枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程

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目的:建立枯草芽抱杆菌活菌数含量的测定标准操作规程

范围:本方法适用于的枯草芽抱杆菌活芽抱的测定

责任人:

内容:

1.仪器与工具:电子天平、生物显微镜、摇床、18 x 180mm 试管、500ml

角瓶、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管

2 •试剂与试液:牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、等。

3. 检测培养基配方:牛肉膏 3g、蛋白胨10g、琼脂16g、氯化钠5g、蒸馏水

1000ml,调至 PH7.2 , 121 °C 灭菌 30min。

4. 检测步骤:

4.1困液制备:采样量不少于500g,从所采的样品中精确称取 10.00g试样,

加入已火菌的带玻璃珠(玻璃珠在80个左右)的500ml锥形瓶中,加入 90ml已火

菌的无菌水,在摇床上200r/mi n 摇动60min,即成母液的菌悬液。

4.2用1ml无菌吸管吸取1ml上述母液的菌悬液,加入 9ml无菌水混匀成1 :

1 x 102稀释的菌悬液,这样依此稀释,直至得到 1 : 106; 1 : 107; 1 : 108; 1 :10

等浓度(每个稀释度必须更换无菌吸管)。

4.3向每个灭菌培养平皿中倒入约 12ml培养基,混合均匀,待凝固后备用。

4.4用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液0.2ml,加至已凝固好的培养

基中,用涂布棒涂匀,在无菌操作台中静置30min后,倒置于37 C的恒温培养箱内

培养18h — 24h。每个样品取3个连续适宜稀释度,每个稀释度重复3次,同时加入

无菌水的空白对照,每个稀释度取5个到10个菌落的菌体,涂片染色,显微镜观察识别后计数菌落。

5. 菌落计数:

5.1以平板上出现20个------ 200个菌落数的稀释度平板为记数标准,并确定为

稀释倍数。

5.2当只有一个稀释度,其平均菌落数在20个一一200个之间时,则以该平均

菌落数乘以其稀释倍数。

5.3若有两个稀释度,其平均菌落数在 20个一一200个之间时,应按两者菌落数之比值来决定。

6、结果统计与计算

根据菌落数特征判定,分别数出平板中的枯草芽抱杆菌菌数及杂菌数(杂菌是指除枯草芽抱杆菌外的其他菌种)。统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数(B )和杂菌数(E)。

6.1有效活菌总数按式(1)计算;

A=10 X B X C X 5 式中:

A--- 有效活菌总数,cfu/g

B--- 菌落活菌数;

C――稀释倍数。

6.2杂菌率按式(2)计算:(1 )

D=

式中:

D ――杂菌率,%

X 100 E――杂菌数

E+A

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