抗生素残留量检查法标准操作规程
抗生素类兽药残留检测技术
抗生素类兽药残留检测技术
1．技术简介
抗生素是微生物在代谢过程中的一种对其他微生物具有杀灭或抑制作用的次级代谢产物。抗生素的发现使人类掌握了治疗感染性疾病的有力武器，抗生素在兽医和畜牧业生产中均有大量应用，临床诊断用于呼吸系统、消化系统和生殖系统感染的治疗，大部分抗生素作为兽药添加剂用于动物疾病预防、降低死亡率和促生长。但抗生素存在耐药性、过敏和稳定性等问题，对人有毒害作用，因此是各国兽药残留监控的重要内容。
浓度（mg/kg） 变异系数CV（%）
≤1 35
1~10 30
10~100 20
≥100 5
b．准确度：指测定值与真实值的接近程度，通常采用添加回收率来表示。定量方法的回收率范围应为79~110%，平均回收率80%以上。以下数据可供参考：
2．应用条件
抗生素残留检测属复杂的痕量组分分析技术，多数残留水平为1ug/Kg~1mg/Kg，对检测条件及仪器设备要求都极高，从事此项工作的机构一般都配有气相色谱、液相色谱、质谱以及灵敏度更高的多级质谱，这些仪器的价格都非常昂贵。实验室环境要好，避免与外界环境间的交叉污染。检验人员要有较高的素质，有深厚的现代化学背景知识，实验技能强，具有分析问题和解决问题的能力。这些都是从事检测工作所必需的。
c．检测限（LOD）与定量限（LOQ）：
一般要求：LOD≤0.1MRL（最大残留限量）
LOQ≤0.2MRL
d．线性范围
e．选择性
抗生素种类很多，目前发现的有上千种，常见的抗生素主要包括以下几大类：
（1）β-内酰胺类：包括青霉素类、头孢氨苄（先锋霉素IV）、头孢、庆大霉素、新霉素、壮观霉素等。
3．操作规程
蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法(一)
蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法（一）1 范围本标准规定了蜂王浆中四环素类抗生素残留的发射受体分析(Charm Ⅱ)办法。
本标准适用于蜂王浆中、、、强力霉素抗生素残留总量的测定。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不行少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括全部的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析试验室用水规格和实验办法 3 办法提要发射受体分析(Charm Ⅱ)办法的基础是药物功能团与微生物受体位点的结合反应，这些位点与某一类种抗生素的共有功能团相关。
应用受体的这种特异性可以实现对某一类抗生素的多残留分析。
本办法中，样品中残留的四环素类药物经提取、稀释后与[3H]标志的金霉素共同竞争结合特异的受体位点。
在一定温度下反应后，离心分别，清除未结合的四环素类药物，最后加人闪耀液，测定[3H]衰变发出的β粒子发射性量值，计数cpm(count per minute)。
测得的cpm值与样品中四环素类抗生素残留量成反比。
4 试剂和材料除另有解释外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 四环素类检测试剂盒： 4.1.1 组织阴性对比浓缩干粉：组织阴性对比浓缩干粉储存于2℃～6℃。
4.1.2 MSU多抗标准品浓缩干粉：浓缩干粉储存于2℃～6℃。
4.1.3 组织萃取缓冲溶液(MSU萃取缓冲溶液)干粉：储存于2℃～6℃。
4.1.4 M2缓冲溶液干粉：用于调整pH值，储存于2℃～6℃。
4.1.5 四环素类受体药片：白色，-15℃以下的条件保存。
4.1.6 四环素类氚标志药片：橙色，-15℃以下的条件保存。
4.2 组织阴性对比溶液：用法时取组织阴性对比浓缩干粉(4.1.1)按试剂盒解释书配制成阴性对比溶液。
配制好的溶液可在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存48 h。
如长时光不用，可将溶液保存于-15℃以下的冰箱中，用法时将其解冻。
SOP-QC--00 盐酸克林霉素残留限度检验测定标准操作规程
目 的：建立盐酸克林霉素残留限度的检验标准操作规程。
范 围：适用于盐酸克林霉素残留限度检验的标准操作。
职 责：QC 负责盐酸克林霉素残留限度的检验。
内 容：1 测定内容1.1 仪器与用具高效液相色谱仪、量筒、容量瓶。
1.2 试剂与试药盐酸克林霉素对照品、色谱甲醇、磷酸氢二铵、磷酸。
1.3 操作方法色谱条件与系统适用性试验 用十八基键合硅胶为填充剂，以磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵2.88g ，加水溶解并稀释成1000ml ，用80%磷酸溶液调节pH 至3.0）-甲醇（210：300）为流动相；检测波长214nm ，流速为1ml/min ；理论板数按克林霉素峰计算应不低于1300，按外标法以峰面积计算含量。
对照品溶液的制备 取盐酸克林霉素对照品适量，加流动相溶解使制成含克林霉素为5μg/ml 的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 取设备清洁水（或取已清洁后擦拭过的棉球加入5ml 流动相超声5mim ），作为供试品溶液。
测定法 精密量取供试品溶液和对照品溶液各20µl ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。
1.4 结果判定 盐酸克林霉素残留限度检验标准操作规程文件编码：SOP －QC －版本号：00 制订人：制订日期： 会稿人：审核人：审核日期： 批准人：批准日期： 起草部门：质量控制部颁发部门：质量保证部 生效日期： 复印份数 共 份 受控号： 分发部门 □质量保证部、□质量控制部、□人力行政部、□设备工程部、□物控部、□仓储、□研发部、□生产技术部、□固体车间、□口服液车间、□洗剂车间、□提取车间、□冻干粉针车间、□生化提取车间淋洗法含克林霉素≤6.09μg/ml、擦拭法含克林霉素≤8.05 μg/ml（以具体设备清洁验证方案要求为准），则符合规定。
2 相关记录2.1盐酸克林霉素残留限度检验记录3 变更明细表序号章节变更内容变更日期变更编号现版本号。
畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法
畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法1主题内容与适用范围本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。
本标准适用于各种畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。
最低检出浓度为:0.15，0.20，0.65mg/kg。
2原理样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分别，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。
标准加法定量。
3试剂3.1乙腈(分析纯)。
3.20.01mol/L磷酸二氢钠溶液:称取1.56g(±0.01g)磷酸二氢钠(NaH2PH4·2H2O)溶于蒸馏水中，定容到100mL，经微孔滤膜(0.45μm)过滤，备用。
3.3土霉素(OTC)标准溶液:称取土每素0.0100g(±0.0001g)，用0.1mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素1mg。
3.4四环素(TC)标准溶液:称取四环素0.0100g(±0.001g)，用0.01mol/l盐酸溶液溶解并定容10.00mL，此溶液每毫升含四环素1mg。
3.5金霉素(CTC)标准溶液:称取金霉素0.0100g(±0.0001g)，溶于蒸馏水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。
以上标准品均按1000单位/mg折算。
3.3～3.5溶液应于4℃以下保存，可使用1周。
3.6混合标准溶液:取3.3、3.4标准溶液各1.00mL，取3.5标准溶液2.00mL，置于10mL 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。
此溶液每毫升含土霉素、四环素各0.1mg，金霉素0.2mg，临时现配。
3.75%高氯酸溶液。
4仪器4.1高效液相色谱仪(HPLC):具紫外检测器。
5色谱条件5.1柱:ODS-C18(45μm)6.2mm×15cm。
5.2检测波长:355nm。
5.3灵敏度:0.002AUFS。
5.4柱温:室温。
5.5流速:1.0mL/min。
5.6进样量:10μL。
全国临床检验操作规程第四版抗生素残留标准(一)
全国临床检验操作规程第四版抗生素残留标准(一)
全国临床检验操作规程第四版抗生素残留标准
引言
•全国临床检验操作规程第四版抗生素残留标准是临床实验室必须遵循的规范。
•本文将介绍该操作规程的背景、目的和实施要求。
背景
•抗生素广泛应用于临床治疗，但合理用药的重要性也逐渐受到重视。
•抗生素残留的存在会对患者的健康产生潜在威胁。
•制定全国临床检验操作规程第四版抗生素残留标准旨在规范临床实验室的操作流程，保障患者用药安全。
目的
•确保临床实验室准确、快速地检测抗生素残留。
•提高实验室人员的专业水平和操作技能，减少操作误差。
•保证抗生素残留检测结果的准确性和可靠性，以指导临床合理用药。
实施要求
•实验室人员必须经过专业培训，并具备相应资质。
•实验室必须配备先进的检测设备和仪器。
•操作过程中要注意标本采集、样品储存和标准曲线的建立。
•严格遵循操作规程进行样品处理、抗生素残留检测和质量控制等操作。
•结果分析和报告必须符合相关要求，且及时准确。
结论
•全国临床检验操作规程第四版抗生素残留标准的制定将提高抗生素残留检测的质量和效率。
•实施该操作规程有助于保证患者用药的安全性，并提高临床治疗的质量。
抗生素检测方法
抗生素检测方法
1、取100ml样品（称取62.5g乳粉定溶至500ml，溶解，从中取100ml 样品）于250ml三角烧瓶内,记录样品号。
2、加热杀菌
将样品放在电炉上加热煮沸1分钟。
3、冷却、接种
用硅胶塞封口，置于冷水浴中（注意不要使奶液流动触及封口塞），使奶温降至43℃，用天平称取3g发酵菌种(预制)加入盛有奶样的三角瓶内。
摇动三角瓶，使发酵菌种与奶液混合均匀。
4、恒温发酵
将该批奶样置于已恒温至43℃的培养箱中进行发酵。
5、观察
恒温培养3小时后即可观察奶样。
取出样品，摇动三角烧瓶，观察凝固状态，并测定滴定酸度。
如酸度≥50。
T，则表明样品质量良好，抗生素阴性；如酸度＜50。
T，表明原料奶中有抗生素残留，抗生素阳性。
家禽肉中残留抗生素的定量检测
家禽肉中残留抗生素的定量检测一、引言家禽被广泛地饲养于人工环境中，肉品提供者（如养户等）常用抗生素预防或治疗身体不适，这就导致许多家禽肉中残留了抗生素。
因此，定量检测家禽肉中残留抗生素就变得非常必要。
二、抗生素残留检测方法常用的抗生素残留检测方法有微生物学法、物理化学法及免疫学法。
其中，微生物学法是基于杀菌剂能影响微生物生长的原理，常用的有生物成分法、纸片扩散法和碟片扩散法。
物理化学法是主要基于色谱分析和光学方法，如高效液相色谱法和三维荧光光谱法。
免疫学法是利用特异性抗体对目标物质进行检测，火灾快速检测方法就是这一类的方法。
三、抗生素残留检测的原理抗生素检测的原理主要基于化学分析，通过化学方法将样品中的目标分子提取出来，然后使用比例色谱法分离目标分子，测量目标分子的含量，从而得到答案。
另外，检测一般还会通过人工复核，以确保结果的准确性。
四、流行抗生素残留标准我国《食品安全国家标准：家禽肉中药物残留限量》中规定，家禽肉中常用的氨基糖苷类、头孢菌素、氟喹诺酮类等抗生素的残留限量。
家禽肉中药物残留超标已被认为是威胁食品安全的一种因素，因此各种法律和规章制度都严格限制了抗生素的使用和监管。
五、抗生素残留问题的解决为了更好地保障食品安全，解决食品安全问题，我们需要采取如下措施：1. 防止抗生素滥用。
2. 严格监管养户、饲养的生产过程，以减少抗生素的使用。
3. 使用替代性方法来预防疾病，如光照和化学预防等。
六、结论抗生素残留带来的问题在食品安全中占有重要地位，我们有责任保障人们的健康，改善消费者的生活质量。
需要从源头上预防问题的发生，加强监管力度，掌握科学的消化技术，推广科学养殖方式，加强企业社会责任和监督执法力度，在食品安全方面不遗余力，确保国民的健康。
牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量测定步骤
牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量测定步骤(1)液相色谱测定条件色谱柱： Kromasil 100-5C18，5 μm，150 mm×4.6 mm(内径)或相当者；流淌相： 0.01 mol/L溶液-～(77+18+5，v/v/v)；流速： 1.0 mL/min；柱温： 40℃；检测波长： 350 nm；进样量：60 μL。
(2)液相色谱测定将混合标准工作溶液分离进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品举行定量，样品溶液中、、、的响应值均应在仪器测定的线性范围内。
在上述色谱条件下，土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的参考保留时光分离为3.09 min、3.73 min、8.27 min和12.53 min。
土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图见图12-11。
图12-11 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图12.2.5.7 分析条件的挑选 (1)提取条件的挑选四环素类抗生素分子含有若干亲水的羟基，易溶于水和较低级的伯醇类，在中性和酸性溶液中较稳定。
在pH 3～8的范围内离子化，在pH3左右以阳离子形式存在，在pH 7.5以上时以阴离子形式存在。
可与二价、三价金属离子阳离子螯合。
牛奶中含有丰盛的蛋白质和钙，影响四环素抗生素的提取。
采纳了20%、-亚铁氢化钾体系、乙腈等作为蛋白沉淀剂，虽然蛋白沉淀效果较好，但回收率均较低。
用pH 4.0的Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取，并在较低温度下离心，可以起到沉淀蛋白的作用，并掩蔽二价阳离子Ca2+和Mg2+的干扰，可以获得较为惬意的回收率，因此选用pH 4.0的Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液为提取液。
(2)净化条件的优化在试验中，对照了WCX、Oasis HLB单-固相萃取柱和Oasis HLB固相萃取柱加羧酸型阳离子交换柱双柱合用的效果。
试验发觉，WCX柱净化效果不好且回收率低。
抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法
批准：
PH4.5、6.0及8.0磷酸缓冲液要用时才配制，如要保存要在121℃高压杀菌15分钟后密封保存。但如有混浊或有沉淀物时不可使用。
4.试验菌的保存
用普通的细菌斜面培养基30℃培养18小时后确认试验菌在斜面全体上发育后密封冷藏（0-4℃）保存。下代移植每隔一个月至一个半月执行。
三、测定步骤
注：芽孢要染色显微镜观察确定芽孢达到80％以上才可。如果芽孢形成率达不到要求再培养数日即可，但如果培养10天以上，芽孢形成率还达
不到的话，试验菌可能变异，该试验菌不可使用。菌悬液冷藏（0-4℃）保存。
2.检定平板的制备在测定前，需进行预测试，以求得菌悬液最佳使用量。ATCC6633枯草芽孢杆菌的检定用平板，加0.1 mg/L（ppm）的标准工作液后,用30℃培养18小时后产生的抑制圈清晰、完整直径为12±1mm的菌悬液量为最佳。ATCC11778蕈状芽孢杆菌的检定用平板，加0.1 mg/L（ppm）的标准工作液后,用30℃培养18小时后产生的抑制圈清晰、完整直径为12±1mm的菌悬液量为最佳。
菌种
培养基
ATCC9341
AM5
ATCC6633
AM5
ATCC11778
AM8
注：尽可能在无菌环境中倾倒平板，打开盖放置于水平台面上冷却1-2分钟后再盖上以减少冷凝水。未用完的平板密封后置4-8℃，可保存2-3天。
4.样品检定
在制备好的检定用平板的底部作好标记，用灭菌镊子将检测用滤纸片浸入提取液，吸足提取液后，放置在制备好的琼脂平板上（也可先将纸片放置于平板上用加液器在每片滤纸上滴加90-100μL提取液），用镊子轻压使其
5001——10000 9 3
10001——15000 12 4
15001——25000 15 5
动物源食品中大环内酯类抗生素残留检测—科标检测
动物源食品中大环内酯类抗生素残留——科标检测检测方法：微生物抑制法，适用于肉类、水产品、动物内脏、鸡蛋和牛奶中大环内酯类兽药筛选检测，阳性结果应用其他法进行确证。
青岛科标检测为您提供抗生素残留检测，以下介绍的是标准SN / T 1777.3-2008的方法。
1、试样制备和保存1.1 试样制备1.1.1 牛奶：取不少于500ｍＬ试样，装入清洁容器内，进行标记。
1.1.2 肉类、水产品、动物内脏：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于500ｇ试样。
装入清洁容器内，进行标记。
1.1.3 蛋：从原始样品中，随机分出一半（不少于500ｇ），鲜蛋需去壳，进行标记。
注：制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
1.2 试样保存1.2.1 牛奶：0℃～4℃保存。
1.2.2 肉类、水产品、动物内脏和蛋：试样于－18℃以下保存。
2、测定方法2.1 方法提要试样经压榨得到样液，样液加到含有一定数量的嗜热脂肪芽孢杆菌培养基中，64℃培养3ｈ～4ｈ。
利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有抗生素。
2.2 设备和材料2.2.1 恒温箱：64℃±１℃。
2.2.2 离心机。
2.2.3 高速组织捣碎机。
2.2.4 均质器。
2.2.5 恒温水浴锅：８０℃。
2.2.6 涡旋振荡器。
2.2.7 肉类榨汁器。
2.2.8 克氏瓶。
2.2.9 安瓿。
2.2.10 可调移液器：１０μＬ～１００μＬ，１００μＬ～１０００μＬ。
2.3 菌种和培养基2.3.1 菌种2.3.1.1 嗜热脂肪芽孢杆菌2.3.2 培养基2.3.2.1 细菌保存及传代培养基：见附录Ａ第Ａ.１章。
2.3.2.2 增菌固体培养基：见附录Ａ第Ａ.2章。
2.3.2.3 检定培养基：见附录Ａ第Ａ.3章。
2.4 试剂本标准所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水、去离子水，试验用水应符合ＧＢ／Ｔ6682的规定。
抗生素微生物检定标准操作规程完整
抗生素微生物检定标准操作规程1 简述抗生素微生物检定法系在适宜条件下，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
依试验设计原理不同，可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。
后二者被列为抗生素微生物检定的国际通用方法。
中国药典也采用这两种方法。
抗生素微生物检定管碟测定法系琼脂扩散法，是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
此法系根据抗生素在一定浓度围，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
抗生素微生物比浊法是将一定量的抗生素加至接种有试验菌的液体培养基，混均后，经培养，测量培养基浊度。
此法系根据抗生素在一定的浓度围，其浓度或浓度的数学转换值与试验菌生长产生的浊度（浊度与细菌群体质量及细菌细胞容积的增加之间存在直接关系）之间存在线性关系而设计，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，计算出供试品的效价。
抗生素效价以“单位（u）”或“微克（µg）”表示。
抗生素管碟测定法2 仪器与用具2.1 操作室光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。
半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化（空气净化级别为100级～10，000级）及空调设备，控制室温在20～25℃之间，达到无菌或半无菌状态。
操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。
注意操作，避免室抗生素污染。
2.2 双碟径约90mm，高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。
碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一白纸，碟加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。
用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后，置清洗液中浸泡过夜，冲洗，沥干，至150℃～160℃干热灭菌2小时或高压121℃蒸气灭菌30分钟，备用。
乳制品中抗生素残留检测方法
疾病 ， 造 成乳 及 乳制 品 中抗 生素 残 留 ， 给 消 费者健 康
带来 了潜在 威胁 。因而 提 高抗生 素 残 留的检 测技 术 显得 尤 其重 要 ， 尽快 开发 或 引进 先 进 的抗 生 素 检 测 技术 以解 决 我 国 当前 乳 和乳 制 品行 业面 临 的难题 已 成 为 当务之 急 。
验， 是我 国食 品卫生 标 准 （ Ｇ Ｉ Ｍ６ ８ ９ ． ２ ７ —９ ４ ） 中规 定 的 检测 牛奶 中抗生 素残 留 的检 测法 其 测定 原 理基 于 抗 生素对微 生 物 的抑 制作 用 。方 法为 ： 检样 中 ， 加入 嗜热乳酸链 球菌经培 育 ２ ． ５ ～３ ｈ后 ， 加入 Ｔ Ｔ Ｃ指示
色 的为 阳性 ， 呈 红色 为 阴性 。
中存在 着诸 多 的 问题 ， 其 中 乳 制 品 中抗 生 素 的残 留
现 象不 容乐 观 ， 从调查数据显示 ， 残 留现 状 严 重 ， 严
重 威 胁着 人们 的健 康 ， 必 须尽 快解 决 。
ＴＴ Ｃ法测 定 各 种 抗 生 素 的 灵 敏 度 为 ： 青 霉 素 ０ ． ０ ０ ４ Ｉ Ｕ， 链霉素 ０ ． ５ Ｉ Ｕ， 庆 大霉 素 ０ ． ４ Ｉ Ｕ， 卡那霉
素 ５ Ｉ Ｕ。 ３ ． １ ． ２ 戴 尔沃检 测（ Ｄ ｅ ｌ ｖ ｏ ｔ ｅ ｓ ｔ Ｓ Ｐ ） 法 其试 剂是 由
２ 抗 生 素 残 留 的来 源
乳和乳 制品 中抗 生 素残 留 的来源 要 追 寻到 原 料 生 产及 其 流 通 过 程 。首 先 ， 使 用抗 生 素 防 治 动 物 疫 病 。对泌乳 期奶 牛用药不 当或不 注意 安全 时间 ， 是 造 成 牛奶 中抗 生素残 留 的重要 因素 。其 次 ， 饲养 户将 抗
动物组织中磺胺类抗生素残留量检测方法(二)
动物组织中磺胺类抗生素残留量检测方法（二）3.4.1 控制液的配制 3.4.1.1 阴性控制液的配制：取2 mL组织阴性对比溶液(3.2.2.1)，加入到6 mL MSU提取缓冲溶液(3.2.2.3)中制成阴性基准液，在室温下混合匀称，该基准液可在室温下放置不超过6h。
用于分析仪和试剂的性能监测。
3.4.1.2 阳性控制液的配制：取0.3mL 抗生素标准溶液(3.2.2.2)，加6 mL组织阴性对比溶液(3.2.2.1)，混匀后从中取2 mL溶液加入到6 mL MSU提取缓冲溶液(3.2.2.3)中制成阳性基准液，在室温下混合匀称，该基准液可在室温下放置不超过6h。
用于分析仪性能监测和阳性确认。
3.4.2 提取称取试样约10g(精确到0.1g)于50 mL离心管中，加入30 mL MSU提取缓冲液(3.2.2.3)。
于高速组织捣碎匀质器中匀质30s～60s。
然后将离心管放置在80℃±2℃的电热恒温器中，保温30 min后，将管取出放置在冰水浴中冷却10 min；于3300 r/min下离心10 min，倒出上清液，注重除去浮在表层的脂肪粒。
用M2缓冲液(3.2.2.3)或0.1mol/L调整提取液pH，每次加入300 uL M2缓冲液或0.1 mol/L盐酸直至pH达到7.5左右。
须要时取适量上清液用等体积举行脱脂。
提取液复原到室温后立刻举行受体分析。
3.4.3 测定 3.4.3.1 将一磺胺受体试剂(3.2.2.4)加入到硅硼酸盐玻璃试管中，用微量移液器加入300 uL水，置于旋涡振荡器上混匀10 s 将试剂溶解。
3.4.3.2 加入 4 mL 样品提取液(3.4.2)或阴性控制液(3.4.1.1)或阳性控制液(3.4.1.2)分离用于测试样本、阴性对比和阳性对比。
3.4.3.3 将一磺胺氘标志物试剂(3.2.2.5)加入试管，混合15 s，65℃±1℃温育3 min。
动物源性食品中抗生素类药物残留检测方法(二)
动物源性食品中抗生素类药物残留检测方法（二）4.5.1 样液提取称取10 g均质好的试样于50 mL离心管中，加入-丙酮缓冲液20 mL，用涡旋振荡器充分振荡3 min，于70℃～75℃水浴保温20 min后，2000g离心15 min取上清液作为样液。
4.5.2 菌悬液的制备 4.5.2.1 ATCC9341菌悬液：将复活的菌种接种于盛有增菌用固体培养基的克氏瓶中，30℃培养18h～24 h后，用灭菌生理盐水洗下菌苔，制成菌悬液。
置29℃～8℃冰箱保存，储藏期15 d。
4.5.2.2 ATCC6633和蜡样芽胞杆菌ATCC11778菌悬液：将复活的菌种分离接种于盛有增菌用固体培养基的克氏瓶中，30℃培养7d，镜检芽胞数达80％以上(假如达不到，可再培养数日，如培养10 d以上，芽胞数仍达不到要求，菌种可能变异，不行用法)，用灭菌生理盐水洗下菌苔，使其悬浮于生理盐水中，65℃水浴加热30 min，经2000g离心20 min，弃去上清液，如此重复洗涤芽胞两次。
然后用适量灭菌生理盐水制成菌悬液。
置2℃～8℃冰箱保存，储藏期30 d。
4.5.3 检定用平板的制备 4.5.3.1 ATCC9341平板每批菌悬液按下法测定其最相宜用量：把不同浓度藤黄微球菌ATCC9341菌悬液加入AM5培养基中，30℃培养18 h后，使0.025 ug/mL标准工作液可产生14 mm±1 mm清楚、完整的抑菌圈。
无菌吸取1 mL相宜浓度的菌悬液加到100 mL融化后冷却至50℃左右的灭菌AM5中充分混匀后，取8 mL注入灭菌平皿内，保持水平使其凝固。
制备好的平板置2℃～8℃冰箱保存，储藏期2d～3d。
4.5.3.2 ATCC6633平板每批菌悬液按下法测定其最相宜用量：把不同浓度枯草芽胞杆菌ATCC6633菌悬液加入AM5培养基中，30℃培养18 h后，使0.5 ug/mL标准工作液可产生14 mm±1 mm清楚、完整的抑菌圈。
抗生素残留检测仪安全操作及保养规程
抗生素残留检测仪安全操作及保养规程前言抗生素残留检测仪是一种用于检测食品中抗生素残留的仪器，广泛应用在食品安全领域中。
为保证抗生素残留检测仪的正常运行和检测结果的准确性，需要掌握其安全操作和保养规程。
安全操作电源和电源线使用抗生素残留检测仪需要用到电源，使用时需要特别注意以下几点：1.电源线应接到地线插座上，且接触牢固；2.电源线不要与其他线路穿在一起；3.电源线不能被潮湿、接触到油、脂肪、酸碱物品等物质。
仪器使用在使用抗生素残留检测仪时，需要注意以下几点：1.在使用前需要仔细阅读说明书，了解每个按钮的作用并知晓使用方法；2.工作时不要触碰仪器内部以及仪器上的元器件和接线，以免触电，特别是不要在长时间使用仪器后，使用手摸测量仪器主板等电子元件，造成触电风险；3.在开机前，应检查样品夹和检测探测器是否安装牢固，防止在检测过程中出现故障；4.维护好仪器的环境和通风，尤其是不要与有害气体材料放在同一房间；5.仪器放置平稳，避免因震动等外力造成损坏。
样品采集和处理在样品采集和处理阶段，也需要格外注意以下几点：1.样品采集应按照食品安全要求进行，防止污染；2.在处理样品的过程中，防止对仪器造成化学腐蚀性物质直接喷洒、溅落至仪器上，导致设备损坏或误差；3.禁止使用过期样品、变质样品等不合格食品进行测试，以免检测结果影响误判导致假阳性或假阴性。
保养规程保养抗生素残留检测仪是确保其正常长期运行的一个关键，以下是几种基本的保养规程：通风仪器通风是保证仪器正常运行和延长使用寿命的关键。
平常使用时应确保其周围的通风情况良好，避免阳光直射或长时间处于低温环境下。
日常清洁定期清洁抗生素残留检测仪外观以及内部的探测器、样品夹等部件，保证仪器外壳、连接器、样品夹、探测器等部分无油污、污渍及其他杂质。
保持干燥抗生素残留检测仪的运行环境应该保持一定的干燥，要避免仪器内部出现水蒸气等现象。
对此，应保证工作室的内部相对湿度在50%以下。
鲜乳中抗生素残留量测定原理
鲜乳中抗生素残留量测定原理
鲜乳中抗生素残留量的测定原理通常包括以下几个步骤：
1. 样品准备：将所要测定的鲜乳样品进行处理，如离心、滤过等，得到样品提取液。
2. 抗生素提取：将样品提取液与适量的有机溶剂进行混合，如氯仿、乙酸乙酯等，利用有机溶剂提取抗生素。
3. 清洗和富集：通过液-液分配、固相萃取等方法，对抗生素进行清洗和富集，以提高测定的灵敏度。
4. 色谱分离：将清洗和富集后的抗生素样品通过色谱柱进行分离。
常用的色谱技术包括高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）等。
5. 检测和定量：通过检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）对分离的抗生素进行检测和定量。
通常采用内标法或外标法进行定量分析。
6. 数据处理：通过对测定结果进行数据处理和分析，得到鲜乳中抗生素残留量的浓度。
需要注意的是，这只是一般测定原理，具体的测定方法和步骤可能会因不同的抗生素和分析要求而有所差异。
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抗生素残留量检查法标准操作规程
目录
1 目的 (2)
2 范围 (2)
3 职责 (2)
4 依据 (2)
5 定义 (2)
6 内容 (2)
6.1 说明............................................................................................... 错误！未定义书签。
6.2 原理 (2)
6.3 实验材料 (2)
6.4 操作步骤 (3)
6.5 判定标准 (3)
6.6 注意事项 (4)
7 相关文件 (4)
8 附件 (4)
9 变更历史记录 (4)
1目的
1.1本规程规范了抗生素残留量检查法的操作过程。
2范围
2.1本规程适用于供试品中氨苄西林的残留量检查。
3职责
3.1质量检验人员：应严格执行本规程的规定。
3.2质量保证人员：负责对本程序的执行进行监督、检查。
4依据
4.1《中国药典》2010年版三部，附录ⅨA，“抗生素残留量检查法”P59~P60。
5定义
N/A
6内容
6.1原理
6.1.1抗生素残留量检查法是依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用，比较对照品
与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小，检查供试品中抗生素的残留量。
6.2实验材料
6.2.1仪器
6.2.1.1生物安全柜
6.2.1.2恒温培养箱
6.2.1.3恒温水浴锅
6.2.1.4游标卡尺
6.2.2器具
6.2.2.1牛津杯规格：内径6mm、外径8mm、高10mm 6.2.2.2玻璃平皿规格：直径约90mm
6.2.2.3试管及硅胶塞规格：18×180mm
6.2.2.4吸管规格：10ml
6.2.3标准物质
6.2.3.1取氨苄西林对照品适量，用0.01mol/L的盐酸溶解，并稀释成每1ml中含氨苄西林
10mg的溶液，作为氨苄西林对照品储备液，200ul/支无菌分装，-20℃保存，备用。
6.2.4试剂、试液
6.2.4.1磷酸盐缓冲液（pH6.0）
●称取磷酸二氢钾8.0g、磷酸氢二钾2.0g，加水溶解并稀释至1000ml，经121℃灭菌
30分钟。
6.2.4.2抗生素II号培养基：
●称取蛋白胨6g、牛肉提取粉1.5g、酵母浸出粉6g，加入适量水溶解后，加入琼脂13～
14g，加热使之溶胀，滤过除去不溶物，加入葡萄糖1g，溶解后加水至1000ml，调节pH值使灭菌后为6.5～6.6；分装于玻璃管或锥形瓶中，经115℃灭菌30min，4℃保存。
6.2.4.30.01mol/L盐酸溶液：
●取9ml浓盐酸，加纯化水至1000ml，混匀即得0.1mol/L的盐酸溶液，临用前取10ml
加纯化水稀释至100ml，混匀即得。
6.2.5实验菌种：
6.2.5.1金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕
6.3操作步骤
6.3.1对照品溶液的制备
6.3.1.1取氨苄西林对照品储备液1支，用磷酸盐缓冲液稀释成每1ml中含1.0ug的溶液。
6.3.2菌悬液的制备
6.3.2.1取金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，35℃~37℃培养
20~22小时。
临用前，用适量的灭菌水将菌苔洗下，备用。
6.3.3底层培养基制备
6.3.3.1取直径约90mm的培养皿，注入已融化的抗生素Ⅱ号培养基约15~20ml，使在平皿内
均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层（临用前制备）。
6.3.4菌层制备
6.3.4.1取抗生素Ⅱ号培养基10~15ml置于1支50℃水浴预热的试管中，加入适量浓度的菌
悬液300μl，混匀，注入已铺好底层的培养皿中，放置水平台上，冷却。
6.3.5加样
6.3.5.1在培养皿上等距离均匀放置牛津杯，向牛津杯中依次加入供试品溶液、阴性对照溶液
（磷酸盐缓冲液）及对照品溶液。
各200μl，将加好样的培养皿置37℃培养18~22小时。
6.4判定标准
6.4.1实验成立判断标准
6.4.1.1对照品溶液应有抑菌圈，阴性对照溶液应无抑菌圈，否则判定实验无效。
6.4.2供试品检测结果判断标准
6.4.2.1供试品溶液不应有抑菌圈出现，否则判定为不符合规定。
6.5注意事项
6.5.1本实验应在无菌条件下进行，在生物安全柜内操作，使用的玻璃仪器、牛津杯等应无
菌。
6.5.2供试品溶液一般指待测原液自身，除另有规定外，不作其它处理。
7相关文件
名称编码
8附件
附件附件名称附件编码版本号
9变更历史记录
文件编码生效日期版本号变更原因
变更内容提要：
抗生素（氨苄西林）残留量检查记录品名
批号/编号请验日期
规格请验部门
检验日期检验依据
1实验材料
1.1仪器与用具
名称型号设备编号
1.2标准物质
名称来源规格/含量批号/编号
1.3试药与试液
名称来源批号
1.4实验菌种
名称编号代数
2操作步骤
2.1对照品溶液的处理
2.2菌悬液的制备
2.2.1取金黄色葡萄球菌琼脂斜面培养物，用ml 灭菌水将菌苔洗下，备用。
2.3底层的制备
2.3.1取直径90mm培养皿，注入融化的抗生素Ⅱ号培养基15~20ml，使在平皿内均匀摊布，放置水平台
上使凝固，作为底层。
2.4菌层的制备
2.4.1取10~15ml抗生素Ⅱ号培养基置于1支50℃水浴预热的试管中，加入适量浓度的菌悬液300μl，混
匀，注入已铺制底层的培养皿中，放置水平台上使凝固。
2.5加样
2.5.1在培养皿上等距离均匀放置牛津杯，并于牛津杯中依次滴加ul供试品溶液、阴性对照溶
液（磷酸盐缓冲液）及对照品溶液。
将培养皿置于℃培养小时后观察。
3结果分析
对照品抑菌圈直径为：；供试品抑菌圈直径为：；阴性对照抑菌圈直径为：；
4结果判定
4.1标准规定：
□对照品溶液应有抑菌圈，阴性对照溶液应无抑菌圈，则实验成立；供试品溶液应无抑菌圈。
4.2检验结果：
4.2.1实验是否成立：□成立□不成立
4.2.2供试品溶液抑菌圈。
4.3检验结论：
4.3.1□符合规定□ 不符合规定□ N/A
5备注
5.1附氨苄西林残留量检查照片，共页
5.2。