BPG 层析柱实用标准装柱流程的要求规范
BPG 层析柱实用标准装柱流程的要求规范
操 作 标 准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min 表示；换算：2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积Vslurry =V柱×PF/Cslurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，Vslurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度Lslurry =Vslurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM 。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱摘要：I.简介- 介绍BPG 层析柱II.装柱过程- 准备工作- 层析柱的准备- 装柱器的准备- 装柱步骤- 加样- 加固定相- 加流动相- 排除气泡- 密封装柱器III.注意事项- 避免气泡的产生- 保持操作环境的清洁- 选择合适的固定相和流动相IV.总结- 装柱的重要性- 装柱后的处理正文：BPG 层析柱是一种在生物分离技术中广泛应用的工具，它通过利用样品中各组分在固定相和流动相之间的分配系数的不同，达到分离的目的。
在使用BPG 层析柱进行分离前，我们需要进行装柱操作。
首先，我们需要进行准备工作。
层析柱的准备主要是清洗柱子，以去除可能影响分离效果的杂质。
装柱器的准备则包括检查装柱器是否完好，并按照说明书进行必要的清洗和消毒。
装柱过程分为以下几个步骤：首先，将样品加入装柱器中。
然后，加入固定相。
这一步需要注意，固定相的加入量应适宜，过多或过少都可能影响分离效果。
接着，加入流动相。
在加流动相的过程中，应缓慢、均匀地加入，以避免气泡的产生。
之后，需要排除气泡，以保证样品在柱子中的分离效果。
最后，密封装柱器，开始进行层析。
在装柱过程中，有几点需要特别注意。
首先，应尽量避免气泡的产生，因为气泡会影响样品的分离效果。
其次，应保持操作环境的清洁，避免杂质污染样品。
最后，选择合适的固定相和流动相，是保证分离效果的关键。
总的来说，装柱是BPG 层析柱实验的重要步骤，正确的装柱操作可以保证实验的顺利进行，得到理想的分离效果。
层析柱装填要点和要求
层析柱装填要点和要求
1. 嘿，一定要注意啊，装填层析柱的时候，颗粒大小可不能马虎呀！就像建房子，砖的大小得合适吧。
比如说用硅胶装填，颗粒太大或太小，效果能好吗？
2. 别忘了均匀装填呀！你想想，要是填得乱七八糟的，那不就像走在坑坑洼洼的路上，能顺顺畅畅吗？比如说填的时候东一块西一块的，那怎么行！
3. 要把气泡赶跑啊！气泡在里面就像个捣蛋鬼，会坏事的呀！就好比你吃饭的时候有颗沙子，多难受啊。
比如装的时候不小心混进了气泡，得想办法弄出去呀。
4. 压实也很关键呀！松松垮垮的可不行，这就好像搭积木不压实会倒一样。
比如说随便弄弄，那后续分离还能靠谱吗？
5. 速度不能太快也不能太慢啊！快了容易出问题，慢了又耽误时间。
就像开车，太快危险，太慢也急人。
比如填充的时候没把握好速度，那不就糟糕了。
6. 注意柱子的垂直哦！歪歪扭扭的可不像话，就跟站没站相一样。
比如说没放垂直，那后续操作能顺利吗？
7. 清洗干净也超级重要！脏兮兮的怎么用啊，就像你穿脏衣服出门一样。
比如装填前不认真清洗，那不是给自己找麻烦嘛。
8. 还有啊，多检查几遍呀！不检查怎么能放心呢，就像考试不检查会丢分一样。
比如说填完了就不管了，万一有问题呢！总之啊，装填层析柱这些要点和要求一定得认真对待，这样才能得到好的结果呀！。
BPG层析柱规范标准装柱经过流程规范标准
操 作 标 准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员 标准操作程序： 1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns UserManual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min表示；2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。
BPG 层析柱标准装柱流程规范
操作标准目得:为了使BＰG3００层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好得柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA prｏcｅsｓ系统进行有效得蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员标准操作程序:1基本术语概念填料因子(PackｉｎｇFａｃtor, PＦ):指在在装柱过程中,用低流速(如６0ｃm/h)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度(柱高)得比值,GＥHC生产得各种常见填料得PF参见《GEＨC ＡxiＣhroｍ300－10０0columns UseｒＭanuａl 28-95６２—89 Ｅｄiｔiｏn AＡ》;线性流速(liｎeａr flow ratｅ):单位时间内液体流经得直线距离,常用cm／h表示;体积流速(volume floｗratｅ):单位时间内液体流经得空间容积,常用ml/mｉｎ表示;换算:２准备工作2.１检查层析柱得完整性,所带配件,就是否水平(用水平仪矫正),就是否清洁(如有污染应进行清洗)、2、２确定所用填料及其特性、浓度等以DＥAE ＳｅpｈaroｓｅFast Flｏw填料为例,其填料因子(PF)为1.１５,新填料(slｕｒｒy)浓度为75％(保存于2０%乙醇中),耐压3bａｒ。
2。
3 确定放大后得工艺参数以ＸX生化制药股份有限公司得放大工艺为例,中试工艺参数:柱高h＝10ｃm;体积流速v1=3mｌ/min;柱内径d=１、６cm、即,线性流速v ２=v1/s 柱=3/(3、14×0。
82) cm/mi ｎ=1.５ cm ／min;样品与填料接触时间t ＝h ／v2=１０/1、5min ＝6。
67mi ｎ;在工艺得线性放大中h 、ｖ2与t 均不变,则可保证样品出峰得位置(洗脱时间)与形状不变、使用ＢP Ｇ３００层析柱进行放大得工艺参数:装柱体积V 柱= S 柱h=3。
1４×1、52×１L=7Ｌ;装柱需要sl ｕr ｒｙ体积V ｓｌurry =Ｖ柱×PF/C sl ｕr ｒy以ＤE ＡE Sepharo ｓe Fast F ｌow 为填料,则,V slur ｒｙ＝7×1。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱（Column Chromatography）是一种常见的色谱技术，用于分离和纯化化合物混合物。
它利用样品成分在固定相和流动相之间的差异迁移速率来实现分离。
在这篇文章中，我们将介绍层析柱装柱的基本步骤和相关参考内容，帮助读者了解层析柱技术的应用与操作。
1. 准备工作在进行层析柱装柱前，我们需要准备以下材料和设备：- 色谱柱：选择合适的柱径和柱高，以容纳样品和分离剂。
不同的应用需要不同类型的色谱柱，如硅胶柱、石墨化炭柱、反相柱等。
- 流动相：确定合适的流动相溶剂体系，用于样品的迁移和分离。
通常选择非极性溶剂（如石油醚、丙酮、甲醇等）或极性溶剂（如乙酸乙酯、二甲醚等）。
- 固定相：将合适的固定相装填到色谱柱中，用于分离和吸附样品成分。
选择合适的固定相类型，如硅胶、氧化铝、石墨化炭等。
- 样品：准备需要分离和纯化的混合物样品。
- 旋转蒸发仪：用于去除样品中的溶剂。
2. 装填色谱柱- 将色谱柱固定在柱座上，并根据柱径和柱高的大小调整砂轮，使得柱床均匀。
- 用适当的溶剂湿润色谱柱，避免流动相在柱床中出现间隙和假相。
3. 样品预处理- 将样品溶解在适当的溶剂中，以便在层析柱中迁移。
- 如果样品中有大量杂质，可以使用旋转蒸发仪去除溶剂。
4. 层析柱操作- 使用毛细管或注射器将样品注入色谱柱顶部。
确保样品不超过柱床高度。
- 将流动相逐步加入色谱柱，使其通过柱床。
可以根据实验需要调整流速和溶剂比例。
- 样品成分会根据其在固定相和流动相之间的亲疏水性质而分离。
在柱床中具有更大亲和力的成分会被滞留，而亲和力较小的成分会更快地通过柱床。
- 根据成分的迁移速度和柱床的色谱裂分能力，监测和采集分离后的组分。
常见的监测方法包括紫外可见光谱、红外光谱、荧光检测等。
5. 分离和纯化产物- 根据监测结果，确定目标化合物的峰位置和纯度。
- 通过收集色谱峰和进一步的实验操作，如再层析、结晶、后处理等，将目标化合物从样品中分离和纯化。
层析柱干法装柱步骤
层析柱干法装柱步骤层析柱干法装柱，这事儿就像搭积木，得有个章法。
咱先得把层析柱给准备好。
这层析柱就好比是一个特殊的小房子，要装东西进去的。
得保证这个小房子干净又干燥，要是里面脏兮兮或者湿漉漉的，那后面装进去的东西可就“住”得不舒服了。
就像你自己的家，如果到处是灰尘和水，你能乐意吗？再来说说填料。
填料是这个柱子里的关键角色，就像是小房子里的家具。
把填料从容器里取出来的时候，动作要轻，可不能像个莽撞的大汉似的。
为啥呢？因为填料如果被弄得乱七八糟，它在柱子里就没法好好排列了。
这就好比你整理衣柜，要是把衣服都胡乱扔进去，找衣服的时候可就麻烦了。
现在开始往柱子里装填料。
把柱子一端封闭好，就像给小房子关上门，只留一个入口。
然后慢慢地把填料倒进去，这个过程要均匀，就像往杯子里倒水，要是一股脑儿全倒进去，水就会溅得到处都是。
填料倒的时候，得时不时晃一晃柱子，让填料在里面铺得更均匀。
这就像你铺床的时候，要把被子铺平展，要是有褶皱，睡起来就不得劲儿。
可不能心急，要是填料倒得太快或者不均匀，那柱子里就会有缝隙或者空洞，这可不行，就像房子的墙有了漏洞，那还怎么住人呢？填料倒得差不多的时候，要轻轻敲打柱子的管壁。
这就像是在给填料做按摩，让它们在柱子里更紧实。
不过敲打的力度得掌握好，不能太用力，不然就把填料给敲坏了。
这就好比你敲鸡蛋，太用力鸡蛋就破了，填料要是破了，那整个柱子的功能可就受影响了。
等填料装得差不多了，再把柱子顶端多余的填料弄平。
这就像是给房子的屋顶做最后的修整，要弄得平平整整的。
要是不平，那后面使用的时候就会有问题。
装完柱之后，可别忘了检查一下。
看看柱子里的填料是不是均匀，有没有什么地方看起来不太对劲。
这就像是做完一件手工品，得检查检查有没有瑕疵。
要是发现有问题，就得重新调整，总不能让一个有毛病的柱子就这么开始工作吧，那肯定会出乱子的。
干这个层析柱干法装柱啊，就得像照顾自己的小宝贝一样细心。
每个步骤都不能马虎，每个细节都很重要。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱是一种用于分离、纯化化合物的重要工具，它具有操作简单、分离效果好、适用范围广等优点，因此在化学、生物等领域得到了广泛的应用。
在进行层析柱操作时，正确的装柱流程是非常重要的，它直接影响到实验结果的准确性和重现性。
下面将介绍层析柱的装柱流程。
首先，准备好所需的层析柱和填料。
层析柱通常由玻璃或塑料制成，填料的选择根据需要分离的化合物而定，可以是硅胶、纸浆、聚合物凝胶等。
填料的粒径和填充量也需要根据具体实验要求进行调整。
接着，将层析柱放置在支架上，并用适当的溶剂进行预洗。
预洗的目的是去除填料中的杂质和空隙中的气体，为样品的装柱做好准备。
预洗的溶剂通常是与样品相似的极性溶剂，如甲醇、乙醇等。
然后，将填料均匀地装入层析柱中。
填料的均匀性对于分离效果至关重要，因此在装填填料时需要轻轻振动层析柱，使填料能够均匀分布，并避免出现空隙或局部堆积的情况。
接下来，将样品溶液缓慢地加入层析柱中。
在加样的过程中，需要注意控制流速，避免填料被冲洗出来或样品在填料中发生混合。
通常情况下，可以使用移液枪或注射器来进行加样，以确保流速的均匀和稳定。
装柱完成后，可以开始进行层析操作。
根据需要，可以选择使用不同的洗脱溶剂来进行洗脱，以实现对样品的分离和纯化。
在洗脱的过程中，需要注意收集不同洗脱峰的组分，并记录下各个组分的出现时间和洗脱溶剂的类型，以便后续的分析和鉴定。
最后，对层析柱进行清洗和保存。
清洗时，可以用适当的溶剂将填料中残留的样品和杂质洗净，然后用干燥剂将层析柱中的水分去除干净。
清洗完成后，将层析柱放置在干燥通风的地方保存，避免受潮和受到污染。
总之，层析柱的装柱流程是一个关键的操作步骤，它直接影响到后续层析操作的效果和实验结果的准确性。
正确的装柱流程应该包括层析柱的预洗、填料的均匀装填、样品的缓慢加样、洗脱组分的收集和记录、以及层析柱的清洗和保存等步骤。
只有严格按照流程进行操作，才能保证层析柱操作的顺利进行和实验结果的准确可靠。
层析柱装柱流程范文
层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱【原创实用版】目录1.BPG 层析柱简介2.装柱的目的和方法3.BPG 层析柱的装柱流程4.注意事项和常见问题正文BPG 层析柱是一种用于生物分离和纯化的实验设备，广泛应用于生物制药、生物化工、食品安全等领域。
在实验室中，装柱是使用 BPG 层析柱的关键步骤之一，其目的是在柱内填充固定相，以便进行样品的分离和纯化。
装柱的目的是在 BPG 层析柱内填充固定相，固定相通常是由吸附剂、凝胶或者其他固态材料组成，它们能够吸附样品中的目标物质，从而实现样品的分离和纯化。
装柱的方法有多种，常见的有湿装法、干装法和半干装法等。
BPG 层析柱的装柱流程如下：1.准备固定相：根据实验需要选择合适的固定相，并进行预处理，如清洗、烘干等。
2.准备柱子：将 BPG 层析柱清洗干净，并检查是否有破损。
3.装柱：将固定相添加到柱子中，一般采用湿装法，即在固定相中加入适量的溶剂，使其形成悬浮液，然后倒入柱子中。
在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
4.冲洗：装柱完成后，用溶剂冲洗柱子，以去除残留的气泡和固定相颗粒。
5.检测：装柱完毕后，可以通过检测柱子的压力和流量等参数，以确保装柱的质量。
在装柱过程中，需要注意以下事项：1.选择合适的固定相：根据样品的特性和实验需求，选择合适的固定相，以实现最佳的分离效果。
2.避免气泡的产生：在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
3.柱子的清洗：装柱前，应将柱子清洗干净，以去除杂质和油污等。
常见的装柱问题有：1.柱压过高：可能是由于装柱过程中产生的气泡或固定相填充不均匀导致的，需要重新冲洗柱子或重新装柱。
2.分离效果不佳：可能是由于固定相选择不当或装柱质量差导致的，需要重新选择固定相或重新装柱。
层析柱使用方法
层析柱使用方法
哇塞，层析柱可是个很重要的实验工具呢！它在很多领域都有着广泛的应用。
那咱就来好好说说层析柱的使用方法哈。
首先得准备好层析柱，检查是否完好无损。
然后就是装柱啦，这可是关键步骤哦！要将填料慢慢倒入柱中，同时用适当的溶剂冲洗，注意不能有气泡产生呀，这就好比盖房子得根基牢固一样重要呢！接着就是上样啦，把样品小心地加到柱子上，可别弄撒了哦。
再进行洗脱，控制好洗脱液的流速，就像把握好节奏一样重要呢。
在整个过程中，要注意保持操作环境的清洁，不然杂质混入可就麻烦啦！还有呀，使用的溶剂要合适，不然也达不到好的效果呀。
在使用层析柱的过程中，安全性和稳定性那也是相当重要的呀！就像走钢丝一样，稍有不慎可能就前功尽弃啦。
要确保实验装置的稳固，避免倒塌啥的危险情况发生。
同时呢，操作过程要规范，可不能马虎大意，这是对自己和实验结果负责呀！只有这样，才能保证实验的顺利进行，得到可靠的结果呢。
层析柱的应用场景那可多了去了呀！在生物化学、制药、食品等领域都能看到它的身影呢。
它的优势也很明显呀，比如能高效分离混合物，让我们更清楚地看到各种成分呢。
这就好像是在一堆混乱中找出秩序一样神奇呀！而且它还可以重复使用，多经济实惠呀！
给你们讲个实际案例哈。
有一次在一个生物实验中，我们就是用层析柱来分离蛋白质的。
哇，效果那叫一个好呀！很清晰地就把不同的蛋白质分离开了，为后续的研究提供了重要的数据支持呢。
这就充分说明了层析柱在实际应用中的强大呀！
总之呢，层析柱真的是个超棒的实验工具呀，只要我们正确使用它，就能发挥出它巨大的作用呀！。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱BPG层析柱是一种常见的分离技术装置，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
本文将介绍BPG层析柱的装柱过程及其相关特点。
一、BPG层析柱的装柱BPG层析柱的装柱过程主要包括填充填料、封口和测试等步骤。
1. 填充填料填充填料是装柱的第一步。
首先，将BPG层析柱的尾部封口，确保填料不会从尾部漏出。
然后，将填料填充到柱体中，填料的选择根据具体的实验目的而定。
常见的填料有凝胶、树脂、硅胶等。
填充填料时需要注意均匀填充，避免形成空隙或过度填充。
2. 封口填充填料后，需要对层析柱进行封口。
封口的目的是固定填料，防止填料在柱体中移动或漏出。
封口材料可以选择合适的密封胶或橡胶垫片，确保封口牢固。
3. 测试装柱完成后，需要对BPG层析柱进行测试。
测试的主要目的是检查装柱过程中是否出现漏液或其他问题。
可以通过加入缓冲液或样品，在一定压力下通过柱体，观察是否有液体泄漏或柱体渗透等现象。
如果发现问题，需要及时进行修复或更换。
二、BPG层析柱的特点BPG层析柱具有以下几个特点：1. 高分离效果BPG层析柱的填料具有较大的比表面积和孔隙结构，能够提供更多的分离位点，有效提高分离效果。
同时，BPG层析柱还可以根据需要选择不同的填料，进一步提高分离效果。
2. 快速操作BPG层析柱的装柱过程相对简单，操作方便快捷。
填充填料和封口都可以在较短的时间内完成，适用于一些对操作时间要求较高的实验。
3. 良好的重复性BPG层析柱具有较好的重复性，可以反复使用。
在使用过程中，只需要更换填料和进行适当的维护保养，就可以保持较好的分离效果和分离效率。
4. 广泛应用BPG层析柱可以应用于各种领域的实验，如生物分离、蛋白质纯化、药物筛选等。
其灵活性和高效性使得BPG层析柱成为实验室中常用的分离技术装置。
总结：BPG层析柱是一种常用的分离技术装置，其装柱过程简单，操作方便快捷。
具有高分离效果、快速操作、良好的重复性和广泛应用等特点。
在实验室中，合理选择和使用BPG层析柱能够提高实验效率，促进科研工作的顺利进行。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱是一种广泛应用于分离、纯化和分析分子的技术。
输出层析柱装柱流程是输出样品时的关键步骤，以下将详细描述该流程的整体流程及每个环节的详细步骤。
整体流程：1. 准备样品：样品可以是固体、液体或气体，需要根据实际情况选择适当的提取方法和溶解方法。
2. 选择合适的层析剂：根据样品的物理化学性质和所需分离纯化的目标分子，选择合适的层析剂。
3. 选择合适的层析柱：根据样品的性质和目标分子的大小、形状、极性等特性，选择合适的层析柱。
4. 装柱：将合适的层析剂和样品混合并注入层析柱，按一定流速进行柱层析过程。
5. 收集分离物：根据样品的物理化学性质，选择适当的收集方法，如平衡、排洗等方式，收集所需的分离物。
详细步骤：1. 准备样品样品的准备是整个流程的第一步，其重要性不言而喻。
根据样品的不同来源和性质，选择适当的提取方法和溶解方法。
对于固体样品可以采用机械法或化学法进行研磨和提取；对于液体样品可以直接进行提取或进行凝固分离等；对于气体样品可以进行气相色谱前处理等。
2. 选择合适的层析剂层析剂是层析柱分离分子的重要物质，其种类和性质直接影响到层析柱的分离效果和速度。
通常选择的层析剂包括氨基酸、糖类、角蛋白等，这些分子性质不同，可以针对不同的目标分子进行选择，以达到高效分离的目的。
3. 选择合适的层析柱层析柱具有不同的分子尺寸和极性，可以针对不同样品和分子的特性进行选择。
一般分为吸附层析柱、离子交换层析柱、凝胶层析柱、分子筛层析柱、亲和层析柱等。
在选择层析柱之前，还需确定流动相的组成和流速，以及层析柱的尺寸和填充物的质量，一般需要根据样品特性进行综合考虑，以提高分离效果和速度。
4. 装柱层析柱装柱是输出样品时的关键步骤。
将提取得到的样品与适当的流动相混合，并加入适当量的层析剂。
然后通过注射泵或手动喷射的方式，将混合物缓慢注入层析柱中，确保柱中填充物充分分散。
柱中填充物经过一段时间的淋洗和平衡后，将流动相依次加入，形成流动相梯度，实现目标分子的分离。
层析柱装柱操作规范
层析柱装柱操作规范(总2页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除层析柱装柱流程装柱材料层析柱：BXK层析柱装柱仪器：ÄKTA装柱器装柱溶液20%乙醇匀浆的准备精确计算所需介质的量（这对固定柱高的层析柱尤其重要）。
1L填充柱所需的介质量大约是1.15L自然沉淀匀浆的量，于干净烧杯中，取 100%沉降胶（静止放置一天以上，倾去20%乙醇后的胶为100%沉降胶）与等体积20%乙醇混合备用。
安装层析柱1.检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后将层析柱垂直固定在铁架台上。
2.将装柱器安装在层析柱上端。
3.往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。
装柱1.用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡的产生。
迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到ÄKTA上。
2.打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。
停止装柱。
3.打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用20%乙醇封满柱子剩余部分。
4.将上端转接头一端连上ÄKTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。
(装柱流速约为70-100%的最大流速）5.拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，在界面处做上记号。
6.关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。
7. 检测柱效3。
层析柱使用标准操作方法
层析柱使用标准操作方法层析柱是一种分离和分析化合物的常用仪器，其操作方法一般包括以下几个步骤：1. 样品预处理：首先，将待测样品进行预处理，如样品溶解、稀释或提取等。
确保样品的浓度适合进行层析分离。
2. 选择合适的层析柱：根据待测物的性质和分离需求，选择合适的层析柱。
不同的层析柱具有不同的吸附材料和分离机制，因此，选择合适的层析柱对于成功的层析分离非常重要。
3. 装填样品：将预处理好的样品注入层析柱，一般通过注射器或其他装置进行。
注意，样品注入量应根据待测物浓度、柱子尺寸和分离需求合理确定。
4. 进行层析分离：根据选择的层析柱类型和设备的操作要求，进行层析分离。
可以通过重力层析、气相层析、高效层析等方式进行。
需要注意的是，层析分离的过程中需保证流速适中，以避免样品在柱子中滞留太久或过快通过，影响分离效果。
5. 收集分离物：将分离得到的组分收集起来，一般通过分数收集器或其他收集装置进行。
根据实验需求，可以选择不同的收集方式，如按时间间隔收集、按流量收集等。
6. 进行分析：收集到的分离物可以进行后续的分析和测定，如质谱分析、紫外可见光谱等。
根据需求，可以选择适宜的分析方法进行进一步的表征和确定。
7. 清洗层析柱：在层析分离结束后，需要仔细清洗层析柱以去除残留的样品和其他污染物。
不同的层析柱有不同的清洗方法，一般可以使用适当的洗涤剂和溶剂进行清洗。
需要注意的是，层析柱的操作方法可能因不同的仪器和实验要求而有所差异，因此，在使用层析柱前，应详细阅读仪器说明书，并按照说明书中的操作要求进行操作。
此外，操作过程中应注意安全，佩戴个人防护装备，避免化学品直接接触皮肤和眼睛。
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操 作 标 准
目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员
标准操作程序：
1 基本术语概念
填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，
GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA 》；
线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；
体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min 表示；
换算：
2 准备工作
2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等
以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数
以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，
中试工艺参数：
柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.
即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；
样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；
在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：
装柱体积V
柱= S
柱
h=3.14×1.52×1L=7L；
装柱需要slurry体积V
slurry =V
柱
×PF/C
slurry
以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，V
slurry
=7×1.15/0.75L=10.73L；
装入柱中的slurry高度L
slurry =V
slurry
/S
柱
=10.73/(3.14×
1.52)dm=1.52dm=15.2cm.
3管路安装
3.1 层析柱管道和配件安装
3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；
3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将
柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；
3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM 。
图1、BPG300层析柱安装示意图
3.2层析柱下端筛网排气泡
3.2.1连接两根足够长的细管到ÄKTA process 进样泵的A1和B1进口，两管另一端均放入纯水中；
3.2.2从A1泵入纯水：打开UNICORN 软件，在system control 窗口点击
manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，insert；Column，选择upflow，insert；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运行程序充水至BPG柱中2-3cm左右，pause，清除下端筛网中的空气，用注射器吸出筛网中残留的气泡。
4装填料
4.1准备填料
所用填料为DEAE Sepharose Fast Flow ，装置的是保存于20%乙醇中的新slurry；
4.2卸下柱头，用搅拌棍引流加入混匀的slurry至1
5.2cm处，再加入纯水至40cm左右，充分搅拌混匀，同时避免挤压筛网和柱壁，静置使填料界面至少低于38cm；
4.3在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，insert；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运行程序将柱头上端筛网充满水以除去气泡，再装上柱头，用密封调节器固定柱头，拧紧螺丝；
4.4在system control窗口点击manual→Pump→Flow，设定流速为42L/h （60cm/h），进行填料的沉降，待填料高度降至14cm左右，将密封调节器旋至全松，将柱头快速调至距离填料3-4cm处，将密封调节器旋至半松，将柱头快速调至滤网距离填料1-2cm，旋紧密封调节器，再设定高流速（如150L/h），继续压缩填料，最后再调节柱头至10cm。
整个过程一直有流速，泵速不能停。
5 柱效测定
图2、柱效测定示意图
5.1 平衡
将A1接口细管放入0.4M NaCl溶液中，将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，insert；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，再设定高流速（如150L/h），点击execute运行，排气泡，再将阀调至管路与柱头相连状态，平衡3-5个柱体积至电导曲线稳定，点击END；
5.2上样
5.2.1将B1接口细管放入2M NaCl溶液，柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择Closed，insert；InletB，选择InletB1，insert；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，设定高流速（150L/h）点击execute运行，排气泡，pause；
5.2.2 在system control窗口点击manual→Other→End_Timer，选择Acc. Volumn, Timeout 设上样量为70mL（1%柱体积）；Pump→Flow，设定上样流速
60L/h，点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，完成上样；
5.3 洗脱
5.3.1 将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，insert；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，设定高流速（150L/h）点击execute运行，排气泡，同时将管路充满0.4M NaCl溶液，调流速至21L/h（30cm/h）；
5.3.2 待流速稳定后，在system control窗口点击manual→valves→Injection Mark，insert，点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，开始洗脱，在一个柱体积左右，电导检测下将产生目的峰。
5.4 测柱效
在Evaluation窗口中，选择实验保存的结果，在结果图中点击鼠标右键，选择Properties，点击Clear，并选中Cond_102，点击OK。
回到Evaluation 窗口，选择积分按钮，在弹出窗口中，选择Cond_102，peak window中调整积分的范围，并在Reject Peaks中，填Peak must be one of 1 largest；确定后，在积分结果窗口，点击右键，选择Properties，在peak table选项中，勾选Plate Height（HETP）和Asymmetry。
确定后即可计算得到计算理论塔板高度HETP和对称因子As。
1 When calculating the amount of media to be packed use the Compression Factor 1.1 instead of the Packing Factor above which is
used during packing.。