电针下关穴改善犬迟发性脑血管痉挛的机制
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脑血管痉挛（ cerebral vasospasm，CVS） 是动脉瘤 性蛛网膜下腔出血（ subarachnoid hemorrhage，SAH） 后最常见、最严重的并发症，在影像学上发生率约为 70% ，临床所见蛛网膜下腔出血后 2 周的发生率约 为 30% ～ 40%［1-2］。CVS 可引起严重的局部脑组织 缺血，造成 迟 发 性 的 缺 血 性 脑 损 伤，导 致 脑 组 织 梗 死，成为致死、致残的主要原因。对于蛛网膜下腔出 血后脑血管痉挛的发病机制尚未完全清楚，普遍认 为与氧合血红蛋白分解产物、内皮素（ ET） 、血块引 起的炎性反应、体内血管收缩舒张物质失衡、血管自 身调节功能的下降等有关。笔者在前期研究中发 现，针刺下 关 穴 可 使 颅 内 血 管 扩 张［3］。 因 此，本 研 究采用犬的蛛网膜下腔出血模型探讨电针下关穴对 脑血管痉挛的作用机制，现报告如下。
［基金项目］ 国家中医药管理局秦亮甫名老中医工作室建 设项目； 上海市卫生局中医基金资助项目（ 2008J008A） ［作者简介］ 丁忱欢，女，医师，主要从事脑缺血性疾病的临 床与基础研究。 ［通讯作者］ 李鹤，副主任医师。 E-mail： lihe1972@ hotmail． com
Inc） ； 狗 ET-1 酶 联 免 疫 吸 附 试 剂 盒，Adlitteram Diagnostic Laboratories Inc； 狗 一 氧 化 氮 合 成 酶 （ NOS） 酶 联 免 疫 吸 附 试 剂 盒，Adlitteram Diagnostic Laboratories Inc； 包埋剂，Leica 公司； 乙酸钠、柠檬酸 钠、硝酸银、硫酸铜，上海化学试剂有限公司； 铁氰化 钾，上海文旻生化科技有限公司； 硫化铵，上海市四 赫维化工有限公司； 乙醇，上海振兴化工一厂； 碘化 乙酰硫代胆碱，Sigma 公司； TS 100 型光学显微镜， Nikon 公司； CM3050S 型冷冻切片机，Leica 公司； 各 种 微 量 取 样 器，EPPENDORF 公 司； 8453 型 UVvisible Spectroscopy System，Agilent 公司； MDF-U52V 型超低温冰箱，SANYO 公司； 5417R 型冷冻离心机， Eppendorf 公 司； 荧 光 倒 置 显 微 镜 IX51，OLYMPUS 公司； 680 型酶标仪，RIO-RAD 公司。 1． 2 动物造模及处理 下关穴组及对照组犬采用 枕 大 池 二 次 注 血 法 造 模［4］，速 眠 新 Ⅱ 注 射 液 （ 0． 08 ml / kg） 肌肉注射麻醉，保留自主呼吸。麻醉 成功后，动物左侧卧位于 DSA 诊断台上，用 3% 碘伏 消毒枕项及腹股沟部，于 DSA 透视下以 9 号腰椎穿 刺针，与脊柱呈 10° ～ 20° 角，沿枕大孔后缘斜刺入 约1 ～ 1． 5 cm，有明显突破感后拔出针芯，见清亮的 脑 脊 液 流 出，继 从 犬 股 动 脉 取 新 鲜 自 体 血 （ 0． 5 m1 / kg，无抗凝剂） ，以 l ml /3 s 速度注入枕大 池，使其保持头低位 30° ～ 45°约 30 min，以使血液在 脑底动脉周围充分弥散和沉积； 48 h 后重复上述操 作，再次注新鲜自体血入枕大池。正常组动物按上 述同样方法将自体脑脊液 （ 0． 5 m1 / kg） 注 入 枕 大 池，方法同上。下关穴组犬于手术显微镜下暴露下 关穴，植入 针 状 刺 激 电 极，使 针 电 极 接 触 蝶 腭 神 经 节； 采用脉冲方波极性交替的方法刺激： 电流 0． 8 ～ 16 mA，可调电压 6 V，间隔 90 s，180 s，270 s 予以重
1 材料与方法
1． 1 实验材料 1． 1． 1 动物与分组 成年雄性 Beagle 犬 20 只，体 质量 15 ～ 17 kg，于上海中医药大学实验动物中心分 笼饲养 3 d，无异常后用于实验。将犬随机分为正常 组（ 6 只） 、针刺下关穴组（ 下关穴组，8 只） 、假针刺 组（ 对照组，6 只） 。 1． 1． 2 试剂和仪器 狗乙酰胆碱酯酶（ AchE） 酶联 免疫吸 附 试 剂 盒 （ Adlitteram Diagnostic Laboratories
上海中医药大学学报 第 26 卷 第 4 期 2012 年 7 月
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电针下关穴改善犬迟发性脑血管痉挛的机制研究
丁忱欢 葛健伟 李 鹤
上海交通大学医学院附属仁济医院中医科 （ 上海 200127）
【摘 要】 目的：探讨电针下关穴改善迟发性脑血管痉挛的作用机制。方法：将 20 只成年 Beagle 犬随机 分为正常组（ 6 只） 、下关穴组（ 8 只） 、对照组（ 6 只） 。采用枕大池二次注血法制作蛛网膜下腔出血后脑血 管痉挛模型。正常组不予干预，下关穴组于左侧下关穴植入电极并电刺激，对照组于皮下植入电极但不予 电刺激。14 d 后处死动物，观察各组犬大脑中动脉、基底动脉、蝶腭神经节乙酰胆碱酯酶（ AchE） 及一氧化 氮类（ NOS） 神经元的变化，及脑脊液 AchE、内皮素、NOS 水平变化。结果：下关穴组蝶腭神经节、大脑中动 脉 NOS、AchE 神经元分布密度较正常组和对照组增加。与正常组和对照组比较，下关穴组犬脑脊液 AchE 水平下降（ P ＜ 0． 05） ，而 NOS 水平上升（ P ＜ 0． 01） ； 3 组犬脑脊液 ET-1 水平比较无显著差异（ P ＞ 0． 05） 。 结论：电针下关穴可兴奋神经节内乙酰胆碱及一氧化氮类神经元及调节脑脊液中 NOS、AchE 水平以改善脑 血管痉挛。 【关键词】 蛛网膜下腔出血； 脑血管痉挛； 电针疗法； 下关穴； Beagle 犬 【中图分类号】 R256； R743 【文献标志码】A 【文章编号】1008-861X（ 2012） 04-0095-03
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ACTA UNIVERSITATIS TRADITIONIS MEDICALIS SINENSIS PHARMACOLOGIAEQUE SHANGHAI Vol． 26 No． 4 Jul．，2012
脑血管痉挛（ cerebral vasospasm，CVS） 是动脉瘤 性蛛网膜下腔出血（ subarachnoid hemorrhage，SAH） 后最常见、最严重的并发症，在影像学上发生率约为 70% ，临床所见蛛网膜下腔出血后 2 周的发生率约 为 30% ～ 40%［1-2］。CVS 可引起严重的局部脑组织 缺血，造成 迟 发 性 的 缺 血 性 脑 损 伤，导 致 脑 组 织 梗 死，成为致死、致残的主要原因。对于蛛网膜下腔出 血后脑血管痉挛的发病机制尚未完全清楚，普遍认 为与氧合血红蛋白分解产物、内皮素（ ET） 、血块引 起的炎性反应、体内血管收缩舒张物质失衡、血管自 身调节功能的下降等有关。笔者在前期研究中发 现，针刺下 关 穴 可 使 颅 内 血 管 扩 张［3］。 因 此，本 研 究采用犬的蛛网膜下腔出血模型探讨电针下关穴对 脑血管痉挛的作用机制，现报告如下。
［基金项目］ 国家中医药管理局秦亮甫名老中医工作室建 设项目； 上海市卫生局中医基金资助项目（ 2008J008A） ［作者简介］ 丁忱欢，女，医师，主要从事脑缺血性疾病的临 床与基础研究。 ［通讯作者］ 李鹤，副主任医师。 E-mail： lihe1972@ hotmail． com
Inc） ； 狗 ET-1 酶 联 免 疫 吸 附 试 剂 盒，Adlitteram Diagnostic Laboratories Inc； 狗 一 氧 化 氮 合 成 酶 （ NOS） 酶 联 免 疫 吸 附 试 剂 盒，Adlitteram Diagnostic Laboratories Inc； 包埋剂，Leica 公司； 乙酸钠、柠檬酸 钠、硝酸银、硫酸铜，上海化学试剂有限公司； 铁氰化 钾，上海文旻生化科技有限公司； 硫化铵，上海市四 赫维化工有限公司； 乙醇，上海振兴化工一厂； 碘化 乙酰硫代胆碱，Sigma 公司； TS 100 型光学显微镜， Nikon 公司； CM3050S 型冷冻切片机，Leica 公司； 各 种 微 量 取 样 器，EPPENDORF 公 司； 8453 型 UVvisible Spectroscopy System，Agilent 公司； MDF-U52V 型超低温冰箱，SANYO 公司； 5417R 型冷冻离心机， Eppendorf 公 司； 荧 光 倒 置 显 微 镜 IX51，OLYMPUS 公司； 680 型酶标仪，RIO-RAD 公司。 1． 2 动物造模及处理 下关穴组及对照组犬采用 枕 大 池 二 次 注 血 法 造 模［4］，速 眠 新 Ⅱ 注 射 液 （ 0． 08 ml / kg） 肌肉注射麻醉，保留自主呼吸。麻醉 成功后，动物左侧卧位于 DSA 诊断台上，用 3% 碘伏 消毒枕项及腹股沟部，于 DSA 透视下以 9 号腰椎穿 刺针，与脊柱呈 10° ～ 20° 角，沿枕大孔后缘斜刺入 约1 ～ 1． 5 cm，有明显突破感后拔出针芯，见清亮的 脑 脊 液 流 出，继 从 犬 股 动 脉 取 新 鲜 自 体 血 （ 0． 5 m1 / kg，无抗凝剂） ，以 l ml /3 s 速度注入枕大 池，使其保持头低位 30° ～ 45°约 30 min，以使血液在 脑底动脉周围充分弥散和沉积； 48 h 后重复上述操 作，再次注新鲜自体血入枕大池。正常组动物按上 述同样方法将自体脑脊液 （ 0． 5 m1 / kg） 注 入 枕 大 池，方法同上。下关穴组犬于手术显微镜下暴露下 关穴，植入 针 状 刺 激 电 极，使 针 电 极 接 触 蝶 腭 神 经 节； 采用脉冲方波极性交替的方法刺激： 电流 0． 8 ～ 16 mA，可调电压 6 V，间隔 90 s，180 s，270 s 予以重
1 材料与方法
1． 1 实验材料 1． 1． 1 动物与分组 成年雄性 Beagle 犬 20 只，体 质量 15 ～ 17 kg，于上海中医药大学实验动物中心分 笼饲养 3 d，无异常后用于实验。将犬随机分为正常 组（ 6 只） 、针刺下关穴组（ 下关穴组，8 只） 、假针刺 组（ 对照组，6 只） 。 1． 1． 2 试剂和仪器 狗乙酰胆碱酯酶（ AchE） 酶联 免疫吸 附 试 剂 盒 （ Adlitteram Diagnostic Laboratories
上海中医药大学学报 第 26 卷 第 4 期 2012 年 7 月
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电针下关穴改善犬迟发性脑血管痉挛的机制研究
丁忱欢 葛健伟 李 鹤
上海交通大学医学院附属仁济医院中医科 （ 上海 200127）
【摘 要】 目的：探讨电针下关穴改善迟发性脑血管痉挛的作用机制。方法：将 20 只成年 Beagle 犬随机 分为正常组（ 6 只） 、下关穴组（ 8 只） 、对照组（ 6 只） 。采用枕大池二次注血法制作蛛网膜下腔出血后脑血 管痉挛模型。正常组不予干预，下关穴组于左侧下关穴植入电极并电刺激，对照组于皮下植入电极但不予 电刺激。14 d 后处死动物，观察各组犬大脑中动脉、基底动脉、蝶腭神经节乙酰胆碱酯酶（ AchE） 及一氧化 氮类（ NOS） 神经元的变化，及脑脊液 AchE、内皮素、NOS 水平变化。结果：下关穴组蝶腭神经节、大脑中动 脉 NOS、AchE 神经元分布密度较正常组和对照组增加。与正常组和对照组比较，下关穴组犬脑脊液 AchE 水平下降（ P ＜ 0． 05） ，而 NOS 水平上升（ P ＜ 0． 01） ； 3 组犬脑脊液 ET-1 水平比较无显著差异（ P ＞ 0． 05） 。 结论：电针下关穴可兴奋神经节内乙酰胆碱及一氧化氮类神经元及调节脑脊液中 NOS、AchE 水平以改善脑 血管痉挛。 【关键词】 蛛网膜下腔出血； 脑血管痉挛； 电针疗法； 下关穴； Beagle 犬 【中图分类号】 R256； R743 【文献标志码】A 【文章编号】1008-861X（ 2012） 04-0095-03
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ACTA UNIVERSITATIS TRADITIONIS MEDICALIS SINENSIS PHARMACOLOGIAEQUE SHANGHAI Vol． 26 No． 4 Jul．，2012