柱层析的操作步骤和注意事项
凝胶柱层析操作方法
凝胶柱层析操作方法凝胶柱层析是一种常见的生物化学分离和纯化技术，主要用于分离和纯化蛋白质、核酸、多糖以及其他生物大分子。
它是基于溶液中分子在凝胶柱中通过扩散和吸附/排斥作用的差异，从而实现分离和纯化的过程。
凝胶柱层析的操作步骤如下：1. 准备工作首先，准备好所需的实验设备和试剂，包括凝胶柱、载体溶液、平衡缓冲液、洗脱缓冲液以及待纯化的样品等。
2. 凝胶柱的平衡将凝胶柱放入层析缸中，并用足够的平衡缓冲液预先洗涤凝胶柱，以确保凝胶柱内缸体达到平衡状态。
洗涤凝胶柱的缓冲液通常是与样品一样的成分，以确保样品在平衡和层析过程中的稳定性。
3. 样品的加载将待纯化的样品加入凝胶柱顶部，让样品自由通过凝胶柱，在凝胶柱中发生分子的扩散和吸附/排斥作用，不同组分因差异而逐渐分离。
4. 缓冲液的加入与洗脱根据需要，逐渐加入一定体积的洗脱缓冲液，通过调整洗脱缓冲液的组成和浓度，使目标分子从凝胶柱上洗脱下来。
洗脱过程中，可以利用不同组分在凝胶柱中的吸附/排斥特性来实现分离纯化。
凝胶柱层析的洗脱缓冲液通常是在平衡缓冲液的基础上，通过调整pH值、离子浓度、缓冲剂浓度等参数来实现。
常用的洗脱缓冲液包括梯度洗脱和逐步洗脱等方法。
5. 收集分离纯化的样品通过洗脱，将目标物质从凝胶柱上洗脱下来，可以收集到分离纯化后的样品。
收集的样品可以进行后续的实验分析、储存或进一步纯化。
凝胶柱层析操作中需要注意的事项：1. 凝胶柱的选择根据待纯化样品的性质和分子大小，选择合适的凝胶柱类型和尺寸。
常见的凝胶柱类型包括聚丙烯酰胺凝胶、超大孔凝胶、琼脂糖凝胶等。
2. 缓冲液的选择根据待纯化样品的特性，选择适当的缓冲液，确保样品在平衡、层析和洗脱过程中的稳定性。
常用的缓冲液有Tris-HCl、PBS等。
3. 流速的控制凝胶柱层析过程中，要控制好流速，以避免分子在凝胶柱中过快通过，影响分离效果。
流速的选择应根据试剂和样品的性质进行调节。
4. 洗脱缓冲液的选择需要根据目标分子的特性选择合适的洗脱缓冲液，确保洗脱效果和分离纯化效果的最大化。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱（Column Chromatography）是一种常见的色谱技术，用于分离和纯化化合物混合物。
它利用样品成分在固定相和流动相之间的差异迁移速率来实现分离。
在这篇文章中，我们将介绍层析柱装柱的基本步骤和相关参考内容，帮助读者了解层析柱技术的应用与操作。
1. 准备工作在进行层析柱装柱前，我们需要准备以下材料和设备：- 色谱柱：选择合适的柱径和柱高，以容纳样品和分离剂。
不同的应用需要不同类型的色谱柱，如硅胶柱、石墨化炭柱、反相柱等。
- 流动相：确定合适的流动相溶剂体系，用于样品的迁移和分离。
通常选择非极性溶剂（如石油醚、丙酮、甲醇等）或极性溶剂（如乙酸乙酯、二甲醚等）。
- 固定相：将合适的固定相装填到色谱柱中，用于分离和吸附样品成分。
选择合适的固定相类型，如硅胶、氧化铝、石墨化炭等。
- 样品：准备需要分离和纯化的混合物样品。
- 旋转蒸发仪：用于去除样品中的溶剂。
2. 装填色谱柱- 将色谱柱固定在柱座上，并根据柱径和柱高的大小调整砂轮，使得柱床均匀。
- 用适当的溶剂湿润色谱柱，避免流动相在柱床中出现间隙和假相。
3. 样品预处理- 将样品溶解在适当的溶剂中，以便在层析柱中迁移。
- 如果样品中有大量杂质，可以使用旋转蒸发仪去除溶剂。
4. 层析柱操作- 使用毛细管或注射器将样品注入色谱柱顶部。
确保样品不超过柱床高度。
- 将流动相逐步加入色谱柱，使其通过柱床。
可以根据实验需要调整流速和溶剂比例。
- 样品成分会根据其在固定相和流动相之间的亲疏水性质而分离。
在柱床中具有更大亲和力的成分会被滞留，而亲和力较小的成分会更快地通过柱床。
- 根据成分的迁移速度和柱床的色谱裂分能力，监测和采集分离后的组分。
常见的监测方法包括紫外可见光谱、红外光谱、荧光检测等。
5. 分离和纯化产物- 根据监测结果，确定目标化合物的峰位置和纯度。
- 通过收集色谱峰和进一步的实验操作，如再层析、结晶、后处理等，将目标化合物从样品中分离和纯化。
柱层析的注意事项
柱层析的注意事项柱层析的注意事项如下：1、装柱。
柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。
干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。
装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。
书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。
当然假如你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。
但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！2、加样。
用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
3、淋洗剂的选择。
感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。
不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不轻易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
4、样品的收集。
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。
所以假如样品与硅胶的吸附比较强的话，就不轻易流出。
这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。
这时可以采用氧化铝作固定相。
另外，收集的试管大小要以样品量而定，非凡是小量样品，假如用大试管，可能一根就收到了三个样品，假如都用小试管那工作量又太大。
5、最后的处理。
柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以假如想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。
另外，再过柱的时候，有时会出现气泡，一是和使用的溶剂有关，假如是易挥发的溶剂，如乙醚、二氯甲烷等，在室温稍高的情况下，很轻易出现这种现象，因此，在室温高的时候，可以选择沸点较高，挥发相对小的溶剂。
柱层析操作的基本流程
1.样品选择与预处理。
根据分离目的选择合适的样品，并进行必要
的预处理。
2.装柱。
选择合适的层析柱，如干法或湿法装柱。
在装柱前，柱子
应预先用适当的溶剂或缓冲液处理，以除去可能吸附的杂质，并确保内部没有气泡。
装柱时，应确保柱子均匀且无分层现象。
3.平衡。
用平衡液（通常是缓冲液）填充柱子，以确保柱子内部充
分平衡。
平衡液的体积一般为柱床体积的3到5倍，以保持平衡后柱床体积的稳定及基质充分平衡。
4.加样。
缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面，尽量避免冲击基
质，以保持基质表面平坦。
加样量应尽量少，以减少对基质的干扰。
5.洗脱。
使用适当的洗脱液进行洗脱，以将样品组分从固定相上洗
脱下来。
洗脱液的流速和体积应根据分离目的和样品性质进行调整。
6.收集与鉴定。
收集不同馏分的样品，并进行进一步的分析和鉴定。
柱层析分离注意事项
柱层析分离注意事项柱层析分离是一种常见的分离技术，富有操作简便、分离效果好、适用范围广等优点。
下面将介绍一些在进行柱层析分离过程中需要注意的事项。
1. 选择适当的分离柱：选择合适的分离柱对于柱层析分离的成功非常重要。
要根据待分离物质的性质、目标分离效果和实验目的来选择适合的柱层析柱。
常见的柱层析柱包括液相柱、气相柱、离子交换柱、大小分子层析柱等。
不同柱层析柱具有不同的分离机制和分离效果，在选择时要根据分析需求进行合理选择。
2. 样品制备：柱层析分离前需要对样品进行适当的制备处理。
首先要选择合适的溶剂，使待测物质充分溶解，避免在柱层析过程中出现沉淀或堵塞的情况。
其次要对样品进行预处理，例如滤除悬浮物、去除杂质、浓缩或稀释等。
样品制备过程中需要注意样品的稳定性和溶解度，以避免对分离结果的影响。
3. 选择合适的流动相：流动相是柱层析分离中的重要组成部分，它对分离效果有很大影响。
选择合适的流动相需要考虑待分离物质的性质、分离机制、柱层析柱的稳定性以及操作要求等因素。
通常选择的流动相是溶解样品的溶液，常用的有水、甲醇、乙腈、醋酸等。
还可以根据需求添加缓冲剂、酸碱调节剂、添加剂等来改善分离效果。
4. 控制流速和压力：在柱层析分离过程中，需要控制流速和压力以保证分离效果和柱层析柱的稳定性。
流速太低会延长分离时间，流速太高则容易导致分离不充分、峰形变宽甚至扩散。
压力过高不仅会降低流体的容积，还可能损坏柱层析柱。
因此，需要根据分离柱的压力限制和分离要求，合理选择和调节流速和压力。
5. 监测记录结果：在进行柱层析分离过程中，需要及时监测并记录分离结果。
可以使用便携式检测仪器如紫外可见光谱仪、荧光检测仪等对柱层析过程进行实时监测。
同时，还需要记录柱层析过程中的相关参数，如流速、压力、峰形、保留时间等，以便分析结果和方法的验证与修改。
6. 注意安全操作：在进行柱层析分离过程中，需要注意安全操作，避免接触或吸入有害物质。
柱层析的操作步骤和注意事项
精心整理柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
头了。
有0.5相差0.1是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
至于是加压、常压、减压，随需而定。
因为是schlenk操作，所以点板是个问题，假如样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。
假如样品无色，只好预备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。
像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。
无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。
因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很轻易是样品分解，非凡是金属有机化合物和含磷化合物。
而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。
听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。
哪位做过可以提出来大家参详参详。
--※关于湿法、干法上样。
湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。
很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，假如不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
层析柱 操作规程
层析柱操作规程
《层析柱操作规程》
层析柱是一种分离和纯化化合物的工具，它在实验室和工业生产中都得到广泛应用。
为了正确、高效地运用层析柱进行实验操作，必须严格按照规程进行操作。
1. 准备工作
在开始操作层析柱之前，首先需要检查仪器设备和试剂是否准备就绪。
确保层析柱、柱子和柱底都是干净的，没有杂质和残留物。
同时，检查溶剂和流动相的浓度和pH值是否符合实验要求。
2. 样品预处理
样品在进入层析柱之前，需要进行适当的预处理。
通常包括溶解、过滤或稀释等步骤，以确保样品的纯度和浓度符合层析柱的使用要求。
3. 层析条件选择
根据样品的特性和分离要求，选择合适的层析柱和流动相。
流动相的选择包括了溶剂的种类、比例和流速等参数，需要根据实验要求进行合理选择。
4. 样品加载
将经过预处理的样品通过适当的方法加载到层析柱中。
可以采用重力流动、压力注入或者其他方法，确保样品均匀地进入层析柱。
5. 层析过程监控
在样品加载后，需要监控层析过程并进行记录。
包括流出液的收集、色谱图谱的观察等，以便及时发现异常情况并进行调整。
6. 收集和分析分离物
根据层析过程中的监控数据，及时收集目标物质，并进行分析和检测。
可以通过色谱、质谱等技术进行分析，得到分离物的纯度和产率数据。
7. 层析柱的清洗和保养
在操作完毕后，及时清洗和保养层析柱。
包括流动相的冲洗、柱子和柱底的清洗以及存放，以保证下次使用时的质量。
在实验操作层析柱时，严格按照规程进行操作，能够确保实验的准确性和重复性，同时也保证了仪器设备的长久使用。
硅胶柱层析的操作方法及注意事项
硅胶柱层析的操作方法及注意事项硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，具有操作简便、结果准确等优点，在化学、生物、医药等领域得到广泛应用。
下面我们来介绍硅胶柱层析的操作方法及注意事项。
1.准备样品及配制溶剂：一般需要将待测物质与适当的溶剂混合，使其溶解度较大，且不产生化学反应。
根据分析目的选用不同的溶剂，以保证分离效果。
2.准备硅胶柱：硅胶柱由无色透明的硅胶胶体组成，直径一般为1-2.5厘米，长约10-40厘米。
硅胶柱层析的分离效果，与柱高、柱径、胶体的大小和分布、溶液的流速等因素有关。
在选择硅胶柱时，应该根据实际需要选用合适的柱径和柱高。
3.测试流速：测试不同流速对分离效果的影响。
测试方法为将流速调节为不同值，测定每个流速下所采集的溶液吸收曲线，最终确定出最佳的流速。
4.样品处理：样品从洗脱液中洗脱出来之后，可以使用各种不同的方法进行处理。
例如可以用过滤膜、离心、深度过滤等方法，来去除样品中的离子、颗粒等。
5.动态洗脱：先在洗脱液用水稀释3-5倍，使液面齐平。
关掉泵阀使得管路只循环搅拌。
将占底部10%的甲醇浸入硅胶柱底部粉末颗粒中，然后打开泵阀。
保持洗脱液的温度和相对湿度稳定，然后逐渐开始动态洗脱。
6.收集洗脱液：可以采用分批收集和连续收集两种方法，最终将洗脱液图谱编制。
1.操作前，务必检查所有设备设施是否完好，液体循环是否通畅，以及所有参数（如气温、流速、洗脱液配比等）是否调整合适。
2.在操作时，不能超量进样，以免产生超过硅胶柱承受能力的负荷。
3.在操作中，应注意洗脱溶液的挥发和流动，以避免水分汽化，在操作过程中，应该密封管路和溶液，防止冷凝积聚。
4.硅胶柱层析法有一定的危险性，提供人员应该具备一定的化学实验经验，同时要持续关注硅胶柱的干燥程度，确定每步操作的效果，以保证精度和安全性。
5.在分析过程中，应注意各种简化重复操作，减少操作依赖，以提高生产效率。
总之，硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，其操作相对简便，可以大量产生准确的结果，因此在化学、生物、医药等领域都有广泛的应用。
层析柱操作规程
层析柱操作规程
《层析柱操作规程》
一、前言
层析柱操作是化学分离和纯化技术中常用的一种手段，它能够对混合物中的成分进行有效的分离。
为了确保操作过程的顺利进行和分离效果的最大化，需要制定一套严格的操作规程。
二、设备准备
1. 确认层析柱和相关设备是否完好，无污染；
2. 准备好使用的溶剂，保证纯度和新鲜度；
3. 根据实验需求，准备好实验所需的各种样品和标准物质；
4. 准备好密封垫和管接头等辅助器材。
三、操作步骤
1. 将层析柱连接至固定相泵；
2. 实验前先进行层析柱的扫表，观察并记录基础数据；
3. 使用实验样品进行预洗柱操作，确保固定相表面无污染；
4. 将样品溶解于溶剂中，装入进样瓶，连接至固定相泵；
5. 开始进行层析分离操作，收集分离出的目标成分，并记录各分离组分的流出时间；
6. 根据实验需求，对分离得到的目标物质进行进一步的纯化操作；
7. 实验结束后，对层析柱进行清洗消毒，保持设备的卫生和使用寿命。
四、实验注意事项
1. 操作过程中要随时检查设备状态，及时处理出现的故障和异常；
2. 严格遵守操作规程，不得随意更改操作步骤；
3. 对固定相、流动相、样品等各项实验条件进行严格控制，确保实验的准确性和可重复性；
4. 清洗消毒后的层析柱应储存于干燥通风的地方，避免细菌污染。
五、结语
层析柱操作规程的制定和执行对于保证实验的顺利进行和分离效果的最大化具有重要意义。
实验人员在操作过程中需严格遵守规程，不得有过失。
同时，定期检查和维护层析柱设备，确保设备处于良好状态，也是保证实验顺利进行的重要环节。
柱层析的实验方法和技巧
柱层析的实验方法和技巧柱层析法（Column chromatography）是一种常用的化学分离和纯化技术，可以用于从混合物中分离出多种化合物。
本文将介绍柱层析法的实验方法和一些实验技巧。
一、实验方法：1.准备工作：a.准备固定相：将固定相填充到柱中，并充填好；可以使用硅胶、氧化铝或C18等材料作为固定相；b.准备混合物：将待分离化合物溶解在适当的溶剂中；c.准备洗脱剂：根据实验需求选择合适的洗脱剂；2.柱层析操作步骤：a.将固定相填充到柱中。
b.添加适量的固定相保护剂：一般使用不溶于溶剂的物质作为固定相保护剂，以避免固定相的挤压；c.向柱中加入样品溶液，可使用注射器或滴管将样品缓慢滴入；d.加入适量的洗脱剂，使样品溶液通过柱时能够清除杂质；e.收集落下液：通过检测进样后的溶液，根据待分离化合物的特点来控制洗脱剂的加入；f.收集洗脱液：通过改变洗脱剂的性质和量，逐渐改变洗脱液中化合物的组成，实现化合物的分离；g.检测：对收集的液体进行分析和检测，确认化合物的纯度。
二、实验技巧：1.选择合适的固定相：根据待分离物质的性质选择合适的固定相。
一般来说，伯胺、硅胶C（C18）适用于一般的分离，而硅胶S（C2），硅胶A（C4）适用于疏水性化合物的分离，氧化铝适用于酸性物质的分离。
2.控制流速：流速过快会导致分离不彻底，流速过慢则浪费时间。
一般来说，柱床高度不同，流速也会有所不同，对于较长的柱床应采用较快的流速。
3.控制样品量：样品量过多可能会使分离效果不理想，样品量过少则浪费固定相。
应根据待分离化合物的性质和固定相的吸附容量来选择适当的样品量。
4.控制洗脱剂的pH值和溶度：柱层析中的选择性很大程度上取决于洗脱剂的pH值和溶度。
应根据待分离物质的性质和固定相的特点选择合适的洗脱剂。
5.收集洗脱液：在开始柱层析实验时，收集过程中的溶液可能是混合物，因此从开始收集时就需要根据所得的混合物变清的时间点调整洗脱剂的性质和量。
柱层析分离的实验方法和技巧
柱层析分离的实验方法和技巧实验方法：1.选择适当的柱：根据待分离样品的特性以及所需分离的目标物质，选择合适的柱，如正相柱、反相柱、离子交换柱等。
2.预处理：将样品中含有的杂质去除或稀释至适当浓度。
可以通过溶剂提取、沉淀、离心等方式进行预处理。
3.柱层析条件的选择：确定柱层析所需的最佳条件，包括流速、柱温、洗脱剂的类型和浓度、前柱洗脱剂的pH、柱洗脱剂的梯度等。
4.样品的制备：将样品溶解或悬浮于适当的溶剂中，调整至适当的浓度，过滤以去除悬浮物或杂质。
5.微量预柱：对于高浓度的样品，可以使用微量预柱进行初步的预分离和富集，减轻柱层析的工作量。
6.样品进样：使用自动进样器或手动进样方式将样品注入柱，控制每次进样的量不宜过多，以确保柱层析分离的效果。
7.流速控制：控制柱层析的流速，避免过快或过慢，以保证分离效果和分离时间。
实验技巧：1.柱层析装置的操作：熟悉柱层析装置的各种操作按钮和调节装置，掌握柱层析装置的使用方法和操作流程。
2.洗脱剂的选取：选择合适的洗脱剂，根据样品的特性和需求选择不同的洗脱剂类型，如乙酸铵溶液、酸性或碱性溶液等。
3.洗脱剂的混合：根据所需分离的目标物质的亲水性或亲油性，合理混合洗脱剂的比例，以提高分离效果。
4.梯度洗脱：根据目标物质的亲水性或亲油性，在洗脱剂中逐渐增加或减少有机溶剂的浓度，以实现目标物质的分离。
5.洗涤：经过洗脱的目标物质可能还会受到柱中残留物质的影响，需要加入适当的洗涤剂，如水、有机溶剂等，进行稀释或清洗。
6.注射顺序：按照样品的亲水性或亲油性从小到大的顺序进行注射，以充分利用柱层析的分区效应。
7.柱层析柱的使用寿命：及时进行柱检查或更换柱，以确保实验结果的准确性和可重现性。
总之，柱层析分离实验的方法和技巧是多方面的，包括实验操作、条件选择、样品制备等方面，只有掌握了这些方法和技巧，才能顺利进行柱层析分离实验，获得准确和可重复的结果。
有机物分离与纯化的方法柱层析的一些技巧
有机物分离与纯化的方法柱层析的一些技巧柱层析是有机物分离与纯化中常用的一种方法，它适用于各种有机物分离和纯化的需求，具有操作简单、分离效果好、分离范围广等优点。
以下是柱层析的一些技巧和注意事项：1.选择合适的固定相：柱层析的关键是选择合适的固定相。
固定相应根据有机物的性质选择，例如，非极性化合物可选择疏水性固定相，而极性化合物可选择亲水性固定相。
此外，选择固定相时还需考虑其耐酸碱性、耐溶剂性以及稳定性等因素。
2.预处理样品：在进行柱层析之前，需要对样品进行预处理。
通常，样品需要经过一系列的前处理步骤，如提取、结晶、干燥等，以去除杂质和水分，确保柱层析的准确性和精确性。
3.选择合适的洗脱剂：洗脱剂的选择应根据样品的性质和分离要求进行。
通常，洗脱剂应具有良好的溶解度、流动性和洗脱效果。
此外，还应注意洗脱剂对固定相的稳定性和可逆性的影响。
4.控制流量和压力：柱层析时，通过控制流量和压力来控制洗脱速度。
一般情况下，流速应控制在适当的范围内，以避免样品在柱上停留时间过短或过长，同时还应注意防止柱内压力过高导致流动性降低。
5.分馏收集：柱层析过程中，不同组分的洗脱剂和样品溶液需要分馏收集。
对于挥发性较强的组分，可采用低温收集或短时间收集的方法，以减少组分的损失。
6.调整pH值：一些有机物分离和纯化需要在特定pH条件下进行。
在柱层析前，需要对洗脱剂或样品溶液进行调整，以改变pH值，提高分离效果。
7.重复柱层析：柱层析是一个可重复进行的操作，可以根据需要多次进行柱层析。
在重复柱层析过程中，需要逐步提高洗脱剂的极性或采用不同的洗脱剂组合，以实现更好的分离效果。
8.优化条件：在柱层析过程中，需进行条件优化。
通过调整柱层析的参数，如固定相类型、样品负载量、洗脱剂类型和流速等，以达到最佳分离效果。
9.保护柱层析柱：柱层析柱是一种易损耗的设备，应注意保护。
在使用过程中，应避免受到机械碰撞和高温等有害因素的影响，避免使用过量的洗脱剂和样品负载，以延长柱层析柱的使用寿命。
柱层析湿法上样操作方法
柱层析湿法上样操作方法柱层析湿法是一种常用的分离和纯化化学物质的方法，以下是该方法的上样操作方法：1. 准备样品：将需要进行分离和纯化的混合物样品准备好，可以是液体溶液或悬浮液。
2. 准备展开剂：根据需要分离的化合物性质和分离条件选择合适的展开剂。
常用的展开剂有硅胶、氧化铝或其他类似材料。
3. 准备分离柱：选择合适的柱子，并将其填充好展开剂。
填充时应注意均匀性和充填度。
4. 填充柱层析系统：将填充好展开剂的柱放入柱层析系统。
根据具体仪器和实验要求，要确保柱子安装到正确的位置，并连接好进样管和检测器。
5. 条件调节：将柱层析系统的操作条件设置为所需的参数，如温度、流速、梯度溶剂等，并进行系统的预热和平衡。
6. 进样操作：将样品通过进样管缓慢地引入分离柱中。
可以使用进样器或注射器等工具进行定量或半定量的进样。
7. 开始层析：打开流速供液器，将流动相缓慢地通过柱子。
调整流速和梯度溶剂的比例，使样品分离。
根据需要监测和记录所得数据。
8. 收集洗脱液：根据目标物的出现时间，分离切取所需的洗脱液。
洗脱液可以是色谱连接器下接式收集、真空收集或通过分数收集。
9. 分析和纯化：将收集的洗脱液进行进一步的分析、检测和纯化。
可以使用多种技术和检测方法，如色谱-质谱联用等。
10. 清洗和保养：完成实验后，及时清洗柱层析系统，并保养好仪器设备，以保证长期稳定地使用。
以上是柱层析湿法上样操作的基本步骤，但具体操作方法还需要结合实验的具体要求和实验室的情况来确定。
在操作过程中，还需要注意实验安全和实验室规范的要求，确保人员和设备的安全。
试述柱层析的基本操作过程
试述柱层析的基本操作过程柱层析是一种常用的色谱分离技术，广泛应用于生物、化学、医药等领域。
以下是柱层析的基本操作过程，主要包括以下几个方面：1. 装柱首先，选择适当规格的色谱柱，将其清洗干净并晾干。
然后，在色谱柱中装入适量的吸附剂或凝胶，注意要将其填充均匀，不留气泡。
最后，用柱塞密封色谱柱，以防止样品进入柱体时发生泄漏。
2. 上样将需要分离的样品按规定要求放入色谱柱的上部，然后在适宜的pH和离子强度下进行上样。
上样过程中要注意控制流速，避免样品快速通过色谱柱，导致分离效果不佳。
3. 洗脱通过改变洗脱液的组成和离子强度，选择合适的洗脱液进行洗脱，使目标化合物与吸附剂充分分离。
洗脱过程中要控制好流速，使洗脱液能够充分淋洗柱体中的样品。
通常采用分步洗脱的方式，根据化合物的不同性质，依次选用不同的洗脱液进行洗脱。
4. 收集在洗脱过程中，将洗脱液收集于合适的容器中，并贴上标签，注明时间和条件等信息。
收集的容器通常采用锥形瓶或烧杯等具有良好倾倒性的容器。
5. 检测根据需要，可以采用各种方法对收集到的液体进行检测，判断目标化合物是否成功分离。
常用的检测方法包括紫外-可见光谱法、红外光谱法、质谱法等。
检测过程中要注意对照标准品，确保分离得到的化合物与目标化合物一致。
6. 洗柱为了防止杂质吸附，需要定期更换洗脱液，并进行洗柱操作。
洗柱过程中要注意控制好流速，避免过快导致吸附剂流失。
通常采用逐步降低流速的方式进行洗柱，直到流出液与洗脱液一致为止。
7. 记录记录实验过程中的各种操作和检测信息，以方便实验过程的追溯和整理。
记录的内容包括实验日期、实验人员、色谱柱规格、吸附剂类型、样品名称和来源、上样条件、洗脱液组成和离子强度、流速控制、检测方法等。
这些信息将有助于对实验结果进行分析和总结，提高分离效果和实验效率。
柱层析的基本操作过程
柱层析的基本操作过程
柱层析是一种化学分离技术，它是通过将混合物溶解在移动相中，在柱状填料（固定相）中进行分离。
下面是柱层析的基本操作过程。
1. 准备样品和固定相：选择适当的柱层析填料，将其装入柱中，并保证填充均匀、紧密。
选择合适的流动相，加入固定相之前，要求固定相先与流动相进行混合，使其湿润，并去除任何未吸附的溶剂。
2. 样品的加载：将待分离的混合物溶解在流动相中，然后通过注射器或者样品加载器注入到柱中。
3. 选择流动相：根据待分离物质的特性，选择合适的流动相，并将其以一定的流速通过柱层析装置。
4. 分离过程：混合物分离后，在柱中不同位置的组分按其亲和力不同，发生分离。
在流动相的作用下，组分会逐一从柱底部向上升移。
5. 收集分离物：分离出的组分可通过检测方法进行检测，确定其最终位置并进行采集。
将采集的组分进行分析、鉴定或进一步处理。
6. 洗脱：当流动相通过柱层析后，需要将柱中残存的组分进行清洗，通常使用
洗脱剂进行洗脱。
总之，柱层析技术是一种重要的分离技术，具有高效、准确、可重复、可控性好等特点。
在实际应用中，需要结合不同的分离目的进行优化选择，使分离效果更佳，为实验和工业应用提供准确的数据和支持。
柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说得过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用得就是以硅胶或氧化铝作固定相得吸附柱。
由于柱分得经验成分太多,所以下面我就几年来过柱得体会写些心得,希望能有所帮助。
柱子可以分为:加压,常压,减压、ﻫ压力可以增加淋洗剂得流动速度,减少产品收集得时间,但就是会减低柱子得塔板数。
所以其她条件相同得时候,常压柱就是效率最高得,但就是时间也最长,比如天然化合物得分ﻫ离,一个柱子几个月也就是有得。
减压柱能够减少硅胶得使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但就是由于大量得空气通过ﻫ硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解得东西可能得ﻫ不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大得噪音,而且时间长)、以前曾经大量得过减压柱,对它有比较深厚得感情,但就是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压得念头了、加压柱就是一种比较好得方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走得快些。
压力ﻫ得提供可以就是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气得就行)、非凡就是在轻易分解ﻫ得样品得分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走得太快就会减低分离效果、个人觉得ﻫ加压柱在普通得有机化合物得分离中就是比较适用得、关于柱子得尺寸,应该就是粗长得最好。
柱子长了,相应得塔板数就高、柱子粗了,上样后样品得原点就小(反映在柱子上就就是样品层比较薄),这样相对得减小了分离得难度。
试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离得难度可想而知,恐怕要用很低极性得溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较轻易得到完全分离了、当然采用粗大得柱子要牺牲比较多得硅胶与溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保得说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)、现在见到得柱子径高比一般在1:5～１０,书中写硅胶量就是样品量得30~40倍,具体得选择要具体分析。
假如所需组分与杂质分得比较开(就是指在所需组分rｆ在0。
层析柱使用标准操作方法
层析柱使用标准操作方法层析柱是一种分离和分析化合物的常用仪器，其操作方法一般包括以下几个步骤：1. 样品预处理：首先，将待测样品进行预处理，如样品溶解、稀释或提取等。
确保样品的浓度适合进行层析分离。
2. 选择合适的层析柱：根据待测物的性质和分离需求，选择合适的层析柱。
不同的层析柱具有不同的吸附材料和分离机制，因此，选择合适的层析柱对于成功的层析分离非常重要。
3. 装填样品：将预处理好的样品注入层析柱，一般通过注射器或其他装置进行。
注意，样品注入量应根据待测物浓度、柱子尺寸和分离需求合理确定。
4. 进行层析分离：根据选择的层析柱类型和设备的操作要求，进行层析分离。
可以通过重力层析、气相层析、高效层析等方式进行。
需要注意的是，层析分离的过程中需保证流速适中，以避免样品在柱子中滞留太久或过快通过，影响分离效果。
5. 收集分离物：将分离得到的组分收集起来，一般通过分数收集器或其他收集装置进行。
根据实验需求，可以选择不同的收集方式，如按时间间隔收集、按流量收集等。
6. 进行分析：收集到的分离物可以进行后续的分析和测定，如质谱分析、紫外可见光谱等。
根据需求，可以选择适宜的分析方法进行进一步的表征和确定。
7. 清洗层析柱：在层析分离结束后，需要仔细清洗层析柱以去除残留的样品和其他污染物。
不同的层析柱有不同的清洗方法，一般可以使用适当的洗涤剂和溶剂进行清洗。
需要注意的是，层析柱的操作方法可能因不同的仪器和实验要求而有所差异，因此，在使用层析柱前，应详细阅读仪器说明书，并按照说明书中的操作要求进行操作。
此外，操作过程中应注意安全，佩戴个人防护装备，避免化学品直接接触皮肤和眼睛。
生产用柱层析
生产用柱层析
柱层析是一种常用的化学分离手段，广泛应用于生产和科学研究中。
以下是柱层析的生产用制备步骤：
1. 称量：称取一定质量的中性氧化铝加入小烧杯，倒入一定体积乙醇溶液后搅拌成糊状。
2. 装柱：向柱中依次加入脱脂棉、石英砂、乙醇、中性氧化铝与乙醇糊状物、石英砂。
3. 上样：用胶头滴管吸取待测样品沿柱壁加入，然后用乙醇清洗柱壁有色物质。
4. 湖蓝BB洗脱和收集：打开色谱柱下端活塞，控制滴速，沿柱壁缓慢旋转加入乙醇溶液，进行试样的洗脱，待湖蓝BB到达柱子底端时，用干净锥形瓶接收。
5. 荧光黄洗脱和收集：沿柱壁缓慢旋转加入碳酸钠溶液，进行荧光黄的洗脱，待荧光黄到达柱子底端时，用干净锥形瓶接收。
在柱层析过程中，需要根据目标物质的性质选择合适的固定相和流动相，控制好洗脱速度和柱子高度等参数，以获得最佳的分离效果。
柱层析的实验方法和技巧
柱层析的实验方法和技巧柱层析是一种常见的分离和纯化技术，广泛应用于药物、化学和生物学等领域。
在进行柱层析实验时，需要掌握一些实验方法和技巧，以保证实验的准确性和可重复性。
以下是柱层析的实验方法和技巧的详细介绍。
实验方法：1.样品准备：首先，将待分离的样品准备好。
样品应该经过适当的前处理，如提取、浓缩和纯化等操作。
同时，还需要将样品溶解在适当的溶剂中，以便在柱层析中进行分离。
2.柱层析填充材料的选择：根据样品的性质和分离需求，选择合适的填充材料。
常用的填充材料有硅胶和化学修饰的硅胶，也可以根据需要选择其他填充材料。
填充材料的选择对柱层析的效果和效率有很大影响，因此需要根据具体情况进行选择。
3.柱层析装置的选择：柱层析装置有多种类型，包括玻璃柱、SPE柱和HPLC柱等。
根据实验要求选择合适的柱层析装置。
同时，还需要选择合适的柱层析操作系统，如柱层析系统和高效液相色谱系统等。
4.样品的加载和洗脱：将样品加载到柱层析柱中，并控制好流速和洗脱溶剂的组成。
对于复杂的样品，可以采用梯度洗脱的方法，逐渐改变洗脱溶剂的组成，以实现目标物质的分离。
5.分离物的收集和分析：根据需要，将分离得到的目标物质收集起来，并进行后续的分析和鉴定。
常用的分析方法包括质谱、核磁共振和紫外可见等。
实验技巧：1.柱的制备：在进行柱层析实验前，需要制备层析柱。
首先，选取合适的柱体和填充材料，将填充材料放入柱体中，并按照要求填充紧密。
同时，还需要注意保持柱体的垂直和水平，以避免填充不均匀。
2. 流速控制：在柱层析实验中，需要控制好流速，以避免过高的流速造成分离效果下降。
一般来说，流速应为填充材料建议的范围内，通常为0.5-2.0 mL/min。
3.洗脱溶剂的选择：洗脱溶剂的选择对柱层析的分离效果有很大影响。
一般来说，需要选择合适的极性洗脱溶剂，以满足分离和纯化的要求。
对于复杂的样品，可以采用梯度洗脱的方法，逐渐改变洗脱溶剂的组成。
4.紧密填充和充实度的控制：在填充柱体时，需要注意填充材料的紧密度和充实度。
柱层析步骤
柱层析分离步骤1.取样拿到样品后用毛细管蘸取少量的样品放入离心管中,加入相应的溶剂将样品溶解，标号后作为对照。
2.跑板将取出的样品与要分离的样品点在同一块硅胶板上进行跑板，确定第几个点是将要分离出来的样品.3.装柱将少量的棉花（棉花太少会露出硅胶,太多过滤的较慢）塞入柱子低端防治硅胶露出，配制硅胶溶剂时浓度应适当（浓度过大易造成干柱，溶度过小会大量浪费溶剂），将硅胶装入柱子直径的15—20倍高即可（柱子过高浪费时间且没有必要，柱子过低会造成物质没有分离开就应经被洗下）。
倒入一定量的硅胶之后将硅胶压实,然后将溶液压至和硅胶面向近处，重复加入硅胶到达预定的高度，然后加入一定量的无水硫酸钠（作用是防治在加样时将硅胶面冲的变形)，然后用手稍微弹动柱子将无水硫酸钠弹平,在溶剂将柱内壁的硅胶及无水硫酸钠洗净。
4.加样将样品用溶剂溶解后加入柱内(加入溶液时从中间像外圈旋转滴加，不要将柱面冲出坑)，并用溶剂反复洗瓶子3遍左右(洗瓶子时将溶剂沿磨砂口加但不能碰到瓶内壁，否则会污染试剂）,将洗后的液体转移至柱子内。
5.过柱先用滴管沿柱内壁加入溶液，溶液到达一定高度后再将配制的溶液倒入到柱子上面的球型漏斗内，加压，先用锥形瓶接取前面柱内的溶剂，然后当溶液到达一定的高度时开始用试管接，然后不断的检验试管中是否有样品洗出，当从有样品洗出到没有时,第一个样品就被完全洗出,跳跃的点一定数量的点，然后进行跑板，确定没有自己要分离的样品后就可以倒掉，继续洗柱子.换取极性稍大的溶剂，分离到第二个样品后同第一个做同样的处理，直至得到自己要的样品。
6.旋干将的的样品转移至圆底瓶中旋干，在将样品瓶安装好后，先打开冷凝系统和加热系统,然后打开旋转和抽气，缓慢关闭活塞，此时不停的观察是否有气泡，若有气泡应放入一定气体，然后缓慢关闭直至没有气泡，旋干后用油泵抽气（油泵的真空度比选转蒸发仪的真空度更大,能抽的更干）然后放入称量过质量的小瓶中，封口后放入冰箱内保存。
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柱层析技术
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相
的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望
能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所
以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分
离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过
硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得
不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过
减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念
头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力
的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
非凡是在轻易分解
的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得
加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是
样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米，而样品就有二
厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只
有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多
的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，
不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选
择要具体分析。
假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质
相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm 的柱子
）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm 的，也
可以减小淋洗剂的极性等等。
关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。
可以湿柱，也可以干柱。
不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅
胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，究竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。
也
是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
至于是
加压、常压、减压，随需而定。
因为是schlenk操作，所以点板是个问题，假如样品是显
色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。
假如样品无色，只好预备几十
个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。
像我以
前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。
无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。
因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，
很轻易是样品分解，非凡是金属有机化合物和含磷化合物。
而氧化铝可以做成碱性、中
性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。
听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一
照就知道产品在哪里了，没有验证过。
哪位做过可以提出来大家参详参详。
--
※ 关于湿法、干法上样。
湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好
，不然溶剂就成了淋洗剂了。
很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一
般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较
好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，假如不能重结晶
那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂
一起走，
显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
样品和硅胶的量有一种说法是1：
1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样
品没有吸附在硅胶上）。
溶剂的选择。
当然是最便宜，最安全，最环保的了。
所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。
文献中有写用
正己烷的，太贵了，除非非凡需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因
为极性很小，有时还是非它不可。
乙醚也可以用，但是就是轻易睡觉，注重保持清醒别
让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。
二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸
附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。
甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品假如想过元素分析的话要留神，应该经过后
继处理，比如说重结晶等。
其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。
由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑
料桶装的，就要注重这些工业品的纯度是较低的。
经常能够从送来的大桶底部看见有色
的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。
当然过
原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。
另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点
是要消耗一定的人工。
这里要注重的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和
乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋
洗时比较合适，正好极性越来越大了。
在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为
在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，假如杂质和
你下面要过的样品有反应那就惨了。
关于操作问题。
1 装柱。
柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节
门的。
干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。
装完的柱子应该要适度的紧
密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。
书中写
的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就
全下来了。
当然假如你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。
但是柱子更忌讳的是
开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！
2 加样。
用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再
加少量的低极性溶剂，然后俅蚩钊绱肆饺危话闶⑸熬突臼前咨
牧恕?
加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm 就够了）
，再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
3 淋洗剂的选择。
感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。
不要认为在板上爬高了分的比较开，过
柱子就用那种极性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不轻易在柱子上分开，因为柱子是一
个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3
）的三次方或四次方大。
4 样品的收集。
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。
所以假如样品与硅胶的吸附比
较强的话，就不轻易流出。
这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。
这时可以
采用氧化铝作固定相。
另外，收集的试管大小要以样品量而定，非凡是小量样品，假如用大试管，可能一根就
收到了三个样品，wuwu。
假如都用小试管那工作量又太大。
5 最后的处理。
柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以假如想送
分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没
了，必要时进行重结晶。
另外，再过柱的时候，有时会出现气泡，一是
和使用的溶剂有关，假如是易挥发的溶剂，如乙醚、二氯甲烷等，在
室温稍高的情况下，很轻易出现这种现象，因此，在室温高的时候，
可以选择沸点较高，挥发相对小的溶剂。
还有，使用混合溶剂时，使用
的两种溶剂的沸点应该相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而
乙醚却要选择30－60的石油醚。
二是：不论是用带砂板的还是塞棉花的，在装柱之前，都要将空气用加压的方法将空气排干，这样就可避免柱中有空气！过柱子需要耐心，不要着急.。