳槽支架上，抗原孔置于负 极端，抗体孔置于正极端，琼脂板两端用纱布搭桥，使琼脂 板两端电流连通。设置电压60v，电泳40min开始电泳，电泳 结束观察结果。
Ab
Ab：AFP诊断血清
（4） 中心孔内加甲胎蛋白诊断血清，四周孔内分别加入待 测血清和肝癌患者阳性血清及生理盐水阴性对照。 （5）将琼脂版放入湿盒，置37摄氏度孵箱，24h后观察结果。
实验二凝集、沉淀反应
凝集反应的分类
按照颗粒表面电荷的性质，凝集反应可以分为正凝集反应和 负凝集反应。正凝集反应是指颗粒表面带有正电荷，相互吸 引形成凝集物；负凝集反应则是指颗粒表面带有负电荷，相 互排斥形成凝集物。
按照颗粒间的相互作用方式，凝集反应可以分为均相凝集和 多相凝集。均相凝集是指同一种物质的不同晶型或同分异构 体之间的凝集；多相凝集则是指不同物质颗粒之间的凝集。
反应条件的影响
实验中，温度、pH值、反应时间等因素也会对凝集、沉淀反应产生影响。例如，在某些条件下，某些物质可能 更容易发生凝集或沉淀。
结果讨论
实验误差分析
对实验结果进行误差分析，探讨可能存在的误差来源，如测量误差、操作误差等，并提出相应的改进 措施。
实验结论总结
根据实验结果和分析，总结实验结论，阐述凝集、沉淀反应的原理和影响因素，并指出实验中需要注 意的事项。
实验二凝集、沉淀反应
目录
• 实验简介 • 凝集反应 • 沉淀反应 • 实验结果分析 • 实验总结与展望
01 实验简介
实验目的
掌握凝集、沉淀反应 的原理。
了解凝集、沉淀反应 在医学和生物学中的 应用。
学习如何观察和记录 凝集、沉淀反应的现 象。
实验原理
凝集反应
凝集反应是指颗粒物在悬浮状态下由于特定因素的作用聚集 在一起的现象。在实验中，通过向含有颗粒物的溶液中加入 特定物质，使颗粒物聚集在一起，形成可见的凝集物。
凝集反应的应用
在生物医学领域，凝集反应常被用于检测和分离细菌、病毒、细胞等生物颗粒。 例如，利用抗原抗体反应的特异性，可以检测和分离特定的生物颗粒，用于诊断 疾病和科学研究。
在化学和工业领域，凝集反应可以用于分离和纯化不同物质颗粒，如矿物、催化 剂等。通过控制凝集反应的条件，可以获得高纯度的产品，提高生产效率和产品 质量。
沉淀反应与凝集反应
(2) Fehcy曲线：适用于分子抗原，扩散时间 较短，使用半对数坐标纸作图，抗原量的
对数和扩散圈直径之间呈线性关系。
免疫学及免疫学检验
双免疫扩散试验
（ double immunodiffusion）
双向免疫扩散试验是在琼脂板上按一定距离打 数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗 体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在 两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原 或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材 料的抗原相关性分析。
免疫学及免疫学检验
2. 操作步骤
1) 用稀释液将待测抗原和抗原标准品稀释。 2) 将抗体致敏胶乳溶液和待测抗原、不同浓度的
抗原标准品反应一段时间，测吸光度值。 3) 以抗原标准品量为横坐标，吸光度值为纵坐标
绘制标准曲线，查出待测抗原量。
免疫学及免疫学检验
3. 方法评价
敏感度高，试剂稳定，因反应液中 无PEC沉淀剂的影响，个体IC对结果影 响也小，所以结果稳定、可靠，特异性 好；不需特殊仪器设备，一般分光光度 计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均 可使用。
免疫学及免疫学检验
沉淀反应
（precipitation reaction)
毛旭虎
医学检验系临床微生物学及免疫学教研室 二OO二年三月
免疫学及免疫学检验
可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
免疫学及免疫学检验
1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀
1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于 其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行
(3) 方法评价：
敏感度达mg/L水平，可自动化，但 反应时间较长
免疫学及免疫学检验
对数和扩散圈直径之间呈线性关系。
免疫学及免疫学检验
双免疫扩散试验
（ double immunodiffusion）
双向免疫扩散试验是在琼脂板上按一定距离打 数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗 体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在 两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原 或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材 料的抗原相关性分析。
免疫学及免疫学检验
2. 操作步骤
1) 用稀释液将待测抗原和抗原标准品稀释。 2) 将抗体致敏胶乳溶液和待测抗原、不同浓度的
抗原标准品反应一段时间，测吸光度值。 3) 以抗原标准品量为横坐标，吸光度值为纵坐标
绘制标准曲线，查出待测抗原量。
免疫学及免疫学检验
3. 方法评价
敏感度高，试剂稳定，因反应液中 无PEC沉淀剂的影响，个体IC对结果影 响也小，所以结果稳定、可靠，特异性 好；不需特殊仪器设备，一般分光光度 计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均 可使用。
免疫学及免疫学检验
沉淀反应
（precipitation reaction)
毛旭虎
医学检验系临床微生物学及免疫学教研室 二OO二年三月
免疫学及免疫学检验
可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
免疫学及免疫学检验
1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀
1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于 其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行
(3) 方法评价：
敏感度达mg/L水平，可自动化，但 反应时间较长
免疫学及免疫学检验
凝集反应和沉淀反应 PPT
以பைடு நூலகம்盐缓冲液为反应介质的抗原抗体特异 性结合的沉淀试验。
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
实验二 凝集、沉淀反应
2021/10/10
7
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
操作步骤
➢ 取洁净玻片1张，用蜡笔划分2等份，如下图所示 ； ➢ 无菌操作，用接种环分别于一、二格内各加2～3环伤
寒杆菌诊断血清、生理盐水； ➢ 用接种环取待测菌液，分别涂布于生理盐水和伤寒血
清中，混匀； ➢ 轻轻摇动玻片，1~2分钟后观Βιβλιοθήκη 结果。实验二 凝集、沉淀反应
2021/10/10
1
实验目的
1.熟悉凝集反应、沉淀反应的概念。 2.了解单向琼脂扩散实验的原理、方法及应用。 3.掌握直接凝集反应玻片法的原理、方法及其
用途。 4.掌握双向琼脂扩散实验的原理、方法、结果
判断。
2021/10/10
2
实验原理
1.直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体结合后所呈 现的肉眼可见的凝集现象。 。
本试验方法简单，容易观察结果，可测定抗原的灵敏度 约为10～20μg／ml.
应用:
人血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。
2021/10/10
12
单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
2021/10/10
抗原浓度
13
（二）双向琼脂扩散试验 （操作）
2021/10/10
9
二、沉淀反应:
➢ 经典抗原抗体反应的一种。
➢
+
可溶性抗原
➢ 分类:
✓ 琼脂扩散 ✓ 环状沉淀反应 ✓ 絮状沉淀反应 ✓ 免疫电泳
2021/10/10
相应抗体
沉淀线或沉淀环
【病原生物与免疫学】实验总结
免疫部分1、沉淀反应的定义：是指可溶性抗原（多糖、蛋白质、类脂等）与相应抗体结合，在适量电解质存在的情况下，形成肉眼可见的沉淀物2、凝集反应的定义：是指颗粒性抗原（细菌、红细胞、立克次体、螺旋体、致敏微球等）在体外一定条件下（有电解质存在，PH、温度恰当）与相应抗体相遇，两者发生特异性反应，出现肉眼可见的凝集物3、直接凝集反应的定义：是指颗粒性抗原（细菌、螺旋体和红细胞等）在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现的凝集现象。
凝集反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素4、间接凝集反应的定义（原理）：当抗原是可溶性小分子时，与特异性抗体结合往往不出现肉眼可见反应。
如果将可溶性抗原吸附到一类与免疫特异性无关的载体微球（如经处理的细菌、红细胞、胶乳颗粒等），形成人工免疫微球（或致敏微球），此时与相应抗体结合，则可出现免疫微球的凝集现象，称为间接凝集反应5、效价的概念：以出现“++”反应凝集的血清的最终稀释倍数称为血清的效价6、效价的意义：血清的效价代表着血液中抗体的含量，其效价越高，说明其所含抗体越多7、对流免疫的电场力和电渗力的关系在PH为8.6的琼脂凝胶中，抗体带有微弱的负电荷，受电渗力作用的影响较大；抗原带有较强的负电荷，受电场力作用的影响较大抗原置于阴极，抗体置于阳极，二者由于受到电场力和电渗力不同程度的影响，会相对泳动电渗力方向：由阳极指向阴极；电场力方向：由阴极指向阳极抗体：电渗力>电场力，向阴极泳动抗原：电场力>电渗力，向阳极泳动一段时间后抗原抗体相遇，8、抗原抗体结合特点、影响因素（1）结合特点1）特异性：抗原决定基与抗体的抗原结合部位之间的结构互补2）可逆性：抗原与抗体结合形成复合物后，在一定条件下，又可以解离为游离的抗原与抗体3）可见性：抗原、抗体的数量比例恰当时，反应体系中无游离的抗原或抗体，在适宜的盐浓度下，有明显的肉眼可见的反应物4）阶段性：抗原抗体反应可分为两个阶段。
《凝集反应》课件
特性
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
THANKS
感谢您的观看
在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
THANKS
感谢您的观看
在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
沉淀反应与凝集反应PPT57页
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
谢谢你的阅读
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。—字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
谢谢你的阅读
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。—字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
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第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
二、间接血凝试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
Patient
1 2 3 4 5 6 7 8
反向间接血凝试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
Titer
第二阶段：
形成肉眼可见的大的免疫复合物。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
3.沉淀反应的类型
①液体内沉 淀试验
•免疫 浊度测
定 •絮状 沉淀试
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
1.正向间接凝集试验
用抗原致敏载体--检测抗体
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
2.反向间接凝集试验
用抗体致敏载体----检测抗原
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
3.间接凝集抑制试验
用抗原致敏载体--检测抗原
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
4.协同凝集试验
协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体 既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种 金黄色葡萄球菌。它的菌体细胞壁中含有A蛋白SPA具有与 IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连 接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即 出现反向间接凝集反应。协同凝集反应也适用于细菌的直接 检测。
二）抗体的检测
检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第四节 自身红细胞凝集试验
未经致敏的受检者新鲜红细胞 试剂：抗人O型红细胞的单克隆抗体 临床应用：HIV检测、HBV检测
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
自身红细胞凝集试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第五节 抗球蛋白试验
64 8
512 <2 32 128 32
4
血凝试验强度
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
三、胶乳凝集试验
将待检血清或抗原和致敏乳胶各滴一滴在玻片上，阳 性者5～10min即出现凝集。如妊娠免疫诊：
• 孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。
• 反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不能消耗掉抗HCG抗
（一） 玻片凝集试验 （二） 试管凝集试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
（一）玻片凝集试验
+
•方法评价:
定性试验，简便和快速；敏感度低。
•临床应用:
菌种鉴定；血清学分型；血型鉴定。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
（二）试管凝集试验
在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的 作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第三节 间接凝集反应
间接凝集反应(indirect agglutination):
将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面， 然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用 下，出现肉眼可见的凝集现象。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
一、间接凝集反应的类型
1.正向间接凝集试验 2.反向间接凝集试验 3.间接凝集抑制试验 4.协同凝集试验ຫໍສະໝຸດ （二）间接Coombs试验
检测血清中的抗红细胞抗体
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
临床应用：
•在输血上的应用； •血型抗原抗体的检查； •对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断； •对溶血性贫血的研究； •对细菌或立克次体的不完全抗体检查。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第二部分 沉 淀 反 应
第一节 沉淀反应的特点 第二节 液体内沉淀试验 第三节 凝胶内沉淀试验 第四节 免疫电泳技术
抗原抗体的特异性结合 出现肉眼可见的凝集现象
三、特点
该方法简便、敏感度高，应用广泛。
四、类型
按抗原的性质和反应方式的不同分为： 直接凝集和间接凝集
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第二节 直接凝集反应
直接凝集反应(direct agglutination)：
颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用 下，出现肉眼可见的凝集现象。
抗球蛋白试验 又称
Coombs试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
（一）直接Coombs试验
检测红细胞上抗体或不完全抗体
单价抗体只能与一方抗原的抗原决定簇结合，不产生凝集 反应，当加入抗球蛋白抗体后，可以将两个各连接一方抗原 决定簇的单价抗体连接起来，出现凝集现象。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
•方法评价：
半定量试验；简便、快速；敏感度低；可有假阳性。
•应用：
测定相应抗体的效价；可作临床诊断或流行病学调查。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
试管凝集试验
根据凝集程度记录为：＋＋＋＋（100％凝集）、＋＋＋ （75％凝集）、＋＋（50％凝集）、＋（25％凝集）。以 出现50％凝集以上的血清最大稀释度为该血清的凝集效价。
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原， 或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒 后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在 适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。参与 凝集反应的抗体有IgM和IgG,IgM的凝集作用比IgG 大数百倍。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
二、反应阶段
体。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
四、明胶凝集试验
将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明 胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时， 若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见 的粉红色凝集。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
五、间接凝集反应的应用
一）抗原的检测
反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原， 也可用于检测各种蛋白质成分。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第一节 沉淀反应原理及特点
1.沉淀反应（precipitation）:
是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发 生特异性结合而出现的沉淀现象,其特性与经典的 抗原抗体反应相同。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
2.沉淀反应分两个阶段
第一阶段：
抗原抗体特异性结合，快速但不可见。
第十章 沉淀反应与凝集反应
第一部分 凝集反应 第二部分 沉淀反应
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第一部分 凝集反应
第一节 凝集反应的特点 第二节 直接凝集反应 第三节 间接凝集反应 第四节 自身红细胞凝集试验 第五节 抗球蛋白试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第一节 凝集反应的特点
一、凝集反应定义
二、间接血凝试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
Patient
1 2 3 4 5 6 7 8
反向间接血凝试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
Titer
第二阶段：
形成肉眼可见的大的免疫复合物。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
3.沉淀反应的类型
①液体内沉 淀试验
•免疫 浊度测
定 •絮状 沉淀试
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
1.正向间接凝集试验
用抗原致敏载体--检测抗体
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
2.反向间接凝集试验
用抗体致敏载体----检测抗原
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
3.间接凝集抑制试验
用抗原致敏载体--检测抗原
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
4.协同凝集试验
协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体 既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种 金黄色葡萄球菌。它的菌体细胞壁中含有A蛋白SPA具有与 IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连 接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即 出现反向间接凝集反应。协同凝集反应也适用于细菌的直接 检测。
二）抗体的检测
检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第四节 自身红细胞凝集试验
未经致敏的受检者新鲜红细胞 试剂：抗人O型红细胞的单克隆抗体 临床应用：HIV检测、HBV检测
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
自身红细胞凝集试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第五节 抗球蛋白试验
64 8
512 <2 32 128 32
4
血凝试验强度
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
三、胶乳凝集试验
将待检血清或抗原和致敏乳胶各滴一滴在玻片上，阳 性者5～10min即出现凝集。如妊娠免疫诊：
• 孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。
• 反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不能消耗掉抗HCG抗
（一） 玻片凝集试验 （二） 试管凝集试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
（一）玻片凝集试验
+
•方法评价:
定性试验，简便和快速；敏感度低。
•临床应用:
菌种鉴定；血清学分型；血型鉴定。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
（二）试管凝集试验
在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的 作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第三节 间接凝集反应
间接凝集反应(indirect agglutination):
将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面， 然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用 下，出现肉眼可见的凝集现象。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
一、间接凝集反应的类型
1.正向间接凝集试验 2.反向间接凝集试验 3.间接凝集抑制试验 4.协同凝集试验ຫໍສະໝຸດ （二）间接Coombs试验
检测血清中的抗红细胞抗体
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
临床应用：
•在输血上的应用； •血型抗原抗体的检查； •对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断； •对溶血性贫血的研究； •对细菌或立克次体的不完全抗体检查。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第二部分 沉 淀 反 应
第一节 沉淀反应的特点 第二节 液体内沉淀试验 第三节 凝胶内沉淀试验 第四节 免疫电泳技术
抗原抗体的特异性结合 出现肉眼可见的凝集现象
三、特点
该方法简便、敏感度高，应用广泛。
四、类型
按抗原的性质和反应方式的不同分为： 直接凝集和间接凝集
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第二节 直接凝集反应
直接凝集反应(direct agglutination)：
颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用 下，出现肉眼可见的凝集现象。
抗球蛋白试验 又称
Coombs试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
（一）直接Coombs试验
检测红细胞上抗体或不完全抗体
单价抗体只能与一方抗原的抗原决定簇结合，不产生凝集 反应，当加入抗球蛋白抗体后，可以将两个各连接一方抗原 决定簇的单价抗体连接起来，出现凝集现象。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
•方法评价：
半定量试验；简便、快速；敏感度低；可有假阳性。
•应用：
测定相应抗体的效价；可作临床诊断或流行病学调查。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
试管凝集试验
根据凝集程度记录为：＋＋＋＋（100％凝集）、＋＋＋ （75％凝集）、＋＋（50％凝集）、＋（25％凝集）。以 出现50％凝集以上的血清最大稀释度为该血清的凝集效价。
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原， 或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒 后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在 适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。参与 凝集反应的抗体有IgM和IgG,IgM的凝集作用比IgG 大数百倍。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
二、反应阶段
体。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
四、明胶凝集试验
将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明 胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时， 若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见 的粉红色凝集。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
五、间接凝集反应的应用
一）抗原的检测
反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原， 也可用于检测各种蛋白质成分。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第一节 沉淀反应原理及特点
1.沉淀反应（precipitation）:
是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发 生特异性结合而出现的沉淀现象,其特性与经典的 抗原抗体反应相同。
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
2.沉淀反应分两个阶段
第一阶段：
抗原抗体特异性结合，快速但不可见。
第十章 沉淀反应与凝集反应
第一部分 凝集反应 第二部分 沉淀反应
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第一部分 凝集反应
第一节 凝集反应的特点 第二节 直接凝集反应 第三节 间接凝集反应 第四节 自身红细胞凝集试验 第五节 抗球蛋白试验
第十章沉淀反应与凝集反应-yhl
第一节 凝集反应的特点
一、凝集反应定义