实验一 磺胺嘧啶在体小肠吸收实验

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六、问题与讨论
1.在体吸收试验方法的特点是什么? 2.影响试验结果的主要因素有哪些？ 3.供试液中为什么要加酚红?
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lg
X
lg
X0
ka t 2.303
LN ( X ) LN ( X 0 ) kat
根据回归方程求得t1/2=0.693/ka
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三、实验原理
Xn的求算
Xn=Cn×Vn
在小肠吸收过程中，药物被吸收的同时水分也
被吸收，使Vn不断减少，利用酚红不被吸收，测 定不同时间酚红的浓度，求算Vn。
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四、实验内容
3．循环实验的操作 (1)蠕动泵流速的调节：选择所需工作方向，按动快、 慢档开关，调节流速为5mL/min和2.5mL／min。 (2)恒温水浴调节：水浴温度调节为（37±0.5）℃。 (3)供试液的准备：取80mL供试液加入循环装置的 烧瓶中，见下图，将烧瓶置恒温水浴中预热至 （37±0.5）℃。 (4)生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37℃ 备用。
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实验一 磺胺嘧啶在体小肠吸收实验
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一、实验要求
1.掌握大鼠在体肠管循环灌流法研究药物吸收的 实验方法。 2.掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数
(ka)、吸收半衰期(t1/2（a）)的方法。
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二、仪器、试剂和动物
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四、实验内容
2．供试液与酚红液的配制（已准备） (1)供试液：精密称取磺胺嘧啶20mg、酚红20mg于 1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇 匀。 (2)酚红液：精密称取酚红20mg于1000mL容量瓶 中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。
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四、实验内容
5．操作注意 (1)在大鼠麻醉前应做好一切准备工作。如手术器械、 水浴温度的调节，试药配制并放在近处，蠕动泵流 速调节等。如果蠕动泵上并未标出流速，可用量筒 接流出液（蒸馏水）的方式确定流速。 (2) 小肠很细，小肠两端插上玻璃管后再洗涤非常 容易堵塞，应先将十二指肠端插上玻璃管，回肠端 找好后先用线扎紧，然后在扎线处切个小口。生理 盐水(37℃)从十二指肠端插管处注入，洗涤内容物 至净，再在回肠端切口处插上玻璃管。
+0.1％二盐酸萘基乙二胺2mL
放置3min
放置20min
摇匀
550nm的波长处测定吸收度
空白液：取酚红1.0 mL，加1mol/LHCl 5mL，摇匀，余下操作按上法操作
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四、实验内容
（2）酚红的标准曲线：精密称取酚红约25mg置 250mL容量瓶中，加蒸馏水定容，分别精密吸取1、 2、3、4、5、6mL置10mL容量瓶中，加蒸馏水定容， 再分别吸取0.5mL置10mL带塞试管中，加 0.2mol/LNaOH 5mL，摇匀。照分光光度法在555nm 波长处测定吸收度。以吸收度对浓度回归，得到酚 红标准曲线方程。
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四、实验内容
(5)大鼠麻醉：取实验前禁食一夜、体重约为200g的 雄性大鼠一只，按1.2g／kg体重腹腔注射乌拉坦 （约0.8mL）麻醉，并固定于固定台上。
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四、实验内容
(6)小肠两端插管：沿大鼠腹部中线打开腹腔(约 3cm)，在十二指肠上部和回肠下部各切一小口， 插入直径约0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。
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四、实验内容
5．操作注意 (3)插玻璃管时应注意方向，在十二指肠端向下插， 回肠端向上插，以构成回路。 (4)SD的测定中，加入氨基磺酸钠后要充分振摇至 无气泡发生。
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五、实验结果
1.分别写出SD和酚红的标准曲线回归方程和相关系 数。 2.SD和酚红样品浓度的计算 根据SD和酚红的标准 曲线方程，分别计算出SD和酚红样品的浓度，并 填于下表中。 3.不同时间SD剩余量的计算 按下表中公式计算出 不同时间的剩余药量，并求剩余药量的对数值。 4.ka和t1/2（a）的计算 以剩余药量的对数对相应的时 间作图，可得一条直线，由直线的斜率求出ka，并 计算 t1/2（a） 。
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四、实验内容
(7)肠管洗涤：用注射器将37℃的生理盐水缓缓注 入肠管，洗净肠管内容物。 注意： ➢ 先将肠管捋顺，确保无死结； ➢ 推注时不要太快，以免涨破肠管； ➢ 充分洗净后送入空气使洗涤液尽量流尽。
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（一）仪器 恒流泵、紫外分光光度计、石英比色皿、万分之 一分析天平、电子秤（称大鼠）、恒温水浴、温 度计、红外线灯、玻璃插管、2mL和10mL移液管、 锥形瓶、烧杯、注射器、眼科剪刀、眼科镊子、 普通中号镊子、小剪刀、动物实验操作台、手术 线、手术纱布、10mL容量瓶、1000mL容量瓶、 10mL带塞试管、量筒、手术止血钳
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大鼠在体小肠吸收量的计算
取样时 SD SD 酚红 酚红 间（h） A 浓度 A 浓度
供试液体积
剩余药量
循环前 A0
C0
A’0 C’0
V0=80mL
P0=80* C0
0
A1
C1
A’1 C’1
V1=C’0V0/ C’1
P1=C1V1
0.25 A2
dC k'C dt
D为药物在膜内的扩散系数；k为药物在膜／水溶液中的分配系数；S为药物扩散的 表面积；CGI为消化道内药物浓度；Cp为血液中药物浓度；h为膜的厚度
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三、实验原理
以消化液中药物的量的变化率dX/dt表示透过速 度，则： -dX/dt=kaX，积分后为
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四、实验内容
4．含量测定
（1）SD的标准曲线：取供试液2、4、6、8、10mL
分别置l0mL容量瓶中，加蒸馏水定容。
各取1mL
+1mol/L HCl 5mL 摇匀
+0.1％NaNO21mL 摇匀
放置3min
+0.5％氨基磺酸铵1mL 摇匀
C2
A’2 C’2
V2=[(V1-1.5)C’1+40]/ C’2
P2=C2V2+1.5C1
0.5
A3
C3
A’3 C’3
V3=[(V2-1.5)C’2+40]/ C’3
P2=C3V3+1.5(C1+C2)
… …… … …
…
…
n 1
tn
An
Cn
A’n C’n Vn=[(Vn-1-1.5)C’n-1+40]/ C’n Pn CnVn 1.5 Ci
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三、实验原理
消化道药物吸收的主要方式为被动扩散。其透过速度
与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示：
dC DkS CGI CP
dt
h
Cp相对于CGI可忽略不计，若设DkS/h=k’上式可简化为
上式说明药物膜透过速度属于表观一级速度过程。
空白液：0.2mol/L NaOH
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四、实验内容
(3)样品测定 ①SD的测定：取样品lmL置l0mL带塞试管中，加 入lmol/L盐酸5mL，摇匀，以下步骤按SD标准曲 线项下操作，在550nm的波长处测定吸收度。 ②酚红的测定：取样品0.5mL置10mL带塞试管中， 加入0.2mol／L NaOH 5mL，在555nm波长处测定 吸收度。
四、实验内容
(8)做成回路：将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管 连接，做成回路，开动蠕动泵，其流速为5mL/min。
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四、实验内容
(9)取样：以5mL/min流速循环10min后，将流速调 节为2.5mL/min，立即自供试液烧瓶中取样两份 (1mL和0.5mL各一份)，分别作为SD和酚红“0”时 间样品，另向烧瓶中补加酚红液2mL，其后每隔 15min按同法取样及补加酚红液，共取样9次，停 止循环。
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四、实验内容
1．试剂的配制 ➢ Krebs-Ringer试 剂 (pH7.4) （ 已 准备 ） ：称 取
NaCl 7.8g，KCl 0.35g，CaCl2 0.37g，NaHCO3 1.37g，NaH2PO4 0.32g，MgCl2 0.02g，葡萄糖 1.4g，加蒸馏水适量使成l000mL。 ➢ 1%NaNO2溶液（100mL） ➢ 0.5%氨基磺酸铵溶液（100mL） ➢ 0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液（200mL） ➢ 1mol/L盐酸（400mL） ➢ 0.2mol/L氢氧化钠（400mL）
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二、仪器、试剂和动物
（二） 试剂 磺胺嘧啶原料药、酚红、1%NaNO2溶液、0.5%氨 基磺酸铵溶液、0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液、 1mol/L盐酸、0.2mol/L氢氧化钠、生理盐水、 Krebs-Ringer试剂（pH7.4）、25%乌拉坦等。 （三）动物 大鼠，约200g，实验前禁食一夜（自由饮水）