超氧阴离子清除能力试剂盒说明书

超氧阴离子清除实验

·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。

·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。

(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。

实际配制500mL。

高压灭菌，室温保存。

PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。

NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。

总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(FRAP 微板法)说明书

植物样品的吸光度值和 0.5mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗氧化能力为 0.5mM/(0.5g/5ml)=0.5mmol/100g；
血浆(血清)样品的吸光度值和 0.7mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗氧化能力为 0.7mM；
细胞(组织)匀浆样品的吸光度值和 0.3mM 的 Fe2+的吸光度值相同，该匀浆液蛋白浓度为 0.2mg/ml，则该细胞(组织)样品的总抗氧化能力为 0.3mM/0.2mg/ml=0.15mmol/g； 0.3mM 的抗氧化物质，其吸光度值和 0.6mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则其相对总抗氧化能力为 0.6mM/0.3mM=2。
注意事项： 1、实验材料应尽量新鲜，样品提取的整个过程最好在 4℃条件下进行；如取材后不能立即检测，也可以-80℃冻存后再进行测定(应在 1 个月内测定完毕)。 2、亚铁标准溶液如变为黄色或棕黄色应弃用。 3、测定 593nm 如有困难，亦可在 585~605nm 范围内进行测定。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(FRAP 微板法)即 Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称 T-AOC Assay Kit，是一种采用铁离子还原能力(Ferric Reducing Ability of Plasma,FRAP)来测定样品抗氧化活性的方法，其原理是在酸性条件下样品中的抗氧化物质还原 Fe3+-TPTZ 产生 Fe2+-TPTZ，呈现出明显的蓝色(紫色)，于 593nm 处有最大的光吸收，在 Fe3+-TPTZ 过量的情况下测定蓝色物质的生成量即可获得待测样品的还原能力即总抗氧化能力，由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素，并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于 10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰 FRAP 法的检测反应，本方法可以对血浆、血清、尿液等各种体液，细胞或组织裂解液、植物或中草药抽提液或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力进行检测。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

SOD试剂盒说明说书(100孔)

请在使用前仔细阅读说明书
超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒- WST®操作说明书 100孔
*本试剂盒（货号：S311）只能用于检测SOD的活性，不能用于检测超氧阴离子（O2- ）
本说明书提供了下列两种检测方法。方法 1（检测 SOD 抑制率法）：100 孔可以检测 18-29 个样品。方法 2（检测 SOD 活性法）： 100 孔可以检测 4-13 个样品。两种方法的操作和实验结果准确度都有区别，请根据您的具体情况和实验准确度要求选择。如有疑问，请按照说明书下方的联系方式咨询技术人员。
检测机理
超氧化物歧化酶（SOD）是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子（O2- ）的歧化反应，生成过氧化氢和单
质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑（氮蓝四唑nitroblue tetrazolium ，
简称NBT）的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是，NBT法存在一些缺点，例如生成的染料（Formanzan dye）的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒- WST®提供了更为简便的检测SOD的方法，它是利用同仁化学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST®-1（2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐），能与超氧阴离子（O2- ）反应生成一种水溶性的染料。WST®-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制（见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝
至10 ml，4℃下，600 g 离心10分钟。 4. 弃上清液，加入等量的生理盐水至沉淀中，制成悬液。4℃下，600 g 离心10分钟。重复此步骤1次。 5. 在沉淀中加入4.0 ml蒸馏水，制成悬液。加入1 ml乙醇和0.6 ml氯仿。 6. 将混合后的液体，盖紧盖子， 4℃下用振荡器强烈震荡15分钟。 7. 在4℃下，将混合液600 g，离心10分钟，随后将上层水乙醇层小心移入一支新的试管中。 8. 取出0.1 ml的水乙醇层，加入0.7 ml蒸馏水，制成红细胞样品溶液。

清除超氧阴离子自由基

清除超氧阴离子自由基
取0.05mol/L Tris-HCl 缓冲液（PH8.2）5ml ，置于25℃水浴中预热20min ，分别加入4ml 不同浓度的提取液，25℃水浴中预热20min ，再加入3mmol/L25℃水浴中预热20min 的邻苯三酚溶液1ml ，混匀后于25℃水浴中准确反应5min ，加入10mol/LHCl 1ml 终止反应，于320nm 处测定吸光度，空白对照组以相同体积的蒸馏水代替样品。

每个试样作三个平行样，取其平均值。

实验结果以清除率E 表示： E=空白
样品空白A A A -×100% A 样品用相同样品浓度的空白调零，消除样品颜色的影响。

注：A 空白是不加样液测一值（A 0），A 样品空白(A x0)是只加样液，其他用水代替。

2.5.2.3清除羟自由基
于试管中分别加入不同浓度的提取液2ml ，9mmol/L 水杨酸-乙醇2ml ，9mmol/L FeSO 4 2ml ，最后加入2ml 8.8mmol/L H 2O 2 启动反应，37℃反应15min ，以蒸馏水为空白对照，在510nm 下测量各待测液的吸光度。

考虑到本身的吸光值，以9mmol/L 水杨酸-乙醇2ml ，9mmol/L FeSO 4 2ml ，蒸馏水2ml ，不同浓度的样品溶液2ml 为提取液的本底吸收。

清除率的计算公式为：
·OH 清除率=0
)0x x (0A A A A --×100% 式中：A0为空白对照液的吸光度，Ax 为加入样品液后的吸光度，Ax0为提取液本底的吸光度。

超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)

超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)简介：超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

Leagene 超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)又称超氧阴离子清除能力检测试剂盒，其检测原理是利用羟胺氧化的方法可以检测生物体系中超氧阴离子自由基(O 2-)，即超氧阴离子自由基(O 2-)与羟胺反应生成NO 2-，在一定范围内颜色深浅与超氧阴离子自由基(O 2-)成正比，根据NO 2-反应的标准曲线将A 530换算成NO 2-浓度，再依据上述关系式即可计算出O 2-浓度。

该试剂盒主要用于测定植物组织中的超氧阴离子自由基含量或超氧阴离子清除能力。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、实验材料：植物组织(大豆、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等3、研钵或匀浆器4、离心管或试管5、低温离心机6、恒温箱或水浴锅7、比色杯8、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TO1123 50T Storage试剂(A): NO 2-标准(1mM) 1ml RT 试剂(B): O 2- Lysis buffer 125ml RT 试剂(C): 羟胺溶液30ml RT 试剂(D): 氨基苯磺酸显色液 30ml 4℃ 避光试剂(E): 萘胺显色液 30ml4℃ 避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取预冷的O2-Lysis buffer后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃离心，上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于超氧阴离子自由基的检测。

[资料]超氧阴离子消除试验

·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。

·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。

(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。

实际配制500mL。

高压灭菌，室温保存。

PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。

NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。

超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-5053

2超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-5053规格：50T/48S可见分光光度法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体3mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体15mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前每瓶加6mL 蒸馏水充分溶解。

2-8℃保存4周。

产品说明：生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

AP-TEMED 系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO －与对氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm 处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm 的吸光值呈负相关。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g ）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃，离心10min ，取上清，置于冰上待测。

2、液体：直接检测。

若有浑浊则离心后取上清待测。

3、细胞样本：收集细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细胞（功率200w ，超声3s ，间隔10s ，重复30次），然后10000g ，4℃，离心10min ，取上清，置冰上待测。

植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒产

植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氢溴化乙啶，在细胞氧化条件下，产生红色荧光，来检测细胞内超氧阴离子活性氧族的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种其适用于新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧的分析。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，滞留持久，荧光清晰。

技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。

二氢溴化乙啶（Dihydroethidium bromide；Hydroethidine；DHE）是一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不外漏的染色剂。

一旦被超氧自由基阴离子氧化，二氢溴化乙啶转化为溴化乙啶，进入细胞核，与DNA紧密结合，便产生荧光。

据此证明细胞内超氧阴离子活性氧族的存在。

产品内容清理液（Reagent A）毫升固着液（Reagent B）毫升离析液（Reagent C）毫升染色液（Reagent D）微升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；固着液（Reagent B）和离析液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基15毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器1.5毫升离心管：用于染色液配制的容器载玻片：用于组织染色操作解剖针：用于植物组织解剖血细胞计数仪：用于细胞计数（微型）台式离心机：用于样品处理培养箱：用于染色孵育比色皿或酶标板：用于荧光定量分析的容器（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光分析细胞流式仪：用于用于细胞染色分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析实验步骤方法一：活体组织染色1．加上xx微升清理液（Reagent A）在载玻片上2．切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的清理液（Reagent A）中3．用解剖针小心压碎根尖4．小心移去清理液（Reagent A）5．小心加上xx毫升清理液（Reagent A）在根尖上6．再加上xx微升染色液（Reagent D）7．放进37℃培养箱里孵育20分钟8．取出载玻片，移去染色液9．小心加上xx毫升清理液（Reagent A）10．小心移去清理液（Reagent A）11．盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压12．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高方法二：组织固定染色1．加上xx微升清理液（Reagent A）在载玻片上2．切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的清理液（Reagent A）中3．用解剖针小心压碎根尖4．小心移去清理液（Reagent A）5．小心加上xx毫升固着液（Reagent B）6．室温下，孵育3小时，避免干化7．小心移去固着液（Reagent B）8．小心加上xx毫升清理液（Reagent A）9．小心移去清理液（Reagent A）10．小心加上xx毫升离析液（Reagent C）11．室温下孵育5分钟12．小心移去离析液（Reagent C）13．小心加上xx毫升清理液（Reagent A）14．小心移去清理液（Reagent A）13．小心加上xx毫升清理液（Reagent A）在根尖上14．再加上xx微升染色液（Reagent D）15．放进37℃培养箱里孵育20分钟16．取出载玻片，移去染色液17．小心加上xx毫升清理液（Reagent A）18．小心移去清理液（Reagent A）19．盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压20．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高方法三、培养植物细胞脱离染色1．准备1瓶25cm2细胞培养瓶的待测细胞2．小心抽去细胞培养液3．加入xx毫升清理液（Reagent A）到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面4．小心抽去清理液（Reagent A）5．加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6．置入37℃培养箱1分种7．振动培养瓶，使细胞脱落8．加入4毫升用户自备的完全细胞培养液9．移入15毫升锥形离心管，充分混匀（注意：悬浮细胞直接从这一步骤开始）10．移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数11．移出1 X 106细胞到新的15毫升锥形离心管12．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入xx毫升清理液（Reagent A）15．再加入xx微升染色液（Reagent D），混匀16．放进37℃恒温水槽孵育20分钟，避免光照17．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g18．小心抽去上清液19．加入预冷的xx微升清理液（Reagent A），轻柔混匀细胞颗粒群20．放进冰槽里21．选择下列方式之一进行操作：1)即刻进行细胞流式仪分析：藻红蛋白（phycoerythrin；PE）波段，观察50000个细胞以上――波峰右移，表明超氧阴离子含量高2)或使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高3)或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：1）移取400微升上述细胞悬液到1毫升比色皿2）加入xx微升清理液（Reagent A）3）上下倾倒混匀数次4）放进荧光分光光度仪：激发波长540nm，散发波长590nm――RFU增高，表明超氧阴离子含量高方法四、贴壁培养细胞染色1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项4）2．小心抽去细胞培养液3．小心沿着孔壁加入xx微升清理液（Reagent A）到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面4．再加入xx微升染色液（Reagent D）5．放进37℃细胞培养箱里孵育20分钟6．小心抽去染色液7．小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A）到细胞培养孔8．选择下列方式之一进行操作：（A）使用倒置荧光显微镜观察（定性检测）：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高（B）使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长540nm，散发波长590nm――RFU增高，表明超氧阴离子含量高注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．固着液（Reagent B）和离析液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全4．孵育时，必须避免光照5．建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析6．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量：7．本产品适合活体染色和固定染色，染色剂不易洗掉，染色持久8．根据不同组织类型，调整染色液（Reagent D）的使用剂量（1：100至1：1000容量比），避免过度染色9．本公司提供系列活性氧分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定荧光清晰。

超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书

Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0175规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体5 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体100 μL×1支2-8℃保存试剂三液体4 mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体0.25mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：使用前先离心再吹打混匀。

根据样本量将试剂二用蒸馏水稀释10倍后使用，当天用完。

2、试剂四：根据样本量将试剂四用蒸馏水稀释5倍后使用，当天用完。

产品说明：SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成H2O2和O2。

SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm 处有吸收；SOD可清除O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、细胞超声破碎仪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.细胞、细菌样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次）。

抗超氧阴离子自由基及生产超氧阴离子自由基测试盒

抗超氧阴离子自由基及生产超氧阴离子自由基测试盒说明书修订日期：2015.07.13 Cat number：KGT012Store at4℃for6monthsFor Research Use Only（科研专用）一、测定原理模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，产生超氧阴离子自由基O2—，加入电子传递物质及gress 氏显色剂，使反应体系呈现紫红色，可用分光光度计测其吸光度，当被测样本中含有O2。

抑制剂时，则比色时测定管的吸光度低于对照管的吸光度，而如果被测样本中含有产生O2。

物质时，则比色时测定管的吸光度高于对照管的吸光度，通过以维生素C做标准，可计算出被检物品对O2。

的影响能力。

二、试剂盒组份组份KGT01250assaysBuffer A 5.0mLBuffer B 5.0mLBuffer C 5.0mLBuffer D350μLBuffer D稀释液 5.0mL试剂E1支试剂F1支Vc标准品4支注意事项1．Buffer A室温较低时会有部分结晶析出，溶解后加蒸馏水稀释10倍至1×Buffer A50ml。

2．Buffer D用前用Buffer D稀释液按1︰14稀释至1×Buffer D（不可冷冻，4℃可保存2个月）。

3．试剂E配制：将试剂加入蒸馏水37.5mL中溶解后备用，4℃避光保存。

4．试剂F配制：将试剂加入蒸馏水37.5mL中溶解后备用，4℃避光保存。

5．显色剂配制：试剂E︰试剂F︰冰乙酸＝3︰3︰2的体积比配制，4℃避光保存（冰乙酸自备）。

6．Vc标准贮备液配制：将一支Vc标准品加蒸馏水定容至5ml（Vc标准配制后当天内使用）Vc标准品工作液（0.15mg/ml）配制：取1ml贮备液加4ml蒸馏水，5倍稀释现配现用。

Vc标准品配制后见光极易分解，配制的0.15mg/ml Vc标准品工作液需30分钟内检测。

三、操作步骤试剂测定管对照管标准管1×Buffer A （mL ） 1.01.0 1.0蒸馏水（mL ）0.050.15mg/ml Vc 标准品（mL ）0.05样品（ml ）0.05Buffer B （mL ）0.10.10.1Buffer C （mL ）0.10.10.11×Buffer D （mL ）0.10.10.1用涡旋混匀器充分混匀，置37水浴40分钟显色剂（ml ）2.02.02.010min 后倒入1cm 光径比色杯中，蒸馏水调零，波长550nm 处比色。

格锐思生物科技DPPH自由基清除能力试剂盒说明书

DPPH自由基清除能力试剂盒说明书（货号：G0128F分光法48样）一、产品简介：DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。

广泛用于定量测定生物试样和食品的抗氧化能力。

此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。

当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，呈现的颜色越浅，即A值越低，进而对样本中DPPH清除能力进行定量分析。

二、试剂盒的组成和配制：试剂名称规格保存要求备注工作液粉剂×1瓶4℃保存临用前甩几下使试剂落入底部，再加入38mL无水乙醇充分溶解备用；用不完的试剂4℃避光保存;标准品粉剂×1支4℃保存若重新做标曲，则用到该试剂三、所需的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、离心机、可调式移液器、研钵、冰、甲醇、无水乙醇和蒸馏水。

四、DPPH自由基清除能力测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜组织或者称取约0.05g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，得到烘干样本），加入1mL的80%甲醇提取液（若鲜样需研磨均质），于60℃，200-300W条件下超声提取30min（间隔5min振荡混匀一次），若有损失需用80%甲醇定容至1mL。

12000rpm室温离心10min，取上清测定。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 80%甲醇提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm室温离心10min，取上清测定。

超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒分光光度计法

超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒（A002-96T分光光度计法）一、测定原理该方法利用NADH-PMS-NBT为超氧阴离子(O2·-)生成系统，超氧阴离子清除剂能减少NBT的蓝色。

通过检测560nm处吸光值可判断体系中还原物质的还原能力。

二、试剂组成试剂一：液体40mL×1瓶；试剂二：液体1mL一瓶；试剂三：液体1mL一瓶；试剂四：粉剂一支；试剂五：1mg/mL没食子酸标准品，1mL。

三、储存条件及有效期试剂盒-20℃可保存6个月。

四、试剂的配制试剂一工作液：用时加双蒸水360mL，也就是10倍稀释，得到400mL试剂一工作液；试剂二工作液：用赠送的棕色瓶配制。

试剂二工作液由试剂二加上100mL试剂一工作液配得，现配现用，注意避光；试剂三工作液：试剂三工作液由试剂三加上100mL试剂一工作液配得，现配现用；试剂四工作液：粉剂一支。

用50mL双蒸水溶解，摇匀后，取10mL，加入90mL试剂一，配成试剂四工作液，现配现用，用赠送的棕色瓶盛装。

注意避光，配好的试剂请于2小时内用完。

试剂五：1mg/mL没食子酸标准品，100μL，-20℃保存。

五、操作步骤测定吸光值。

1空白管很重要，建议做3个以上平行；2如样品颜色较浅可不做对照管六、计算公式注： 1 如未做对照孔，可以将其视作为0；2 阳性对照求值时将其视作测定孔进行计算即可。

七、注意事项1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；2. 如不确定样品的超氧阴离子自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。

3. 试剂四切记避光保存，特别是配制后，且应尽快用完。

建议在做好一切其它准备工作后再配制试剂四应用液。

试剂四正常颜色为黄色，强光照射下，5-10分钟内会变为绿色，随后变为蓝色，变色后试剂不可再用！4. 试剂二、三应用液和样品混匀后再加入试剂四，次序颠倒会导致不显色。

冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试

冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂MitoSOX，在线粒体氧化损伤条件下，产生红色荧光，来检测冰冻组织细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在状况的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

适宜于冰冻动物组织细胞线粒体内的超氧阴离子分析。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，性能稳定。

技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。

其中线粒体氧化磷酸化副产物之一是超氧阴离子，为线粒体内最主要的活性氧族，与心血管疾病，包括高血压、冠状动脉硬化、糖尿病相关的血管疾病、神经退行性疾病（巴金森氏症、阿茨罕默症、肌萎缩硬化症）相关。

MitoSOX 是一种完全自由通过细胞膜，并选择性在活体细胞线粒体内长期滞留而不外漏的染色剂。

一旦被超氧自由基阴离子氧化，便产生荧光。

据此证明细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在。

产品内容清理液（Reagent A）20毫升染色液（Reagent B）40微升稀释液（Reagent C）20毫升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器培养箱或恒温水槽：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光组织细胞实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent C）置于室温预热。

A001-1T-SOD说明书20120505修改

[注]：所用吸嘴为一次性吸嘴。
试剂五：粉剂×1 支，用时加 70℃～80℃热双蒸水 75ml 溶解后备用，若加热过程中水分蒸发减少，此时必须用双蒸水补充至 75ml，配好后的试剂避光 4℃冷藏 1 年。
试剂六：粉剂×1 支，用时加双蒸水 75ml 溶解后备用，配好后试剂避光 4℃冷藏保存 6 个月。显色剂的配制：按试剂五:试剂六:冰乙酸=3:3:2 的体积比配显色剂，用多少配多少，配好的显色剂 4℃避光冷藏 3 个月。
=
对照OD值 − 测定OD值对照OD值
反应体系的样本测试前的 ÷ 50% × 稀释倍数 × 稀释倍数
（二）、动物组织匀浆中总 SOD 活力计算：
1、定义：每毫克组织蛋白在 1ml 反应液中 SOD 抑制率达 50%时所对应的 SOD 量为一个 SOD
活力单位（U）。
2、计算公式：
总SOD活力（U／mgprot )
本试剂盒仅用于科研、实验室
南京建成
总超氧化物歧化酶（T-SOD）测试盒说明书
（货号：A001-1 羟胺法）
目录
超氧化物歧化酶（SOD）测试盒 ····················································································· 1 货号：A001-1 ···················································································································· 1 目录 ···································································································································· 1 试剂盒的介绍 ····················································································································2 测定意义 ····························································································································2 试剂盒有效期和保存条件 ································································································2 实验中所需的仪器和自备的试剂 ····················································································· 2 试剂的组成与配制 ············································································································3 总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的测定······································································ 4 最佳取样量摸索 ················································································································5 参考值 ································································································································ 6 注意点 ································································································································ 7 试剂盒优点 ························································································································8 附录Ⅰ：SOD 标准曲线的制备························································································9 附录Ⅱ：血清（浆）等相关液体中 T-SOD 的测定······················································ 10 附录Ⅲ：组织中 T-SOD 的测定 ····················································································· 11 附录Ⅳ：高脂血症血清（浆）中 SOD 的测定 ····························································· 13 附录Ⅴ：红细胞中 SOD 的测定····················································································· 14 附录Ⅵ：植物组织中 SOD 的测定················································································· 15

DPPH自由基清除能力检测试剂盒说明书

DPPH 自由基清除能力检测试剂盒说明书微量法货号：BC4755规格：100T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体30mL×1瓶（自备）常温保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：无水乙醇自备；2、试剂二：粉剂置于瓶内EP 管中。

临用前加入4.05mL 试剂一振荡溶解，用不完的试剂可于-20℃保存1个月，建议分装保存，避免反复冻融；临用前根据试验所需量按照试剂二：试剂一（V:V ）=4：21的比例配制成工作液，现配现用，用不完的工作液可于2-8℃保存一周；3、试剂三：10mg 维生素C 。

临用前加入1mL 提取液，充分振荡溶解，配成10mg/mL 的维生素C 溶液，2-8℃保存两周；用于阳性对照。

产品说明：DPPH 自由基一种很稳定的氮中心的自由基，是样本抗氧化能力的重要指标之一，广泛应用于抗氧化类食品、保健品及药品的研究中。

DPPH 自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在515nm 处有强吸收。

当有抗氧化剂存在时，DPPH 自由基被清除，其溶液颜色变浅，515nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。

本试剂盒中，通过吸光度下降的程度来反映样本清除DPPH自由基的能力。

DPPH ·DPPH ·H注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、无水乙醇、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50目筛和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的制备（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）AntioxidantsBeijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:************（1）植物样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛；称取约0.05g样本，加入1mL提取液后置于40℃水浴锅中浸提30min；10000rpm室温离心10min，取上清，置于冰上待测。

细胞ROS测定试剂盒说明书1

用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基 15 毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器 1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光细胞
5
c) 或使用荧光分光光度仪检测（定量检测）：
1）移取 400 微升上述细胞悬液到 1 毫升比色杯
2）加入
微升 GENMED 保存液（Reagent D）
3）上下倾倒混匀数次
4）放进荧光分光光度仪：激发波长 540nm，散发波长 590nm――
RFU 增高，表明活性氧族（ROS）含量高
2
二、直接法
活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒细胞内氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒
细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS10111.1 v.A
GENMED 细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
GENMED 细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氢溴化乙啶，在细胞氧化条件下，产生红色荧光，来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

清除超氧阴离子自出基能力的测定

清除超氧阴离子自出基能力的测定清除超氧阴离子自出基能力的测定？听起来好像高深莫测，但其实它就像是一次科学“侦探”游戏，目标是找到并消除体内的坏小子——超氧阴离子。

我们平时说的自由基，大家都知道吧？它们就像街头上的“坏蛋”，能引发一连串的麻烦，比如加速衰老、引发疾病等等。

超氧阴离子就是这种坏蛋的亲戚之一，它活跃得很，又特别“调皮”，一不小心就能对我们的细胞造成伤害。

所以，清除它的能力如何测定，关系着我们如何守护自己的健康，简直是生活中不可忽视的小细节！究竟该怎么测定这种能力呢？其实嘛，不是像侦探小说里的那种大案子，直接一上来就有个明确的线索。

而是得通过一系列的实验，逐步寻找蛛丝马迹。

最常见的一个方法，就是通过特定的化学试剂来“捉拿”这些超氧阴离子。

它们就像犯罪现场的指纹一样，只要你用对了方法，就能准确找到它们藏身的地方。

实验中，我们通常会使用一种叫做NBT的化学物质，超氧阴离子一旦和它接触，就会发生颜色变化。

这就好比是超氧阴离子自己暴露了行踪，白白地站在那儿，成了显眼的“嫌疑犯”。

这样一来，实验人员只需要观察颜色变化的程度，就能判断体内清除超氧阴离子自出基的能力强不强。

这时候你可能会想，为什么要通过NBT来测量呢？其实是因为NBT反应得很灵敏，它能迅速与超氧阴离子反应，形成一种沉淀物，产生蓝色的变化。

想象一下就像我们在画画时，画布突然冒出了几滴颜料，整个画面一下子就不一样了。

颜色越深，就说明超氧阴离子的清除能力越弱，反之，如果颜色很淡或者没有什么变化，那就说明清除能力比较强，毕竟超氧阴离子在实验中被清除得差不多了。

不过，话说回来，实验的结果就像打麻将，得靠点运气。

因为很多时候，清除超氧阴离子自出基能力不仅受化学反应影响，还和实验条件密切相关。

比如温度、时间、试剂浓度等等，都可能让实验结果出现偏差。

每个小细节都很重要，有时候稍不注意，实验结果就像那种“莫名其妙”的失败，怎么做都不对劲。

所以，这个测定的过程既考验技巧，也考验耐心，真的是需要一点点时间去琢磨。

超氧自由基清除能力测定法-操作图解

超氧自由基（·O2-）的清除能力测定法（连苯三酚自氧化法）（适用于：SOD及各种抗氧化剂）操作图解具体方法1 溶液配制1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。

1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。

1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA）40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。

用pH计测量，pH应为7.4。

用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。

（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。

1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中）取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。

再往里加连苯三酚14.6 mg (M。

W.126.1 )，即得。

（当天有效,以上为1个样品的用量）。

2 测试液2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。

（空白参比：Tris-HCl 缓冲液）ΔA＝A325nm,300s- A325nm,30s。

由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。

此时的ΔA为ΔA0。

3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。