甘蔗蔗糖磷酸合成酶磷酸化位点的突变及相应表达载体的构建

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Ｋｅｒｓａｃａｕ吧ｙｗｏｄ：Ｓｃｈｒｍ
ｖｅｏｒｃｔ
；ｓｃｏｅｐｏｐａｅｓｎｈｓ Ⅲ ；ｐｏｐｏｙａｉｎｓｔ；ｓｅｄｒｃｅｔｇｎｉ；ｅｐｅｓｏｕｒｓｈｓｈｔｙｔａｅｈｓｈｒｌｔｉｏｅｉ－ｉｔｄｍｕａｅｓｓｘｒｓｉｎｔｅ
ＳＳＬ因的定点突变成功，Ｐ３基构建表达载体ｐＡＢＡ３１ＳＳＬ成功。ＣＭＩ１０－Ｐ３关键词：甘蔗；Ｐ Ⅲ；ＳＳ磷酸化位点；定点突变；表达载体
中图分类号：７Ｑ８文献标识码：Ａ文章编号：６３０２（０００－８－１７－５２１）４０００９２４
Ｓｔ－ｒｃｅｉｅｄｉｅｔｄｍｕｔｇｎｉｆｔｅｐｓｈｏｙｌｔｏｓｔｆｓｃｏｅｐｈｓａｅｓｎｈｓａｅｓｓｏｈｈｏｐｒａｉｎｉｅｏｕｒｓｏｐｈｔｙｔａｅ
ｆｏＳｃｈｒｍｏｃｎｒｍｎｏｓｕｔｄｔｅｒｌｔｎｅｐｓｉｎｖｃｏｒｍａｃａｕｆｉａｕａｄｃｎｔｃｅｅｉｘｒｓｏｅｔｒｉｆｒｈａｏｅ
ｔｒｓｒｅｒＳｔＤｒｃｄＭｕａｅｅｉＫｔＣｏｔｃ）ｔｅｎｏｈｈａ４６ｔ４９ｗｓｅｐｃｖｌｍｔｇｎｉｄｉｔｈＴａｆｍｒｉ．ｉｔｔｎｓ（ｌｅｈ，ｈＳｒｏｄｎｉｔ５５ａｓｅｔｅｕａｅｓｅｏｅｎｏＭｅｅｅｇｓｉｎｅｃｗｃｏｒｉｙｓｎｔｅｏｄｎＴｒｌ，ｌ）ｈｕａｅｓｅｎｎｔｅｓｅＰ３ｅｌｅｔｅｐｅｓｎｖｃｒＣＭＢＡ３１ｈｅｃｎｏｓ（ｈ，ＡａＧｕ．ＴｅｍｔｇｎｉａｄｕｍｕｇｎｉｄＳＳＬｗｒｃｎｉｏｘｒｓｉｅｔＡＩ１０－ｒｓｄａｓｅｏｄｎｏｏｐ
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摘要：Ｃｏｔｈ公司的定点突变试剂盒ＴａｓｒｅＳｔＤｒｔ用ｌｅｎｅｒｆｍｒｉ．ｉｃｄＭｕａｅｅｉＫｔｎｏｅｅｅｔｇｎｓｉ对克隆载体ｐ１ＴＳＳＬ上的ＳＳ基ｓＭＤ８ —Ｐ３Ｐ因ＳＳＬＰ３进行定点突变，使其４９位的丝氨酸密码子分别突变为编码苏氨酸、５丙氨酸和谷氨酸的密码子。然后将突变后的和未突变的ＳＳＬ基因分别克隆至表达载体质粒ｐＡＩ１０Ｐ３ＣＭＢＡ３１中，构建重组质粒ｐＡＩ１０－Ｐ３。经测序鉴定，ＣＭＢＡ３１ＳＳＬ对
亚热带农业研究
ＳｕｒｐｃｌＡｇｉｕｔｒｓａｃｂｔｏｉａｒｃｌｕｅＲｅｅｒｈ
第６卷第 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ期
２１００年１月１
甘蔗蔗糖磷酸合成酶磷酸化位点的突变及相应表达载体的构建
胡巍，张积森，叶冰莹，陈由强，如凯陈（．１福建师范大学生命科学学院，建福州３００；．福５１８２农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室，福建福州３００）５１８
ｏＧｎｔｓＩｐｏｅｅｔｏｕａａｅＭｉｓｙｏｇｉｔｒ，ｕｈｕＦｊｎ３００，ｈｎ）ｆｅｅｃｒｖｍｎｒｇｒｎ，ｎｔｆｒｕｕｅＦｚｏ，ｕａ５１８ＣｉｉｍｆＳｃｉｒＡｃｌｉａ
ＡｓａｔＴｅＰ３ｅｅｏｃｓｈｓｈｔｓｎｈｓＳＳｉｔｅｖｃｒｐＩＴＳＳＬｗｓＳｅｉｃｕａｅｓｅｙｂｔｃ：ｈＳＬｇｎｆｕｒｅｐｏｐａｔａｅ（Ｐ）ＯｅｔＭＤ８－Ｐ３ａｉ・ｒｔＭｔｎｉｄｂｒＳｓｏｅｙｌｈｏｔｄｅｅｄｇｓ
甘蔗（ａｃａｕｗｎｒｍＬ）Ｓｃｈｒｍｏｉａｕ．是最主要的糖料作物，ｆ蔗糖已占我国食糖总产量的９％；０同时甘蔗也是生产乙醇的理想能源作物。在高等植物体内与蔗糖代谢密切相关的酶主要有蔗糖磷酸合成酶（ｕｒｓｓｃｏｅｐｏｐａｙｔａｅＳＳ、ｈｓｈｔｓｎｈｓ，Ｐ）蔗糖合成酶（ｕｒｓｎａｅＳＳ）ｅｓｃｅｓｔｓ，ｕｙ和转化酶（ｎｅｔｅＩｖ。ＳＳ是蔗糖合成ｏｙｈｉｒｓ，ｎ）Ｐｖａ途径中的一个重要控制点，植物的ＳＳ？．Ｐ舌陛直接反映了植物体内蔗糖合成的能力＿ｊｌ。研究表明，ＰＳＳ对
ＳＳＬＰ３．Ａｃｏｄｎｏｔｅｓｑｅｃｄｒｓｌ，ｔｅＳｔ— ｉｅｔｄＭｕａｅｓｓＷａｏｒｃｄｔｅｅｐｅｓｎｖｃｏＣｃｒｉｇｔｈｅｕｎｅｅｕｔｈｉｄｒｃｅｔｇｎｉｓｃｒｅｔｅｎｈａｘｒｓｉｅｔｒＡＭＢＡ１０１ｓｓＬｏｐＩ３一ｐ３ｗａｏｓｒｃｅｕｃｓｆＨ．ｓｃｎｔｔｄｓｅｅｓｙｕｕ