实验5 细菌的生化反应实验

明胶发酵培养基等。
试 等 其他材料：试管架、酒精灯、接种环等 剂：大肠杆菌IMViC鉴定管、金黄色葡萄球菌生化鉴定管、 甲基红指示剂、40%KOH、5%α -萘酚、乙醚、吲哚试剂
三、实验步骤
（一）糖发酵试验
1. 用记号笔在各试管上标明发酵培养基名称和所接种的细菌 2. 取葡萄糖发酵培养基管3支，分别接种大肠杆菌、未知菌， 第三支不接种，作为对照。另取3支乳糖发酵培养基，作 同样的操作。
实验五
细菌的生化反应实验
Fra Baidu bibliotek、实验目的

掌握细菌鉴定中常用生化实验的原理和方法 了解细菌生化试验在细菌鉴定及诊断中的重要 意义
二、实验原理
不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类 和蛋白质的分解能力不同，最终形成的分解
代谢产物不同。
通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。
吲哚试验Indol

细菌分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可
糖、甘露糖、木糖醇、麦芽糖、蕈糖、甘露醇、乙酰葡胺、硝酸盐、 蜜二糖、果糖、葡磷胨水、山梨醇），将实验结果记入表格


中。 接种方法：将鉴定管上端用砂轮划痕折断，后用接种 环取纯菌接种，置于灭菌平皿或小试管架上。 培养：35℃培养12-24h，观察记录结果。
葡萄球菌属TH编码鉴定结果记录表
实 4 2 1 4 2 1 4 验 尿 蔗 精 木 乳 甘 木 项 素 糖 水 糖 糖 糖 醇 目 结 果 2 1 4 麦 蕈 甘 芽 糖 醇 糖 2 1 乙 硝 酰 还 葡 胺 4 2 1 1 蜜 果 V 山 二 糖 P 醇 糖
3. 37℃ ，24-48h。
4. 观察颜色变化及有无气体产生。
5. 结果： 将结果填入下表，“ ”表示产酸或产气；“+”表 示产酸不产气,“-”表示不产酸不产气。
糖类发酵 葡萄糖发酵 乳糖发酵 大肠杆菌 未知菌 对 照
OF :Oxidize and ferment
氧化发酵实验
（二）IMViC试验(吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸盐）
（4）柠檬酸盐试验：培养48h后观察柠檬酸盐
斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色
为阳性，绿色为阴性。
菌 名
吲哚试验
IMViC试验
甲基红试验 伏-普试验 柠檬酸试验
大肠杆菌 未知菌 对 照
（三）金黄色葡萄球菌的生化鉴定

以16种生化鉴定管检测金黄色葡萄球菌对各种物质的 利用情况，每组一套（尿素、蔗糖、精氨酸水溶液、木糖、乳
养物之间产生红色环状物为阳性反应。
（2）甲基红试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水
培养物内加甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变
黄色者为阴性。 （3）伏-普试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培 养物内加入5-10滴40%KOH，然后加入等量的5% α-萘酚， 用力振荡，再放入37℃温箱中保温5-10分，以加快反应速 度。若培养物呈红色者为V-P试验阳性。
与试剂中的对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲
哚而呈红色

反应结束加试剂0.5ml 两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性
甲基红实验（M.R实验）
微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸——
pH下降——加入指示剂甲基红——红色
V.P实验原理
三、实验材料
菌 种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、未知菌斜面 培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基试管、 蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、
1. 接种和培养 用接种针将大肠杆菌与未知菌分别接种于2支蛋白 胨水培养基（吲哚试验），2支葡萄糖蛋白胨水培养基 （甲基红试验和伏-普试验），2支柠檬酸盐斜面培养基，
置37℃ 培养2d。
2. 结果观察
（1）吲哚试验：于培养24h后的蛋白胨水培养基内 加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1-3分，待乙醚上 升后沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培
总 值