AZD8055抑制胆管癌细胞HuCCT1的迁移及EMT进程的机制研究
吉西他滨在胆管细胞癌中的耐药机制研究进展
吉西他滨在胆管细胞癌中的耐药机制研究进展张家宁;周伟平【摘要】胆管细胞癌(cholangiocarcinoma,CCA)是一种具有高度恶性和侵袭性的肿瘤,多数病人确诊时已经失去手术的机会,只能进行姑息性治疗,而化学治疗(化疗)是一种重要的治疗方法.目前对于胆管细胞癌一线的化疗药是以吉西他滨为主,从目前研究来看,吉西他滨在CCA治疗过程中的耐药机制主要涉及以下几个方面:非编码RNA(ncRNAs)介导的耐药、特定编码基因介导的耐药、信号通路异常介导的耐药以及上皮间质转化介导的耐药.【期刊名称】《腹部外科》【年(卷),期】2018(031)005【总页数】3页(P369-371)【关键词】吉西他滨;胆管细胞癌;耐药【作者】张家宁;周伟平【作者单位】200438上海,海军军医大学附属东方肝胆外科医院肝外三科;200438上海,海军军医大学附属东方肝胆外科医院肝外三科【正文语种】中文【中图分类】R735.8胆管细胞癌(cholangiocarcinoma，CCA)是来源于肝脏的原发性肿瘤，其恶性程度高、隐匿性强，多数病人发现时已经是中晚期，不再适合手术治疗[1]。
化学治疗(化疗)是胆管细胞癌治疗的重要方式，目前主要化疗药物是以吉西他滨为主，而一部分病人在接受化疗后出现耐药现象[2]，因此探究吉西他滨在治疗胆管细胞癌过程中的耐药机制，有利于解决临床上遇到的问题。
一、非编码RNA介导的耐药机制常见的非编码RNA(ncRNAs)包含microRNAs(miRNAs)以及长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)等，它们作为一种多功能调节因子在癌症进程中行使重要功能，在很多肿瘤细胞的耐药机制中也发挥重要作用[3]。
而使用吉西他滨作为化疗药的肿瘤，其耐药过程中非编码RNA涉及的调控也较为常见，已经有很多研究发现包括胆管细胞癌在内的很多肿瘤类型，mirRNA在这些肿瘤耐药形成过程扮演着重要角色[4-5]。
蛋白精氨酸甲基转移酶5抑制剂研究进展
引用本文 詹康宁，全旭，黄张建，等 . 蛋白精氨酸甲基转移酶 5 抑制剂研究进展［J］. 中国药科大学学报，2021，52（3）：371–378.
Cite this article as：ZHAN Kangning，QUAN Xu，HUANG Zhangjian，et al. Research progress of protein arginine methyltransferase 5 inhibi⁃
4 PRMT5 与肿瘤的关系
最近几年，作为一个抗肿瘤药物靶点，PRMT5 越来越引起科学界的关注。它在多种肿瘤中过表 达，包括胶质母细胞瘤、肺癌、前列腺癌等，并在不 同肿瘤中发生机制不同［5］。
例 如 ，在 临 床 上 越 来 越 多 人 胶 质 母 细 胞 瘤 病 例的发生与 PRMT5 过表达相关［23］。研究发现，定 位于肿瘤细胞胞浆的长非编码 RNA，LINC00515 与 SNHG16，分 别 通 过 miR-16 与 miR-4518 调 节 PRMT5 高表达，招募并限制肿瘤抑制基因 ST7 与 PTEN 的表达，导致肿瘤发生［24-25］。相同的，PRMT5 在人肺癌组织中显示高表达，在组织培养中，下调 PRMT5 的表达和使用 PRMT5 选择性抑制剂可明 显抑制肺癌 A549 和 H1299 细胞的增殖。研究显 示 PRMT5 是蛋白激酶 B 的上游调节因子，直接与 蛋白激酶 B 共定位并相互作用，从而诱导肺癌细胞 增殖［26］。在前列腺癌中，PRMT5 通过表观基因激 活前列腺癌细胞中雄激素受体（androgen receptor， AR）的转录来促进前列腺癌细胞的生长［27］。免疫
蛋 白 质 精 氨 酸 甲 基 转 移 酶（protein arginine methyltransferase，PRMT）催 化 的 精 氨 酸 胍 基 甲 基 化，是一种常见的真核生物细胞翻译后修饰，影响 细胞信号传导、基因转录、mRNA 翻译、DNA 重组 和修复等多种生物学过程［1-4］。作为 PRMT 家族的 成员，PRMT5 介导的甲基化在维持正常细胞内环 境平衡中发挥重要作用。然而，越来越多的研究 表明，PRMT5 的异常表达与多种肿瘤发生相关，目
DOCK10基因在肝癌中的突变和表达分析及对肝内胆管癌细胞增殖和迁移的影响
DOCK10基因在肝癌中的突变和表达分析及对肝内胆管癌细胞增殖和迁移的影响张文君;杨红;胡涛涛;韩泽广【期刊名称】《兰州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2018(044)004【摘要】Objective To study the functions of DOCK genes in liver cancer progression through bioinformatic study and experimental validation. Methods The molecular evolution of DOCK family genes was analyzed by sequence alignment.Recurrent mutational patterns and expression differences of DOCK genes between cancer and normal samples in human liver cancer were figured out by mining public cancer genomic databases.We evaluated the role of DOCK10 in intrahepatic cholangiocarcinoma (ICC) cells through gain or loss of function assays in vitro experiments.Results Based on a phylogenetic analysis of seven species, the 11members of human DOCK gene family were evolutionarily conserved.Of them, DOCK2 and DOCK10 were further found to be recurrently mutated or low-expressed in liver cancer, especially in ICC, a subtype of liver cancer, through mining public cancer genomic databases, in which the loss of function of DOCK10 occurred in ICC due to the mutations or low expression.Then we further evaluated the expression and role of DOCK10in human ICC cells, showing that DOCK10 expression was significantly down-regulated in 16 ICC specimens, as compared with thematched adjacent non-cancerous livers.Furthermore, in ICC cell lines QBC939, RBE, Hucct1, Hccc9810 and HIBEC, the silence of DOCK10 via RNA interference could promote cell proliferation and cell metastasis in vitro.Conclusions DOCK10 may function as a potential tumor suppressor gene in human ICC, where the down-regulation or mutations of DOCK10 can promote ICC progression.%目的通过生物信息学分析和实验验证,探讨胞质分裂贡献者 (DOCK) 基因家族在肝癌发生发展过程中的作用.方法通过基因序列比对和进化谱系分析对DOCK基因家族在7个进化关系上递进的物种定义和分类;挖掘肿瘤基因组公共数据库中DOCK基因家族在肝癌及其他癌症中的突变和表达数据;采用实时定量RT-PCR技术和蛋白印记技术检测DOCK10在16对肝内胆管细胞癌 (肝癌亚型) 组织样本及其癌旁组织和5株胆管癌细胞系中的表达;利用RNA 干扰将DOCK10低表达后观察其对胆管癌细胞增殖、细胞迁移能力的影响.结果通过对7个物种的进化分析显示,人类DOCK家族的11个成员在进化过程中是保守的;突变谱和表达谱分析显示,DOCK2和DOCK10基因在肝癌中存在较高频率的突变或较低的表达量,其中DOCK10在胆管细胞癌中突变频率较高 (9％);定量和半定量PCR实验结果表明,与对照组癌旁组织相比,DOCK10基因在16个胆管癌组织样本中表达量明显下降;同时,低表达DOCK10后,肝内胆管癌细胞系RBE、Hucct1和Hccc9810的细胞增殖和细胞迁移能力明显提高.结论 DOCK10基因可能是肝内胆管细胞癌发生与发展过程中的抑癌基因,而DOCK10低表达或基因突变会促进肝内胆管细胞癌发展.【总页数】8页(P1-8)【作者】张文君;杨红;胡涛涛;韩泽广【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院系统生物医学教育部重点实验室, 上海 200025;华东理工大学生物技术学院, 上海 200237;上海交通大学医学院附属瑞金医院系统生物医学教育部重点实验室, 上海 200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院系统生物医学教育部重点实验室, 上海 200025;上海市疾病与健康基因组学实验室, 国家人类基因组南方研究中心上海 201203;上海交通大学系统生物医学研究院上海 200240【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响研究 [J], 陈浩洋;郑永绵;刘明辉2.DNMT3B基因在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的影响 [J], 李雅睿;王梦瑶;卢桂芳;任牡丹;卢新兰;张丹;赵艳;和水祥3.Engrailed-2基因在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响 [J], 苌新伟;马秀现;申红霞;李健;黄向上4.DEK基因在肝癌中的表达及靶向抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响 [J], 林云志;唐浩;周亚龙;赵晓彪;曾凯5.肝癌组织中lncRNA-PRR34-AS1的表达特性及其对肝癌细胞增殖、迁移的影响和潜在分子机制 [J], 魏英;王小林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于miR-15a-5p／P53信号通路探讨EMT与肺癌细胞阿霉素耐药的关系
Ｘ ｒａｙｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＤ）ａｎｄｅｎｅｒｇｙｄｉｓｐｅｒｓｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＥＤＳ）ｗｅｒｅｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｅｌ ｅｍｅｎｔｓｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｓｃａｆｆｏｌｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ，ｔｈｅｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎｓｔｒｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅｓｃａｆｆｏｌｄｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙｍｅｃｈａｎｉｃａｌｕｎｉｖｅｒｓａｌｔｅｓｔｉｎｇｍａｃｈｉｎｅ．Ｔｈｅｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｓｃａｆｆｏｌｄａｎｄｔｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｒｅｓｅａｒｃｈｗｅｒｅｃｈａｒ ａｃｔｅｒｉｚｅｄｖｉａＣＣＫ ８ａｓｓａｙａｎｄＬｉｖｅ／Ｄｅａｄｓｔａｉｎｉｎｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙＤＰＡＩ／Ｐｈａｌ ｌｏｉｄｉｎｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｉｎｇ．ｑＲＴ ＰＣＲｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｕｃｈａｓＢＭＰ２，ＲＵＮＸ２ａｎｄＣＯＬ１．ＡＬＰｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆＢＭＳＣｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴｈｅＣＳ β ＴＣＰｓｃａｆｆｏｌｄｗａｓｃｏｍｐｒｉｓｅｄｏｆｂｕｌｋｐａｒａｌｌｅｌ，ａｌｉｇｎｅｄａｎｄｔｈｉｎｌａｍｅｌｌａｓｗｉｔｈｍａｎｙｐｏｒ ｏｕｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．β ＴＣＰｐａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｅｖｅｎｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｏｖｅｒＣＳｆｒａｍｅｗｏｒｋｌａｙｅｒｓａｎｄｔｈｅＣＳ βＴＣＰｓｃａｆｆｏｌｄｐｏｓ ｓｅｓｓｅｘｃｅｌｌｅｎｔｅｌａｓｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｙａｎｄｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ，ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｅｅｄｅｄｏｎｓｃａｆｆｏｌｄｒｅｖｅａｌｅｄｈｉｇｈｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉ ｔｙａｎｄｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．ｑＲＴ ＰＣＲａｎｄＡＬＰｓｔａｉｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＣＳ β ＴＣＰｓｃａｆｆｏｌｄｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｏｓｕｍｕｐ，ｔｈｅＣＳ β ＴＣＰｓｃａｆｆｏｌｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄｄｅｓｉｒｅｄｍｅ ｃｈａｎｉｃａｌａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅＢＭＳＣｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ，ｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓｃａｆｆｏｌｄｐｒｏ ｖｉｄｅｄａｐｒｏｍｉｓｉｎｇｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｂｏｎｅｄｅｆｅｃｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｃｈｉｔｏｓａｎ；β ＴＣＰ；ｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓｃａｆｆｏｌｄ；ｂｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ ｔｉｏｎ网络出版时间：２０２２－０６－２８９：４９ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０６５．ｒ．２０２２０６２４．１７４１．０２０．ｈｔｍｌ基于ｍｉＲ １５ａ ５ｐ／Ｐ５３信号通路探讨ＥＭＴ与肺癌细胞阿霉素耐药的关系魏 东１，辛运超２，刘 博３，容 宇１，李彦明１，郝雁冰１摘要 目的 探讨ｍｉＲ １５ａ ５ｐ在肺癌细胞对阿霉素（ＤＯＸ）耐药中的作用，并阐明其与ＤＯＸ耐药之间的功能和机制联系。
mTOR高选择性抑制剂AZD8055对乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株化疗敏感度的作用
mTOR高选择性抑制剂AZD8055对乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株化疗敏感度的作用丁木莲;李峰【摘要】目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)高选择性抑制剂AZD8055对乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株化疗敏感度的作用.方法体外培养MCF-7细胞株、MCF-7/Doc细胞株.噻唑蓝比色法检测AZD8055作用后MCF-7/Doc细胞对多西紫杉醇的半数抑制浓度(IC50),实验分2组:MCF-7/Doc组和MCF-7/Doc+AZD8055组.实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测AZD8055作用后,细胞MDR1基因和P-gp蛋白的表达,实验分4组:MCF-7组、MCF-7+AZD8055组、MCF-7/Doc组、MCF-7/Doc+AZD8055组.裸鼠体内荷瘤实验检测AZD8055的体内抑瘤率,实验分3组:空白对照组、阴性对照组和AZD8055组.为排除MCF-7和MCF-7/Doc细胞特异性对实验结果的影响,研究采用乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-231/Doc细胞株重复了上述实验.结果噻唑蓝比色法检测显示,MCF-7/Doc+AZD8055组细胞对多西紫杉醇的IC50为5.1±0.6μmol/L,明显低于MCF-7/Doc组(P<0.05),AZD8055对多西紫杉醇的耐药逆转倍速为5.4.实时荧光定量PCR检测显示,MCF-7/Doc组细胞MDR1基因表达量为1.84±0.35,明显高于MCF-7组(P<0.05);而MCF-7/Doc+AZD8055组细胞MDR1基因表达量为1.21±0.29,明显低于MCF-7/Doc组(P<0.05).蛋白印迹法检测显示,MCF-7/Doc组细胞P-gp蛋白表达量分别为0.93±0.15,明显高于MCF-7组(P<0.05);而MCF-7/Doc+AZD8055组细胞P-gp蛋白表达量0.54±0.10,明显低于MCF-7/Doc组(P<0.05).AZD8055组肿瘤生长速度明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),AZD8055对移植瘤具有显著的抑制作用,抑瘤率为48.95％,差异有统计学意义(P<0.05).MDA-MB-231和MDA-MB-231/Doc细胞株重复实验得到了相似结果.结论 mTOR高选择性抑制剂AZD8055可显著提高乳腺癌细胞株对多西紫杉醇的化疗敏感度,其作用机制可能与抑制MDR1和P-gp表达有关.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)011【总页数】5页(P189-193)【关键词】哺乳动物雷帕霉素靶蛋白;AZD8055;乳腺癌;多西紫杉醇【作者】丁木莲;李峰【作者单位】611930 彭州市人民医院;430014 华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院【正文语种】中文【中图分类】R737.9乳腺癌发生率已位居我国女性全部恶性肿瘤之首，且呈年轻化趋势，严重威胁女性生命安全[1，2]。
MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响说明书
世界华人消化杂志2009年2月28日; 17(6): 566-572ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R基础研究 BASIC RESEARCHMUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响黄 强, 任雪峰, 刘臣海, 齐 伟黄强, 任雪峰, 刘臣海, 齐伟, 安徽医科大学附属省立医院普通外科 安徽省合肥市 230001黄强, 硕士, 教授, 主任医师, 硕士研究生导师, 主要从事肝胆胰疾病的基础与临床研究.2007年度院科研基金资助项目, No. 200775作者������������ 本研究的设计由黄强与任雪峰完成, 实验操作由任雪峰完成; 刘臣海与齐伟参与论文资料查询、整理; 数据统计及图像处理由刘臣海完成; 论文写作由黄强与任雪峰完成.通�作者���作者��作者���� 黄强, 230001, 安徽省合肥市, 安徽医科大学附属省收稿日期:2008-12-1����: 2008-12-1����2008-12-1���� ��日期:��日期:日期:: 200�-01-05200�-01-05接受日期:日期:200�-01-12����日期:: 200�-01-12200�-01-12 ����日期:: 200�-02-28200�-02-28Construction of the specific MUC5AC-siRNA expression plasmid and effect of siRNAon proliferation and apoptosis in human bile duct cancer line HCCC-9810Qiang Huang, Xue-Feng Ren, Chen-Hai Liu, Wei QiQiang Huang, Xue-Feng Ren, Chen-Hai Liu, Wei Qi, Department of General Surgery, the Affiliated Provincial Hospital, Anhui Medical University, Hefei 230001, Anhui Province, ChinaSupported by: the 2007 Annual Science Foundation of the Affiliated Provincial Hospital, No. 200775 Correspondence to: Qiang Huang, Department of General Surgery, the Affiliated Provincial Hospital, Anhui Medical University, Hefei 230001, Anhui Province,Received: 2008-12-17 Revised: 2009-01-05 Accepted: 2009-01-12 Published online: 2009-02-28AbstractAIM:To observe specific siRNA silencing effect on Mucin-5 subtype AC gene in human intrahepatic cholangiocarcinoma cell line HCCC-9810 as well as to investigate the influence on proliferation and apoptosis after silencing the Mucin-5 subtype AC gene.METHODS: Three pairs of specific MUC5AC-siRNA were designed and synthesized through transcription in vitro. Three different siRNA expression plasmids (pRNAT-U6.1/Neo-MU-C5AC-siRNA1/2/3) were constructed by gene recombination. Then three stable expression plasmids and the comparison plasmid (empty plasmid-transfected control) were transfected into HCCC-9810 by liposome-mediated transfec-tion. Transfection efficiency was evaluated by nonspecific small molecular siRNA (fluorescent conjugate). MUC5AC-mRNA level was detected by RT-PCR. Expression of Mucin-5 subtype AC was investigated by immunohistochemical SABC method. Cell apoptosis and proliferation were analyzed by flow cytometry and MTT, re-spectively.RESULTS: The results of gene sequencing in-dicated that the pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/3 was successfully constructed. After the transfection, the efficiency of fluo-rescent protein expression reached 28.57%; the results of RT-PCR and immunocytochemistry showed that constructed plasmids down-reg-ulated mRNA and protein of Mucin-5 subtype AC at 48 h after transfection. The results of MTT indicated that the growth of HCCC-9810 was obviously inhibited after silencing the Mucin-5 subtype AC gene. Apoptosis was in-duced in the tumor cells after suppressing the expression of Mucin-5 subtype AC gene by flow cytometry.CONCLUSION: Three different stable expres-sion plasmids of siRNA specific for Mucin-5 subtype AC gene obviously inhibit the ex-pression at MUC5AC-mRNA and protein level. The blockage of Mucin-5 subtype AC gene expression in HCCC-9810 cells shows significant effect on cell apoptosis and prolif-eration.Key Words: HCCC-9810 cells; Bile duct cancer; Mu-cin-5 subtype AC; RNA interference; Cell prolifera-tion; Cell apoptosisHuang Q, Ren XF, Liu CH, Qi W. Construction of the specific MUC5AC-siRNA expression plasmid and effect of siRNA on proliferation and apoptosis in human bile duct cancer line HCCC-9810. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2009; 17(6): 566-572®■背景资料黏蛋白参与了细胞间的黏附及细胞间信号的传导,在肿瘤的发生和转移等过程中起重要作用.黏蛋白5AC是黏蛋白分子家族中的一员,在多种恶性肿瘤中均过表达, 可能与肿瘤的发生发展有相关性, 但具体对肿瘤细胞的生长增值及凋亡的影响不清楚.■同行评议者梁力建, 教授, 中山大学附属第一医院肝胆外科; 邰升, 副教授, 哈尔滨医科大学附属二院肝胆外科黄强, 等. MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-�810增殖及凋亡的影响 567摘要目的: 探讨黏蛋白5AC特异性siR N A对人肝内胆管癌细胞珠HCCC-9810体外增殖及凋亡能力的影响.方法:设计合成三对特异性siR N A, 构建了三个可在哺乳动物细胞中表达siR N A的表达质粒, pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A1/2/3, 应用脂质体转染技术分别将三个稳定表达的质粒和对照质粒(空质粒对照)转染HCCC-9810, 应用有荧光标记的非特异性小分子的siR N A检测转染效率, RT-PCR检测黏蛋白5AC基因mR N A水平; SABC免疫组化染色技术检测黏蛋白5AC的表达; MTT检测细胞生长增殖情况; 流式细胞仪分析细胞凋亡.结果: 基因测序表明成功构建质粒; 转染后荧光蛋白表达率28.57%; RT-PCR结果表明在mR N A水平, 三个质粒都可抑制黏蛋白5AC 基因的表达, 并可使黏蛋白5AC的表达下降, MTT结果对细胞的生长有一定的抑制作用, 流式细胞仪分析结果使肿瘤细胞凋亡增加.结论:构建p R N AT-U6.1/N e o-M U C5A C-siR N A1/2/3质粒明显抑制了黏蛋白5AC基因在mR N A水平及蛋白的表达, 并可抑制肿瘤细胞的生长增殖和诱导其凋亡.关键词�� HCCC-9810细胞; 胆管癌; 黏蛋白5AC; RNA干扰; 细胞增殖; 细胞凋亡黄强, 任雪峰, 刘臣海, 齐伟. MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株H C C C-�810增殖及凋亡的影响. 世界华人消化杂志 200�; 1����(6): 566-5����2/1009-3079/17/566.asp0 引言我国胆管癌在消化系肿瘤中居第5位, 居胆道肿瘤首位, 其发病机制目前尚不清楚.因其生长缓慢, 往往发病时已到中晚期, 手术时大多已侵犯周围组织, 故手术根治率低, 预后差.黏蛋白5AC(mucin-5 subtype AC, MUC5AC)是黏蛋白分子家族中的一员, 属于一种分泌型黏蛋白, 正常表达于人呼吸道、胃及生殖道中, 而不表达于胆管上皮细胞[1], 在胆管癌的发生过程中, 肿瘤细胞获得了这种表型, 使得MUC5AC的表达增加.最近研究[2-6]表明MUC5AC在胃癌、结直肠癌、肺癌、卵巢肿瘤及胆管癌等肿瘤中均过度表达.说明其在肿瘤的发生发展和转移过程中起重要的作用.本实验采用腺病毒作为载体构建稳定表达MUC5AC-siR N A的质粒后, 通过脂质体转染胆管癌细胞干扰MUC5AC基因, 观察干扰后基因沉默的效果及对胆管癌细胞生长增殖与凋亡的影响.1 材料和方法1.1 材料胆管癌细胞株HCCC-9810购自中国科学院上海生命科学研究院细胞库; 胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT), 碘化丙啶(PI)和二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma公司; Annexin V-FITC购自南京凯基生物科技发展有限公司, 大肠杆菌感受态细胞DH5α购自上海闪晶分子生物科技有限公司; Lipofectamine 2000及Opti-MEM I购自Invitrogen公司; 小牛血清及RPMI 1640购自Gibco公司; 腺病毒载体PR N AT-U6.1/N eo购自南京金思特科技有限公司; 限制性内切酶Bam HⅠ和Hin dⅢ, T4连接酶, TRIzol以及RT-PCR其他的相关试剂均购自TaKaRa公司; 质粒小量提取试剂盒QIAprep Spin Miniprep购自Qiagen公司; 鼠对人MUC5AC mAb购自Thermo Fisher Scientific公司; 即用型SABC免疫组化试剂盒和DAB染色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司;所设计的寡核苷酸链均委托上海闪晶分子生物科技有限公司合成.1.2 方法1.2.1 特异性M U C5A C基因s i R N A的设计与合成: 参照文献[7-8]介绍的方法设计合成三个选择性靶向MUC5AC基因mR N A的siR N A序列: (1): TCTGTGGCGGTATATGGTGGA;(2): TAATAGCAATGGCCAGCGAGG; (3):T G G T C G C G TA C AT C T T G A C G C.针对MUC5AC基因的R N A干扰(R N A interference,R N Ai)位点, 设计三条双链D N A(double-strandD N A, dsD N A): S1: 正义链5'-GGATCCCGTCTG TGGCGGTATATGGTGGATTGATATCCGTCCA CCATATACCGCCACAGATTTTTTCCAAAAGCTT-3'及反义链5'-AAGCTTTTGGAAAAAATC TGTGGCGGTATATGGTGGACGGATATCAAT CCACCATATACCGCCACAGACGGGATCC-3';S2: 正义链5'-GGATCCCGTAATAGCAATGGC CAGCGAGGTTGATATCCGCCCGCTGGCCA TTGCTATTATTTTTTCCAAAAGCTT-3'及反义链5'-AAGCTTTTGGAAAAAATAATAGCAAT GGCCAGCGAGGCGGATATCAACCTCGCTG GCCATTGCTATTACGGGATCC-3'; S3: 正义链5'-GGATCCCGTGGTCGCGTACATCTTGACG■研发前沿黏蛋白5AC对胆管癌患者可作为癌标, 但在其他过表达黏蛋白5AC的肿瘤中是否可以作为一种癌标,值得进一步研究.568 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 200�年2月28日 第1����卷 第6期CTTGATATCCGGCGTCAAGATGTACGCGACCATTTTTTCCAAAAGCTT-3'及反义链5'-AAGCTTTTGGAAAAAATGGTCGCGTACATCTTGACGCCGGATATCAAGCGTCAAGATGTACGCGACCACGGGATCC-3'.其中“GGATCCC”为Bam HⅠ的酶切位点, “AAGCTT”为Hin dⅢ的酶切位点, TTGATATCCG为中间的发卡结构.所设计的寡核苷酸链均委托上海闪晶分子生物科技有限公司合成.1 2.2 pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A1/2/3质粒的构建与鉴定: 用TE缓冲液(10 mmol/L Tris-HCI, 1 mmol/L EDTA, pH8.0)重悬MUC5AC的寡核苷酸干粉至浓度为100 μmol/L, 上下游序列以1∶1混合, 5'和3'黏端分别与Bam HⅠ和Hin d Ⅲ酶切后黏端一致, 95℃ 30 s, 72℃ 2 min, 37℃2 min, 25℃ 2 min完成退火.取其中1 μL退火后的双链寡核苷酸用TE缓冲液稀释成100 μL, 与PR N AT-U6.1/N eo, 用T4 D N A连接酶连接, 同时连接试剂盒中提供的阴性对照和空白对照(超纯水代替寡核苷酸).室温放置3 h以进行连接.把连接产物分别转化大肠杆菌感受态细胞DH5α, 挑选阳性克隆送上海闪晶分子生物科技有限公司测序鉴定, 确认获得重组质粒pR N AT-U6.1/ N eo-MUC5AC-siR N A1/2/3, 取出测序结果正确的菌种, 划线接种在含氨苄的LB平板上, 挑单个菌落接种在4 mL含氨苄的LB液体培养基中, 取约3 mL菌液按QIAprep Spin Miniprep Kit说明书提取质粒, 取1 μL质粒D N A经酶切后进行电泳, 检测插入序列的D N A.1.2.3 细胞培养与转染: 人HCCC-9810胆管癌细胞株常规培养于含100 mL/L小牛血清的RPMI 1640培养液, 37℃, 50 mL/L CO2, 稳定传代后至指数增长期用于本实验.转染前24 h, 将肿瘤细胞接种在6孔培养板上, 每孔约5×105个细胞, 使每孔细胞饱和度在转染前达到90%以上, 铺板时不使用含抗生素的培养液.按Lipofectamine 2000转染试剂说明书方法进行瞬时转染.对于6孔板中的每一孔, 将质粒D N A(包括实验质粒、对照质粒)和Lipofectamine 2000以4 μg∶10 μL 的比例分别用250 μL转染专用液Opti-MEM I稀释, 孵育5min后, 将稀释的质粒D N A与稀释的Lipofectamine 2000混匀, 室温孵育20 min, 然后将500 μL混合物加入到细胞培养基中, 轻轻混匀, 于37℃培养6 h后, 将其中的培养基吸出, 加入新鲜的培养基, 继续孵育.并在转染后8-12 h 于荧光显微镜下直接观察具有荧光蛋白的非特异性小分子的siR N A的表达, 估算转染效率. 1.2.4 MTT检测肿瘤细胞的生长增殖: 将HCCC-9810细胞接种于96孔培养板中, 细胞终密度约为2×107/L, 体积100 μL, 接种后24 h进行转染.分别培养0, 24, 48, 72 h后每孔加入100 μL MTT 液(5g/L), 继续培养4 h后, 小心弃去上清液, 加入100 μL DMSO液, 震荡, 待蓝紫色溶解后, 在全自动酶标仪上测定各孔A490.抑制率(%) = (1-实验组A值平均值/对照组A值平均值)×100%.每个时间点测定6孔求平均值, 以时间为横轴, 以抑制率为纵轴绘制曲线.1.2.5免疫组化检测M U C5A C的表达: 先将HCCC-9810以约5×108个/L的细胞密度接种在已铺有无菌盖玻片的6孔板内, 37℃, 50 mL/L CO2下生长24 h后进行转染, 转染后48 h取出盖玻片严格按照即用型SABC免疫组化试剂盒及D A B显色试剂盒使用说明进行免疫组化检测, 其中一抗为鼠对人MUC5AC mAb, 二抗为SABC免疫组化试剂盒内提供的生物素化山羊抗小鼠IgG, 实验结果在普通光学显微镜下观察.免疫组化结果: 细胞不着色为阴性.呈棕黄色为阳性, 每张爬片于高倍视野下随机观察5个视野, 计算阳性细胞平均数, 即为MUC5AC的表达强度.按下列公式计算MUC5AC基因表达的抑制率: MUC5AC表达的抑制率(%) = (1-观察组MUC5AC表达强度/对照组MUC5AC表达强度)×100%.1.2.6 半定量RT-P C R检测M U C5A C基因在mR N A水平的表达: 转染胆管癌细胞HCCC-9810 48 h后, 按照TRzol Reagan R N A提取试剂盒试剂操作说明从HCCC-9810细胞中提取总R N A, 而后按RT-PCR试剂盒说明书采用20 μL/L逆转录反应体系操作进行逆转录.PCR扩增MUC5AC 基因和内参照β-actin基因.MUC5AC正义引物: 5'-ATCACCGAAGGCTGCTTCTGTC-3', 反义引物: 5'-GTTGATGCTGCACACTGTCCAA-3', 扩■相关报道2003年Boonla et al 报道黏蛋白5AC 在胆管癌患者的血清中过表达,可能作为一种诊断胆管癌的指标, 2007年Bamrungphon et al 报道黏蛋白5AC 作为一种诊断胆管癌的肿瘤标记物,其灵敏性达71%,特异性达90%.1 2 3 41500bp1000600500400300200100图1提取的质粒经酶切后DNA电泳图. 1:Marker; 2-4: 所对应Marker 76 bp处的光带分别为三个提取的质粒经酶切后DNA电泳图.黄强, 等. MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-�810增殖及凋亡的影响 569增片断长度为417 bp; β-actin 正义引物: 5'-CTC CATCCTGGCCTCGCTGT -3', 反义引物: 5'-GCT GTCACCTTCACCGTTCC -3', 扩增片断长度为268 bp . 反应条件: 94℃预变性5 min, 94℃变性30 s, 56℃退火30 s, 72℃延伸30 s, 共30个循环, 72℃延伸10 min; 最后将RT -PCR 产物在1%琼脂糖凝胶上进行电泳(5 V/cm ×30 min), 用UVP 凝胶成像系统进行条带灰度测定.1.2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡率: 转染48 h 后, 先用胰酶消化下待测细胞, 用4℃预冷的PBS 洗细胞2次, 用250 μL 结合缓冲液重新悬浮细胞, 调节其浓度为1×109/L; 取100 μL 的细胞悬液加入一个5 mL 流式管中, 加入5 μL Annexin V -FITC 和10 μL(20 mg/L)的PI 溶液; 混匀后于室温避光孵育15 min; 在反应管中加400 μL PBS, 上流式细胞仪(FACSCalibur)分析.2 结果2.1 构建pR N AT -U6.1/N eo -MUC 5AC -siR N A 稳定表达质粒 通过测序验证了插入序列与我们合成的寡核苷酸序列完全符合, 说明我们成功构建了pR N AT -U6.1/N eo -MUC 5AC -siR N A1/2/3.2.2 所提质粒酶切后D N A 鉴定结果 如图1所示, 与Marker 的条带比较可见所提质粒经过酶切后D N A 三条光带均位于76 bp 处, 与构建的目的D N A 片段相符.2.3 细胞转染结果 转染后11-12 h 左右在荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达, 取三个视野分别在光镜下计细胞总数, 在荧光镜下计表达特异红色荧光的细胞数以计算质粒的转染率[转染率(%) = 同一视野下发荧光的细胞/同一视野下所有细胞×100%]. 为了优化转染效率, 用不同比例的质粒载体和脂质体进行转染, 以4 μg ∶10 μL 下转染效率较高, 达到28.57%, 且脂质体对细胞的毒性较小, 为质粒和转染剂的合适比例, 以2 μg ∶5 μL 转染时转染率为9.37%, 8 μg ∶20 μL■创新盘点本文利用R N A 干扰技术沉默黏蛋白5AC 基因抑制黏蛋白5AC 的表达, 探讨了黏蛋白5AC 对胆管癌细胞生长增值和凋亡的影响.图 2 荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达. A: 质粒载体∶脂质体 = 2 μg∶5 μL; B: 质粒载体: 脂质体 = 4 μg∶10 μL; C: 质粒载体:脂质体 = 8 μg∶20 μL.抑制率(%)t /h图 3 MTT法测定转染不同质粒后对HCCC-9810生长的抑制.M 1 2 3 4 52000bp 1000750500250100图 4 RT-PCR产物图. M: DNA Marker DL2000; 1: pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1; 2: pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA2; 3: pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA3; 4: 空质粒转染对照; 5: 空白对照.图 5 转染后48 h HCCC-9810的MUC5AC表达. A: 空白对照组; B: 实验组.BA570 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 200�年2月28日 第1����卷 第6期比例转染时转染率为30.80%; 但当脂质体体积更大时(8 μg ∶20 μL), 对细胞的毒性较大, 细胞形■应用要点本研究表明应用R N A 干扰技术下调HCCC -9810细胞中黏蛋白5AC 的表达, 抑制了肿瘤细胞的生长增值, 促进了肿瘤细胞的凋亡, 为将来在基因水平治疗肿瘤提供了可能的靶点.100 101 102 103 104100 101102 103 104P I Annexin VZ.001A10 100C o u n t s Z.001100 101 102 103 104Annexin VA20 100C o u n t s Z.001100 101 102 103 104PI M1M1Marker Left, Right % Gated MedianAll 1, 9910 100.00 5.14M1 57, 9910 0.03 63.21Marker Left, Right % Gated Median All 1, 9910 100.00 2.59 M1 57, 9910 23.31 102.74File: Z.001File: Z.001100 101 102 103 104100 101102 103 104P I Annexin V1.001B10 100C o u n t s 1.001100 101 102 103 104Annexin VB20 100C o u n t s 1.001100 101 102 103 104PI M1M1Marker Left, Right % Gated MedianAll 1, 9910 100.00 4.18M1 57, 9910 0.29 81.68Marker Left, Right % Gated Median All 1, 9910 100.00 20.17 M1 57, 9910 42.79 115.48File: 1.001File: 1.001100 101 102 103 104100 101102 103 104P I Annexin V2.001C10 100C o u n t s 2.001100 101 102 103 104Annexin VC20 100C o u n t s 2.001100 101 102 103 104PI M1M1Marker Left, Right % Gated MedianAll 1, 9910 100.00 4.41M1 57, 9910 0.18 82.05Marker Left, Right % Gated Median All 1, 9910 100.00 39.24 M1 57, 9910 46.69 105.54File: 2.001File: 2.001100 101 102 103 104100 101102 103 104P I Annexin V3.001D10 100C o u n t s 3.001100 101 102 103 104Annexin V D20 100C o u n t s 3.001100 101 102 103 104PI M1M1Marker Left, Right % Gated MedianAll 1, 9910 100.00 4.83 M1 57, 9910 0.11 82.79Marker Left, Right % Gated Median All 1, 9910 100.00 14.33 M1 57, 9910 38.48 100.90File: 3.001File: 3.001图 5 转染后48 h, Annexin V/PI双染色法检测HCCC-9810凋亡情况. A: 空白对照; B: pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1; C: pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA2; D: pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA3. 1: 二维散点; 2: Gate分析.黄强, 等. MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-�810增殖及凋亡的影响 571态不佳.正常对照组无红色荧光(图2)).2.4 MTT结果转染后分别在0、24、48、72 h测定各孔A490, 每个时间点测定6孔求平均值, 计算抑制率, 抑制率(%) = (1-实验组A值平均值/对照组A值平均值)×100%.以时间为横轴, 以抑制率为纵轴绘制曲线如图3, 可见图中代表紫色线条的pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A2的抑制作用最明显, 而代表蓝色线条的pR N AT-U6.1/ N e o-M U C5A C-s i R N A1和代表黄色线条的pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A3的抑制率比pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A2稍低.2.5RT-PCR结果转染后48 h, RT-PCR反应产物琼脂糖凝胶电泳结果如图4所示, 内参β-actin主带在268 bp处, 说明各组R N A提取正确.各组均可见MUC5AC基因的特异性条带(417 bp), 与空白对照的条带比较可发现的MUC5AC条带亮度较弱, 而pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A1和pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A3的亮度变化比pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A2亮度稍强, 但比空白对照的条带弱, 说明此三个质粒对MUC5AC均有抑制, 而以pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A2的效率较高.2.6 免疫细胞化学法检测结果转染后48 h, 免疫细胞化学检测MUC5AC的表达情况, 棕黄色颗粒沉着代表黏蛋白分子MUC5AC表达阳性.如图5所示转染后48 h, 空白对照组HCCC-9810细胞中的MUC5AC表达较多, 多数细胞均有棕黄色颗粒沉着, 而实验组HCCC-9810细胞中仅个别细胞有棕黄色颗粒沉着.2.7 Annexin V/PI双染色法检测结果转染后48 h, Annexin V/PI双染色法检测HCCC-9810凋亡结果如图6实验组与空白对照组比较可见, Annexin V-FITC表达率很低, 即在转染后48 h 未发现明显早期凋亡细胞; 但PI的表达率有升高, pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A1/2/3的Gated分别为42.79%、46.69%、38.48%, 而空白对照为23.31%, 说明排除坏死细胞外, 有相当一部分为晚期凋亡细胞, 且pR N AT-U6.1/N eo-MUC5AC-siR N A2作用后诱导的晚期凋亡细胞最多.3 讨论R N Ai是一种具有序列特异性的R N A依赖性转录后基因沉默现象.自从1998年Fire et al[9]在向秀丽线虫注射双链R N A时发现R N Ai现象以来, 已被广泛应用于基因功能的探索、治疗传染性疾病、恶性肿瘤和疤痕疙瘩等领域.应用R N Ai技术对肿瘤侵袭与转移的发生机制及有关基因的改变进行研究, 有助于加深理解恶性肿瘤的生物学本质, 为从不同水平阻断肿瘤的侵袭与转移提供理论依据和方法.黏蛋白(mucin, MUC)是一组由不同基因编码产生的糖蛋白, 包括分泌型黏蛋白MUC2、MUC5AC、MUC6和跨膜型黏蛋白MUC1、MUC3、MUC4等, 他们的表达具有组织、器官、细胞特异性, 这种特点可能与不同种类的黏蛋白特定的功能有关.在正常机体内, 多种组织的黏膜上皮细胞均可合成和分泌不同种类的黏蛋白, 保护黏膜免受各种物理、化学、微生物和机械等有害因素的损伤,并参与细胞间的黏附及细胞间信号的传导, 对细胞生长、胚胎的发育、上皮细胞的更新和分化, 上皮完整性的维持及肿瘤的发生和转移等过程起重要作用[10].在上皮细胞恶变的过程中黏蛋白的质和量会发生相关改变.这种变化主要表现为: 出现新的黏蛋白的表达, 原先存在于正常组织中的黏蛋白的表达增强或减弱, 原有黏蛋白的结构被修饰或改变, 如其糖链的结构发生变化(糖基化不全或去糖基化)[11].最近文献报道[12], MUC5AC可作为诊断胆管癌的一种肿瘤标记物, 其灵敏性达71%、特异性达90%.一方面因失去极性和过度表达, 干扰来自机体免疫系统的识别, 逃避机体免疫反应; 另一方面肿瘤细胞表面的糖基侧链可在肿瘤细胞转移的过程中起到配体的作用, 从而促进肿瘤的生长与转移[13].因此, MUC5AC基因产物的异常表达与肿瘤细胞的表型变化、细胞黏附、免疫识别以及转移和预后密切相关.为探讨MUC5AC基因在胆管癌发生发展中的作用, 本文采用R N Ai技术体外靶向封闭人胆管癌细胞株(HCCC-9810)MUC5AC基因, 观察基因沉默效应及对胆管癌细胞凋亡及增值的影响.本研究通过转染荧光蛋白标记的非特异性小分子siR N A了解转染效果, 排除了转染效率低对实验结果造成的影响.结果显示: MUC5AC-siR N A成功诱导胆管癌细胞MUC5AC基因沉默, 转染组MUC5AC mR N A水平较空白对照组明显下降, 免疫组化检测显示转染组MUC5AC表达被靶向抑制.MTT法检测细胞增殖, 结果显示转染组与空白对照组及阴性对照组相比, 明显抑制了细胞的增殖.流式细胞仪检测凋亡结果显示转染组与空白对照组相比, 可诱导细胞的凋亡.以上结果表明, 靶向抑制MUC5AC基因对■同行评价本研究立题新颖,结果可靠, 结论可信, 但实验方法过于繁琐.572 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 200�年2月28日 第1����卷 第6期HCCC-9810细胞凋亡及增殖有一定的影响, 采用R N Ai技术在基因水平封闭MUC5AC的表达就可能影响肿瘤细胞的生长和增殖, 从而为胆管癌和其他相关肿瘤的基因治疗开辟一条新的途径.4 参考文献1 Boonla C, Wongkham S, Sheehan JK, WongkhamC, Bhudhisawasdi V, Tepsiri N, Pairojkul C.Prognostic value of serum MUC5AC mucin inpatients with cholangiocarcinoma. Cancer2003; 98:1438-14432 Wakatsuki K, Yamada Y, Narikiyo M, Ueno M,Takayama T, Tamaki H, Miki K, MatsumotoS, E n o m o t o K, Y o k o t a n i T, N a k a j i m a Y.Clinicopathological and prognostic significance ofmucin phenotype in gastric cancer. J Surg Oncol2008; 98: 124-1293 卜晓东, 李俐, 黄培林, 樊克武, 赵建华. MUC5AC蛋白在大肠肿瘤中的表达及意义. 世界华人消化杂志2004; 12: 467-4694 Yu CJ, Shih JY, Lee YC, Shun CT, Yuan A, Yang PC.Sialyl Lewis antigens: association with MUC5ACprotein and correlation with post-operativerecurrence of non-small cell lung cancer. LungCancer 2005; 47: 59-675 安锦丹, 王静芬, 赵宇, 董德武. 粘蛋白MUC5AC在原发性和转移性卵巢肿瘤中的表达及意义. 哈尔滨医科大学学报 2005; 39: 498-5016 Aishima S, Kuroda Y, Nishihara Y, Taguchi K,Iguchi T, Taketomi A, Maehara Y, Tsuneyoshi M.Down-regulation of aquaporin-1 in intrahepaticc h o l a n g i o c a r c i n o m a i s r e l a t ed t o t u m o rprogression and mucin expression. Hum Pathol2007; 38: 1819-18257 Tuschl T, Zamore PD, Lehmann R, Bartel DP,Sharp PA. Targeted mRNA degradation bydouble-stranded RNA in vitro. Genes Dev1999;13: 3191-31978 Elbashir SM, Martinez J, Patkaniowska A,Lendeckel W, Tuschl T. Functional anatomyof siRNAs for mediating efficient RNAi inDrosophila melanogaster embryo lysate. EMBO J2001; 20: 6877-68889 Fire A, Xu S, Montgomery MK, Kostas SA,Driver SE, Mello CC. Potent and specific geneticinterference by double-stranded RNA inCaenorhabditis elegans. Nature 1998; 391: 806-811 10 Corfield AP, Myerscough N, Longman R,Sylvester P, Arul S, Pignatelli M. Mucins andmucosal protection in the gastrointestinal tract:new prospects for mucins in the pathology ofgastrointestinal disease. Gut 2000; 47: 589-59411 Wittel UA, Goel A, Varshney GC, Batra SK.Mucin antibodies - new tools in diagnosisand therapy of cancer. Front Biosci2001; 6:D1296-D131012 Bamrungphon W, Prempracha N, Bunchu N,Rangdaeng S, Sandhu T, Srisukho S, Boonla C,Wongkham S. A new mucin antibody/enzyme-linked lectin-sandwich assay of serum MUC5ACmucin for the diagnosis of cholangiocarcinoma.Cancer Lett 2007; 247: 301-30813 Jass JR, Walsh MD. Altered mucin expression inthe gastrointestinal tract: a review. J Cell Mol Med2001; 5: 327-351编辑 史景红 电编 何基才ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 2009年版权归世界华人消化杂志•消息•世界华人消化杂志参考文献要求本刊讯本刊采用“顺序编码制”的著录方法, 即以文中出现顺序用阿拉伯数字编号排序.提倡对国内同行近年已发表的相关研究论文给予充分的反映, 并在文内引用处右上角加方括号注明角码.文中如列作者姓名, 则需在“Pang et al”的右上角注角码号; 若正文中仅引用某文献中的论述, 则在该论述的句末右上角注码号.如马连生[1]报告……, 潘伯荣et al[2-5]认为……; PCR方法敏感性高[6-7].文献序号作正文叙述时, 用与正文同号的数字并排, 如本实验方法见文献[8].所引参考文献必须以近2-3年SCIE, PubMed,《中国科技论文统计源期刊》和《中文核心期刊要目总览》收录的学术类期刊为准, 通常应只引用与其观点或数据密切相关的国内外期刊中的最新文献, 包括世界华人消化杂志(/1009-3079/index.jsp)和World Journal of Gastroenterology(/1007-9327/index.jsp).期刊: 序号, 作者(列出全体作者).文题, 刊名, 年, 卷, 起页-止页, PMID编号 ; 书籍: 序号, 作者(列出全部),书名, 卷次, 版次, 出版地, 出版社, 年, 起页-止页. (常务副总编辑: 张海宁 2009-02-28)。
天冬酰胺合成酶通过促进β-catenin核转位驱动胆管癌转移
天冬酰胺合成酶通过促进β-catenin 核转位驱动胆管癌转移*褚珍珍1，2， 周栩萱1，2， 刘力豪1， 张鲍欢3△， 姚楠1，2△（1暨南大学基础医学院病理生理学系，广东 广州 510632；2国家中医药管理局病理生理科研实验室，广东 广州510632；3暨南大学基础医学院形态学实验教学中心，广东 广州 510632）［摘要］ 目的：检测天冬酰胺合成酶（ASNS ）在胆管癌（CCA ）中的表达情况，探讨ASNS 在CCA 转移中的作用及其机制。
方法：通过公共数据库分析各肿瘤组织中ASNS 的mRNA 表达；收集CCA 患者病理组织（n =27），构建硫代乙酰胺诱导的大鼠自发CCA 模型和左中位胆管结扎联合二乙基亚硝胺诱导的小鼠自发CCA 模型，通过免疫组化、Western blot 和免疫荧光法检测ASNS 蛋白表达。
采用CCK8、划痕和Transwell 实验检测ASNS 对人CCA 细胞HuCCT1和HCCC -9810增殖、迁移和侵袭的影响。
构建ASNS 稳定敲减的CCA 细胞株HuCCT1shNC 、HuCCT1shASNS 、HCCC -9810shNC 和HCCC -9810shASNS ，通过肝原位种植和尾静脉注射研究ASNS 对CCA 细胞肝内生长和肺转移的影响。
利用公共数据库富集与ASNS 相关的信号通路，并用免疫荧光和Western blot 验证相关分子机制。
结果：无论在人或动物CCA 组织中，ASNS 表达水平均高于癌旁组织（P <0.01）。
ASNS 以酶活性非依赖性方式促进CCA 细胞HuCCT1和HCCC -9810的增殖、迁移与侵袭。
生物信息学分析显示，β-catenin 在ASNS 高表达的CCA 组织中富集，ASNS 通过促进β-catenin 核转位，启动CCA 细胞上皮-间充质转化（EMT ）。
β-catenin 抑制剂XAV -939可显著抑制CCA 细胞的侵袭与迁移。
核转录因子Snail对肝内胆管癌细胞HCCC9810侵袭和迁移能力的影响
核转录因子Snail对肝内胆管癌细胞HCCC9810侵袭和迁移能力的影响康强;邹浩;刘立鑫;王连敏;朱亚;石万红;张小文【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2017(44)5【摘要】目的探讨核转录因子Snail对肝内胆管癌细胞HCCC9810侵袭和迁移能力的影响。
方法采用小干扰RNA(si-RNA)技术靶向沉默肝内胆管癌细胞HCCC9810中Snail的表达,通过Transwell和划痕实验检测肝内胆管癌细胞侵袭和迁移能力,采用免疫印迹法检测si-RNA处理前后的胆管癌细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达情况。
结果 Transwell结果显示靶向沉默Snail后HCCC9810细胞的迁移能力下降(P=0.005),侵袭能力减弱(P=0.007),细胞划痕结果表明细胞迁移能力同样降低(P=0.017),免疫印迹结果表明沉默Snail后E-cadherin表达上调(P=0.004),Vimentin表达下调(P=0.001)。
结论 Snail可诱导HCCC9810细胞上皮间质转化,增强其侵袭和迁移能力。
【总页数】5页(P315-319)【关键词】肝内胆管癌;Snail;侵袭;迁移;上皮-间质转化【作者】康强;邹浩;刘立鑫;王连敏;朱亚;石万红;张小文【作者单位】昆明医科大学第二附属医院肝胆外科二病区【正文语种】中文【中图分类】R73-37;R735.7【相关文献】1.微缺氧对人结肠癌细胞HT-29骨桥蛋白及核转录因子表达及其侵袭能力的影响[J], 杨庆强;张才全2.叉头框转录因子 A2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响 [J], 李正平;张宇;罗道蕴;付宁3.核转录因子CDX2抑制胃癌细胞迁移、侵袭与逆转上皮-间质转化有关 [J], 钱雪芬;张健锋;俞智华;鞠少卿;毛振彪4.METTL3对肝内胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响 [J], 韩慧慧;刘旸;陈红霞;张毅;周钢桥5.转录因子Snail对食管癌Eca-109细胞侵袭和迁移的影响 [J], 李文雯;张琳丽;胡国清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究
多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究刘猛;姜玖良;付立跃;李俊俊;朱海涛【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2022(50)12【摘要】目的研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。
方法将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组(加入等量的二甲基亚砜处理),2、5、10μmol/L多纳非尼组。
CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。
结果随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高(P<0.05);免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核(P<0.05)。
结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。
【总页数】5页(P1259-1263)【作者】刘猛;姜玖良;付立跃;李俊俊;朱海涛【作者单位】贵州医科大学附属医院肝胆外科;贵州医科大学临床医学院;贵州医科大学附属医院临床医学研究中心【正文语种】中文【中图分类】R735.8【相关文献】1.阿帕替尼调控WWOX对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制研究2.吡非尼酮对人胆管癌HuCCT1细胞增殖、迁移及侵袭的影响3.长春新碱调控PI3 K/Akt信号通路抑制肝癌细胞Hep3 B增殖迁移侵袭及促进细胞凋亡的机制研究4.阿法替尼调控Egr-1/TLR4/mTOR信号通路抑制肝癌细胞Hep3B增殖迁移侵袭及促进细胞凋亡的机制5.MCM2通过抑制p53信号通路促进胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体通路在胆管细胞癌发生发展及治疗中的作用
血管内皮生长因子／血管内皮生长因子受体通路在胆管细胞癌发生发展及治疗中的作用博 伦，张 琼，王祥旭，潘 伟，张红梅空军军医大学西京医院肿瘤科，西安７１００３２摘要：胆管细胞癌（ＣＣＡ）是源于胆道上皮的恶性肿瘤，缺乏有效的治疗药物，预后不良。
研究表明，ＣＣＡ的发生发展离不开血管生成，以血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）及其受体ＶＥＧＦＲ为代表的多种促血管生成因子，均可调节ＣＣＡ血管生成，参与ＣＣＡ发生发展并影响其预后。
因此，以ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ为靶点的抗血管生成药物，包括单克隆抗体、小分子抑制剂等，逐渐成为ＣＣＡ治疗的研究热点。
针对ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ通路在ＣＣＡ临床特征及预后中的作用、ＣＣＡ抗血管生成治疗进展及耐药相关研究进行综述。
关键词：胆管上皮癌；血管内皮生长因子类；血管生成抑制剂；治疗学中图分类号：Ｒ７３５．８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－５２５６（２０２０）０８－１８６６－０４ＲｏｌｅｏｆｔｈｅＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲｐａｔｈｗａｙｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｈｏｌａｎｇｉｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＢＯＬｕｎ，ＺＨＡＮＧＱｉｏｎｇ，ＷＡＮＧＸｉａｎｇｘｕ，ＰＡＮＷｅｉ，ＺＨＡＮＧＨｏｎｇｍｅｉ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＸｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＡｉｒＦｏｒｃｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００３２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＣＣＡ）ｉｓａｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｔｈｅｂｉｌｉａｒｙｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ｗｉｔｈａｌａｃｋｏｆｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｄｒｕｇｓａｎｄｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．ＳｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＣＡａｒｅｃｌｏｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎｄａｖａｒｉｅｔｙｏｆａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ａｎｄｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒＶＥＧＦＲ，ｃａｎｒｅｇｕｌａｔｅａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＣＣＡ，ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＣＡ，ａｎｄａｆｆｅｃｔｉｔｓｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ａｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｄｒｕｇｓｔａｒｇｅｔｉｎｇＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ，ｓｕｃｈａｓｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄｓｍａｌｌ－ｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｈａｖｅｇｒａｄｕａｌｌｙｂｅｃｏｍｅｒｅｓｅａｒｃｈｈｏｔｓｐｏｔｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＣＣＡ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｒｏｌｅｏｆｔｈｅＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲｐａｔｈｗａｙｓｉｎｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｆｅａｔｕｒｅｓａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆＣＣＡ，ｔｈｅａｄｖａｎｃｅｓｉｎａｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｔｈｅｒａｐｙｆｏｒＣＣＡ，ａｎｄｒｅｌａｔｅｄｓｔｕｄｉｅｓｏｎｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ；ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ；ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２０．０８．０４１收稿日期：２０２０－０２－２１；修回日期：２０２０－０５－０４。
CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤的研究进展
CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤的研究进展
王娟;杨朝群
【期刊名称】《农垦医学》
【年(卷),期】2007(029)005
【摘要】CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)是健康个体T细胞库的组成成分之一,具有独特的生物学功能,能够分泌IL-4、IL-10,转化生长因子-β(TGF-β),表达IL-
2Ra(CD25)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)分子,对效应性T细胞具有抑制作用,是调节性T细胞的重要亚群,参与肿瘤的生长,自身免疫性疾病的发生及耐受移植排斥.现将该类细胞抑制作用机制的研究现况及其与肿瘤关系的研究进展作一综述.
【总页数】2页(P364-365)
【作者】王娟;杨朝群
【作者单位】石河子大学医学院;石河子大学医学院第一附属医院放疗科,新疆石河子,832002
【正文语种】中文
【中图分类】R392
【相关文献】
1.CD4+CD25+调节性T细胞在非小细胞肺癌肿瘤免疫及化疗方面的研究进展 [J], 孙成龙;毕明宏
2.CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤免疫研究进展 [J], 施展;曾晓颖
3.CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤免疫的研究进展 [J], 卢永刚;刘凌云;何沙
4.CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤免疫及化疗方面的研究进展 [J], 卢晓婷;刘俊田
5.CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤免疫中的研究进展 [J], 胡子龙;何长征;邢晓伟;胡时栋;李宇轩;宋林杰;王玉锋;杜晓辉
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CD147分子在胆管癌浸润及转移中作用及机制的研究
CD147分子在胆管癌浸润及转移中作用及机制的研究贺伟旗;王曙光;顾建文;匡永勤;程敬民;邢学民;杨文涛;张俊海【摘要】目的了解CD147与胆管癌侵袭转移的关系.方法通过RT-PCR和免疫荧光法了解CD147在胆管癌细胞株QBC939中的表达,然后构建反义CD147分子基因片断的重组腺病毒抑制胆管癌细胞株CD147分子的表达,观察其基质金属酶MMPs改变及生长情况.结果 CD147分子在胆管癌细胞株QBC939中表达,表明反义CD147通过抑制肿瘤细胞的CD147分子的表达,主要减少了肿瘤组织中基质金属酶MMP-2,而不是MMP-9的表达,导致肿瘤的生长抑制.结论 CD147分子的高表达能够促进胆管癌的肿瘤生长,并且CD147促进肿瘤生长的能力可能与MMP-2的高表达密切相关.【期刊名称】《局解手术学杂志》【年(卷),期】2010(019)004【总页数】3页(P263-265)【关键词】胆管癌;CD147;肿瘤转移;MMP-2;MMP-9【作者】贺伟旗;王曙光;顾建文;匡永勤;程敬民;邢学民;杨文涛;张俊海【作者单位】成都军区总医院神经外科,四川,成都,610083;第三军医大学西南医院,全军肝胆外科研究所,重庆,400038;成都军区总医院神经外科,四川,成都,610083;成都军区总医院神经外科,四川,成都,610083;成都军区总医院神经外科,四川,成都,610083;成都军区总医院神经外科,四川,成都,610083;成都军区总医院神经外科,四川,成都,610083;成都军区总医院神经外科,四川,成都,610083【正文语种】中文【中图分类】R735.8胆管癌可通过多种途径转移[1]。
CD147是一种广泛分布于多种细胞的属于免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily,IgSF)的跨膜糖蛋白。
在多种肿瘤中发现有 CD147表达的增高,并与肿瘤的浸润和转移相关。
有学者从人肺癌 LX-1细胞膜上分离出来CD147-MMP-1复合物,说明 CD147不仅能刺激纤维母细胞产生MMP-1,还能结合 MMP-1于肿瘤细胞表面,从而促进肿瘤的浸润[2]。
PI3Kγ调控肿瘤相关巨噬细胞表型影响胆管癌细胞EMT进程与干性特征
PI3Kγ调控肿瘤相关巨噬细胞表型影响胆管癌细胞EMT进程与干性特征唐津天;唐润娟;薛峰;黎旺红【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2024(33)2【摘要】目的探究磷酸肌醇3-激酶γ(phosphatidylinositide 3-kinaseγ,PI3Kγ)调控肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)表型影响胆管癌细胞EMT进程及干性特征的作用。
方法利用佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和IL-4诱导建立M2型TAM,并使用PI3Kγ抑制剂AS605240进行干预,观察细胞形态变化,免疫细胞荧光染色检测细胞表面M2特异性表型标志物CD163表达情况。
建立M2型TAM与人胆管癌细胞系QBC-939共培养体系,分组为对照组、M2组、PI3Kγ抑制剂组,进行对应处理后收集QBC-939细胞,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,免疫细胞荧光染色观察细胞内E-cadherin与Vimentin表达,Western blotting检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2及MMP9蛋白表达,肿瘤细胞成球实验检测细胞干性,Western blotting检测细胞中肿瘤干细胞相关蛋白CD133、OCT4及SOX2蛋白表达。
结果经PMA和IL-4诱导后,细胞呈典型M2型形态,CD163荧光强度明显增加,但经PI3Kγ抑制剂干预后,M2型细胞数目明显减少,CD163荧光强度减弱。
与M2组比较,PI3Kγ抑制剂组细胞迁移数目与侵袭数目均减少(P<0.05),E-cadherin荧光密度值升高、Vimentin荧光密度值降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平上调而N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白表达水平均下调(P<0.05),同时,肿瘤细胞成球数量减少(P<0.05),CD133、OCT4及SOX2蛋白表达水平均下调(P<0.05)。
CCL5-CCR5生物轴与EMT在乳腺癌转移中的相互作用
2020年4月组成EMT MET 细胞标志物E-cadherin N-cadherin ↓β-catenin ↓vimentin ↓N-codherin ↑E-cadherin ↑vimentin ↑β-catenin ↑细胞表型获间质细胞型获上皮细胞型形态学演变为纺锤形演变为立方形细胞极性丧失获得细胞间隙变宽、疏松紧密、黏附功能变化原发灶侵袭、转移形成转移灶凋亡关系抗凋亡易凋亡耐药性耐药药物敏感表1EMT 与MET 的表现综述DOI:10.19347/ki.2096-1413.202010076基金项目：山东省自然科学基金（No.ZR2017MH033）；烟台市科技计划项目（No.2019YD063）；滨州医学院校级科技计划项目（No.BY2018KJ31）。
作者简介：曹卫刚（1984-），男，汉族，山东日照人，主治医师，硕士。
研究方向：乳腺癌复发转移机制。
*通讯作者：杨振林，E -mail :Yangzhenlin918@.国内乳腺癌发病率占女性肿瘤第1位，死亡率占第5位[1]。
乳腺癌术后转移是乳腺外科临床治疗工作中遇到的难点，不仅给临床诊疗带来难题，同时也给乳腺癌患者带来心理和经济负担。
趋化因子和上皮间质转化是近年来研究的热点，趋化因子和受体已被证实与乳腺癌复发、转移及其发展过程密切相关。
上皮-间质转化（EMT ）是近来研究肿瘤细胞浸润和转移的重要机制，两组间存在一定的联系。
基于此，本研究总结趋化因子配体5（CCL5）-趋化因子受体（CCR5）生物轴和EMT 在乳腺癌转移中的作用相关机制，旨在为研究乳腺癌的转移机制提供思路。
1CCL5-CCR5生物轴与EMT 1.1CCL5-CCR5生物轴CCL5是CC 类趋化因子家族的成员之一，被称作调节活化正常T 细胞表达与分泌的趋化因子，多种炎症细胞可分泌表达CCL5，主要表达于单核细胞、T 细胞、血小板、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞和特定的肿瘤细胞[2]。
AZD8055对胆管癌细胞自噬和凋亡的影响
AZD8055对胆管癌细胞自噬和凋亡的影响刘特思;闫文帝;王雪;吕游;朴英实;林贞花;任香善【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2018(034)006【摘要】目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)双重抑制剂AZD8055对人胆管癌HuCCT1细胞自噬和凋亡的影响.方法:采用MTT法检测不同浓度的AZD8055对HuCCT1细胞活力的抑制作用;吖啶橙染色检测AZD8055处理胆管癌细胞后,细胞自噬小体形成情况;Western blot法观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3以及自噬相关标志蛋白beclin 1、LC3 和p62 的表达;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡.结果:AZD8055显著抑制胆管癌细胞的活力(P<0.05).吖啶橙染色后,AZD8055用药组橙红色颗粒增多. Western blot 实验显示,AZD8055处理后,与对照组相比自噬标志蛋白beclin 1表达上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例上调,p62表达下调;cleaved caspase-3表达降低,促凋亡蛋白Bax 表达降低,抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高( P<0.05).流式细胞术显示, AZD8055可抑制细胞凋亡.结论:AZD8055可抑制胆管癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞自噬相关.【总页数】5页(P1020-1024)【作者】刘特思;闫文帝;王雪;吕游;朴英实;林贞花;任香善【作者单位】延边大学肿瘤研究中心,吉林延边133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延边133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延边133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延边133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延边133002;延边大学医学院病理学教研室,吉林延边133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延边133002;延边大学医学院病理学教研室,吉林延边133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延边133002;延边大学医学院病理学教研室,吉林延边133002【正文语种】中文【中图分类】R735.8;R363【相关文献】1.抑制自噬可以增加mTOR抑制剂AZD8055引起的喉癌细胞株Hep－2的凋亡[J], 金香顺;王东旭;尤涛2.RNA干扰靶向抑制自噬调控基因Beclin 1对结肠癌细胞株HCT116自噬活性及增殖/凋亡的影响 [J], 吴淑华;何双;胡金龙;温菲菲;孙晨博;田东3.NOD8抑制人胰腺癌细胞自噬及凋亡对其自噬作用的影响 [J], 梁若龙; 曾琪; 王晗月; 胡巢凤; 罗森4.草氨酸钠对胆管癌细胞自噬与凋亡的影响 [J], 何大伟;何敖林;周明慧;于亚平;张明华5.lncRNA MALAT1调控人肝胆管癌细胞侵袭及凋亡影响胆管癌发生发展临床研究[J], 魏志成;马腾;车旭;赵宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
mTOR抑制剂AZD8055的抗肝癌机制探讨
mTOR抑制剂AZD8055的抗肝癌机制探讨刘欢;张阳德;李坚【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2013(23)12【摘要】目的雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂AZD8055抗肝癌活性及其作用机制.方法分别采用MTT法和流式细胞术测定AZD8055对HepG2肝癌细胞生长和细胞周期的影响；用TUNEL染色检测细胞凋亡；通过免疫印迹法检测信号通路中关键激酶下游靶蛋白磷酸化水平变化.结果 AZD8055对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且随着作用时间的延长,细胞增值率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐增加；其生长抑制主要是阻滞G0/G1期.AZD8055下调蛋白激酶B(AKt)和核糖蛋白S6激酶(S6K)的磷酸化水平.结论 AZD8055对人肝癌细胞HepG2的生长具有显著的抑制作用.【总页数】3页(P47-49)【作者】刘欢;张阳德;李坚【作者单位】中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南长沙410008;中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南长沙410008;中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南长沙410008【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.抑制自噬可以增加mTOR抑制剂AZD8055引起的喉癌细胞株Hep－2的凋亡[J], 金香顺;王东旭;尤涛2.一种新型PI3K/mTOR双抑制剂GDC-0941的抗肝癌机制探讨 [J], 杨维维;王丹萍;陈潇;崔羽;陈毓;梁雨蒙;邹祖全3.mTOR高选择性抑制剂AZD8055对乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株化疗敏感度的作用 [J], 丁木莲;李峰4.双mTORC1/2抑制剂AZD2014诱导的自噬对HCCLM3肝癌细胞增殖的影响[J], 廖晖; 徐小平; 周陈杰; 张健民; 钟克波; 杨定华5.mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究 [J], 林凯煌;蔡高阳;刘新城因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
miR-7-5p通过靶向抑制成纤维生长因子受体4影响胆囊癌细胞的增殖和迁移
miR-7-5p通过靶向抑制成纤维生长因子受体4影响胆囊癌细胞的增殖和迁移李云超;孙占峰;苏彬;胡金朋;王振国;王月明【期刊名称】《中国中西医结合外科杂志》【年(卷),期】2022(28)3【摘要】目的:探讨miR-7-5p对胆囊癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制。
方法:选取胆囊癌细胞GBC-SD,检测miR-7-5p和成纤维生长因子受体4(FGFR4)表达情况;通过TargetScan数据库检索调控FGFR4的miRNA,并用双重荧光素酶基因检测系统检测FGFR4与miR-7-5p结合情况;通过慢病毒将miR-7-5p转染GBC-SD 细胞,检测FGFR4、miR-7-5p mRNA和FGFR4蛋白表达,MTT检测细胞活性,Transwell检测细胞侵袭。
结果:在GBC-SD细胞中miR-7-5p低表达且FGFR4高表达(P<0.05);TargetScan预测FGFR4特异结合miR-7-5p,并在双重荧光素酶基因检测系统得到验证;GBCSD细胞慢病毒转染miR-7-5p后,FGFR4 mRNA和蛋白表达水平下调,细胞增殖率下降,穿膜细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05);沉默miR-7-5p后,FGFR4 mRNA和蛋白表达水平上升,细胞增殖率升高,穿膜细胞数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:miR-7-5p通过靶向抑制FGFR4而抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移。
【总页数】6页(P289-294)【作者】李云超;孙占峰;苏彬;胡金朋;王振国;王月明【作者单位】天津市宁河区医院普外科;武警特色医学中心研究部【正文语种】中文【中图分类】R735.8【相关文献】1.慢病毒介导的靶向沉默胰岛素样生长因子1型受体的siRNA对人子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响2.miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响3.miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移4.miR-210通过靶向抑制成纤维细胞生长因子受体样因子1(FGFRL1)调节癌细胞的增殖5.猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1靶向抑制微小RNA-515-5p表达对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
腺病毒介导的p53对胆管癌细胞生长的抑制作用
腺病毒介导的p53对胆管癌细胞生长的抑制作用鲁建国;林晨【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2000(021)006【摘要】目的研究p53基因对胆管癌细胞的作用. 方法将重组体腺病毒p53转移到人胆管癌细胞QBC939, 用RT-PCR、克隆形成实验、流式细胞仪、DNA片段化分析等方法对p53基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析. 结果用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体腺病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导. 用RT-PCR方法检测,在胆管癌QBC939细胞系中p53无表达. 重组体腺病毒能介导外源基因p53在胆管癌QBC939细胞系中高效表达. 重组体腺病毒介导的p53在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成. 流式细胞计数和细胞DNA Ladder, 证实p53能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞. 结论 p53基因可能通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用.【总页数】3页(P764-766)【作者】鲁建国;林晨【作者单位】第四军医大学唐都医院普外科;中国医学科学院【正文语种】中文【中图分类】R575.7【相关文献】1.腺病毒介导的p16和p53的联合应用对胆管rn癌细胞QBC939的生长抑制作用 [J], 鲁建国;马庆久;要秀;林晨;付明;张雪艳;梁萧;吴旻;黄志强2.腺病毒载体介导的野生型P53基因对前列腺癌细胞生长和致瘤能力的抑制效果[J], 褚庆军;李鹏波;江岩3.腺病毒介导的p53和顺铂的联合应用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用[J], 鲁建国;林晨;黄志强;马庆久;付明;张雪艳;梁萧;要秀;吴旻4.腺病毒介导的野生型p53基因表达对入胰腺癌细胞生长的影响 [J], 郭洪涛;刘彤华;高洁5.重组腺病毒介导的p53基因对肝癌细胞生长抑制作用的研究 [J], 张沁宏;王东;牟江洪;李增鹏;卿毅;杨宇馨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
微RNA-30d-5p通过调控ABCB5对胰腺癌进程的影响
微RNA-30d-5p通过调控ABCB5对胰腺癌进程的影响郑坚江;阿木提江·马合木提;郭磊;刘跃全;张涛【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2024(28)2【摘要】目的探讨微RNA(miR)-30d-5p在胰腺癌(PAAD)中的潜在作用和调控机制。
方法选择2016年12月至2019年1月来新疆维吾尔自治区人民医院接受手术治疗的胰腺癌病人35例,术后即刻获得胰腺肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织,采用实时定量PCR检测miR-30d-5p在胰腺癌组织和细胞中的表达水平。
使用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成、transwell和流式细胞术检测miR-30d-5p对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。
通过萤光素酶测定和蛋白质印迹法评估miR-30d-5p对ABCB5表达的调控作用。
进一步构建裸鼠成瘤模型通过肿瘤质量和体积验证miR-30d-5p对肿瘤生长的影响。
采用苏木精伊红染色验证肿瘤组织增殖情况。
结果与癌旁组织(1.03±0.17)及正常细胞(0.98±0.18)相比,胰腺癌组织(0.35±0.08)和细胞(0.63±0.08,0.23±0.07,0.48±0.07及0.31±0.05)中miR-30d-5p的表达显著降低(P<0.05);miR-30d-5p的过表达抑制了肿瘤细胞的活力、迁移和侵袭并促进了细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);抑制ABCB5的表达能抑制细胞活力、迁移和侵袭性并促进了胰腺癌的细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);体内实验证明miR-30d-5p组能够抑制肿瘤生长且差异有统计学意义(P<0.05)。
结论MiR-30d-5p通过靶向ABCB5影响胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,可能是PC病人潜在的预后生物标志物及靶向治疗的靶点依据。
【总页数】6页(P275-279)【作者】郑坚江;阿木提江·马合木提;郭磊;刘跃全;张涛【作者单位】新疆维吾尔自治区人民医院胰腺外科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.脱泛素酶OTUD7B调控肿瘤微环境和肿瘤进程的分子机制2.胰腺癌内质网应激微环境活化核转录因子-κB通路对内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78的调控作用3.低氧微环境下BANCR调控HIF-1α促进胰腺癌微淋巴管生成4.低氧微环境通过TGFBI调控Wnt/β-catenin通路介导胰腺癌化疗耐药及机制研究5.BANCR调控VEGF-C/VEGFR-3通路促进胰腺癌微淋巴管生成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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林省科技厅自然科学基金项目（Ｎｏ２０１８０１０１００７）；吉林省 教育厅自然科学基金项目（ＮｏＪＪＫＨ２０１９１１１６ＫＪ） 作者简介：王 雪 （１９９１－），女，硕士 生，研究 方向：肿瘤分 子病理 学，Ｅｍａｉｌ：８２５８１１３４９＠ｑｑ．ｃｏｍ； 任香善（１９７６－），女，博 士，副 教 授，硕 士 生 导 师，研 究 方 向：肿 瘤 分 子 病 理 学，通 讯 作 者，Ｔｅｌ：０４３３２４３５０９２，Ｅ ｍａｉｌ：ｒｅｎｘｓｈ＠ｙｂｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
关键词：ＡＺＤ８０５５；胆管癌；ＤＥＫ；上皮 －间质转化；增殖；迁 移；Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信号通路
胆管癌是源自胆管上皮细胞的恶性肿瘤，具有 易发生转 移、预 后 差 等 特 点［１］。 目 前，其 治 疗 手 段 以外科手术 切 除 为 主，辅 以 放 化 疗［２］，但 常 规 放 化 疗方法具有毒副作用大、易耐药等缺点。近年来，分 子靶向治疗是一种快速发展的治疗方法，可特异性 的结合肿瘤细胞并诱导其凋亡，但不会伤及肿瘤周 围的正常组 织 细 胞，因 此，分 子 靶 向 治 疗 也 被 称 为
中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ
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网络出版时间：２０１９－９－５９：３３ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．ｒ．２０１９０９０４．０９４０．０３６．ｈｔｍｌ
“生物导弹”。 研究表明［３］，在胆管癌中，Ａｋｔ／哺乳动物雷帕霉 素靶蛋白（ｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ，ｍＴＯＲ）信 号通路异常激活，并与肿瘤的侵袭和转移等恶性进 程呈正相关。ｍＴＯＲ在体内以 ｍＴＯＲＣ１和 ｍＴＯＲＣ２ 两种复合物的方式存在［４］。研究发现，ｍＴＯＲＣ１的 特异性靶向药物雷帕霉素，易出现负反馈作用，导致 Ａｋｔ的磷酸化［５］。ＡＺＤ８０５５是一种新型的 ｍＴＯＲＣ１ 和 ｍＴＯＲＣ２双重抑制剂（结构见 Ｆｉｇ１Ａ），能有效抑 制 ｍＴＯＲＣ１复合物引起的 Ａｋｔ负反馈活性。在肝 癌、神 经 母 细 胞 瘤 等 多 种 肿 瘤 中，ＡＺＤ８０５５通 过 抑 制细胞增殖和 ／或诱导细胞凋亡，从而达到抗肿瘤作 用 ［６－８］，但在胆管 癌 中 的 抗 肿 瘤 作 用 及 其 分 子 机 制 尚未见报道。
ＡＺＤ８０５５抑制胆管癌细胞
ＨｕＣＣＴ１的迁移及 ＥＭＴ进程的机制研究
王 雪１，３，毕宇宁１，３，闫文帝１，３，张 鑫１，３，董 颖１，３，匡子藤１，３，林贞花１，２，３，任香善１，２，３
（延边大学 １．肿瘤研究中心、２．医学院病理学教研室、３．吉林省科技厅重点实验室，吉林 延吉 １３３００２）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１９．１０．０１８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１９）１０－１４２９－０８ 中国图书分类号：Ｒ３２９．２４；Ｒ３９４．２；Ｒ７３５．８；Ｒ９１６４；Ｒ９７７６ 摘要：目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）双重抑 制剂 ＡＺＤ８０５５在抑制人胆管癌细胞 ＨｕＣＣＴ１的迁移及 ＥＭＴ 进程中的作用及分子机制。方法 ＭＴＴ法与平板克隆形成 实验检测 ＡＺＤ８０５５对胆管癌细胞增殖的影响；划痕愈合实 验和 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室迁移实验检测 ＡＺＤ８０５５对 ＨｕＣＣＴ１细胞 迁移能力的影响；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测 ＥＭＴ标志相关蛋白、 Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信号通路蛋白及 ＤＥＫ蛋白的表达；利用 ＳＴＩＴＣＨ、 ＧｅｎｅＭＡＮＩＡ数据库，分析 ＡＺＤ８０５５、ＤＥＫ、Ａｋｔ信号通路相互 作用关系；在 ＤＥＫ基因沉默后，检测胆管癌细胞增殖活力、 迁移能力及 Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信号通路相关蛋白表达水平的变化。 结果 ＡＺＤ８０５５可抑制胆管癌细胞的增殖及迁移能力，同时 抑制 Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信号通路相关蛋白、ＤＥＫ蛋白表达及 ＥＭＴ 的进程；沉默 ＤＥＫ基因可明显抑制胆管癌细胞增殖及迁移 能力，并降 低 Ａｋｔ、Ｓ６、４ＥＢＰ１蛋 白 的 磷 酸 化 水 平。结 论 ＡＺＤ８０５５抑制 ＨｕＣＣＴ１细胞的迁移及 ＥＭＴ进程，其机制与 下调 ＤＥＫ，抑制 Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信号通路有关。
原癌基因 ＤＥＫ是一种染色质调节蛋白，在胆管 癌中 呈 高 表 达［９］，可 通 过 调 节 Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信 号 通 路、转录因子等多种途径，促进肿瘤细胞生长、浸润 等过程［１０－１１］，提示 ＤＥＫ可作为抗肿瘤的靶点。因 此，本研究旨在探讨 ＡＺＤ８０５５对胆管癌细胞 ＨｕＣ ＣＴ１的抑制作用，阐明其分子机制，为胆管癌的临床 治疗提供新的实验依据及理论基础。 １ 材料 １．１ 细胞株 人胆管癌 ＨｕＣＣＴ１细胞，购自美国模 式培养物 保 藏 所 （ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， ＡＴＣＣ）细胞库。 １．２ 试剂 ＡＺＤ８０５５，购自美国 ＳｅｌｌｅｃｋＣｈｅｍｉｃａｌｓ 公司（批号：Ｓ１５５５），用 ＤＭＳＯ配制成 １ｍｍｏｌ·Ｌ－１ 的浓缩液，分装保存于 －２０℃冰箱；胎牛血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ）、ＯｐｔｉＭＥＭ 培养基，均购自美国 Ｇｉｂｃｏ公司；ＲＰＭＩ１６４０培养基，购自美国 Ｃｏｒｎｉｎｇ公 司；ｐ４ＥＢＰ１、４ＥＢＰ１、ｐＳ６、Ｓ６、ｐＡｋｔ、Ａｋｔ、上皮型钙 黏蛋白（ＥＣａｄｈｅｒｉｎ）、波 形 蛋 白 （Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、转 录 因 子 Ｓｎａｉｌ抗体，均购自美国 ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 公司；ＤＥＫ抗体，购自美国 ＢＤ公司；βａｃｔｉｎ抗体， 购自美国 Ａｂｃａｍ公司；ＭＴＴ、二甲基亚砜 （Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ），均 购 自 美 国 Ａｍｒｅｓｃｏ；吉 姆 萨 （Ｇｉｍｅｓａ）染色液，购自日本 Ｗａｋｏ；ＤＥＫ小干扰 ＲＮＡ