淡豆豉炮制工艺的优化研究

August 2010 Vol. 32 No. 8
出， 除去药渣， 洗净稍凉， 置容器内再闷 20 d， 至充分 发酵、 香气溢出时， 取出， 略蒸， 干燥， 即得。 按照选 定方法测定大豆苷元、 染料木素和异黄酮的含量， 结 果见图 2 。
2010 年 8 月 第 32 卷 第 8 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
August 2010 Vol. 32 No. 8
淡豆豉炮制工艺的优化研究
* 牛丽颖， 石素琴 ， 刘敏彦， 王 芳 ， 王鑫国 （ 河北医科大学中医学院 河北省实验动物重点实验室 ， 河北 石家庄 050091 ）
Fig. 1 图1 大豆苷元对照品（ A） ， 染料木素对照品（ B） ， 淡豆豉样 品（ C） 的 HPLC 色谱图
1. 大豆苷元 2. 染料木素
HPLC chromatogram of daidzein reference substance （ A ） ， genistein reference substance （ B ） ， sample of Semen Sojae praeparatum（ C）
3 煮 3 次， 每次 1 h， 药液相对密度为 1. 10 ～ 1. 12 g / cm ， 拌入 1 kg 大豆中， 蒸煮 1. 5 h， 发酵温度为（ 30 ± 2 ） ℃ ， 发酵 6 ～ 8 d。
结论：优化的炮制工艺适合淡豆豉的炮制加工 。 中图分类号：R283 文献标识码：A 1528 （ 2010 ） 08137205 文章编号：1001-
KEY WORDS： Semen Sojae praeparatum； processing technology； Folium Mori； Herba Artemisiae annuae； isoflavonids； daidzein； genistein ABSTRACT： AIM： To optimize the processing of Semen Sojae praeparatum，identify technological parameters， provide foundation on normalization manufacture and quality control of Semen Sojae praeparatum. METHODS： Single factor test was used，with the contents of daidzein，genistein and isoflavonids of Semen Sojae praeparatum as to investigate the rate of Folium Mori and Herba Artemisiae annuae， relative density of in soybean meal， the indexs， cooking time，fermentation temperature，fermentation time，holding time and recooking time； orthogonal test was used with the content of total flavones as the index，to investigate decoction time，decoction frequency，water dose of Folium Mori and Herba Artemisiae annuae， thus specified the processing of Semen Sojae praeparatum. RESULTS：The optimal processing was as follows： 90 g Folium Mori and 100 g Herba Artemisiae annuae，addition of water about 18 times，decoction time for 3 times，1 hour per time，soybean meal extract of relative density for 1. 10 － 1. 12g / cm3 ，mix in 1 kg of soybean，cooking time for 1. 5 hours，fermentation temperature at （ 30 ± 2 ） ℃ ， fermentation time for 6 － 8 days. CONCLUSION： The optimal processing is fit to the processing and production of Semen Sojae praeparatum. 淡豆豉 （ Semen Sojae praeparatum ） 是由豆科植 物大豆（ Gly cine max （ L. ） Merr. ） 的成熟种子和青 蒿、 桑叶经发酵加工而成的制品， 具有解表除烦， 宣 ［ 1］ 发郁热等功效 。 目前淡豆豉的药用价值越来越 ， 显示出广阔的应用前景， 但炮制过程 ， 从而导致 控制主要凭经验 缺乏可量化的控制系统， 引起关注 其质量不稳定， 严重影响临床疗效。 为保证淡豆豉 质量稳定可控， 本研究采用单因素考察结合正交设
关键词：淡豆豉； 炮制工艺； 桑叶； 青蒿； 异黄酮； 大豆苷元； 染料木素 摘要：目的：优化淡豆豉的炮制工艺， 明确工艺参数， 为淡豆豉的规范化生产和质量控制提供依据 。 方法：采用单因素试 验， 以淡豆豉中大豆苷元、 染料木素和异黄酮的含量为指标， 考察桑叶和青蒿用量比例 、 药汁拌入大豆时的相对密度 、 蒸 煮时间、 发酵温度、 发酵时间、 再闷时间和略蒸时间；采用正交试验， 以总黄酮含量为指标， 考察桑叶和青蒿煎煮时间 、 煎 煮次数、 加水量， 从而规范淡豆豉的炮制工艺 。结果：最佳炮制工艺为取桑叶 90 g、 青蒿 100 g， 加入约生药量 18 倍水煎
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0927 收稿日期：2009基金项目：河北省自然科学基金资助项目（ C2009001061 ） 。 作者简介：牛丽颖（ 1968 － ） ， 女， 教授， 硕士生导师， 主要从事中药药效物质基础研究工作。 * 通讯作者：王鑫国（ 1966 － ） ， mail： wangxinguozy@ 163. com 男， 教授， 硕士生导师。Tel：（ 0311 ） 86265056 E河北医科大学中医学院 2007 级硕士研究生
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并稀释成 72 μg / mL 的溶液， 即得。 2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密吸取 2. 1. 3 项下 水浴蒸干， 用 15 mL 水定 续滤液 5 mL 置蒸发皿中， 量转移置分液漏斗中， 用乙酸乙酯 25 mL 萃取 6 次，
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Processing of Semen Sojae praeparatum
NIU Liying， SHI Suqin ﹡﹡ ， LIU Minyan， WANG Fang ﹡﹡ ， WANG Xinguo ﹡
（ College of Traditional Chinese Medicine，Hebei Medical University，Hebei Key Lab of Laboratory Animal Science，Shijiazhuang 050091 ，China）
1. daidzein 2. genistein
合并萃取液水浴蒸干， 用乙醇溶解并稀释至 25 mL 量瓶中， 摇匀， 精密吸取 3 mL 置 10 mL 量瓶中， 用乙 醇稀释至刻度， 摇匀， 即得。 2. 2. 3 线性关系 精密吸取染料木素对照品溶液 （ 72 μg / mL） 1. 0 、 2. 0 、 3. 0 、 4. 0 、 5. 0 mL 置 50 mL 的 量瓶中， 用乙醇稀释到刻度， 摇匀。以乙醇为空白对 照。分别在 261 nm 处测吸收值， 以浓度 （ μg / mL ） （ X ） 为横坐标， 吸收值 （ Y ） 为 纵 坐 标， 绘制标准曲 线。结果表明染料木素浓度在 1. 44 μg / mL ～ 7. 20 μg / mL 范围内呈良好线性关系。 回归方程为 Y = 0 . 136 2 X + 0 . 000 6 ，r = 0. 999 9 。 2. 3 2. 3. 1 炮制工艺参数考察 桑叶和青蒿用量比例考察 按《 中国药典 》 2005 年版一部中炮制工艺进行试验， 取桑叶、 青蒿 24 、 27 、 30 不 各 21 ～ 30 g， 分别以桑叶和青蒿各 21 、 同比例， 加入约生药量 20 倍水煎煮 3 次， 每次 30 min， 滤过， 药液浓缩到相对密度为 1. 10 ～ 1. 12 g / cm3 ， 拌入净大豆 300 g 中， 俟吸尽后， 隔水蒸 1 h， 取 稍凉， 用煎过的桑叶、 青蒿渣覆盖， 放入温度为 出， （ 30 ± 2 ） ℃ 的培养箱内， 闷使发酵至黄衣上遍时， 取
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计以异黄酮、 染料木素、 大豆苷元的含量为控制指 标， 对淡豆豉炮制工艺进行了优化， 量化了工艺参 数， 规范了炮制工艺。 1 仪器与材料 1. 1 仪器 高效液相色谱仪 （ Agilent 1100 ） ， 紫外 UV检测 器 （ Agilent Dual λAbsorbance Detector ） ， 2550 紫外可见分光光度计（ 日本岛津公司 ） ， 色谱柱 （ Agilent HCC18 4. 6 mm × 250 mm ） ， 电子天平 （ AG135 ） ， KQ250 型超声波清洗器 （ 昆山市超声仪 HZQF160 震荡培养箱 （ 中国哈尔滨 器有限公司 ） ， 市东联电子技术开发有限公司） 1. 2 对照品及试药 芦丁对照品、 染料木素对照品 （ 由中国药品生物制品检定所提供， 批 号： 100080200306 ， 111704200501 ） ， 大豆苷元对照品 （ 由四川 省维克奇生物科技有限公司提供， 纯度﹥ 98% ） ， 流 动相用甲醇为色谱纯， 其余试剂为分析纯， 水为乐百 氏纯净水。 1. 3 药材 大豆（ 河北安国药材市场 ） ， 桑叶、 青蒿 （ 石家庄乐仁堂药店） ， 由河北省药检所中药室段吉 平主任药师鉴定。 2 2. 1 法 2. 1. 1 色谱条件 0. 1% 冰醋酸溶 流动相为甲醇流速为 1 mL / min， 检测波长：261 nm， 液（ 50 ∶ 50 ） ， 柱温：30 ℃ 。理论塔板数以染料木素峰计算应不低 于 3 000 。色谱图见图 1 。 2. 1. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取五氧化 二磷减压干燥 12 h 的染料木素对照品和大豆苷元 对照品适量， 用甲醇溶解并稀释成 9. 92 μg / mL 和 10. 3 μg / mL 的溶液， 即得。 2. 1. 3 供试品溶液的制备 取淡豆豉粉末约 0. 5 g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入稀乙醇 20 mL， 称定重量， 超声处理 50 min， 取出， 放冷， 再称定 ， ， ， ， 重量 用稀乙醇补足减失的重量 摇匀 滤过 取续滤 液， 即得。 2. 2 UV 法测定淡豆豉异黄酮含量的方法 2. 2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取五氧化 二磷减压干燥 12 h 的染料木素对照品， 用乙醇溶解 方法与结果 HPLC 法测定大豆苷元和染料木素含量的方