高效液相色谱柱后衍生(pickering)测定氨基甲酸酯类农药
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高效液相色谱柱后衍生技术应用在农药残留氨基甲酸盐杀虫剂
(Carbamate Pesticide)方面的分析分析
1． 氨基甲酸盐杀虫剂分析柱
Pickering Labs 氨基甲酸盐分析柱利用EPA 和AOAC 的指定方法，保证了氨基甲酸盐残余物的良好分离。对于C18柱，两种水/甲醇梯度模式可以用来分别对甲醇中和水中的样品进行分析。扩展的分析法采用C8柱结合水/甲醇或水/氰甲烷梯度洗脱可以将23种氨基甲酸盐进行分离。甲醇与氰甲烷之间选择性的不同可以分别被用来对各自的出峰进行鉴定。
杀虫剂分析的柱后条件：
衍生试剂1：加水分解衍生试剂CB130
衍生试剂2：100mg of OPA, 2g Thiofluor ? in 950 mL of CB910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度，0.1mL 衍生试剂流速：0.3mL/min 检测：
荧光检测器：λex 330nm, λem 465nm
氨基甲酸盐柱1846250 （4.6×250mm ）
, C18, 5um
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1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ）
2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ）
3. 杀线威（Oxamyl ）
4. 灭多威（Methomyl ）
5. 3-Hydroxycarbofuran
6. 涕灭威（Aldicarb ）
7. 残杀威（Propoxur ）
8. 克百威（Carbofuran ）
9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准) 氨基甲酸盐柱1846150 （4.6×150mm ）
, C18, 5um
1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ）
2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ）
3. 杀线威（Oxamyl ）
4. 灭多威（Methomyl ）
5. 3-Hydroxycarbofuran
6. 涕灭威（Aldicarb ）
7. 残杀威（Propoxur ）
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8. 克百威（Carbofuran ） 9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准)
氨基甲酸盐柱0840250 （4.0×250mm ）, C18, 5um ─用于23+种复合物的扩展分析法
1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ）
2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ）
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3. 杀线威（Oxamyl ）
4. 灭多威（Methomyl ）
5. 3-Hydroxycarbofuran
6. 涕灭威（Aldicarb ）
7. 残杀威（Propoxur ）
8. 克百威（Carbofuran ）
9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准)
用0846250柱对23种氨基甲酸盐进行分离 （4.6×250mm ）
1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 13. 丁酮威砜（Butocarboxim sulfone ）
2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 14. 乙硫甲威亚砜（Ethiofencarb sulfoxide ）
3. 杀线威（Oxamyl ） 15. 乙硫甲威砜（Ethiofencarb sulfone ）
4. 灭多威（Methomyl） 16. 丁酮威（Butocarboxim）
5. 3-Hydroxycarbofuran 17. 乙硫甲威（Ethiofencarb）
6. 涕灭威（Aldicarb） 18. 硫伐隆亚砜（Thiofanox sulfoxide）
7. 残杀威（Propoxur） 19. 硫伐隆砜（Thiofanox sulfone）
8. 克百威（Carbofuran） 20. 甲硫威亚砜（Methiocarb sulfoxide）
9. 西维因（Carbaryl） 21. 甲硫威砜（Methiocarb sulfone）
10. 甲硫威（Methiocarb） 22. 3-Ketocarbofuran
11. BDMC (内部标准) 23. 硫伐隆（Thiofanox）
12. 丁酮威亚砜（Butocarboxim sulfoxide） N 1-萘酚（1-Naphthol）
2. 2.1mm内径微型氨基甲酸盐杀虫剂分析柱─用于液质连用分析的理想品
为了节省溶剂与衍生试剂，提高灵敏度，并且配合液质连用分析，我们开发了用于氨基甲酸盐杀虫剂分析的微型柱（2.1×100，150mm）。5um的填充料（C18, C8）按照我们标准柱的模式进行粘合，确保了正确的选择性与严谨性。在标准法（美国EPA531.1和AOAC985.32）的支持下，这种带有微型柱后反应器的特殊的柱后衍生系统被开发出来。因为微型柱提供了优秀的分离效果，利用挥发性流动相在一个低流速下进行工作，且填充料流失率很低，所以它们对于氨基甲酸盐的液质连用分析非常理想。
杀虫剂微型柱分析的柱后条件：
衍生试剂1：加水分解衍生试剂CB130
衍生试剂2：100mg of OPA, 2g Thiofluor? in 950mL of CB910
反应器1：100℃，100uL
反应器2：环境温度，20uL
衍生试剂流速：60uL/min
检测：
荧光检测器：λex 330nm, λem 465nm
微型氨基甲酸盐柱1821100 （2.1×100mm）
C18, 5um
1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide）
2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone）
3. 杀线威（Oxamyl）
4. 灭多威（Methomyl）
5. 3-Hydroxycarbofuran
6. 涕灭威（Aldicarb）
7. 残杀威（Propoxur）
8. 克百威（Carbofuran）
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9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准
)
微型氨基甲酸盐分析柱0821150 （2.1×150mm ）, C8, 5um
1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ）
2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ）
3. 杀线威（Oxamyl ）
4. 灭多威（Methomyl ）
5. 3-Hydroxycarbofuran
6. 涕灭威（Aldicarb）
7. 残杀威（Propoxur）
8. 克百威（Carbofuran）
9. 西维因（Carbaryl）
10. 甲硫威（Methiocarb）
11. BDMC (内部标准)
12. 丁酮威亚砜（Butocarboxim sulfoxide）
13. 丁酮威砜（Butocarboxim sulfone）
14. 乙硫甲威亚砜（Ethiofencarb sulfoxide）
15. 乙硫甲威砜（Ethiofencarb sulfone）
16. 丁酮威（Butocarboxim）
17. 乙硫甲威（Ethiofencarb）
18. 硫伐隆亚砜（Thiofanox sulfoxide）
19. 硫伐隆砜（Thiofanox sulfone）
20. 甲硫威亚砜（Methiocarb sulfoxide）
21. 甲硫威砜（Methiocarb sulfone）
22. 3-Ketocarbofuran
23. 硫伐隆（Thiofanox）
N 1-萘酚（1-Naphthol）
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高效液相色谱习题和答案解析
高效液相色谱法习题 一、思考题 1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理 14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？ 16．以液相色谱进行制备有什么优点？ 17．在毛细管中实现电泳分离有什么优点？ 18．试述CZE的基本原理 19．试述CGE的基本原理 20．试述MECC的基本原理 二、选择题 1．液相色谱适宜的分析对象是（）。 A 低沸点小分子有机化合物 B 高沸点大分子有机化合物 C 所有有机化合物 D 所有化合物 2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（）。 A 柱前压力高 B 流速比GC的快 C 流动相钻度较小 D 柱温低 3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g·mL －1），在流动相中浓度为CB（g·mL－1），则此组分的分配系数是( )。 A mA/m B B mB/mA C CB/CA D CA/CB。 4．液相色谱定量分析时，不要求混合物中每一个组分都出峰的是＿。 A 外标标准曲线法 B 内标法 C 面积归一化法 D 外标法 5．在液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（）是有效的？ A 改变流动相种类 B 改变固定相类型 C 增加流速 D 改变填料的粒度 6．在分配色谱法与化学键合相色谱法中，选择不同类别的溶剂（分子间作用力不同），以改善分离度，主要是（）。 A 提高分配系数比 B 容量因子增大 C 保留时间增长 D 色谱柱柱效提高 7．分离结构异构体，在下述四种方法中最适当的选择是（）。 A 吸附色谱 B 反离子对色谱 C 亲和色谱 D 空间排阻色谱 8．分离糖类化合物，选以下的柱子（）最合适。 A ODS柱 B 硅胶柱 C 氨基键合相柱 D 氰基键合相柱 9．在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离（）。 A 异构体 B 沸点相近，官能团相同的化合物 C 沸点相差大的试样 D 极性变化范围宽的试样 10．在高效液相色谱中，采用254 nm紫外控制器，下述溶剂的使用极限为（）。 A 甲醇210 nm B 乙酸乙醋260 nm C 丙酮330 nm 11吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用（）。 A 液一液色谱法 B 液一固色谱法 C 键合相色谱法 D 离子交换法 12．当用硅胶为基质的填料作固定相时，流动相的pH范围应为（）。
高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯
实验七高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯 一.实验目的 1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。 2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。 3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。 二.实验原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。 在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为： R＝ 2[t (R2)-t (R1) ] /1.7*(W 1 ＋W 2 ) 式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t (R1) 为相邻两峰中前一峰的保留 时间； W 1及W 2 为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。 本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。待测物性质见表1。 表1色谱柱测试条件 如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。
三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。 2、试剂 甲醇（色谱专用），高纯水 四.实验步骤 1、色谱条件 色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8） 柱温：室温 流动相：初始为高纯水：30％，甲醇：70％ 检测器：DAD检测器; 检测波长：220nm； 进样体积：100μl定量环，实际注射每次可控制在200μl。 2、待测溶液的配制 首先用甲醇做溶剂配制储备液：邻苯二甲酸二甲酯（0.3880g/L），邻苯二甲酸二乙酯（0.2770g/L），邻苯二甲酸二丁酯（0.3776g/L）。然后各取1mL储备液用水和甲醇（20：80）稀释至10mL，作为待测溶液。 3、色谱测定 (1) 按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动Agilent 1100在线工作软件，设定操作条件。流量为1.000ml/min。 (2) 待仪器稳定后，开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸取混合物溶液50ul，注入仪器进样口，顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置，此时显示屏显示进样标志。 (3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积及分离比。 (4) 实验完毕，清洗系统及色谱柱。依次用甲醇-水（60：40）、甲醇-水（70：30）……直到纯甲醇作流动相清洗，每次清洗至基线走稳，至少清洗15min。 五.实验结果
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准 1. 范围 本标准规定了由酶抑制法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检验方法。 本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定。 测试方法酶抑制率法 2. 原理 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在410nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 3.试剂 3.1 pH8.0缓冲溶液：分别取43.5g无水磷酸氢二钾与2.2g磷酸二氢钾，用510mL蒸馏水溶解。 3.2 显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg 碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4°C冰箱中保存。 3.3 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.1mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。保存期不超过十天。 3.4 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3 min 的吸光度变化D A0值应控制在0. 3以上。摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超十天。 3.5 可选用由以上试剂制备的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的ΔA0值应控制在0.3以上。
4 仪器 4.1 分光光度计或相应测定仪。 4.2常量天平。 4.3 恒温水浴或恒温箱 5 分析步骤 5.1 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL 缓冲溶液，静制十五分钟，之间需振荡几次，待用。 5.2 对照溶液测试：先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，依次加入0.lmL酶液、0.1mL显色剂、0.lmL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3 min的吸光度变化值ΔA0。 5.3 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，但在加底物之前必须放置15分钟，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt。 6 结果的表述计算 6.1 结果计算 检测结果按公式计算：抑制率(%)=[ (ΔA0-ΔA t)/ ΔA0]×100式中：ΔA0－对照溶液反应3min吸光度的变化值； ΔA t－样品溶液反应3min吸光度的变化值； 6.2 结果判定 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。 对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。 7 附则
果蔬中氨基甲酸酯类农药残留量的检测方法
果蔬中氨基甲酸酯类农药残留量的检测方法 摘要:由于氨基甲酸酯类农药的诸多优点，使其在农业生产过程中得到广泛地应用。但其若进入人体可生成具有致癌作用的亚硝基化合物。所以在果蔬中其残留量的检测有非常重要的意义。只有测定其残留量在允许的范围内，我们的饮食安全才能得到保证。本文简单介绍了几种最常见的检测氨基甲酸酯类农药残留量的方法。 关键词：果蔬氨基甲酸酯类农药残留检测方法 Detection methods of Carbamate pesticide residues in fruits and vegetables Abstract：Due to many advantages of carbamate pesticides, it has been widely used in the process of agricultural production. But if it enters the body, there will generate carcinogenic nitroso compounds. So detection methods of Carbamate pesticide residues in fruits and vegetables are of very important significance. Only by measuring its residue in the allowed range, can our food safety be guaranteed. This article simply introduces several kinds of the most common method of detecting carbamate pesticide residues. Key words: fruits and vegetables Carbamate pesticide residues detection methods
高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量
河北医科大学学报 JOURNAL OF HEBEI MEDICAL UNIVERSITY 1999年第20卷第4期Vol 20No.41999 高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量 颜京霞 宋秀君 卞小芸 勾凌燕 王仁杰 张亚超 摘 要 目的 探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值。方法 采用2种流动相,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)-甲醇-四氢呋喃(80∶20∶0.8),流动相B为0.05 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.5)-甲醇(20∶80);色谱柱为necleos ODSΦ4.6 nm×150 nm。Wistar大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析。结果 该方法最低检出限为10 μg/ml,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为0.998±0.002,回收率为91.07 %～96.79 %,牛磺酸峰面积变异系数在进样量3μl时为10.75 %,进样量5 μl时为3.12 %。结论 高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法。 主题词 牛磺酸/分析;白内障/病因学;色谱法,高压液相/方法;大鼠 中图号 R493.2;R776.1 DETERMINATION OF TAURINE CONTENT BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Yan Jingxia Song Xiujun Bian Xiaoyun Department of Ophthalmology,the Third Hospital of Hebei Medical University (Shijiazhuang 050051) Gou Lingyan Wang Renjie Zhang Yachao Shijiazhuang Medical College of PLA ABSTRACT Objective To explore the method for determination of taurine in plasma, aqueous and lenses of rate by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods Two mobile phase were used:0.05 mol/L sodium acetate buffer (pH=6.5)-methanolfourhydrofuran(80∶20∶0.8) and 0.05 mol/L sodium citrate butter (pH=6.5)-methanol(20∶80);the analytical column was Φ4.6 nm×150 mm necleos ODS.The Wistar rat's plasma,aqueous and lenses samples were determined after derivation.Results Using this method,the minimum detected limit was 10 μm/ml;the mean related coefficient between concentration of amino acids and reaction valus was 0.998±0.002;the rate of recovery were 97.07 %～96.79 %;the coefficient of variation of taurine's peak area was 10.75 % when the analysed sample was 3 μl and was 3.12 % when the analysed sample was
氨基甲酸酯类农药残留分析方法的研究进展
氨基甲酸酯类农药残留分析方法的研究进展 摘要：目前氨基甲酸酯类农药被广泛应用，其母体及代谢产物有较为严重的毒害作用。建立快速、灵敏、有效的氨基甲酸酯类农药残留的检测技术，成为当前研究者关注的课题。本文者从分光光度测定法、色谱分析、生物检测、免疫分析、生物传感器、联用技术6 个方面综述了目前氨基甲酸酯类农药残留分析方法的研究进展及应用现状。 关键字：氨基甲酸酯、农药残留、检测方法 1、分光光度测定法 由于早期在分光光度分析过程中没有分离步骤，因此颜色反应的特异性就成为目标化合物定量分析的主要因素，如环境中的总涕灭威残留量可用氨基甲酰肟基团的特殊反应来测定。残留物用碱分解，产生涕灭威肟，再用酸水解放出羟胺。后者用碘氧化成亚硝酸，然后用亚硝酸-偶氮法测定。这种方法是早期使用的分析方法，由于其操作烦琐，灵敏度低,易受其它物质干扰，现已很少使用。蒋淑艳等[ 2 ] 提出采用间接邻菲罗啉光度法测定氨基甲酸酯类农药，其标准偏差为0 . 21%～2 . 3%,变异系数为0. 22%～2. 43%，回收率达99. 6 %～107. 8%。目前对农药西维因也常采用分光光度分析法，并且采用不同的样品前处理、不同的耦合试剂和不同的波长条件下进行测定。如可先将西维因氧化成1-奈酚，固定于固相吸附剂上，然后用分光光度计测定水样中的西维因；也可用固相萃取(SPE)浓缩西维因，经过洗脱和溶剂替换后，用分光光度法进行测定。分光光度测定法对于农药残留量进行分析时，不足之处是首先需要进行富集,其优点为要求的设备简单，对于基层生产单位及一般实验室具有使用价值。 2、色谱法 2.1 气相色谱法(GC)测定 气相色谱法(GC)是一种经典的农残检测方法，约70％的农药残留都是用气相色谱法来检测。氨基甲酸酯类农药在高温中不稳定，即使在选择柱条件方面下很大功夫，仍不可避免产生氨基甲酸酯的分解，同时也缺乏灵敏度高的选择性检测器，于是只能对不发生分解的氨基甲酸酯进行直接GC测定。而对于易热分解的化合物，或是考虑将氨基甲酸酯完全水解，以测定氨基甲酸酯的甲胺或酚部分，或是通过热稳定衍生化后测定其衍生物。陈霞等［5］建立了蔬菜中24种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测新方法，在蔬菜中3个浓度添加水平的平均回收率为70.1％～113.4％，相对标准偏差(RSD)1.8％～12.4％，该方法准确，杂质干扰少，操作简便，适用于蔬菜样品中农药多残留的检测。 2.2高效液相色谱法(HPLC)测定 高效液相色谱法对于气相色谱法不能分析的高沸点或稳定性差的农药可以进行有效的分离检测，特别适于检测氨基甲酸酯类农药。大部分氨基甲酸酯类农药的HPLC检测采用反相C8或C18柱,检出限一般高于气相色谱(GC)的检出限。近年来多采用液相色谱法柱后衍生技术，能够使氨基甲酸酯类农药中的甲氨基团在碱液作用下生成的甲胺与衍生试剂反应生成一种强荧光物质，可用高灵敏度的荧光检测器检测该物质，选择性高，基质干扰小，是检测氨基甲酸酯类农药有效、灵敏的方法之一。马纪伟等［6］通过柱后衍生化,荧光检测器(荧光波长为445nm)定性定量测定猕猴桃中11种氨基甲酸酯类农药的残留量。11种农药在30min内可以得到很好的分离，线性范围为0.01～50.00mg/L，线性相关系数为0.9989～0.9999，检出限为5.0～0.7μg/L，方法回收率为82.96％～101.10％。 2.3 其他色谱技术测定 其它应用于氨基甲酸酯农药残留分析的色谱技术还有超临界流体色谱法(SFC)和薄层色
高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含 量 一、实验目的 1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。 2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。 3.了解流动相的选择依据及配制方法。 4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。 二、实验原理 高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。 三、实验内容 （一）实验仪器与材料 1.实验仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。 2.实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl（0.1mol/L）、乙腈、三氟乙酸、超纯水。 （二）实验内容 1、色谱操作条件的制定： 色谱柱：C18柱（250×4.6mm,5μm）； 流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80） 流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL 2、标准溶液配制 精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。 3、标准曲线的建立 （1）精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中，然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤
高效液相色谱柱后衍生(pickering)测定氨基甲酸酯类农药
美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.360docs.net/doc/616817229.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 高效液相色谱柱后衍生技术应用在农药残留氨基甲酸盐杀虫剂 (Carbamate Pesticide)方面的分析分析 1． 氨基甲酸盐杀虫剂分析柱 Pickering Labs 氨基甲酸盐分析柱利用EPA 和AOAC 的指定方法，保证了氨基甲酸盐残余物的良好分离。对于C18柱，两种水/甲醇梯度模式可以用来分别对甲醇中和水中的样品进行分析。扩展的分析法采用C8柱结合水/甲醇或水/氰甲烷梯度洗脱可以将23种氨基甲酸盐进行分离。甲醇与氰甲烷之间选择性的不同可以分别被用来对各自的出峰进行鉴定。 杀虫剂分析的柱后条件： 衍生试剂1：加水分解衍生试剂CB130 衍生试剂2：100mg of OPA, 2g Thiofluor ? in 950 mL of CB910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度，0.1mL 衍生试剂流速：0.3mL/min 检测： 荧光检测器：λex 330nm, λem 465nm 氨基甲酸盐柱1846250 （4.6×250mm ） , C18, 5um
美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.360docs.net/doc/616817229.html, 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ） 8. 克百威（Carbofuran ） 9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准) 氨基甲酸盐柱1846150 （4.6×150mm ） , C18, 5um 1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 3. 杀线威（Oxamyl ） 4. 灭多威（Methomyl ） 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威（Aldicarb ） 7. 残杀威（Propoxur ）
氨基甲酸酯分析方法现场培训-waters
氨基甲酸酯分析方法 2004年3月
氨基甲酸酯分析方法 原理： 图1 氨基甲酸酯分析方法中测定的化合物 上图中显示了11个EPA方法531.1分析物的结构。它们依次从反相色谱C18上洗脱。 图2 氨基甲酸酯分析柱后反应的次序 每一个氨基甲酸酯从反相色谱中洗脱后，在较高温度被强碱性溶液（NaOH）水解，释放出醇，CO2(以碳酸盐的方式)以及甲胺。在第二步，甲胺与OPA反应并和巯基乙醇形成一个具有荧光的异氮(杂)茚基衍生物。 注意：请使用最高质量的试剂和溶剂，完全洗净的用于溶液、样品以及溶剂的玻璃器皿。残
留的清洁剂、指纹、香烟雾、呼吸，或者其它任何含有胺或者氨的物质，都可能导致分析中的干扰。 使用氨基甲酸酯分析方法 标样，试剂和溶剂： 氨基甲酸酯标样： 氨基甲酸酯依次洗脱如下： 1．Aldicarb sulfoxide 涕灭威亚砜 2．Aldicarb sulfone 涕灭威砜 3．Oxamyl 杀线威 4．Methomyl 灭多威 5．3-Hydroxycarbofuran 3－羟基克百威 6. Aldicard 涕灭威 7. Propoxur残杀威 8. Carbofuran克百威 9. Carbary 西维因 10. 1-Naphthol 抗蚜威 11. Methiocarb灭虫威 12. BDMC（内标） 化合物2－4以及6－11可得到干燥的结晶性粉末。而所有的化合物都可购得独立的或者已混合的乙腈溶液。 柱后衍生试剂成分 z OPA，邻苯二甲醛，97％，尽量使用级别高的试剂，重结晶级更佳。 z2－巯基乙醇，98％，尽量使用级别高的试剂。 z十水硼酸钠，ACS级。 z片状NaOH，ACS级（低CO2浓度）。 注：氢氧化钠必须处于低CO2浓度下保存。 溶剂和试剂 z乙腈（ACN），HPLC级 z甲醇（MeOH），HPLC级 注：乙腈和甲醇，即使是HPLC级，也可能含有在柱后衍生系统内会与OPA/ME反应的胺或者氨水，形成高荧光吸收杂质。这些衍生物可能造成基线漂移，相应随着溶剂组成而变化，并且/或者可能加大基线噪音。一般说来，如果基线漂移或者噪音随着时间变化而令人不快的话，清洗储液瓶并使用新鲜的溶剂。如果一开始就存在这个问题，那么使用另一批不同批号的溶剂或者尝试另一家供应商的产品。 z水，Milli-Q系统或者HPLC级 z浓HCl 注：仅使用1L装的甲醇和乙腈。直接使用瓶中的溶剂，不要将其转移到其它的储液瓶中。不要用光或者重新装满瓶子。当溶剂瓶几乎用光时，弃去剩余的溶剂（或另作他用）并启用一瓶新的溶剂。在一瓶新的溶剂开封后，乙腈的质量可能会发生变化，所以尽快使用而不要
高效液相色谱法测定有机化合物的含量
实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量 [目的要求] 1、了解仪器各部分的构造及功能。 2、掌握样品、流动相的处理，仪器维护等基本知识。 3、学会简单样品的分析操作过程。 [基本原理] 高效液相色谱仪液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。 液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。其中反相键合相色谱应用最广，键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相，极性流动相，则称为反相色谱。这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。 反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相，纯水廉价易得，紫外吸收小，在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37―）键合到硅胶表面，这也就是我们通常所说的碳十八柱。 [仪器试剂] 高效液相色谱仪（包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站）、过滤装置 待测样品（浓度约100 ppm）、甲醇、二次水 [实验步骤] 1、仪器使用前的准备工作 （1）样品与流动相的处理 配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。 水、甲醇等过滤后即可使用；水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。含稳定剂的流动相需经过特殊处理，或使用色谱纯的流动相。 （2）更换泵头里清洗瓶中的清洗液 流动相不同，清洗液也不同，如果流动相为甲醇-水体系，可以用50%的甲醇；如果流动相含有电解质，通常用95%去离子水甚至高纯水。 如果仪器经常使用建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。（3）更换托盘里洗针瓶中的洗液 洗液一般为：50%的甲醇。
氨基甲酸酯类农药残留
氨基甲酸酯类农药残留 1 基本概念和性质 氨基甲酸酯类农药（carbamates）用作农药的杀虫剂、除草剂、杀菌剂等。其毒理机制是抑制昆虫乙酰胆碱酶（Ache）和羧酸酯酶的活性，造成乙酰胆碱（Ach）和羧酸酯的积累，影响昆虫正常的神经传导而致死。这类杀虫剂分为三大类: (一)稠环基氨基甲酸酯类 （1）甲萘威（西维因）Carbaryl Union Carbide Co.(56)：水中溶解度低，30o C，40ppm，苯、二甲苯中溶解度低，稳定性好（光、热、酸），碱中易分解。具有触杀、胃毒和微弱的内吸作用。低毒，大白鼠LD50口服540～710mg/kg，LD50经皮＞2000mg/kg。人体中酯酶水解为主，昆虫中MFO酶分解（非水解酶），在酸性条件下能转化为亚硝基苯化合物，具有致癌作用。 （2）克百威（呋喃丹）Carbofuran FMC(1967)：广谱性杀虫、杀线虫剂，可防治300多种害虫，如稻、棉、玉米、马铃薯、地下害虫。胃毒、触杀、内吸，残效长、残留低。高毒，鱼、牛、水生动物有毒。不易积累，代谢快（水解、羟基化）。不允许喷雾，桑树附近不使用。 （3）丙硫克百威（安克力，fenfuracarb）：难溶于水，溶于大多数有机溶剂，对光不稳定。触杀、胃毒和内吸作用，持效期长。中毒，大鼠急性经口LD50为138mg/L，急性经皮LD50 >2200mg/L。 （4）丁硫克百威（好安威，好年冬，carbosulfan）：不溶于水，与丙酮、二氯甲烷、乙醇、二甲苯互溶，酸性介质中易分解。克百威低毒化衍生物，杀虫谱广，有内吸性。大鼠急性经口LD50为209mg/L，兔急性经皮LD50 >2000mg/L。 （二）取代苯基类 （1）异丙威（叶蝉散，isoprocarb）：不溶于卤代烷烃和水，难溶于芳烃，溶于丙醇、甲醇、乙醇、二甲亚砜、乙酸乙酯等有机溶剂。在酸性条件下稳定，碱性溶液中不稳定。较强的触杀作用，速效性强，主要防治水稻叶蝉、飞虱类害虫。中等毒性。不能与敌稗混用，否则易发生药害。 （2）仲丁威（巴沙，fenobucarb）：微溶于水，易溶于一般有机溶剂，如氯仿、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、石油醚、甲醇等。遇碱或强酸易分解，弱酸介质中稳定，高温下热分解。杀虫作用快，有杀卵和内吸作用，低温下仍有良好的杀虫效果。低毒。 （三）氨基甲酸肟类 （1）涕灭威aldicarb Union Carbide Co.(1965)：水中溶解度6000ppm（﹥33%），溶于大多数有机溶剂。LD50 经皮＝5mg/kg。内吸作用。防治方法：5%G的用量为2斤/亩，主要针对的是棉花刺吸式害虫（蓟马、盲蝽、蚜、叶蝉、螨、粉虱）；针对甘薯线虫病则3%G用量为5kg/亩。有一定的水溶性，可使地下水受污染。我国规定在下列地区禁止使用：地下水埋深不足1.0米的地区；地下水埋深不足1.5米的地区，月降雨量大于150mm的砂性土地区（砂粒含量大于85%）；地下水埋深不足1.5米，月降雨量大于200mm的壤砂土地区（砂粒含量70%-85%）；地下水埋深不足3.0米，月降雨量大于200mm的砂性土地区（砂粒含量90%）；所用施药区距饮水源必须在30米以上。 （2）灭多威methomyl (万灵)：内吸、触杀、胃毒作用；高毒：LD50口服＝17-24mg/kg，LD50兔经皮﹥5000mg/kg； （3）硫双灭多威thiodicarb 拉维因：胃毒，较弱的触杀；中毒：LD50 口服66mg/kg；（4）苯氧威fenoxycarb：又名双氧威、苯醚威。1982 年由瑞士的DR. R.MAAG公司发现, 是一种非萜烯类昆虫生长调节剂,对大多数昆虫表现出强烈的保幼激素活性,可以使卵不孵化、抑制成虫期变态及幼虫期的蜕皮,有时还会抑制成虫或幼虫的生长和出现早熟。特点：具胃毒、触杀作用,杀虫谱广；选择性很强, 通过干扰昆虫特有的发育和变态过程而产生杀虫的作
氨基甲酸酯类杀虫剂
第四节氨基甲酸酯类杀虫剂 一、特点 1.多数品种速效，残效期短，选择性强。对叶蝉、飞虱、蓟马、玉米螟防效好，对天敌安全 2.多数品种对高等植物低毒，在生物和环境中易降解，个别品种克百威等急性毒性极高 3.不同结构类型的品种、生物活性和防治对象差别很大 4.与有机磷作用机理相似，抑制乙酰胆碱酯酶，但反应过程有差异 5.与有机磷混用，有产生拮抗作用，有的增效作用。 二、常用品种 1.异丙威（叶蝉散）： 2.涕灭威（铁灭克）： 3.灭多威(万灵)： 4.丁硫克百威(好年冬)： 克百威(呋喃、大扶农、加保扶) 1.理化性质及毒性 (1)碱性介质中不稳定，不易燃，无腐蚀作用 (2)高毒，LD50=8-14 mg/kg，经皮>10200 mg/kg 2.作用特点及剂型 (1)广谱杀虫、线虫剂，具有内吸，触杀胃毒 (2)抑制胆碱酯酶，与其结合不可逆，因此毒性高 (3)根系吸收，叶部积累较多，果实含量较少，土壤中半衰期30-60天 (4)对水稻、棉花有明显刺激生长的作用 (5)剂型：35%种子处理剂，3%颗粒剂 3.防治对象及使用方法 适于棉花、水稻、甘蔗、等80多种作物防治300多种地下害虫、叶面害虫、及线虫 4.注意事项 (1)毒性高，严禁加水制成悬浮液直接喷施 (2)对鱼类及水生动物毒性大 (3)人体每日允许摄入量0.01 第五节拟除虫菊酯类杀虫剂 一、天然除虫菊素及发展概况 （一）天然除虫菊素 （二）仿生合成的拟除虫菊酯类杀虫剂 1.广谱高效，用药量少， 2.使用安全，多数品种低毒，残留量很低 3.促进生长，增加产量，在棉田、烟草、茶叶、蔬菜上使用有增产效果 4.触突部位传导抑制剂 5.负温度系数杀虫剂 6.易产生抗药性 三、主要品种 氯菊酯(百灭灵、除虫精、闯入者、二氯苯醚菊酯、蛀王醇) 1.理化性质及毒性 (4)原药为暗黄色至棕黄色液体，难溶于水
高效液相色谱仪LC2000-技术标书(全检测器+自动进样器+柱后衍生)
液相色谱仪 技术标书 1. 总则： 1.1 提供相应货物的技术规格文件，在应答的品目标题下，表明货物的型号、商标名称及生产厂家。 1.2 货物的制造和检验，必须是按照现行的中国国家标准，或通用国际标准。 1.3 仪器设备如需特殊工作条件（如：水、电源、磁场强度、特殊温度、湿度、振动强度等），应在相关文件中加以说明。 1.4 所提供的货物的技术规格应与响应品目所要求相符。应根据产品的正式出版样本（原本）和说明书如实逐项填写技术规格响应表。 1.5 在价目表上应分别列出每台（套）设备的单价及每台（套）设备的配置清单，每个包的总价应是该包中各设备单价的总和，如在统计上有差错，则以单价为准，总价由买方更正。 2. 工作条件 除该品目在技术要求中另有说明外，所有仪器、设备和装置，均应适合以下条件： 能在电源电压220V（±10%），50Hz，5~35℃。 3．技术参数 3.1 输液泵 3.1.1 液体输送原理：双柱塞串联往复式，自动脉冲抑制系统； 3.1.2 流速范围：0.001mL/min～9.999mL/min； 3.1.3 最大输出压力：39MPa； 3.1.4 *流速准确度：±2μL/min(0.01～0.1mL/min); ±2%(0.101～8.01mL/min); ±4%(8.01～9.999mL/min)； 3.1.5 *流速精密度：SD＜0.02min 或RSD＜0.075%(流速为1.0mL/min时的保留时间)； 3.1.6 润湿部分材料：SUS 316,陶瓷，氟树脂。 3.2 梯度系统 3.2.1 混合液体数：4种液体；
3.2.2 *混合原理：用比例阀的开关时间编程进行梯度比例控制，流动相只在泵前合流，泵后直接混合； 3.2.3 *混合准确度：±1%； 3.2.4 *混合精密度：0.2%； 3.2.5 四元连续在线脱气（选配）。 3.3 紫外检测器 3.3.1 光源：进口氘灯； 3.3.2 光学系统：比例双光束，凹面光栅，1200线/mm； 3.3.3 波长范围：190～600nm； 3.3.4 波长精度：≤±2nm； 3.3.5 波长重复性：≤0.2nm； 3.3.6 光谱带宽：≤8nm； 3.3.7 *噪音水平：不超过±0.00001AU (254nm,流通池充满空气，时间常数2.0秒)； 3.3.8 *漂移水平：不超过0.00025AU/hr (254nm,室温恒定，稳定的工作状态)； 3.3.9 自动调零范围：－0.3～2 AU； 3.3.10 补偿范围：0～2AU,每步0.001ＡＵ； 3.3.11 响应时间：0.1 , 0.5 , 2.0 , 4.0 秒； 3.3.12 波长时间程序：有。 3.4柱温箱 3.4.1 操作简便； 3.4.2 控温精度：≤±0.1℃； 3.4.3 控温范围：室温+5℃～80℃。 3.5 Primaide自动进样器 3.5.1 *进样方法：全部体积直接进样方式（高压进样）； 3.5.2 *样品数：≥200个（标准1.5ml样品瓶）； 3.5.3 *扩展样品数： 4mL×128； 3.5.4 标准进样体积：0.1－50μL（100μL标准注射器）；
柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述
柱前衍生和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法的进展与评述 美瑞泰克有限公司中国代表处整理 柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述 以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍，讨论和研究。 1、柱前衍生技术和反向色谱分离 氨基酸à衍生物à色谱分离 1.1 AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚氨基甲酸酯)法 优点：能同时检测一级二级氨基酸，检出现1pmole 缺点：pH值和洗脱温度要求控制准确。 1.2 PITC（异硫氰酸苯酯）法 缺点：PITC试剂进入柱子使柱填料过早的老化，柱子寿命降低，因此过量的衍生剂需要真空干燥除掉，为此，仪器要附设衍生及真空干燥装置。（主要用在生物饲料及食品分析中应用） 1.3 OPA （邻苯二甲醛-巯基乙醇） 缺点：OPA只能与伯氨反应，使二级氨不能同时被检测。由于反向柱分离过程中会有部分衍生物发生裂解，致使OPA-氨基酸的稳定性很差，尤其是胱氨酸和赖氨酸衍生物信号衰减较快，灵敏度低。 1.4 DANSYL-Cl（丹磺酰氯）法 优点：同时可以检测1，2级氨基酸同时能够准确的测定样品中的胱氨酸。 缺点：衍生物在紫外光下不稳定，特别是蛋氨酸对紫外光十分敏感，收率很低，因此衍生反应必须避光进行，而且反应最好要在室温下进行40min左右，如果温度高于45度降低衍生物的产率。 1.5 FMOC-Cl（芴甲氧羟基氯）法 2 柱后衍生技术和阳离子交换色谱分离 2.1 OPA（邻苯二甲醛-巯基乙醇）法 优点：程序化柱后衍生，OPA以极快的速度于氨基酸反应成发荧光团物质，又在很短的时间内进入灵敏度很高的荧光检测器检测，消除了柱前手动衍生是衍生物不稳定的因素，该方法具有较高的分辨率和灵敏度。 2.2 Nin-hydrin（茚三酮）法 优点：程序化衍生，衍生反应速度快（60S），衍生物稳定性好，衍生试剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测。 缺点：衍生物只能用紫外检测器检测，使灵敏度较低而不适合微量氨基酸测定；衍生反应条件要求较高，需要附设加温衍生装置，仪器造价高；流动相与衍生液同时泵入体系，体系平和时间较长长。 综上所述：经过改进和完善的柱后衍生，离子交换色谱法，仪器已具备很高的自动化水平，被分离出来的氨基酸在特有的诸侯氧化剂衍生设备中按固定程序与衍生剂迅速反应并被检测，消除了个样品由于衍生时间，衍生温度等因素的差异带来的测试误差，实践证明该方法是继稳定性分辨率，分离度具佳的可靠的氨基酸分析方法，而衍生试剂不直接计入色谱柱，使柱寿命延长时柱后衍生法的一明显优势。 柱前——柱后衍生对照表 自动化程度衍生物的稳 定性柱子的损害前处理氨基 酸 分析的种类一次性设备 投入 柱前衍生法低低大繁琐18-26种小柱后衍生法高高小简单22-45种大
最新高效液相色谱法测定维生素C
高效液相色谱法测定维生素C的含量 【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段，在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析，所采用的定量分析方法为外标法，通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。 【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量 1、引言 维生素 C（Vitamin C, Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。Vc 在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏 Vc 时容易导致坏血病。同时，由于 Vc 是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc 在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中 Vc 含量在 50-300 mg/100 g。 溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。高效液相色谱法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代 HPLC 仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型 HPLC 仪还备有自动馏分收集装置。 2、HPLC测定维生素C的含量 2.1、仪器试剂 2.1.1、仪器 高效液相色谱仪（Agilent1260），色谱柱：C18 柱 (250 mm×4.6 mm, I.D.5 μm)；平头进样器。 2.1.2、试剂 乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素 C，磷酸二氢钾等均为分析纯，实验用水为超纯水。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测 （GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测） 酶制剂岳阳家政排毒养颜胶囊减肚子她他女鞋痔疮偏方毛孔大 方法一快速卡法 一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。 二、实验原理： 胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。 三、实验试剂： 1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片； 2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4?12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。 四、实验步骤： 1、整体测定法 （1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上. (2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 （3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。 注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。 2、表面测定法（粗筛法） （1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。 （3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。 （4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。