层析柱装柱流程
硅胶层析柱的填装方法
硅胶层析柱的填装方法硅胶层析柱所用的硅胶是试剂级，100-200目，在实验前将10g左右的硅胶放在托盘中，130℃真空干燥箱内活化16h，活化后放在干燥器中冷却，待用。
将无水硫酸钠盛装在托盘中，在450℃马弗炉中活化2h，后取出放在干燥器中冷却，待用。
一、装柱过程：1、取40ml烧杯4个，100ml量筒2个（分别倒取二氯甲烷100ml，正己烷90ml），40cm玻璃棒1个，250ml烧杯1个（盛装废液用），铁架台1个，层析柱1个（长350mm，内径20mm），不锈钢铁勺1个，20ml注射器（带针头）2个（以上仪器均干净）。
2、拌硅胶。
将活化过的硅胶倒入40ml烧杯中，用另一个20ml烧杯盛取二氯甲烷并缓慢倒入硅胶中，同时用玻璃棒不断搅拌，赶走硅胶中的气泡。
3、倒硅胶。
用少量二氯甲烷淋洗层析柱，玻璃棒引流；之后将上述拌好的硅胶沿着玻璃棒倒入层析柱，倒完后缓慢抽出玻璃棒。
4、敲柱子。
用橡皮管敲击柱子，赶走层析柱硅胶中的气泡，然后打开活塞，流出洗脱液，让硅胶自然沉降；在此期间，用不锈钢小勺舀取一勺无水硫酸钠，倒入层析柱中；等到柱子快干是关闭活塞（二氯甲烷的液面在无水硫酸钠的表面以上）。
5、走柱子。
柱子装好后用20ml二氯甲烷冲洗层析柱2次，注意用玻璃棒引流，缓慢倒下二氯甲烷，并打开活塞，使洗脱液缓慢流下，确保液面保持在硫酸钠表面以上，不能流干；再用40ml正己烷冲洗层析柱，待液面在硫酸钠以上些许时关闭活塞。
6、层析柱至此装好，待用。
二、样品走柱子过程：1、将样品液转移到装好的层析柱中后，用1-2ml正己烷清洗鸡心瓶，并转移到层析柱内，流出液弃去。
2、用25ml正己烷洗脱层析柱，弃去流出液，关闭活塞。
3、将盛装废液的烧杯移去，将K-D浓缩瓶接在层析柱下，再用30ml二氯甲烷/正己烷淋洗液（体积比2:3）洗脱层析柱，以2-5ml/min流速接收流出液于K-D 浓缩瓶中。
仪器名称规格数量烧杯40ml 4个250ml 1个量筒100ml 2个玻璃棒40cm 1个铁架台1个层析柱350mm×20mm 1个不锈钢小勺1个注射器20ml 2个。
BPG 层析柱标准装柱流程规范
操作标准目得:为了使BＰG3００层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好得柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA prｏcｅsｓ系统进行有效得蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员标准操作程序:1基本术语概念填料因子(PackｉｎｇFａｃtor, PＦ):指在在装柱过程中,用低流速(如６0ｃm/h)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度(柱高)得比值,GＥHC生产得各种常见填料得PF参见《GEＨC ＡxiＣhroｍ300－10０0columns UseｒＭanuａl 28-95６２—89 Ｅｄiｔiｏn AＡ》;线性流速(liｎeａr flow ratｅ):单位时间内液体流经得直线距离,常用cm／h表示;体积流速(volume floｗratｅ):单位时间内液体流经得空间容积,常用ml/mｉｎ表示;换算:２准备工作2.１检查层析柱得完整性,所带配件,就是否水平(用水平仪矫正),就是否清洁(如有污染应进行清洗)、2、２确定所用填料及其特性、浓度等以DＥAE ＳｅpｈaroｓｅFast Flｏw填料为例,其填料因子(PF)为1.１５,新填料(slｕｒｒy)浓度为75％(保存于2０%乙醇中),耐压3bａｒ。
2。
3 确定放大后得工艺参数以ＸX生化制药股份有限公司得放大工艺为例,中试工艺参数:柱高h＝10ｃm;体积流速v1=3mｌ/min;柱内径d=１、６cm、即,线性流速v ２=v1/s 柱=3/(3、14×0。
82) cm/mi ｎ=1.５ cm ／min;样品与填料接触时间t ＝h ／v2=１０/1、5min ＝6。
67mi ｎ;在工艺得线性放大中h 、ｖ2与t 均不变,则可保证样品出峰得位置(洗脱时间)与形状不变、使用ＢP Ｇ３００层析柱进行放大得工艺参数:装柱体积V 柱= S 柱h=3。
1４×1、52×１L=7Ｌ;装柱需要sl ｕr ｒｙ体积V ｓｌurry =Ｖ柱×PF/C sl ｕr ｒy以ＤE ＡE Sepharo ｓe Fast F ｌow 为填料,则,V slur ｒｙ＝7×1。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱（Column Chromatography）是一种常见的色谱技术，用于分离和纯化化合物混合物。
它利用样品成分在固定相和流动相之间的差异迁移速率来实现分离。
在这篇文章中，我们将介绍层析柱装柱的基本步骤和相关参考内容，帮助读者了解层析柱技术的应用与操作。
1. 准备工作在进行层析柱装柱前，我们需要准备以下材料和设备：- 色谱柱：选择合适的柱径和柱高，以容纳样品和分离剂。
不同的应用需要不同类型的色谱柱，如硅胶柱、石墨化炭柱、反相柱等。
- 流动相：确定合适的流动相溶剂体系，用于样品的迁移和分离。
通常选择非极性溶剂（如石油醚、丙酮、甲醇等）或极性溶剂（如乙酸乙酯、二甲醚等）。
- 固定相：将合适的固定相装填到色谱柱中，用于分离和吸附样品成分。
选择合适的固定相类型，如硅胶、氧化铝、石墨化炭等。
- 样品：准备需要分离和纯化的混合物样品。
- 旋转蒸发仪：用于去除样品中的溶剂。
2. 装填色谱柱- 将色谱柱固定在柱座上，并根据柱径和柱高的大小调整砂轮，使得柱床均匀。
- 用适当的溶剂湿润色谱柱，避免流动相在柱床中出现间隙和假相。
3. 样品预处理- 将样品溶解在适当的溶剂中，以便在层析柱中迁移。
- 如果样品中有大量杂质，可以使用旋转蒸发仪去除溶剂。
4. 层析柱操作- 使用毛细管或注射器将样品注入色谱柱顶部。
确保样品不超过柱床高度。
- 将流动相逐步加入色谱柱，使其通过柱床。
可以根据实验需要调整流速和溶剂比例。
- 样品成分会根据其在固定相和流动相之间的亲疏水性质而分离。
在柱床中具有更大亲和力的成分会被滞留，而亲和力较小的成分会更快地通过柱床。
- 根据成分的迁移速度和柱床的色谱裂分能力，监测和采集分离后的组分。
常见的监测方法包括紫外可见光谱、红外光谱、荧光检测等。
5. 分离和纯化产物- 根据监测结果，确定目标化合物的峰位置和纯度。
- 通过收集色谱峰和进一步的实验操作，如再层析、结晶、后处理等，将目标化合物从样品中分离和纯化。
纯化工艺层析柱(XK)装填标准操作规程
II编制I 批准1.目的1.1.规范层析柱装填的标准操作流程。
2.范围2. 1. 适用于XXXXXXXX有限公司的XK16、XK26、XK50层析柱。
3.职责3.1.分管主任、操作人员对本规程实施负责，QA质控员负责监督检查。
4.设备与耗材5.5. 1. 实验准备：5. 1. 1.估算装柱的柱体积，然后乘以压缩因子1. 1计算需要取的沉降后的填料体积，取出填料装入烧杯中，将填料中的乙醇溶液用纯化水||编制I 批准/注射用水等体积置换三次。
5.1.2.将XK16/XK26/XK50层析柱的各部件淸洗干净，组装好后连接到层析系统，将柱前报警压力设置为0.45MPa，使用0. 4MPa的恒压模式进行保压测试，30min内压降小于0.05MPa、未出现明显漏液方可投入使用。
5.1.3.配制好对应体积的氯化钠、乙醇溶液。
5. 2. 实验步骤：5. 2. 1.保压测试结束后，确认层析柱下柱头膜内无气泡，若有气泡则取岀柱头，取下柱头膜，使用upFlou-lml/min的方式慢慢将液体填满柱头，然后将柱头膜安上，并再次确认该柱头有无气泡。
5. 2. 2.将装柱器安装到层析柱上，调好层析柱水平，确保层析柱竖直。
5. 2. 3.计算层析柱和装柱器的总体积，按该体积向填料中加入纯化水/ 注射用水（可以稍少一点，用润洗装填料烧杯的纯化水/注射用水补上），使填料混旋液的体积等于层析柱和装柱器的总体积。
5. 2. 4.将填料混旋液充分混合均匀，并小心倒入到层析柱中，润洗烧杯一并倒入层析柱中（注意液体不能溢出）。
5. 2. 5.轻轻将装柱器的盖子旋上，为保证装柱器内的气泡残留尽可能少, 在旋紧盖子前可以DownFlou-lml/min的方式，使液体充分填满装柱器，然后暂停系统，旋紧盖子。
5. 2.6.以DownFlow的方式进行恒流操作，各填料恒流的线性速度见下表。
当填料高度在lOniin内不发生变化时，说明恒流结束，准备恒压操作。
层析柱设备的操作流程
层析柱设备的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 制备层析柱。
根据样品量和层析介质的性质选择合适的层析柱尺寸。
(完整版)柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm 的柱子）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
柱层析的操作步骤和注意事项
精心整理柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
头了。
有0.5相差0.1是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
至于是加压、常压、减压，随需而定。
因为是schlenk操作，所以点板是个问题，假如样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。
假如样品无色，只好预备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。
像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。
无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。
因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很轻易是样品分解，非凡是金属有机化合物和含磷化合物。
而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。
听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。
哪位做过可以提出来大家参详参详。
--※关于湿法、干法上样。
湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。
很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，假如不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
装柱知识
通常将树脂装于圆筒形的树脂柱中，溶液连续地通过。
树脂柱内装载树脂的体积称为床容积(bed volume)，简写为BV。
工业用的树脂柱的床容积通常由1～10m3，也有较小或较大的。
这是树脂柱的基本单位，它工作时的各种物料量都以BV为单位。
例如溶液通过树脂柱的流量速度为2～4BV/h，即每小时通过溶液的体积为树脂床容积的2～4倍。
树脂的处理能力亦常以BV为单位计算。
流量bv ：单位时间某断面（横截面）的水（液体）流量。
流速bv/h：单位时间水（液体）中一个质点移动的距离。
装柱子过程：(1)将层析柱垂直固定在铁架台上，关闭活塞，在柱中加入约3cm高的蒸馏水。
(2)用烧杯将大孔树脂水浆液一次性均匀倒入层析柱中，倒入树脂的同时用玻棒搅拌大孔树脂浆液，并不断加入蒸馏水。
(3)把过量的水从柱底部放出，保持水面高于树脂层面3cm以上，直到树脂转移完毕。
(4)待所有树脂转移完毕后，继续往柱中加蒸馏水，持续30min3.2树脂预处理方法（1）乙醇浸泡：称取适量大孔吸附树脂，加入95%以上的乙醇浸泡24小时，乙醇液面应高于树脂上表面3-5厘米。
然后装入35×50mm 层析柱中。
（2）醇洗：用2BV（BV：指树脂床体积）乙醇以2BV/h的流速冲洗大孔树脂，洗至流出液加三倍量水不呈白色浑浊为止。
并以水以同样流速冲洗树脂，至流出液无醇味。
（3）酸洗：用2BV2%盐酸浸泡2～4小时，并以4～6BV/h流速淋洗树脂，然后用水以同样流速洗至流出液pH中性。
（4）碱洗：用2BV树脂床体积的2%NaOH水溶液淋洗树脂，流速与酸洗相同。
然后用水以同样流速洗至流出液pH中性。
（5）树脂连续使用不必再进行预处理，停用时间过长，应考虑重新预处理。
停用前要充分解吸，洗净，并以大于10%食盐溶液浸泡，以避免细菌在树脂中繁殖。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱是一种用于分离、纯化化合物的重要工具，它具有操作简单、分离效果好、适用范围广等优点，因此在化学、生物等领域得到了广泛的应用。
在进行层析柱操作时，正确的装柱流程是非常重要的，它直接影响到实验结果的准确性和重现性。
下面将介绍层析柱的装柱流程。
首先，准备好所需的层析柱和填料。
层析柱通常由玻璃或塑料制成，填料的选择根据需要分离的化合物而定，可以是硅胶、纸浆、聚合物凝胶等。
填料的粒径和填充量也需要根据具体实验要求进行调整。
接着，将层析柱放置在支架上，并用适当的溶剂进行预洗。
预洗的目的是去除填料中的杂质和空隙中的气体，为样品的装柱做好准备。
预洗的溶剂通常是与样品相似的极性溶剂，如甲醇、乙醇等。
然后，将填料均匀地装入层析柱中。
填料的均匀性对于分离效果至关重要，因此在装填填料时需要轻轻振动层析柱，使填料能够均匀分布，并避免出现空隙或局部堆积的情况。
接下来，将样品溶液缓慢地加入层析柱中。
在加样的过程中，需要注意控制流速，避免填料被冲洗出来或样品在填料中发生混合。
通常情况下，可以使用移液枪或注射器来进行加样，以确保流速的均匀和稳定。
装柱完成后，可以开始进行层析操作。
根据需要，可以选择使用不同的洗脱溶剂来进行洗脱，以实现对样品的分离和纯化。
在洗脱的过程中，需要注意收集不同洗脱峰的组分，并记录下各个组分的出现时间和洗脱溶剂的类型，以便后续的分析和鉴定。
最后，对层析柱进行清洗和保存。
清洗时，可以用适当的溶剂将填料中残留的样品和杂质洗净，然后用干燥剂将层析柱中的水分去除干净。
清洗完成后，将层析柱放置在干燥通风的地方保存，避免受潮和受到污染。
总之，层析柱的装柱流程是一个关键的操作步骤，它直接影响到后续层析操作的效果和实验结果的准确性。
正确的装柱流程应该包括层析柱的预洗、填料的均匀装填、样品的缓慢加样、洗脱组分的收集和记录、以及层析柱的清洗和保存等步骤。
只有严格按照流程进行操作，才能保证层析柱操作的顺利进行和实验结果的准确可靠。
层析柱装柱流程范文
层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。
Chromaflow 标准装柱流程
标准操作规程目的：为了使Chromaflow层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process或Uvis-920手动系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1、方法描述1.1在位装填技术（packing-in-place）是专门针对Chromaflow层析柱的新型装柱方法，它利用特殊的喷嘴（nozzle）将填料装进柱体，因此在每次装柱和拆柱的过程中就不需要移动柱体和柱头。
本标准的操作流程可以适用于不同填料装于不同规格的Chromaflow层析柱中。
1.2本操作流程以填料Q-Sepharose BB为例，将其快速有效地装入Chromaflow 400层析中，柱高为30cm。
2、材料和设备Chromaflow 400层析柱（内径40cm，带有50µm不锈钢筛网）；装柱站（packing station）；不锈钢储罐2个（分别装纯水和胶悬液slurry）；10mm ÄKTAprocess系统或手动系统（Skid）；4路2通阀（10mm）；压力表（0-60psi）；TC接头卡箍和垫片若干；连接管道若干；压缩空气；50-70%浓度的Q-Sepharose Big Beads slurry（纯水中）；纯水和20%乙醇；1%丙酮水溶液（V/V），0.4 M NaOH和2 M NaOH水溶液.3、准备工作3.1 柱体调水平3.1.1配件连接将三通连接到MPT上，并在其他2个出口依次连接压力表和4路2通阀，在底部MPB上连接4路2通阀，将阀门的其他出口依次连接管道备用。
利用合适的管道和配件将柱子的nozzles和packing station（图2）以及水、slurry的储藏罐相连。
将packing station和压缩空气相连。
用20%乙醇侵润柱头和密封圈，以便调节柱头高度。
3.1.2 柱头高度调节关闭MPT和MPB，并将顶部和底部nozzle分别调至UNPACK和PACK位置（图1）。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱【原创实用版】目录1.BPG 层析柱简介2.装柱的目的和方法3.BPG 层析柱的装柱流程4.注意事项和常见问题正文BPG 层析柱是一种用于生物分离和纯化的实验设备，广泛应用于生物制药、生物化工、食品安全等领域。
在实验室中，装柱是使用 BPG 层析柱的关键步骤之一，其目的是在柱内填充固定相，以便进行样品的分离和纯化。
装柱的目的是在 BPG 层析柱内填充固定相，固定相通常是由吸附剂、凝胶或者其他固态材料组成，它们能够吸附样品中的目标物质，从而实现样品的分离和纯化。
装柱的方法有多种，常见的有湿装法、干装法和半干装法等。
BPG 层析柱的装柱流程如下：1.准备固定相：根据实验需要选择合适的固定相，并进行预处理，如清洗、烘干等。
2.准备柱子：将 BPG 层析柱清洗干净，并检查是否有破损。
3.装柱：将固定相添加到柱子中，一般采用湿装法，即在固定相中加入适量的溶剂，使其形成悬浮液，然后倒入柱子中。
在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
4.冲洗：装柱完成后，用溶剂冲洗柱子，以去除残留的气泡和固定相颗粒。
5.检测：装柱完毕后，可以通过检测柱子的压力和流量等参数，以确保装柱的质量。
在装柱过程中，需要注意以下事项：1.选择合适的固定相：根据样品的特性和实验需求，选择合适的固定相，以实现最佳的分离效果。
2.避免气泡的产生：在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
3.柱子的清洗：装柱前，应将柱子清洗干净，以去除杂质和油污等。
常见的装柱问题有：1.柱压过高：可能是由于装柱过程中产生的气泡或固定相填充不均匀导致的，需要重新冲洗柱子或重新装柱。
2.分离效果不佳：可能是由于固定相选择不当或装柱质量差导致的，需要重新选择固定相或重新装柱。
层析柱操作规程
层析柱操作规程
《层析柱操作规程》
一、前言
层析柱操作是化学分离和纯化技术中常用的一种手段，它能够对混合物中的成分进行有效的分离。
为了确保操作过程的顺利进行和分离效果的最大化，需要制定一套严格的操作规程。
二、设备准备
1. 确认层析柱和相关设备是否完好，无污染；
2. 准备好使用的溶剂，保证纯度和新鲜度；
3. 根据实验需求，准备好实验所需的各种样品和标准物质；
4. 准备好密封垫和管接头等辅助器材。
三、操作步骤
1. 将层析柱连接至固定相泵；
2. 实验前先进行层析柱的扫表，观察并记录基础数据；
3. 使用实验样品进行预洗柱操作，确保固定相表面无污染；
4. 将样品溶解于溶剂中，装入进样瓶，连接至固定相泵；
5. 开始进行层析分离操作，收集分离出的目标成分，并记录各分离组分的流出时间；
6. 根据实验需求，对分离得到的目标物质进行进一步的纯化操作；
7. 实验结束后，对层析柱进行清洗消毒，保持设备的卫生和使用寿命。
四、实验注意事项
1. 操作过程中要随时检查设备状态，及时处理出现的故障和异常；
2. 严格遵守操作规程，不得随意更改操作步骤；
3. 对固定相、流动相、样品等各项实验条件进行严格控制，确保实验的准确性和可重复性；
4. 清洗消毒后的层析柱应储存于干燥通风的地方，避免细菌污染。
五、结语
层析柱操作规程的制定和执行对于保证实验的顺利进行和分离效果的最大化具有重要意义。
实验人员在操作过程中需严格遵守规程，不得有过失。
同时，定期检查和维护层析柱设备，确保设备处于良好状态，也是保证实验顺利进行的重要环节。
Chromaflow装柱流程
标准操作规程目的：为了使Chromaflow层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process或Uvis-920手动系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1、方法描述1.1在位装填技术（packing-in-place）是专门针对Chromaflow层析柱的新型装柱方法，它利用特殊的喷嘴（nozzle）将填料装进柱体，因此在每次装柱和拆柱的过程中就不需要移动柱体和柱头。
本标准的操作流程可以适用于不同填料装于不同规格的Chromaflow层析柱中。
1.2本操作流程以填料Q-Sepharose BB为例，将其快速有效地装入Chromaflow 400层析中，柱高为30cm。
2、材料和设备Chromaflow 400层析柱（内径40cm，带有50µm不锈钢筛网）；装柱站（packing station）；不锈钢储罐2个（分别装纯水和胶悬液slurry）；10mm ÄKTAprocess系统或手动系统（Skid）；4路2通阀（10mm）；压力表（0-60psi）；TC接头卡箍和垫片若干；连接管道若干；压缩空气；50-70%浓度的Q-Sepharose Big Beads slurry（纯水中）；纯水和20%乙醇；1%丙酮水溶液（V/V），0.4 M NaOH和2 M NaOH水溶液.3、准备工作3.1 柱体调水平3.1.1配件连接将三通连接到MPT上，并在其他2个出口依次连接压力表和4路2通阀，在底部MPB上连接4路2通阀，将阀门的其他出口依次连接管道备用。
利用合适的管道和配件将柱子的nozzles和packing station（图2）以及水、slurry的储藏罐相连。
将packing station和压缩空气相连。
用20%乙醇侵润柱头和密封圈，以便调节柱头高度。
3.1.2 柱头高度调节关闭MPT和MPB，并将顶部和底部nozzle分别调至UNPACK和PACK位置（图1）。
柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说得过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用得就是以硅胶或氧化铝作固定相得吸附柱。
由于柱分得经验成分太多,所以下面我就几年来过柱得体会写些心得,希望能有所帮助。
柱子可以分为:加压,常压,减压、ﻫ压力可以增加淋洗剂得流动速度,减少产品收集得时间,但就是会减低柱子得塔板数。
所以其她条件相同得时候,常压柱就是效率最高得,但就是时间也最长,比如天然化合物得分ﻫ离,一个柱子几个月也就是有得。
减压柱能够减少硅胶得使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但就是由于大量得空气通过ﻫ硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解得东西可能得ﻫ不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大得噪音,而且时间长)、以前曾经大量得过减压柱,对它有比较深厚得感情,但就是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压得念头了、加压柱就是一种比较好得方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走得快些。
压力ﻫ得提供可以就是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气得就行)、非凡就是在轻易分解ﻫ得样品得分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走得太快就会减低分离效果、个人觉得ﻫ加压柱在普通得有机化合物得分离中就是比较适用得、关于柱子得尺寸,应该就是粗长得最好。
柱子长了,相应得塔板数就高、柱子粗了,上样后样品得原点就小(反映在柱子上就就是样品层比较薄),这样相对得减小了分离得难度。
试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离得难度可想而知,恐怕要用很低极性得溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较轻易得到完全分离了、当然采用粗大得柱子要牺牲比较多得硅胶与溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保得说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)、现在见到得柱子径高比一般在1:5～１０,书中写硅胶量就是样品量得30~40倍,具体得选择要具体分析。
假如所需组分与杂质分得比较开(就是指在所需组分rｆ在0。
BPG 层析柱标准装柱流程规范
操 作 标 准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min 表示；换算：2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为 1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程介绍层析柱是一种常用于分离和纯化化合物的技术，其基本原理是利用化合物在不同介质中的亲和力差异而实现分离。
层析柱分为填充柱和装柱两种，本文将主要介绍装柱流程。
装柱前准备工作确定分离目标在装柱前，需要明确分离目标，以选择合适的载体和介质，如离子交换色谱柱、逆相色谱柱、凝胶过滤柱等。
准备层析柱和配件根据选择的层析柱类型，选购适当的层析柱、压力计、样品瓶、钝化剂等必要配件。
准备介质根据选择的柱类型和实验需求，选择合适的介质。
在使用新柱前，需要进行开柱处理，以去除杂质和预处理柱体。
装柱流程1. 柱体预处理将新柱体安装在装置中，流通适当的缓冲溶液经过柱体，洗涤不溶于溶液中的杂质和微生物。
2. 样品准备用适当的缓冲液将样品准备妥当，剔除其中的微粒和杂质。
3. 柱体装填将预处理后的柱体安装在柱体装填器上，逐层添加介质和样品，并用特殊方法将介质压实，尽可能减小柱体和样品的空隙。
4. 柱体检测装填完成后，用压力计检测柱体的漏气和密封情况，确保柱子健康并正常工作。
5. 样品装柱用希望分离的样品样品注入装好介质的分离柱，并应用压力调节器，并通过仪器程序使样品流过柱体。
在这个过程中，样品将在介质上进行分离。
6. 分离结果分析在对样品通过柱体后，将流出的溶液进行采集和处理，并用相应的分析方法对化合物进行测定。
后续处理1. 柱子的清理在完成实验后，需要将层析柱进行清洗以去除残留的样品和介质，防止柱体污染和结晶，降低柱子的使用寿命。
2. 柱子的储藏对于长期不使用的柱体，需要将柱子放置在特定的保护剂中，以保持干燥和清洁状态，防止介质变质或者柱子老化。
装柱流程是层析柱实验的重要步骤之一，其良好的实施关系到实验结果。
在实验前，需要仔细做好准备工作，掌握每一个环节的操作细节，并进行严格的柱子检测和后续处理工作。
柱层析法操作步骤
柱层析法操作步骤嘿，朋友们！今天咱就来聊聊柱层析法操作步骤这档子事儿。
柱层析法呀，就像是一场奇妙的冒险！首先呢，你得准备好你的“冒险装备”，也就是合适的层析柱。
这柱子就好比是你冒险途中的可靠伙伴，得选得称心如意才行。
然后呢，就是装填柱子啦！这可不是随便把东西往里一倒就完事儿的哦。
就像建房子，得一层一层稳稳当当的，不能有丝毫马虎。
把吸附剂均匀地填进去，要填得紧实又恰到好处，这可是个技术活呢。
接下来，就是上样啦！把你要分离的混合物小心翼翼地加进去，就好像给你的“冒险伙伴”送上一份特别的礼物。
这时候可不能毛手毛脚的，得轻点儿，再轻点儿。
上完样，就该开始洗脱啦！洗脱剂就像是给柱子注入了神奇的力量，让不同的物质在柱子里“跑”起来。
有的跑得快，有的跑得慢，就像比赛一样。
你就等着看它们在柱子里展现出各自的“本领”吧。
在这个过程中，你得时刻关注着，就像看着自己的宝贝一样。
观察流出液的颜色、状态，是不是有什么奇妙的变化在发生呢？有时候你会惊喜地发现，哇，想要的东西出来啦！整个过程中，可不能掉以轻心哦。
要像个细心的守护者，随时调整洗脱剂的流速，太快了不行，太慢了也不行，得找到那个恰到好处的节奏。
这不就跟我们过日子一样嘛，得用心去经营，每一个步骤都要认真对待。
要是稍微马虎一点儿，可能就得不到想要的结果啦。
柱层析法，虽然看起来有点复杂，但只要你掌握了这些步骤，再加上一点点耐心和细心，就一定能在这场“冒险”中取得胜利！你想想，当你成功地分离出你想要的物质时，那种成就感，是不是就像攻克了一座难以攀登的山峰一样呢？所以呀，别怕困难，大胆去尝试吧！相信自己，一定能行！总之，柱层析法就是这样一个充满挑战又有趣的过程，让我们一起在这个奇妙的世界里探索吧！。
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层析柱装柱流程标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]
层析柱装柱流程
装柱材料
层析柱：BXK层析柱装柱仪器：?KTA 装柱器
装柱溶液
20%乙醇
匀浆的准备
精确计算所需介质的量（这对固定柱高的层析柱尤其重要）。
1L填充柱所需的介质量大约是1.15L自然沉淀匀浆的量，于干净烧杯中，取 100%沉降胶（静止放置一天以上，倾去20%乙醇后的胶为100%沉降胶）与等体积20%乙醇混合备用。
安装层析柱
1.?检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后
将层析柱垂直固定在铁架台上。
2.?将装柱器安装在层析柱上端。
3.?往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气
泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。
装柱
1.?用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡
的产生。
迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到?KTA 上。
2.?打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。
停止装柱。
3.?打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用
20%乙醇封满柱子剩余部分。
4.?将上端转接头一端连上?KTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路
中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。
(装柱流速约为70-100%的最大流速）
5.?拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，
在界面处做上记号。
6.?关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开
的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。
7. 检测柱效。