湿法装柱

刚学做中药提取分离，由于没人指导问些可能是很简单的问题，各位大侠帮助：1、硅胶湿法装柱一般用多少洗脱液润湿硅胶? 2.装柱是倒到层析柱里还是用勺子一点点喂入？3、洗脱时一般多少毫升收集一管？4、要是每管收集液浓度太稀，是不是可以蒸掉洗脱液，然后定性合并？定性合并一般有那些依据？是根据薄层板来确定吗？大家提供点做好硅胶柱层析的经验！谢谢，不胜感激！

呵呵，一个个回答。

1、硅胶湿法装柱一般用多少洗脱液润湿硅胶?

至少要先全部浸没硅胶，还要看你的柱体积如何，估计硅胶到哪个位置，保证液体和硅胶全部加入后不会多出柱口，而且一般还要洗一下烧杯中的硅胶，特别是装反相硅胶时。

2.装柱是倒到层析柱里还是用勺子一点点喂入？

我一般都是倒入的。用勺子喂不光是麻烦，硅胶沉积也不均匀的。摇匀烧杯中的硅胶后，拿个漏斗直接倒入就行了。

3、洗脱时一般多少毫升收集一管？

原则上是越少越好，点样麻烦了，不过分段清楚。不过实际中这个要看你样品量多少及是粗分还是细分了。粗分时可以多接点，要是样品量多且粗分，用试管得接多少才是头啊，呵呵。上样量大的粗分时我们有时直接用那种500ml的试剂瓶，或者是250ml的三角瓶。样品量小的细分时用10ml试管自动收集。不过上凝胶柱我一般用10ml试管自动收集。

4、要是每管收集液浓度太稀，是不是可以蒸掉洗脱液，然后定性合并？定性合并一般有那些依据？是根据薄层板来确定吗？

可以啊！我最近就在做这种工作，反相柱下来的东西，含水难点样，浓度又小，很烦。只好割5管回收，确定范围后再回收局部细致确定合并组份。合并的依据很难讲，一般很难有明显分段，我是看主要斑点。特别是样品量少时，全部分散了量更少了。把主要斑点组份合并，拿到主斑点后其它微量成份再合并富集。一般是根据薄层来定的。

呵呵，个人经验，希望有用。

4.浓度太稀没有关系，只要你有好的监测系统，比如紫外灯，显色剂。一般TLC 的检测下限是ppm级或者至少是千分之一级的。浓度如果低的话，我一般用毛细管蘸4次，点4次。基本没有问题的。

另外，为了节约时间和溶剂，建议使用梯度洗脱的方法。

谢谢了，受益匪浅！再问个问题：梯度洗脱具体怎么操作？洗脱液极性应该不是连续变化吧，我理解是用不同极性洗脱液从低到高依次洗脱？另外问下：10％硫酸乙醇显色剂具体配法？是10体积浓硫酸＋90体积无水乙醇吗？

若是正向硅胶，梯度洗脱的极性变化是由小到大，梯度变化可以根据TLC的结果选择，也就是选展开条件。如果是上大柱子粗分，可以每隔一个一定浓度换一个梯度，如氯仿:甲醇＝98：2到95：5到9：1到8：2等等。至于10％硫酸乙醇显色剂的配法，那样就行了，不需要太精确，5％到8％都可以，配制是小心点浓硫酸就行了，有时无水乙醇的质量不太过关。

10％硫酸乙醇显色剂具体配法？

10体积浓硫酸＋90体积无水乙醇

我装的是1公斤的硅胶柱，经过几次尝试，湿法上柱

上柱前：硅胶一定要用上柱液，搅拌和泡足够长时间，然后就可以随意往柱子里倒就行了

1 kg 的硅胶湿法上柱，可真够难为你了！！！

用棉花塞住口，将1kg硅胶倒入柱子里面，然后再用展开剂走通就行了。

下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。

1。称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml 也可以。

2。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3。装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4。压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

7。检测。要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。

8。送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。

我作过这方面的实验，补充几点，用棉花塞住口，在装柱前应用溶剂润湿，捣出棉花中的气泡，装柱最好一次完成且保持溶剂流出状态；加完样后最好再再上面加一层硅胶以免加溶剂时冲坏样品表面

大家讨论下样品收集好后重结晶问题，对重结晶技术不太懂，我收集的样品浓缩后就是不结晶，放到烘箱里高温烘也只能得到胶状液

千万不要放烘箱里！你的样品会坏掉的。

记住你的目的是纯化，而不是得到好的晶体。

用小极性的溶剂把样品顶出来。

求助:用正丁醇萃取水液是不是一定要用水饱和,回收的正丁醇是不是可以不再饱和了?谢谢.

正丁醇用水预饱和一下，是为了在萃取时不吸走太多的水。

重蒸的正丁醇还是再预饱和一次吧，费不了多少劲。

我做全合成，分黄酮类产物的时候，一般硅胶用量是上样量的5倍，有时4倍也做过的。做一次反应后拌出一百多克料，柱子不够大，过柱周期又长（一整天）。就是5倍也得分两次过才过得完，经常过得不够纯。还有，请问，过完后硅胶不管用甲醇怎么冲也洗不干净，总是黄黄的，还有没有回收价值？是不是只能用作粗分？谢谢！