人教版选修3 专题2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 学案

2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体

学习目标：1.掌握动物细胞融合技术及应用。(重点) 2.简述单克隆抗体的制备。(重、难点)

一、动物细胞融合

1．概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2．原理：细胞膜的流动性。 3．诱导细胞融合的三种方法 (1)物理法：如电激等。

(2)化学法：如聚乙二醇。

(3)生物法：如灭活的病毒。

4．过程：不同DNA 的两个细胞――→促融

细胞膜融合―→细胞核融合→有丝分裂→两个完整的杂交细胞。

5．意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。

二、单克隆抗体

1．传统抗体的制备

(1)方法

(2)缺点：产量低、纯度低、特异性差。

2．单克隆抗体的制备

(1)

(2)解决思路：将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞。

(3)制备过程：制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：

(4)单克隆抗体的特点：特异性强、灵敏度高，并可大量制备。

1．判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)

(1)动物细胞融合过程中既有细胞膜融合也有核的融合。( )

(2)跟植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒。 ( )

(3)动物体细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞。( )

(4)单克隆抗体的制备首先要从小鼠体内提取B淋巴细胞。

( )

(5)单克隆抗体制备过程中的两次筛选目的相同。( )

提示：(1)√

(2)×动物细胞融合特有的诱导因素为灭活的病毒。

(3)×若用来融合的动物细胞是二倍体细胞，那么融合后的细胞应是四倍体细胞。

(4)×从小鼠体内提取的应该是经免疫的B淋巴细胞。

(5)×第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，而第二次筛选是为了获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

2．下列关于动物细胞融合的说法，错误的是( )

A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程

B．动物细胞融合需要用纤维素酶处理

C．动物细胞融合时需要人工诱导

D．常用的诱导动物细胞融合的因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激等

B[动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。动物细胞无细胞壁，所以诱导融合前不需要用纤维素酶处理。动物细胞融合需要人工诱导融合，诱导因素包括聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。]

3．关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是( )

A．可直接从动物体内获取B淋巴细胞进行培养

B．杂交瘤细胞具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特点

C．用灭活病毒诱导融合后形成的融合细胞即可产生单克隆抗体

D．经选择培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产

B[将骨髓瘤细胞与免疫后的B淋巴细胞融合，经过选择培养基的筛选得到杂交瘤细胞，并经专一抗体检测后，培养能产生特定抗体的杂交瘤细胞，即可得到单克隆抗体。杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞无限增殖的特点和B淋巴细胞产生特异性抗体的特点。诱导融合后可能会形成三种融合细胞，即同种细胞融合(B—B融合细胞、瘤—瘤融合细胞)、不同种细胞融合(B—瘤融合细胞)，故需要进一步筛选。]

动物细胞融合

[思考交流]

1．动物细胞融合与植物原生质体融合所依据的原理是什么？

提示：细胞膜的流动性。

2．动物细胞完成融合的标志是什么？

提示：动物细胞融合时，先是细胞膜发生融合，然后是细胞核的融合。当两个细胞核融合后形成具有单核的杂交细胞，则标志着动物细胞融合的完成。

3．比较动物细胞融合与植物体细胞杂交所用的促融方法的异同。

提示：二者都可以采用离心、振动、电激等物理方法，或者使用化学试剂聚乙二醇进行促融，除上述方法外，动物细胞融合还可以采用灭活的病毒进行促融。

4．什么是灭活？灭活病毒诱导融合的原理是什么？

提示：灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。

[归纳总结]

1．原理

细胞膜的流动性。

2．诱导方法

物理法——离心、振动、电激等；化学法——聚乙二醇(PEG)诱导；生物法——灭活的病毒诱导。

3．动物细胞融合的过程

用灭活的病毒诱导融合为例，如图所示。

(1)细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合，其中细胞膜的融合是细胞融合的先导，没有细胞膜的融合就不会有细胞质和细胞核的融合。

(2)杂交细胞的特点：融合形成的杂交细胞具有两个细胞的遗传特性，通过动物细胞培养，杂交细胞能表现出两个亲本的性状。

(3)病毒在细胞工程中作为诱导剂，在基因工程中作为载体，在免疫调节中属于抗原。

4．优点

突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。

1．动物细胞融合和植物原生质体融合相比较，特殊性表现在( )

A．融合的原因B．融合的优点

C．融合的诱导手段D．融合的过程

C[动物细胞融合和植物原生质体融合都是为了将不同物种的优良性状集于一体，过程都是先膜融合再质融合，最后核融合，即融合的过程相同；动物细胞融合可以用灭活的病毒诱导，而植物原生质体融合不能用灭活的病毒诱导。]

2．关于动物细胞融合的说法，不正确的是( )

A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程

B．动物细胞融合后形成的具有两个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C．常用的诱导动物细胞融合的方法有聚乙二醇、灭活的病毒诱导、电激、紫外线照射等

D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能

C[常用的诱导动物细胞融合的方法有物理法——离心、振动、电激等；化学法——聚乙二醇(PEG)诱导；生物法——灭活的病毒诱导。紫外线照射不是诱导动物细胞融合的方法。]

单克隆抗体

[思考交流]

1．制备单克隆抗体的过程中的几种细胞，如免疫的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞各有何特点？