【CN110396553A】一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子标记及区分方法与应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910204598.9

(22)申请日 2019.03.18

(71)申请人 信阳师范学院

地址 464000 河南省信阳市浉河区南湖路

237号

(72)发明人 衡双平　杨茜　黄浩　陈果　

刘明芳　崔梦迪　吕擎　

(74)专利代理机构 郑州立格知识产权代理有限

公司 41126

代理人 崔卫琴

(51)Int.Cl.

C12Q 1/6895(2018.01)

C12N 15/11(2006.01)

(54)发明名称

一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子

标记及区分方法与应用

(57)摘要

一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子

标记及区分方法与应用，本发明属于植物分子标

记育种领域，具体涉及到一种芥菜紫色叶片紧密

连锁的分子标记的开发和利用。本发明首先对控

制紫叶芥菜叶色的基因片段进行扩增并与绿叶

芥菜中的基因序列进行序列比对（其核苷酸序列

如序列表SEQ ID NO:1到NO:2所示），分别在基因

序列保守和绿叶芥菜中特异插入的核苷酸序列

设计引物，开发用于区分紫叶芥菜和绿叶芥菜特

异的SCAR分子标记。利用紫叶芥菜和绿叶芥菜自

交系对这两对SCAR标记进行验证。本发明设计和

开发了芥菜不同叶色特异的SCAR标记，在芥菜杂

交育种中其应用不但可以鉴定不同芥菜叶色材

料的基因型。还能用于鉴定种子纯度，提高育种

效率。

权利要求书1页 说明书5页序列表2页 附图3页CN 110396553 A 2019.11.01

C N 110396553

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110396553 A

1.一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记，其特征在于，包括2对SCAR分子标记，分别是Bj901-L和Bj90A-R引物组合以及Bj901-L和Bj901-R引物组合，其中，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。

2.利用权利要求1所述的分子标记区分叶用芥菜的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取叶用芥菜总DNA；

2）利用所述的分子标记对提取的总DNA进行PCR扩增；

2.1）若Bj901-L和Bj90A-R引物组合不能扩增出目的条带，则判断为紫叶纯合芥菜；

2.2）若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出1条约1.4 Kb大小的条带，则进一步确定为绿叶纯合芥菜；若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出目的条带小于200 bp，则判断为紫叶纯合芥菜；若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出以上两条目的条带，则判断为紫叶杂合芥菜。

3.如权利要求2所述的利用分子标记区分叶用芥菜的方法，其特征在于，PCR扩增的程序为：94℃总变性5min；94℃变性30S，63℃退火30S，72℃延伸1min，共34个循环；72℃延伸5 min，扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。

4.权利要求1所述的叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记在芥菜叶色类型、种子纯度鉴定和芥菜分子育种中的应用。

5.一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒内包含三条SCAR分子标记引物，依次为Bj901-L、Bj90A-R和Bj901-R，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。

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