(固相凝集法)
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反应板 (已包被血小板单抗)
血小板单层
阴性
阴性反应
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
2.1.2 抗体鉴定用血小板谱细胞图谱(冻干制品)
阴性反应
HPA-1a HPA-1b HPA-2a HPA-2b HPA-3a HPA-3b HPA-4a HPA-4b HPA-5a HPA-5b HPA-15a HPA-15b
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
2.4 HLA-I类群反应性抗体(PRA)检测
O型健康人血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
血小板单层
阴性
阴性反应
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
注意事项:
1 血清或血浆样本:离心(3000rpm,5 min)后取上清进行检测。 2 血小板悬液的制备(3种方式): 2.1 冻干血小板:用生理盐水溶解。 2.2 机采血小板:用生理盐水进行5-10倍稀释。 2.3 抗凝全血中提取血小板:采血当天8h内EDTA或枸橼酸钠抗凝全血经200g离心10min后, 取上层2/3富血小板血浆(PRP)直接使用。自身免疫性血小板减少症患者在进行自身结合抗 体检测时应将上述PRP 3000rpm离心10min,弃去上层部分血浆并将血小板浓度调节至 50~150×109/L。
血小板悬液应贮于聚丙烯或聚乙烯试管中(不可采用玻璃试管),20-25℃保存并在8h 内进行检测。 3 洗涤过程中须轻缓滴加洗液,否则水流剧烈冲击会造成血小板单层破坏导致错误结果。
长春博德生物技术有限责任公司
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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2.2 自身抗体检测 2.2.1 自身结合抗体检测
患者血小板 50μl/孔
阳性
50g,5min离心 洗涤3次
各50μl/孔 200g,5min离心
反应板 (已包被血小板单抗)
血小板单层
阴性
阳性反应 200g,5min离心
2 抗体检测 2.1 同种异型或同种抗体检测 2.1.1 检测流程
血小板筛检(谱)细胞 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)
组成:
应用范围:1 抗原检定
待检测血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
含已知特异性抗体的血清或试剂 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
应用单位: 中心血站
医院血库及输血科 妇幼保健医院 器官移植中心 ….
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
反应板 (已包被血小板单抗)
血小板单层
阴性
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
3 交叉配型
供血者血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
受血者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 (已包被血小板单抗)
反应板 (已包被血小板单抗)
阴性
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
2.2.2 自身游离抗体检测
患者血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 (已包被血小板单抗)
血小板单层
阴性
2.3 药物依赖性抗体检测
血小板筛检(谱)细胞 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 (已包被血小板单抗)
药物 (终浓度100U/ml) 血小板单层
阴性
指示红细胞 (人IgG致敏红细胞) 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心