粘膜免疫佐剂的研究进展
兽用免疫佐剂的研究进展
兽用免疫佐剂的研究进展高泽乾;孙建男;武炜;李成会【摘要】佐剂可以增强机体对抗原的免疫应答反应,可以显著增强疫苗的免疫效果。
综述了在兽用疫苗研究领域中常用的免疫佐剂,并对佐剂的发展趋势作了展望。
%Adjuvant can improve the body＇s immune response to antigen and play an extremely important role to enchance vaccine effect.In accordance with consulting lots of Chinese and English literature,we review the research progress of the vaccine adjuvants commonly used in veterinary and prospect the development trend of the veterinary vaccine.【期刊名称】《唐山师范学院学报》【年(卷),期】2012(034)002【总页数】5页(P45-48,51)【关键词】免疫佐剂;免疫应答;疫苗【作者】高泽乾;孙建男;武炜;李成会【作者单位】唐山师范学院生命科学系,河北唐山063000;唐山师范学院生命科学系,河北唐山063000;唐山师范学院生命科学系,河北唐山063000;唐山师范学院生命科学系,河北唐山063000【正文语种】中文【中图分类】S825.4随着现代生物化学技术的飞速发展，兽用疫苗的研发获得了巨大成功，经历了从灭活死疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗等传统疫苗到基因工程疫苗、合成肽疫苗、转基因植物疫苗等新型疫苗的演变[1]。
新型兽用疫苗与传统兽用疫苗相比，具有良好的抗原特异性和低毒性，但由于其抗原分子小，纯化程度高，疫苗的免疫原性较差。
所以应用佐剂来增强疫苗免疫原性或增强宿主对抗原的保护性应答就显得尤为重要。
天然来源免疫佐剂的研究进展
• 454 •国际生物医学工程杂志2020年丨2月第43卷第6期丨nt J Biome(丨Eng. December 2020. Vo丨.43. No.6天然来源免疫佐剂的研究进展马兵邓博刘丹冷希岗刘兰霞中国医学科学院生物医学工程研究所，天津300192通信作者：冷希岗，Email:lengxgyky@;刘兰霞，Email:liulanxiabme@163.c.o m•综述.【摘要】随着人们对疫苗的不断研究和创新，免疫佐剂在疫苗的研发和制造中占据着越来越重要的地位：人们可从自然界中获取一些能增强机体免疫应答的物质，并制成佐剂应用于疫苗中，以此来提高疫苗的免疫效力这些天然来源的免疫佐剂往往具有毒性低、稳定性高、价格低廉等优点，为疫苗的研发提供了更多的可能性：对一些已被发现和使用的天然来源的免疫佐剂进行综述，主要包括植物来源(皂苷、多糖、蜂胶）、动物来源(细胞因子、树突状细胞)和微生物来源(病毒、细菌)的免疫佐剂，论述它们的作用与临床应用进展【关键词】佐剂，免疫；疫苗；天然来源基金项目：国家自然科学基金面上项目（31870920 );中国医学科学院医学与健康科技创新工程健康长寿先导科技专项(青年奖掖项目）(2019-RC-HL-015);中国医学科学院医学与健康科技创新X程项目（CAMS-I2M-3-004)D0I： 10.3760/ 121382-20200604-00606Research progress in natural source immune adjuvant Ma Bing, Deng Bo. Liu Dan, Leng Xigang, Liu LanxiaInstitute oj Biomedical Engineering, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College; TianjinKey Laboratory of Biomedical Materials, Tianjin 300192, ChinaCorrespondingauthors:LengXigang,Email:******************:Liu Lanxia, Email:********************【Abstract】With the contiiuious research an(l innovation of vaccines, imn仙adjuvants haveand more important in the development and manufacture of vaccines. Researchers ran oi)tain some substances thatcan enhance the body^s immune response from nature, and use them as adju\ants in vaccines, so as to improvethe immune efficacy of vaccines. These natural-derived immune adjuvants often have the advantages of low toxicity,high stability, and low price, which provide more possibilities for vaccine development. In this paper, some natural-derived immune adjuvants that have been discovered and used were reviewed, including plant sources (saponins, polysaccharides, propolis), animal sources (cytokines, dendritic cells) and mitT〇l)ial sources (vimses, bacteria). The roleand clinical application progress of these immune adjuvants were discussed.【Keywords】Adjuvants, immunologic; Vaccine; Natural sourceFund programs：National Natural Science Foundation of China (31870920); Chinese Academy of MedicalSciences Innovation Fund for Health and Longevity Pilot Project (Youth Award Program) (2019-RC-HL-015); ChineseAcademy of Medical Sciences Innovation Fund for Medical Sciences (CAMS-I2M-3-004)DOI: 10.3760/ 121382-20200604-00606〇引言为阻止病原菌对机体的侵害，人们将病原微生 物及其代谢产物经人工减毒、灭活或利用基因T程 等方法，制成用于预防传染病的自动免疫制剂，并 称之为疫苗。
脂质体作为疫苗免疫佐剂的应用研究进展
脂质体作为疫苗免疫佐剂的应用研究进展核心提示：2,李春玲1,王贵平1,侯加法2*（1.广东省农业科学院兽医研究所，广东广州510640；2.南京农业大学动物医学院，江苏南京210095）摘要：脂质体作为一种新型疫苗佐剂可同时增强机体的体液和2,李春玲1,王贵平1,侯加法2*（1.广东省农业科学院兽医研究所，广东广州510640；2.南京农业大学动物医学院，江苏南京210095）摘要：脂质体作为一种新型疫苗佐剂可同时增强机体的体液和细胞介导免疫应答，对疫苗有很强的增效作用。
通过分析脂质体的作用机理，概述脂质体作为疫苗免疫佐剂的一些优点以及目前在抗细菌、抗病毒、抗寄生虫以及抗肿瘤疫苗等方面的应用情况，列举出存在的问题并提出改进的方法，展现出脂质体未来良好的应用前景。
关键词：脂质体；疫苗；免疫佐剂佐剂（adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用时，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，而本身并不引起机体产生免疫应答的物质[1]。
理想的佐剂应该有以下特征：能促进体液和细胞介导的免疫，也能作用于弱免疫性抗原，而且不引起有害的副作用；能以不同途径免疫，也能用于不同的抗原；能在免疫抑制个体中发挥作用，应用于食用动物不应有残留，能有效影响免疫反应质量（型的控制、局部免疫以及细胞类型的控制），稳定、价廉、易生产[2]。
自1965年由英国的Bangha首先发现磷脂在水中可以自发形成脂质体（lipses）以来，对其试验研究日渐广泛[3]。
1974年Allisn等首次报道脂质体的免疫佐剂效应，从而拉开了脂质体作为免疫增强剂的序幕[4]。
脂质体是由类脂质组成的人造细胞膜样小球体，主要由磷酸类脂、胆固醇、硬脂胺等组成的单层或多层双分子夹水结构，可包裹多种疫苗，并有效地引入细胞内。
在体内趋向沉积于肝、脾、淋巴结等状内皮巨噬系统内，延长在体内停留时间，减少疫苗用量、降低毒副作用，提高免疫功能。
它对多种抗原和抗体具有明显的佐剂及载体作用，是目前最有希望成为理想的疫苗佐剂物质之一[5]。
鼻腔给药制剂_脂质体的研究概述
6． 作为靶向性制剂 进入体内后，脂质体主要被网状内皮系统（RES） 摄取，是治疗 RES 疾病理想的药物载体。但普通脂质 体仍然存在靶向分布不理想、稳定性较差等缺点。对 此，近年来医药工作者研制出一系列新型的靶向脂质 体，如通过对脂质体表面进行特异性修饰，使其能够靶 向到特异性组织；或是通过改变脂质双层的磷脂组成， 使脂质体在特定的靶器官释放药物。Tenu 等[13]应用 pH 敏感脂质体作为干扰素的载体可以激发巨噬细胞的宿 主防卫反应，而非 pH 敏感脂质体却无此作用。Babin－ cova 等[14]将 Fe3O4 拼入到磷脂双层中，在外加磁场条件 下，磁性脂质体靶向到特定组织中，以微波辐射 15min 后，所包封的药物 6-羧基-荧光素完全释放。Yanagie 等[15]将抗癌胚抗原（CEA）单抗制备成免疫脂质体，可 与细胞表面带有 CEA 的人胰腺癌细胞选择性结合，应 用这种免疫脂质体携带药物向瘤内注射，其抑瘤效果 较普通脂质体明显增强，且能破坏正常组织与癌组织 交界处的恶性细胞。
多糖作为免疫佐剂的研究进展
中国免疫学杂志2022年第38卷多糖作为免疫佐剂的研究进展①姜红蕾王凤山（山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，济南250012）中图分类号R392文献标志码A文章编号1000-484X （2022）05-0638-05［摘要］多糖能够作用于免疫系统，引起免疫应答，并且具有良好的生物相容性、低毒，是优秀的疫苗佐剂候选药物。
多糖的来源广泛，种类繁多，不同多糖所产生的免疫效果也不相同。
本文系统地综述了近年来关于具有疫苗佐剂活性多糖的研究，包括壳聚糖、菊糖、葡聚糖、脂多糖、中药多糖等，并展望了多糖作为佐剂的应用前景。
［关键词］多糖；佐剂；免疫；疫苗Research progress of polysaccharides as immunoadjuvantsJIANG Honglei ，WANG Fengshan.Institute of Biochemical and Biotechnological Drugs ，School of Pharmaceutical Sciences ，Shandong University ，Jinan 250012，China［Abstract ］Polysaccharides ，which generally have good biocompatibility and low toxicity and can induce immune responses ，are good candidates for vaccine adjuvants.There are many different kinds of polysaccharides due to that they come from a wide variety of sources and different polysaccharides can induce different immune responses.This article systematically summarizes the recent studieson the vaccine adjuvant activities of polysaccharides adjuvant activities ，including chitosan ，inulin ，glucan ，lipopolysaccharide andthe polysaccharides from Chinese medicinal herbs.In addition ，the future of polysaccharides as immunoadjuvants is prospected.［Key words ］Polysaccharide ；Adjuvant ；Immunity ；Vaccine接种疫苗是产生充分的保护性免疫反应来预防和控制传染病传播的最有效策略。
疫苗佐剂的研究进展
疫苗佐剂的研究进展一、佐剂的定义佐剂（Adjuvant）又称免疫调节剂（Immunomodulator）或免疫增强剂（Immunomodulator），是指先于抗原或与抗原混合或同时注入动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥辅助作用的一类物质。
佐剂的英文名adjuvant来源于拉丁文“adjuvare”,意思为“帮助”。
药物佐剂，即某种可以加强药物疗效的物质。
二、佐剂的作用佐剂可增强抗原的免疫原性、免疫应答速度及耐受性，可调节抗体对抗原的亲和性与专一性，可刺激细胞介导的免疫，可促进肠胃粘膜对疫苗的吸收。
佐剂的作用机制当前了解的很少，阻碍了设计新的佐剂化合物，佐剂常激活多个免疫链，其中只有少数与抗原特异应答相关，要想确切地知道佐剂的作用很困难。
佐剂能增加对细胞的渗入性，防止抗原降解，能将抗原运输到特异的抗原呈递细(APC5)，增强抗原的呈递或诱导细胞因子的释放。
在注射抗原后，抗原可直接被APC5吸收，与B细胞表面抗体结合或发生降解，抗原的吸收途径主要取决于抗原的特征，但也受佐剂影响。
被APC5吸收的抗原通过两种途径MHCI或MHCII而呈递于CD8+或CD4+T细胞上。
根据注射疫苗后分泌细胞因子方式的不同，可分为Th1应答与Th2应答。
Th1应答主要通过诱导分泌IFN-γ, IL-2和IL-12，而Th2应答是通过诱导分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-12，不同的细胞因子分泌模式是相互拈抗的，促进一种应答形式常会抑制另一种应答形式，产生I g G2a抗体被认为是Th1应答，然而诱导产生I g G1常与Th2应答有关。
不同的佐剂虽然可诱导相似的抗体水平，但是细胞因子应答的方式可能不同，Th1或Th2应答方式对于疫苗的功效有显著的影响。
评价佐剂质量的优劣或能否适用于人用疫苗疫苗的主要因素为：①能使弱抗原产生满意的免疫效果；②不得引起中等强度以上的全身反应和严重的局部反应，在局部贮留的硬结必须逐渐被吸收；③不得因其对佐剂本身的超敏反应，不应与自然发生的血清抗体结合而形成有害的免疫复合物；④不得引起自身免疫性疾病；⑤既不能有致癌性，也不得有致畸型性；⑥佐剂的化学组成应明确，物理和化学性质稳定；⑦在一定的保存期内的疫苗佐剂,应该稳定有效。
纳米佐剂的研究进展
纳米佐剂的研究进展黄兴;岳华【摘要】自从纳米材料诞生以来,就因其特殊功效而备受瞩目.纳米材料在医学领域中的应用十分广泛,用纳米材料研制疫苗佐剂已成为当前研究的热点.作者从目前常用免疫佐剂存在的问题、纳米佐剂的概念、纳米佐剂的研究进展、前景和展望共4个方面概述了近年来国内外纳米佐剂研究所取得的成果.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)009【总页数】4页(P210-213)【关键词】纳米材料;佐剂;免疫【作者】黄兴;岳华【作者单位】成都农业科技职业学院,成都,611130;西南民族大学生命科学与技术学院,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】S852.4免疫佐剂可辅佐免疫原刺激机体产生较早、较强、持久的免疫应答,理想的免疫佐剂应该能满足以下条件:在有效剂量内无毒或毒性极小;能刺激机体产生强大的体液免疫和/或细胞免疫应答;具有持久的免疫力;不诱导自身免疫;无致突变、致癌、致畸形作用等。
虽然现在已有许多佐剂应用于动物,但还没有哪一种佐剂能完全满足以上要求。
近年来,随着第2、3代疫苗的迅速发展,特别是多肽疫苗呈现出的极大发展空间,促使免疫佐剂也有了长足的进步。
纳米技术是一门具有广阔前景的新兴技术,纳米技术与免疫技术相结合的产物-纳米佐剂已成为了当前疫苗研究的热点。
从免疫学观点来看,纳米佐剂均匀性好,包裹或吸附的抗原颗粒正是巨噬细胞(M Φ)和树突状细胞(DC)的首选吞噬目标,为实现机体有效的免疫反应完成了重要的一步,而且纳米佐剂与多肽抗原或DNA疫苗连接后,可以避免常规佐剂载体效应的发生,起到保护抗原的作用。
作者回顾了20多年来人们对纳米佐剂进行的研究,现将取得的进展综述如下。
1 目前常用免疫佐剂存在的问题自从法国兽医免疫学家Ramon(1925)首先观察到在疫苗中加入某些与之无关的物质可以特异地增强机体对抗原的反应开始(周慧等,2004),近一个世纪以来,人们对免疫佐剂进行了大量的研究,许多新型免疫佐剂的出现,为预防人类和动物疾病作出了巨大的贡献。
M细胞在肠黏膜免疫中作用的研究进展_闫文慧
作者简介：闫文慧（1987-），女，研究生，从事寄生虫研究，Email：814345208@qq．com通讯作者：崔昱，Email：dlcuiyu@dlmedu．edu．cn ·综述·M细胞在肠黏膜免疫中作用的研究进展闫文慧，秦元华，任一鑫，郑莉莉，戴晓冬，崔昱大连医科大学寄生虫教研室，辽宁大连116044摘要：M细胞是肠道一种免疫细胞，同时，也是一种特殊的抗原运转细胞。
M细胞具有特殊的形态结构特点，与肠黏膜免疫功能密切相关。
目前认为，位于肠淋巴滤泡上皮中特化的M细胞是大多数黏膜病原体侵入机体的靶细胞，它能特异性的结合肠道大分子物质及微生物，并将其摄取、转运至位于其下的APC 进行识别、处理，并激活T、B淋巴细胞，继而激发肠道黏膜免疫应答作用。
本研究就目前国内外学者所做M细胞在肠黏膜免疫中作用的研究进展做一综述。
关键词：M细胞；病原体；肠黏膜免疫中图分类号：Ｒ392．11文献标志码：A文章编号：1005-376X（2014）03-0361-05DOI编码：10．13381/j．cnki．cjm．201403031Ｒole of M cells in intestinal mucosal immune：research progressYAN Wen-hui，QIN Yuan-hua，ＲEN Yi-xin，ZHENG Li-li，DAI Xiao-dong，CUI YuDepartment of Parasitology，Dalian Medical University，Dalian116044，ChinaCorresponding author：CUI Yu，Email：dlcuiyu@dlmedu．edu．cnAbstract：Objective M cells are a kind of immune cells in the gut，and also a kind of special antigen-transporting cells．With special morphological structure characteristics，M cells are closely related to the intestinal mucosal im-mune function．At present，the specialized M cells located in intestinal lymph follicle epithelia are the target cells of the body which most of the mucosal pathogens invade．They can specifically bind to the intestinal macromolecular substances and microorganisms，uptake and transport them to the following APC to be recognized，processed and activate T/B lymphocytes，and then stimulate the intestinal mucosal immune response．In this review，the research progress that the scholars at home and abroad have made on M cells in the intestinal mucosal immune function was reviewed．Key words：M cell；Pathogen；Intestinal mucosal immunity有研究显示，95%以上的人类或动物疾病感染发生在黏膜或通过黏膜入侵，黏膜组织有一套严密的感染防御体系即黏膜免疫系统，后者是宿主抵御病原体感染的第一道免疫屏障。
免疫佐剂的作用和发展
免疫佐剂的作用和发展佐剂（Adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。
佐剂可选择性地改变免疫应答的类型，产生体液和\或细胞免疫。
改变体液抗体的种类IgG亚类和抗体的亲和性。
佐剂可改变抗原的构型，使疫苗诱导T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞(CHL)反应。
佐剂可改变免疫反应为MHCⅠ型或MHC Ⅱ型。
佐剂还能改变T辅助细胞(Th1和Th2)的免疫反应。
随着生物技术的发展，新一代疫苗，如合成肽疫苗、基因工程疫苗等的研究已取得了初步成果，但现代疫苗研究过程所遇到的一个关键问题是其免疫原性较弱，往往需要佐剂来克服。
对适合于推广应用的新疫苗的研制，佐剂的研究显得至关重要。
因此，近年来免疫佐剂的研究进展更为迅速。
本文就各种免疫佐剂的研究现状和应用前景进行简要的讨论。
1 矿物质矿物质佐剂是传统佐剂中的一类，包括AL(OH)3和磷酸铝等。
1926年Glenny首先应用铝盐吸附白喉类毒素，至今已有70多年了，但它还是唯一被FDA批准用于人用疫苗的佐剂。
常用佐剂中效果较好的是AL(OH)3和磷酸铝佐剂，其次磷酸钙较常用。
铝佐剂主要诱导体液免疫应答,抗体以IgG1类为主,刺激产生Th2型反应，还可刺激机体迅速产生持久的高抗体水平,也比较安全,对于胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原是良好的疫苗佐剂。
它虽是人医和兽医均获批准的佐剂，广泛应用于兽医疫苗，特别是各种细菌苗，但其仍存在缺点：如有轻度局部反应，可以形成肉芽肿，极个别发生局部无菌性脓肿；铝胶疫苗怕冻；可能对神经系统有影响；不能明显地诱导细胞介导的免疫应答。
疫苗中加入磷酸三钙[Ca3(PO4)2]作佐剂，与铝胶一样具有吸附沉淀作用，但使用更加简便。
其缺点是：含盐量高；贮存日久有结晶沉淀。
皮下注射时偶有肿胀或结块,抗原免疫原性弱时,不足以提高其免疫原性,特别是保护性免疫机制要求活性介导的免疫参加时,应使用其他佐剂。
佐剂的研究进展
佐剂的研究进展“Adjuvant”,即佐剂,最早来源于希腊语“adjuvare”,也就是帮助的意思[1]。
随着DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗不断涌现,免疫佐剂研究越来越受到人们的关注.近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷,人们对佐剂的作用机理亦有更深入的认识.佐剂的概念及发展简史佐剂（Adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。
佐剂被用来增强疫苗的免疫反应已有近80年的历史，1925年，法国兽医免疫学家Ranmon发现疫苗中某些物质的佐剂作用，1926年Glenny证明明矾具有佐剂作用，1951年Freund研制成弗氏佐剂。
目前我国对蜂胶佐剂、油乳佐剂、核酸佐剂、细胞因子佐剂等新型佐剂的研究也有迅速发展。
1免疫佐剂的功能佐剂可选择性地改变免疫应答的类型，产生体液和\或细胞免疫。
如：弗氏完全佐剂（FCA）是细胞免疫的强刺激剂，也能刺激体液免疫；弗氏不完全佐剂（FIA）仅能刺激体液免疫。
改变体液抗体的种类IgG 亚类和抗体的亲和性，如壳聚糖、氧化甘露聚糖。
佐剂还可改变抗原的构型，使疫苗诱导T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞(CHL)反应。
如免疫刺激复合物。
佐剂可改变免疫反应为MHCⅠ型或MHCⅡ型。
如：白细胞介素4（IL-4）能上调MHCⅠ类抗原,IL-1可诱导MHCⅡ类反应。
佐剂还能改变T辅助细胞(Th1和Th2)的免疫反应。
FCA可诱导Th1型细胞因子，IL-18、IL-12也可强烈诱导Th1型细胞因子产生;FIA则是典型的只诱导Th2型细胞因子。
2免疫佐剂的分类目前,经动物实验证实有佐剂作用的物质多达百种以上,按佐剂作用可将其分为2类:①贮存型佐剂,即能以吸附成其他方式粘着抗原物质,注入机体后,可使抗原存留在一定的接种部位,并逐渐往周围释放,以延长抗原的作用时间,如铝佐剂。
肠道粘膜免疫应答机制综述
肠道粘膜免疫应答机制摘要：人体肠道内的黏膜是人体内环境与外环境间直接交流的主要界面。
肠道黏膜不仅是营养吸收及水分、矿物质交换的主要场所,同时也是许多病原体感染或起始感染的主要位点。
肠道粘膜免疫是机体免疫系统的重要部分，近年发现了病原体、肠道菌群、免疫疫苗、免疫载体在其免疫调节的机制发挥着极其的重要地位。
肠道黏膜免疫系统是由肠相关淋巴组织组成的复杂网络,具有完善的免疫反应机制和严格的免疫调控机制。
可以说,肠道黏膜免疫系统是机体抵御肠道病原体感染的第1 道防线,同时,也在宿主与外环境间黏膜稳态的建立和维持上发挥重要的作用。
本文简要综述简要介绍肠道黏膜免疫应答机制的研究进展以及介绍这些影响因素在肠道粘膜免疫的作用。
关键词：肠道黏膜免疫细胞应答机制肠道粘膜免疫病原体肠道菌群免疫疫苗免疫载体研究进展1 肠道黏膜免疫系统简介黏膜免疫系统由呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道及某些外分泌腺(如唾液腺、泌乳的乳腺等)粘膜相关的淋巴组织共同构成一个相对独立的体系，由于其所处的解剖位置相分布部位的特殊性，粘膜免疫系统既是机体系统免疫的重要组成部分，同时又具有其相对独立性。
传统观念认为淋巴细胞是来自骨髓或胸腺，在中枢淋巴器官巾分化、成熟后经淋巴循环定居于周围淋巴器官，担负免疫监视功能。
近年来大量的资料［37］显示脏器巾的淋巴细胞不完全由淋巴器官移入，存在着固有淋巴细胞，并统称为组织相关性淋巴细胞。
胃肠道黏膜不仅是消化、吸收营养物质的场所，而且还是重要的免疫器官，具有重要的免疫功能，与呼吸道的淋巴组织共同构成免疫系统的第一道防线。
2 肠道黏膜免疫系统组成肠道黏膜免疫系统，也称之为肠道相关淋巴组织（GALT），直接参与和调控肠道黏膜免疫调节，也是机体免疫系统的重要组成部分。
肠道黏膜免疫系统有以下部分组成：肠上皮细胞（IEC），肠上皮细胞间淋巴细胞（IEL），黏膜固有层淋巴细胞（LPL），肠粘膜下集合淋巴结（PP），以及黏膜组织内各种单核淋巴细胞，如T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突细胞（DC）等［35］。
壳聚糖黏膜佐剂促进黏膜免疫的研究进展
壳 聚糖 － Ｐ 体 中 ，经 滴 鼻 免疫 小 鼠后 可 诱 导 Ｔ Ｐ载
产 生较 高水 平 的特 异性 抗体 ， 加血 浆 Ｉ６ 粘 膜 增 ｇ、 ＩＡ的产 生及 诱 导细胞 免 疫 ，且 免疫 应答 与没 加 ｇ 佐 剂 的相 比可持 续 更 长 时 间， 说 明该 佐 剂促 进 这 了包 裹 的抗 原 到达 鼻 淋 巴结 （Ａ Ｔ 和 引 流 淋 巴 ＮＬ ） 结 ， 实现 了其 缓 慢释 放 。将流 感 病 毒与 壳 聚糖 并 共 同接 种 于 Ｂ ｌ ／ ａ ｂ ｃ小 鼠的 鼻腔 内 ，血 清 Ｔ Ｇ抗 ｇ 体 明显 升 高 并且 还 产 生 了局 限性 ｓ ｇ ＩＡ反 应 ， 说 明壳聚 糖可 作 为佐剂 诱 导局 部粘膜 免 疫 。用 壳聚 糖 包 裹 脑 膜 炎 双 球 菌 疫 苗 （Ｃ — Ｒ １ ７ 免 疫 Ｍ ＰＣ Ｍ９ ）
倍受关 注 ：它 能与活 体组 织相容 ，被体 内的溶菌 酶 、 胃蛋 白酶 降解后 ，降解产物 能 完全 被人 体 吸
收， 无毒 、 副作 用 而且 壳 聚糖 还 具 有 降低 血 脂 、 无
提高免 疫力 、 抗肿 瘤等特 点， 目前 已作为一 种 新型 的保健 品上 市销 售 瞳。对 壳 聚糖 进 行季 铵 化修 饰 ］
鼻腔免 疫策 略成功 的关键 。研究 者们 已采 用各 种 各样 的疫苗 载体或 加入 佐剂 以提 高疫 苗在 鼻腔 处 的吸 收率 ， 如粉 末 制剂 、 微球 制 剂 、 液制 剂 或 加 溶 入 表面 活性剂 、 膜渗透 促进 剂 以及 粘 附剂 等 。 黏 其
中凝胶制 剂是较 新 的一类 剂 型 。与 常用 的溶 液 剂 型 或粉末 剂型相 比， 的黏度较 高 ， 它 能有 效延 长 疫 苗在 鼻腔 中 的停 留 时问 ，同 时实现 疫苗 的缓 慢 持 续释 放 ［。
我国免疫佐剂的研究进展(共54张PPT)
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▪ 3.3.2 CpG序列(CpGmotifs)
▪ CpG序列是指一类以非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸 (CpG)为核心的寡聚脱氧核糖核苷酸。主要存在于病毒、细 菌及无脊椎动物的基因组中，而脊椎动物基因组中较少，且 大部分是甲基化的。
▪ CpG序列可激活T细胞、B细胞、NK细胞等免疫活性细胞, 产生大量的多种细胞因子,增强机体的特异性和非特异性免 疫效应。
目前报道的最有效的黏膜免疫佐剂是CT、LT，它们能促进 和增强许多不同的细菌和病毒抗原的免疫原性,但是所造成腹 泻性不良反应,使得它们不能应用于临床。只有通过基因突变 产生的无毒性或减毒CT、LT以及CAP则可作为安全有效的黏膜 佐剂。动物细胞因子、CPG序列、微生物及其代谢产物是目前常 用的黏膜佐剂。
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1.3 根据其物理和化学性质：
▪ 把佐剂分为凝胶型佐剂、微生物来源佐剂、微粒型佐剂 、乳剂和合成佐剂(如非离子阻断共聚物) 。
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1.4 按其来源分为：
• 无机盐：如铝盐佐剂； • 植物来源：如QS21； • 细菌来源：如霍乱毒素(CT)、大肠杆菌不耐热毒
▪ 其副作用限制了它们在临床上的应用,除少数兽用疫苗如口蹄疫疫 苗使用FIA外,很少用于动物免疫,更不能用于临床医学。
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▪ 3.3 黏膜免疫佐剂
黏膜是阻止入侵的重要生理防线.黏膜免疫方法与传统的 肌肉注射方法相比有以下优点:
①口服或鼻腔内接种可避免针剂的疼痛,减少注射局部的炎症反应,易 于重复接种；
▪ 铝盐佐剂是一类含Al3+的无机盐，主要有氢氧化铝胶，简称铝胶。是一种具
有良好吸附作用的佐剂。不仅可将可溶性抗原吸附于铝胶分子表面,还可浓缩抗 原,减少注射剂量，是良好的沉淀剂。
基因疫苗黏膜免疫及其机制的研究进展
基因疫苗黏膜免疫及其机制的研究进展秦妍;管晓燕【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2016(040)004【总页数】3页(P426-428)【关键词】基因疫苗;黏膜免疫;分泌型免疫球蛋白;免疫佐剂【作者】秦妍;管晓燕【作者单位】遵义医学院口腔医学院,贵州遵义563099;遵义医学院口腔医学院,贵州遵义563099;贵州省高等高校口腔疾病研究特色重点实验室遵义市口腔疾病研究重点实验室,贵州遵义563099【正文语种】中文【中图分类】R780.2基因疫苗是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的载体质粒上，然后将重组质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。
以达到预防疾病的目的。
现已证实基因疫苗的有效性及安全性，但存在人体不能对基因疫苗进行有效的吸收以及机体对抗原的免疫耐受等不足，使其在人体中的免疫效果不佳。
近年来，对基因疫苗的免疫策略、免疫效果及作用机制已进行了大量的研究。
肌肉注射法因外源基因在体内的表达水平较低，免疫效果不够理想。
基因枪法、电穿孔等递送技术的发展均显著提高了基因疫苗的活体递送效率，使基因疫苗免疫具有较强的诱导免疫应答的能力[1-2]。
口服、鼻腔黏膜滴注等黏膜免疫途径因其给药安全方便，价钱便宜，安全等优点[3]已受到广泛关注。
基因疫苗的黏膜免疫途径不同，所产生的免疫应答强弱也不同。
本文就基因疫苗的黏膜免疫的效果及其机制研究现状做一综述。
黏膜免疫系统(MIS)是指广泛分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道黏膜下及一些外分泌腺体(唾液腺、泪腺、乳腺)处的淋巴组织，这些淋巴组织提供了天然的保护，防止病原体从机体表面进入，减少病原体散布到黏膜下组织、局部淋巴结、血液中。
因此，黏膜免疫系统是机体抵抗病原体入侵的第一道免疫屏障，同时，黏膜免疫系统也是免疫系统中最大的部分，是执行局部特异性免疫功能的主要场所。
近年关于黏膜免疫的前沿研究提示,诱导黏膜局部免疫应答,将比常规的全身免疫更有助于清除黏膜感染病原体,预防感染的扩散和慢性化[4]。
肠道黏膜免疫系统的研究进展
肠道黏膜免疫系统的研究进展生物与感染2007年筮2鲞筮塑』!垫!丛鉴!!oJ!.肠道黏膜免疫系统的研究进展柬弋综述王健伟审校人体肠道内的黏膜总面积约为300m2,是人体内环境与外环境间直接交流的主要界面.肠道黏膜不仅是营养吸收及水分,矿物质交换的主要场所,同时也是许多病原体感染或起始感染的主要位点.肠道黏膜免疫系统是由肠相关淋巴组织组成的复杂网络,具有完善的免疫反应机制和严格的免疫调控机制.可以说,肠道黏膜免疫系统是机体抵御肠道病原体感染的第1道防线,同时,也在宿主与外环境间黏膜稳态的建立和维持上发挥重要的作用.本文简要综述了肠道黏膜免疫系统的组成和免疫机制研究进展,并对现今研究的热点问题进行了讨论.肠道黏膜免疫系统组成肠道内的黏膜免疫系统由肠相关淋巴组织(t—associatedlymphoidtissue,GALT)组成.GALT主要以两种形式存在:一种是呈弥散分布的淋巴组织(scatteredlymphoidtissue),即在肠道黏膜上皮及固有层(1aminapropria,LP)内散在的淋巴细胞,它们是肠道黏膜免疫系统行使免疫保护功能的效应位点;另一种为组织化的淋巴组织(organizedlymphoidtissue),如派氏结(Payerpatch,PP),肠系膜淋巴结(mesentericlymphoidnode,MLN)及较小的孤立淋巴滤泡.这些淋巴组织作为肠道黏膜免疫系统的诱导位点(inductivesite),负责起始肠道黏膜内的免疫反应.其中,特别要指出的是PP区域的滤泡相关上皮(follicle—associatedepithelium,FAE)中存在的一种特殊的M细胞(microfoldcel1).M细胞表现出高度的跨细胞转运活性,所以一般认为它是肠道黏膜免疫系统的"入口",是GALT摄取外界抗原最主要的细胞[11.肠道黏膜免疫反应机制肠道黏膜免疫系统是机体免疫系统内最大也是作者单位:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制研究所,北京100052通讯作者:王健伟,E-mail:wangjw28@vip.sina.COB最为复杂的部分l2J,这不仅仅是因为肠道的内环境非常复杂,使得肠道黏膜免疫系统持续地受到包括病原体,食物蛋白和共生菌群在内的信号刺激,同时还因为肠道黏膜免疫系统需要依靠严格的调节机制来区分这些信号中的危险信号和无害信号.对于无害信号刺激,GALT或是保持一种低反应性的免疫监视状态,或是调动免疫耐受机制;而对于危险信号,GALT则及时反应将其清除,从而维持肠道内环境的稳定.对于正常的食物蛋白,肠道黏膜免疫系统主要通过由调节性T细胞介导的主动抑制和抗原特异性T细胞克隆无反应或缺失(clonalanergyO1"deletion)等机制诱导的口服耐受来防止对食物蛋白的过敏反应_3J.另外,肠道内还有大量的微生物定居,肠道生态系统的长期进化最终导致GALT下调针对正常存在的共生菌群的固有炎症反应.概括来讲,GALT对共生菌的低反应性主要是由共生菌自身的特点,小肠上皮细胞(epithelialcell,EC)表面的特性及肠道黏膜LP内免疫细胞的特点3个方面的因素所决定.从共生菌自身的特点来看,它们与致病菌不同,不能表达黏蛋白酶及黏附,定居和侵入因子,因此不能分解肠道内保护性的黏液层.小肠蠕动形成的黏液层流可以将共生菌冲离肠道表面,使其不能黏附EC,破坏上皮屏障.另外,可能由于共生菌具有五聚化的类脂A(pentacylatedlipidA),比致病菌的六聚化类脂A(hexacylatedlipidA)要短_4J,所以它们只表现低的内毒素毒性(endotoxicity),不会引发强的炎症反应.从黏膜上皮细胞的角度来看,首先,EC表面缺少识别共生菌病原相关分子模式(pathogen—associated molecularpattern,PAMP)的Toll样受体(Tolllike receptor,TLR),如TLR2,TLR4,MD2和CD14t;其次,这些固有免疫的传感分子被阻隔和"隐藏"起来,如]rIB5在基底侧表达,使其不能与EC顶侧的共生菌接触_6J,因此不能有效地识别共生菌的PAMP;最后,GALT在共生菌群存在的压力下,诱导永久活化的抗炎症反应系统.研究发现,诱导活化细胞核受体过氧化物酶体增殖子活化受体7(pemxisome—ofMicrobesandIrffeetion,M—arch2007—,Yol2,No.Droliferator-activatedreceptor-y,PPAR一)可抑制TLR 诱导的NF-信号传导通路l,从而抑制了炎症反应的发生.从肠道黏膜LP的特点来看,LP内含有特殊的耐受性树突细胞(dendriticcell,DC),巨噬细胞和调节性T细胞,这些免疫细胞可以产生许多抗炎症的细胞因子,从而下调针对共生菌的固有炎症反应,维持了肠道内环境的稳定J.与共生菌群相反,肠道内病原体则可被GALT识别并引起免疫保护反应.然而准确地说,GALT识别的是一种危险信号,不仅包括致病的细菌,病毒等分子,也同样包括肠道内过量存在,甚至侵入EC的共生菌群.GALT针对病原体引发的危险信号的反应起始于PP,MLN或小肠黏膜中的孤立淋巴滤泡8.以PP为例,病原体主要是通过FAE中的M细胞进行摄取,并呈递到抗原呈递细胞(antigen- presentingcell,APC),APC继而将抗原呈递到黏膜内的淋巴细胞,活化的淋巴细胞在归巢受体的介导下到达效应组织.在效应位点处,抗原起始的免疫球蛋白A(Ign)B细胞分化成为IgA浆细胞,并向肠腔内分泌大量的抗原特异性的二聚化或多聚化的IgA,以捕获和清除腔内的抗原.另外,效应组织中还含有多种T细胞亚型,表现出辅助,调节和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)等活性,以完成和调节黏膜表面保护性的免疫反应.同时,黏膜组织摄取的抗原还可以进入淋巴循环,诱导全身陛免疫反应的发生. 而GALT针对过量增生的共生菌群所引发的反应则是在小肠的隐窝处起始的E8J.正常情况下,小肠的隐窝处于相对无菌环境,一旦上皮层表面共生的微生物体生长过量,那么隐窝处的菌体密度就会升高, 这种危险信号可以被隐窝内上皮细胞表面的TLR 和NOD2/CARD15分子识别L9J,继而引发固有免疫反应,诱导潘氏细胞(panethcel1)分泌抗菌多肽,清除过量存在的微生物体.肠道黏膜免疫系统研究中的热点问题1.M细胞不是唯一的抗原摄取位点尽管FAE相关的M细胞被认为是吸收腔内抗原并起始抗原特异性免疫反应的主要位点,但是,M细胞不表达主要组织相容复合物(MHC)I1类分子_2],因此,M细胞可能并不是肠黏膜唯一的抗原摄取位点.现今的研究认为,肠黏膜摄入抗原至少还有另外3种可选择的方式:首先,在小肠PP附近的微绒毛上皮中存在另一种微绒毛M细胞(viUousMcel1)[m],它可能是一个小肠摄入抗原的新入口,并且也可能是新的病原微生物入侵位点.另外,肠黏膜Dc参与一个摄入抗原的M细胞非依赖途径(Mcell—independent pathway).DC表达一些紧密连接相关蛋白(如occludin,claudin1和zonulaoccludens1),可与紧密连接的某些结构成分相互作用,使DC能够将其突起伸入上皮细胞间隙.通过这些伸向外界腔体的突起,DC可以收集抗原,并将这些抗原呈递到T和(或)B细胞.还有报道指出,表达CD18分子的巨噬细胞也参与这种M细胞非依赖途径来呈递入侵的细菌抗原【11』.第3种抗原摄入的途径是通过EC本身.一些实验证明,EC可以加工抗原并通过MHCI类和Ⅱ类分子向T细胞和B细胞呈递抗原L】. 2.上皮内淋巴细胞的功能GALT内存在一类黏膜免疫系统内特有的T细胞群,即上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocyte,IEL),它们在黏膜的免疫防御中也起到了非常重要的作用.肠道黏膜内的IEL分为两类,一类为CD8a~3IEL,另一类为CD8aa IEL,如T细胞.与黏膜固有层淋巴细胞(1amina proprialymphocyte,LPL)相比,IEL中含有少量的℃RCD8offl"细胞(一10%).大多数(一50%)的CD8IEL为℃RCD8eaT细胞或TaTCRCD8aaT细胞_】引.CD8a~3IEL在胸腺中发育,并且通过选择性地表达CCR9和a4』37整合素而迁移到黏膜区域¨.而对于CD8aaIEL,之前的研究认为其发生是非胸腺依赖的,该类T细胞亚群主要在肠相关的隐窝结节(cryptopatches,CP)处发育.但是最新的研究发现,小肠内的T细胞,不论是表达同源二聚体(呶)的CD8分子,还是表达异源二聚体(a8)的CD8分子,都是来源于CD4,CD8胸腺细胞[15J.此外,CD8actIEL与CD8a~3IEL还存在一个重要的差别,即TCRCD8a~3IEL为MHCI类分子依赖的,而CD8actIEL则是MHCI类分子非依赖的【].因此,rI℃RCD8IEL在MHCI类分子的限制下,对细胞质内的抗原表现出较高的细胞毒性;而CD8actIEL则不受MHCI类分子的限制,表现低水平的细胞毒性.一些非经典的MHC分子,如胸腺白血病抗原(thymusleukeITliaantigen,TL),Qa一1,Qa,2,CD1和MHCI类相关分子(MHCclassI—relatedmolecule,如MICA和MICB)等,可能具有向CD8aaIEL呈递非蛋白抗原的能力[17-19].例如,当细菌或病毒感染EC后,EC随即表达MICA这种非经典的MHC分子,胞内抗原进而被MICA呈递给TCRCD8~aIEL,诱导其细胞毒性作用,从而杀死感染的EC,阻止病毒和细菌在机体内继续扩散.另外,有2OO7年3月第2卷第1期Jo—urnalofMicro—besandInfection,March2007,V ol2,No.1研究发现,小肠EC表面还持续表达另一种非经典的MHC分子——11L[驯.11L与IEL的CD8aa相互作用促进了某些细胞因子的生成,但不造成CD8aalEL 的增殖和细胞毒性反应,因此不会造成对肠道上皮的破坏当然,对于IEL还需要进行更进一步的研究.但是,以上的种种发现至少可以说明,在黏膜IgA型B细胞介导的体液免疫与CTL介导的细胞免疫之外,IEL又可为肠道黏膜提供另一层免疫保护. 3.PP中的DC在肠道黏膜免疫系统中的作用DC是一类重要的抗原呈递细胞,具有摄取抗原,并将其呈递到免疫效应细胞表面的功能.同时,DC还是黏膜获得性免疫的调节因子,特别是在小肠的PP,这种调节作用更为明显.在PP中,DC主要分布于FAE下的上皮下穹隆(subepithelialdome,sED)区域[21].PP内的DC通常可以分为3个不同的亚型,并且各个亚型的功能也存在差异J.第1个亚型的DClCD8a—CD1lb(髓样DC)]特异性定居在PP的SED区域,在表达CD1lb分子的同时主要分泌IL-10.第2个亚型的DC[CD8aCD1lb一(淋巴样DC)]表达CD8aa分子并定位于PP中T细胞富集的滤泡间区域(Tcell—richinterfollicularregion,IFR).第3个亚型的DC(CD8a—CD1lb一)既不表达CD1lb,也不表达CD8ct,因此被定义为双阴性DC(double negative(DN)DC].DNDC位于SED,WR和FAE内,与CD8a+CD11b-DC有一些相似的功能特点l引. 例如:两类DC在受到细菌刺激后都分泌IL-12p70.在黏膜淋巴组织中,DNDC占有很高的比例(占PP的29%,占MLN的30%)J.最近的一项研究表明,DNDC可以从呼肠孤病毒感染引发凋亡的肠细胞内摄取病毒抗原【24J.PP中的DC担负着多种重要的职责:首先,DC调节CD4辅助性T细胞(Thelpercell,111)的多样性反应.当CD4T细胞暴露于抗原后,会产生不同类型的分化反应,最终可在特定的细胞因子调节下分化成为Thl(分泌7一IFN),Th2(分泌IL4和IL-13), 1h3(分泌TGF.13),Tr.1(分泌ILdO)或Treg细胞并导致GALT趋向不同的免疫反应结果.而PP中存在的不同DC直接介导了这种CD4T细胞反应的差异性.研究发现,CD8a—CD1lbDC分泌IL-10,TGF-13和IL-6,诱导抗原特异性的CD4幼稚T细胞分化为调节性T并引起口服耐受,同时还刺激CD4T细胞高水平地分泌IL-10和IL广4,并与IIJ- 6L22J一起作用于B细胞以调节IgA的生成;而CD8aCD1lb一和DNDC则分泌IL-12,可诱导T细胞分化成为辅助性T细胞,进而引发CTL反应,并诱导B细胞产生I抗体以清除体内的病原体J.其次,PP和MLN中的DC可调节T细胞归巢至肠黏膜.因为PP的DCE]和MLN中的DC【26J可以增强CD8+T细胞表面a4岛整合素和CCR9的表达,从而调节T细胞在黏膜组织中的迁移.最后,PP内的DC还具有诱导IgA产生的能力.这种诱导IgA生成的反应既针对病原体,同时也选择性地针对共生菌群[引.结语肠道黏膜免疫系统是机体内部一个结构独立,功能复杂的免疫网络.它的存在确保了GALT在针对病原体的免疫反应与针对非病原体诱导的耐受之间,在机体的内环境与外环境之间建立一种动态的平衡,以维持机体自身的稳定.对肠道黏膜免疫系统的研究还需进一步深入,有待阐明的主要有如下几个方面:(1)GALT摄取肠腔内抗原的机制;(2)GALT趋向耐受或是趋向保护性免疫反应的调节机制;(3)DC在肠道黏膜免疫系统中的作用.这些机制的阐明将会为口服黏膜疫苗的开发及过敏性或自身免疫性疾病的治疗提供更多的思路和方法.参考文献1.BraydenDJ,JepsonMA.BairdAW.Keynotem~ew:intestinal Peyer'SpatchMcellsandoralvaccinetargeting.DrugDiseovToday,2005,10:l145～11572.Mowat,AM.Anatomicalbasisoftoleranceandimmunityto intestinalantigens.NatRevImmuno1.2oo3.3:33l一34l3.StrobelS,MowatAM.Oraltolelanceandallergicresponsesto foodproteins.CurtOpinAllergyClinImmunol,2006,6:207～2l34.GolenbockDT,HamptonRY,QureshiN,eta1.LipidA?like moleculesthatantagonizetheeffectsofendotoxinsonhuman 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最新：消化内镜切除技术中黏膜下注射液的研究进展
最新：消化内镜切除技术中黏膜下注射液的研究进展【提要】近十几年，内镜切除技术不断发展普及，在消化道癌前病变与早期癌变的治疗中应用广泛。
内镜切除技术主要包括息肉切除术、内镜黏膜切除术(endoscopic muscosal resection , EMR )、内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection z ESD ∖其中ESD 及多数EMR术中都需要黏膜下注射这一重要操作，通过该操作使病灶与肌层分离，这对黏膜的完整切除及预防出血穿孔等都非常重要，同时也促进了内镜技术的推广应用。
如何选择合适的黏膜下注射液值得关注，本文就目前黏膜下注射液的研究现况进行阐述，并展望了未来黏膜下注射液的发展方向。
【关键词】注射剂；内镜黏膜切除术；内镜黏膜下剥离术据国家癌症中心公布的数据,2015年中国胃癌结直肠癌新发病例79.1万例，占全部恶性肿瘤发病的20.13% ;由结直肠癌导致的死亡病例47.8万例，占全部恶性肿瘤死亡的20.44%o减少消化道癌的发病数量及降低其死亡率是我国所面临的严峻问题，有充分证据证明对早中期胃及结直肠病灶内镜切除后能够降低胃癌、结直肠癌的发病率和死亡率。
内镜切除技术已被广泛应用于消化道早期肿瘤病变的治疗中，而且相对于外科手术治疗, 还具有治疗周期短及并发症少的优势，两者生存率差异也无统计学意义。
为提高内镜下病变黏膜切除的方便性，通常会采取黏膜下注射的方式使病灶与肌层分离，这对黏膜的完整切除和穿孔的预防都非常重要。
另外，黏膜下注射还可用于切除术中的止血、提高细胞内镜诊断能力及辅助鉴别食管癌分期等。
不同使用情况下对黏膜下注射液的要求不同，不同黏膜下注射液也具有不同的特性。
一、黏膜下注射液的使用范围黏膜下注射的操作，是将液体填充于黏膜层与固有肌层间，形成黏膜下垫, 可使操作更安全，故被广泛用于内镜切除术中，其中又以内镜黏膜切除术（EMR ）、内镜黏膜下剥离术（ESD ）最常见。
一些新型免疫佐剂的研究进展
中图 分类 号 ： ８ ２５ ￥５．
文献 标识 码 ： Ｂ
文章 编号 ：０ ４ ５ ９ （０ ６０ — ０ ０ ０ １０ — ０ ０２ ０ ）７ ０ １ — ２ 扰 素诱 生 剂 和某 些 细胞 因子 作用 下 所产 生 的一 类 高 活性
免 疫 佐 剂可 以理解 为 能 加 强抗 原 的免 疫 原性 和免 疫 保护效 果 的物质 。这 种 加强 的免疫 功 能 ， 可表 现 为增 强与
细 胞 因子 （ｙｏ ｉｅｃ ） 由细 胞分 泌 的 、 够影 响其 ｃｔｋｎ ， 是 ｋ 能 他 细胞功 能 的多肽 ， 它产 生于 天然 免疫 和特 异免 疫 的效应 阶段 ， 对免疫 应答 、 炎症反应 进行 介导 和调 节作用 。细胞 因 具有 明 显 的免 疫佐 剂 效 应 ， 增 强病 毒 、 菌 和寄 生虫 可 细
‘ 于多种 免疫 活性 细胞 ， 扩 大其功 能 ， 并 在抗 感 染免 疫 、 制 抑
新 的疫苗 研究 热 中 ，除了研 究 Ｄ Ａ疫苗 的 免疫 机理 和 Ｎ 免疫途 径外 ， 发现核 酸本 身具有 佐剂 作用 。 还
２ １ Ｃｐ ． ＧＤＮＡ
肿 瘤细胞 生 长及 维持 机体 内环 境 的平衡 中起 着重 要作 用 。 人 的 Ｉ＿ Ｌ ｌ已工业 化 生产 ， 在进 行临 床治 疗试 验 ， 正 主要 用
高抗 体滴 度 ， 也有 明 显 的副 作 用 ， 但 主要 表 现为 发热 和 拉
稀。
序 列 。Ｃ Ｇ Ｎ ｐ Ｄ Ａ能 在动 物体 内诱 生强 烈 的免疫 反应 ， 主要
２ 核 酸 佐 剂
白介 素 １是于 １ ８ ９ ３年第 一 个被 发现 有免疫 作 用 的细
，
胞 因 子 ，是 由抗 原一 体 复合 物 、 ｏＡ、 Ｐ Ｌ Ｓ及 ＭＤ 抗 Ｃ ｎ Ｐ Ｄ、Ｐ Ｐ
黏膜疫苗抗原运输方式及佐剂研究进展
说， 黏膜 免疫 系统是 免疫 系统 中最 大 的部 分 ， 体近 机 ５ 的淋 巴组 织存 在于 黏膜 系统 ， ０ 因此 ＭＡＬ 是发 Ｔ 生 局部特 异性 免疫 应答 的主要 部 位 。诱 导 黏膜 免疫
应 答对疾 病 的预 防和控 制具 有重 要 的意义 。 黏膜 疫苗 抗原 诱 导 的免 疫 应 答 具 有 多 型 性 ， 不 仅诱 导 系统 性 免 疫 应 答 ， 能 产 生 黏 膜 免 疫 应 答 。 还 疫造 成 的副反 应及 易 于广泛免 疫 的优 点 。虽 然 黏膜
发现 ， 有效 的黏 膜 疫 苗 与抗 原 的有 效 运 输 和 高 效 的
佐 剂 紧密相 关 。
１ Ｍ 细 胞 受 体 的 配 体 可 以 介 导 黏 膜 疫 苗 抗 原 的 高效 运 输
一
用 。一 种有 效 的疫苗 应该 能够 没有 风 险地 增 强 由先
天 性免 疫应 答 到适应 性免 疫应 答 的过渡 。 ］ 黏膜免 疫 系统 （ ｃｓｌ ｍｍｕ ｅｓ ｓｅ ｍｕ ｏ ａ ｉ ｎ ｙ ｔｍ，ＭＩ ） Ｓ
上 占很 少 比例 ， 限制 黏 膜 疫 苗 应 用 的 主要 原 因是 抗
安 全 而有 效 的黏膜 佐 剂及 选择有 效 的抗 原运输 系统是发 展黏 膜疫 苗 的必须 条件 。论 文就 近几年 来黏 膜 疫苗
佐 剂及 抗原 运输 方式进 行 综剂 ； 输 形 式 黏 佐 运
中 图分 类 号 ： ８ ３ ￥ ５ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （ ０ ２ ０ — ０ ７０ １ ０ －０ ８ ２ １ ） ７０ ９ — ４
黏 膜表 面在 动物 身体 和外 界环 境 之 间组 成 了一 个 很 大且很 重 要 的界 面 ， 了维 持 正 常 的生 理 功 能 除 外 ， 是抵 抗 病 原 感 染 的 第 一 道 防 线［ 。先 天 性 免 还 １ ］ 疫 应答 在 预 防病 原初 步 感 染 时 发 挥 重 要 作 用 ， 适 而 应 性免 疫应 答在 预 防病原 二次感 染 中起 着 关键 性 作
疫苗佐剂的研究进展
疫苗佐剂的研究进展李丹1陈阳2刘宇1王爽1王岩1秦明伟1史同瑞1(黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161000)(哈尔滨铁路兽医卫生处哈尔滨150006)佐剂最早来源于拉丁语“adjuva re”一词,为“帮助”,是指能够提高机体对抗原的适应性免疫应答的物质,能够在免疫反应中诱导全面持久的免疫应答。
在疫苗制剂中,佐剂的功能主要包括:增强疫苗抗原的免疫原性;促进细胞免疫和体液免疫,优化免疫应答,促进免疫能力较弱人群中的免疫应答;增进抗原与黏膜之间的传递以及免疫接触;减少疫苗成分中抗原的需求量以及在实施过程中的免疫接种次数;优化抗原结构,维持抗原构象等。
从巴斯德至今近百年来已开发了许多菌苗和疫苗,但传统的疫苗一般多为全菌或全病毒制成,其中含有大量非免疫原性物质,这些物质除具有毒副作用外也有佐剂作用,所以一般cn. All Rights Reserved.不需要外加佐剂。
因此,很长一段时间以来主要是研究毒素、类毒素、抗毒素的学者在研究和使用佐剂。
直到1925年,法国免疫学家兼兽医学家Ga ston Ramon发现如果在白喉和破伤风疫苗中加入某些与之无关的物质可以特异地增强机体的抵抗反应,从此佐剂引起了人们的注意,许多国家也开始不同程度的开展了这方面的研究。
1.传统佐剂1.1铝佐剂铝佐剂是目前兽用疫苗和人用疫苗上应用最广泛的佐剂。
铝佐剂苗可以分为铝沉淀疫苗和铝吸附疫苗两种,铝沉淀疫苗是将铝剂悬液加至抗原液中,铝吸附疫苗是将抗原溶液加至氢氧化铝或磷酸铝中。
两种铝佐剂疫苗不仅能够减少抗原用量,还能够增强机体的免疫应答。
铝佐剂通常用氢氧化铝,其次是明矾及磷酸三钙。
1926年,Glenny发现用明矾沉淀的白喉类毒素悬液要比类毒素本身具有更高的抗原性,免疫豚鼠取得了较强的免疫效果。
1931年,Glenny等又报道了氢氧化铝吸附抗原制成的疫苗在注射部位具有缓慢释放的功能,就此提出氢氧化铝佐剂的作用机制为储存库效应。
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粘膜免疫佐剂的研究进展摘要：黏膜免疫在机体抵抗病原入侵时发挥着重要的作用，疫苗通过黏膜免疫可以引起局部和全身的免疫应答。
但是疫苗经过消化道黏膜时常受到消化液的降解，而且常常会引起免疫耐受，为了克服这些困难，人们设计了大量的黏膜免疫佐剂以增强机体对抗原的黏膜免疫力和全身的免疫应答水平。
这里将近年来粘膜免疫佐剂的研究进展做一下叙述。
关键词：粘膜免疫；佐剂；类型；研究进展机体约有80％以上的细菌、病毒和寄生虫的感染都起始于粘膜表面。
粘膜免疫可以诱导局部粘膜产生分泌性IgA(sIgA)、IgM和IgG等保护性抗体，并可诱导其它部位的粘膜也产生sIgA，这是粘膜免疫保护作用的主要机制。
此外，粘膜免疫还诱导粘膜CTL反应，并且产生分泌IFN-γ的CD4+T细胞，这对于病原体侵入的预防和清除是非常重要的[1]。
因此粘膜免疫是保护机体免于病原体侵犯的重要屏障，在疫苗的设计中具有重要意义。
目前机体粘膜免疫的机制还不完全清楚。
现有研究表明，基于粘膜免疫的疫苗由于诱导的免疫往往反应较弱，持续时间短，难以取得理想的免疫保护效果。
目前认为，如重组蛋白、合成多肽和DNA等抗原的免疫原性较弱是重要原因之一，因此需要设法提高免疫反应的强度，并且还有一些疫苗需要转变免疫反应类型，以突出粘膜免疫等。
这些方面的问题使佐剂的使用显得尤为迫切和重要，因此对于粘膜免疫佐剂的研究已经成为感染免疫和疫苗领域的一个研究热点[2]。
目前，已报道的粘膜免疫佐剂主要分为四类：第一类是细菌性物质；第二类是各种细胞因子；第三类是某些无机成分；第四类是可增强抗原递呈的相关载体[3]。
1 细菌性物质大多数细菌来源的蛋白、核酸或者其它成分均能增强免疫，其原因大多是它们的保守成分可与模式识别受体(Pattern-recognition receptor，PRR)结合。
PRR主要分为两种：Toll样受体(Toll-1ike receper，TLR)和核苷酸结合的寡聚化结构域(Nucleotide-binding oligomerization domain，NOD)。
其中TLR识别胞外配体，NOD针对胞内病原体及其产物引发级联信号转导。
1.1 细菌毒素和其衍生物1.1.1 霍乱毒素(CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素(LT) CT和LT都属于A-B型细菌蛋白毒素家族，而且两者的氨基酸序列有80％的相同。
晶体结构分析显示两者有很相近的结构特征，也很好地说明两者具有同源性。
CT是由A、B两种亚单位组成的AB5型结构的六聚体蛋白，A亚单位(CTA)有240个氨基酸，在第192位氨基酸附近被蛋白酶裂解后可以生成CTA1和CTA2两个多肽，二者以二硫键相连。
CTAl具有ADP-核糖基转移酶的作用；CTA2的主要功能是连接CTAl和B亚单位(CTB)。
与CT相同，LT的A亚单位(LTA)是酶活性单位，B亚单位(LTB)具有与靶细胞结合的功能，LTB除可与神经节苷脂l(GMl)结合，还可与GM2、非GM糖脂类受体等结合。
与CT引起的致死性腹泻相比，LT引起的腹泻要温和的多，而且与CT相比，LT同样具有很好的粘膜佐剂作用，基本上不诱生IgE，却能有效地启动机体局部和全身的体液和细胞免疫。
因此，LT 作为佐剂可能比CT更胜一筹。
CT(LT)发挥毒素的大致作用过程为CTB通过GMl的结合位点与细胞表面的GMl受体结合，经过吞噬作用CT分子进入细胞，主动转运至内质网，CTA与CTB分离，进入细胞质。
CTAl通过结合NAD，ADP-核糖转移酶作用于GTP结合蛋白，引起腺苷酸环化酶长久活化，细胞内环化腺苷酸无限增加，刺激肠粘膜过度分泌水和电解质，产生腹泻等毒素效应。
目前认为，LT和CT主要通过以下方式诱导粘膜免疫反应[4,5]：①增加上皮细胞的渗透性，增强抗原吸收；②增强不同抗原呈递细胞的抗原呈递作用；③调节B细胞的分化，使IgA的形成增加；④诱导树突状细胞(DC)分泌白细胞介素1β(IL-lβ)；⑤通过上调IL-lO，下调IL-12，选择性地影响细胞表面分子的表达，抑制Thl细胞的产生，增强T细胞的调节活性。
但是值得注意的是，细菌毒素的佐剂效应并不仅仅涉及一种机制，而是多种机制协同作用的结果。
1.1.2 减毒或无毒CT和LT的衍生物虽然LT和CT是强有力的粘膜免疫佐剂，但是由于具有毒性阻碍了它们在人体的应用。
为了避免毒性，人们试图直接把CT和LT的B亚单位用作佐剂，但研究发现，CTB或LTB直接与抗原混合免疫，其佐剂效应弱。
若用化学方法或基因重组的方法与抗原结合后其佐剂活性会大幅度地提高，其机理可能是由于结合后的抗原不仅被DC、巨噬细胞有效摄取，还被原初B淋巴细胞有效摄取。
但总的来讲，其佐剂效应都较全蛋白弱。
CTB／LTB在作为粘膜免疫佐剂时的应用方式主要有：①CTB／LTB与目的抗原按一定比例在体外直接混合；②通过基因融合手段，构建可表达CT／LT或CTB／LTB与目的基因抗原融合的蛋白质系统；③以化学偶联手段将抗原分子同CTB／LTB在体外进行偶联；④CT ／LT的多种突变体等。
如今人们构建了很多突变体以去除或降低毒性，同时保留佐剂属性。
它们的毒性不一，诱导的免疫反应强度差异较大。
研究发现，ADP一核糖基转移酶活性降低，其毒性降低，同时佐剂活性也降低[6]。
1.2 病原体相关模式分子模式识别受体可以通过与病源体相关模式分子(PAMP)结合，激活天然免疫系统。
PAMP 包括脂多糖、肽聚糖、鞭毛和细菌CpG DNA等。
TLR是一类主要的模式识别受体，它识别PAMP后可以活化NF-κB转录因子和MAP激酶家族成员，从而使细胞产生促炎症因子，并使协同刺激分子的表达上调。
这样不仅活化了天然免疫系统，最终也促进了获得性免疫的活化。
因此，利用TLR配基(即一些PAMP)作为粘膜佐剂来激活天然免疫系统是一种很有希望的策略[7]。
1.2.1含CpG基序的DNA 细菌DNA中含有CpG基序，它具有较好的佐剂活性。
CpG具有佐剂活性是因为它可与TLR9结合，从而诱导促炎症因子、Thl型细胞因子和趋化因子的产生、也可以诱导APC上MHC和协同刺激分子的表达。
在小鼠体内可以产生以Thl型为主的免疫反应，包括高水平的细胞毒性T淋巴细胞、IFN-β的产生和IgG2a抗体的产生。
含有CpG的寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)也是一种有效的粘膜佐剂。
将CpG-ODN与纯化蛋白抗原一起经鼻免疫，可以诱导粘膜Th2型免疫反应(即IgA抗体的产生)和系统的Th1型免疫反应。
目前，已有研究报道在小鼠生殖道疱疹病毒感染模型中，应用CpG-ODN为佐剂进行粘膜免疫可以诱导有效的免疫保护作用[8]。
有实验证明，将CpG-ODN通过阴道和口腔给予小鼠后，可以分别激活雌性小鼠阴道和消化道的粘膜免疫。
因此，仅通过阴道粘膜给予免疫刺激剂CpG-ODN就可以在小鼠阴道粘膜迅速地诱导产生Th1型反应相关的细胞因子，如IFN-β、IL-12、IL-18以及趋化因子RANTES、MIP-lα和MIP-1β等。
另外，在没有任何病毒抗原的情况下，仅在阴道给予一剂CpG-ODN也可以在致死量阴道疱疹病毒攻击下提供有效的免疫保护[9]。
该研究小组还证明CpG-DNA可以增强消化道粘膜的天然免疫。
经消化道给予CpG-ODN可以提高胃肠道局部CC趋化因子RAN-TES，MIP-la，MIP-1β的产生，以及CXC趋化因子IP-10的产生。
更重要的是CpG ODN在没有任何外源细菌抗原存在的条件下，经胃肠道给药同样可以抑制细菌在小鼠胃粘膜的克隆增殖[10]。
扁桃体B细胞属于粘膜型B细胞，Cognasse等研究了多种CpG-ODN与扁桃体B细胞的反应。
将IL-2，IL-10和sCD40L与不同的CpG-ODNs组合刺激B细胞，会对B细胞最终分化为抗体分泌细胞产生不同的影响[11]。
因此，CpG-ODN可能成为一类能够调控局部免疫球蛋白类型和亚型的粘膜佐剂。
1.2.2 单磷酰脂质A(MPL) MPL来源于细菌提取物，已被广泛应用于胃肠外疫苗佐剂。
MPL是从沙门氏菌R595的脂多糖(LPS)中提取的，保持了LPS的大部分免疫刺激活性，但没有继承其毒性。
MPL具有佐剂活性是因为它能够活化抗原呈递细胞，诱导产生促炎症因子。
这些都可以诱导产生抗原特异性细胞免疫和增强抗体水平。
最近，MPL被用于口服和经鼻免疫，来诱导和增强抗原特异性粘膜和系统免疫反应。
与CpG-DNA相似，MPL是通过活化TLR 来发挥作用。
Martin等[12]证明，MPL通过TLR2，TLR4诱导纯化的人单核细胞，以及人外周血单核细胞表达TNF-α、IL-10、IL-12。
通过检测NF-κB的活性证明，MPL通过TLR2，TLR4激活NF-κB。
另外，MPL刺激单核细胞后，可以使其协同刺激分子CD80、CD86表达上调，当单核细胞用抗TLR2、TLR4的单克隆抗体预先处理，该效应会被抑制。
2 细胞因子佐剂细胞因子用作粘膜免疫佐剂可以直接定位于作用部位，常用的免疫部位有鼻粘膜和上呼吸道。
细胞因子在许多动物模型系统中都是有效的免疫佐剂，能增强和保护机体免受病毒、细菌和寄生虫的侵袭，对肿瘤免疫和临床应用也有增效作用。
研究较多的用于粘膜免疫佐剂的细胞因子有IL-1、IL-6、IL-12、IL-18、IFN、GM-CSF、淋巴细胞趋化因子等，实验表明，淋巴细胞趋化因子可以增强Thl和Th2型细胞的应答。
IL-12、IL-18、IFN主要增强Thl型免疫反应，IL-6主要增强Th2型免疫反应。
Staats等用IL-1、IL-6、IL-12、IL-18、GM-CSF的各种组合与抗原鼻部免疫后，产生了混合型的抗原特异性反应，有些组合的免疫反应甚至强于CT，可见，细胞因子能有效增强粘膜免疫反应[13]。
3 无机成分佐剂3.1 氟化物应用氟化物作为粘膜免疫佐剂的研究已有报道。
氟化钠可以诱导大鼠T细胞中多聚磷酸肌醇降解为磷酸肌醇，升高细胞内自由Ca2+，并使T细胞受体的γ和ε链进行磷酸化，从而T细胞进入活化的早期阶段。
Sumio等研究发现粘膜佐剂NaF能够消除口服耐受，引起抗体反应增加，鸡同时口服抗原与NaF后，血清IgG抗体水平明显增加。
尽管鸡群有个体差异，并且抗体滴度较低，但在胆汁和泪液中均检测到IgA抗体[3]。
3.2 多聚体研究发现，烷基聚丙烯酯多聚体Butyll6-p(AA)作为灭活抗原粘膜免疫增强剂，可明显增强IgA对灭活新城疫病毒(iNDV)、灭活流感病毒MRC-11(iMRc-11)、甲型得克萨斯血凝素／神经氨酸酶亚单位流感病毒(HA／NA)的反应[3]。
3.3 亲脂性季铵盐KLinguer等以二甲基双十八基季铵溴化物(DDA)为粘膜免疫佐剂，鼻内接种DDA与白喉类毒素(DT)，破伤风类毒素(TT)或呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白重组片断BBG2Na的混合物都可诱导全身和局部的强免疫应答，其作用机理可能是增加通过鼻腔上皮细胞的抗原量，产生炎性刺激以促进抗原摄取[3]。